克隆表达

摘要： 丰年虾是一种小型甲壳类动物,孵化后的幼虫是水产动物的优质饵料,残留的卵壳则作为废弃物处理。然而丰年虾卵壳含有丰富的蛋白质和几丁质,具有极大的应用潜力。为了从丰年虾卵壳中制备几丁寡糖,选择了水解产物分布宽泛和含有几丁质结合域的维氏气单胞菌来源的几丁质酶ChiB565,将其在毕赤酵母Pichia pastoris中进行重组表达,对其酶学性质和高密度发酵条件进行研究后,建立了以中性蛋白酶和重组几丁质酶ChiB565为主协同处理丰年虾卵壳以制备几丁寡糖的绿色工艺。结果显示,重组菌发酵的最高酶活为13.2 U/mL,是摇瓶发酵酶活的3.88倍;当先以中性蛋白酶(30 mg/g(以底物质量计),4 h)处理丰年虾卵壳以脱除蛋白质,再用重组几丁质酶ChiB565(40 U/g(以底物质量计),5 h)来水解几丁质时,水解产物主要为几丁二糖到几丁四糖,伴随少量几丁五糖和几丁六糖,且水解产物对DPPH自由基和ABTS自由基清除率分别为59.94%和53.15%。上述研究表明以丰年虾卵壳为底物采用生物酶法制备几丁寡糖相较于传统化学法回收率更高,时间更短。该研究为几丁寡糖的工业化制备奠定了重要基础。

摘要： 从海洋细菌Wenyingzhuangia aestuarii OF219中挖掘到一种新颖的β-紫菜多糖酶编码基因por16Z,对其进行生物信息学分析。利用分子生物学技术进行异源表达,研究其生化性质,采用高效液相色谱-质谱联用技术对降解产物进行解析。生化性质研究表明:β-紫菜多糖酶Por16Z_Wa的最适反应温度为45°C,最适反应pH 6.5,在pH 4.0~9.0范围具有较好的稳定性,且该酶具有适冷性。作用方式结果表明:Por16Z_Wa为内切酶,其降解终产物主要由紫菜二糖构成,含有少量的四糖及六糖,且它们均为被修饰或取代后的紫菜寡糖。Por16Z_Wa作为紫菜多糖的新型工具酶,能够高效、定向制备紫菜二糖,对紫菜多糖的应用研究具有推动作用。

摘要： 目的:提高几丁质酶降解几丁质生产几丁寡糖产量。方法:利用基因工程方法对淀粉酶链霉菌几丁质酶进行克隆、原核表达、酶学性质探究,并通过同源建模、催化域氨基酸比对、定点突变等方法探究几丁质酶活性位点。结果:克隆和原核表达后,产酶周期由7 d缩短至24 h,酶活可达132 U/L,较原始菌酶活性(100 U/L)提高了32%。决定几丁质酶活性的氨基酸为催化域的128,130位的天冬氨酸和132位的谷氨酸。结论:对几丁质酶基因克隆表达后,其产酶周期缩短、酶活性提高。

摘要： 旨在探析毒害艾美耳球虫氧化还原酶EnOXIO1的功能。提取毒害艾美耳球虫扬州株配子体总RNA,应用RT-PCR获取EnOXIO1编码基因,构建原核表达载体pET-28a(+)-EnOXIO1,转化至大肠杆菌BL21(DE3),体外诱导表达,对重组蛋白进行抗原性分析,应用制备的多抗进行激光共聚焦免疫荧光定位。结果显示,获得的EnOXIO1基因全长为2535 bp,体外重组表达的蛋白大小约100 ku,主要以包涵体的形式存在,表达量约为0.5 mg·mL^(-1)。Western blot分析结果显示,该重组蛋白能被6×HIS标签单克隆抗体识别,同时能被制备的鼠多抗以及毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫病鸡康复血清所识别,表明该重组蛋白具有较好的反应原性和交叉反应原性。激光共聚焦免疫荧光定位结果显示,EnOXIO1基因表达产物主要存在于配子体内的成壁体上,参与了卵囊壁的形成。本研究成功克隆和表达了毒害艾美耳球虫EnOXIO1蛋白,并将其定位于配子体和卵囊壁上,为进一步解析EnOXIO1蛋白参与卵囊壁形成的分子机制奠定基础,为研制新型免疫阻断型球虫亚单位疫苗提供重要靶抗原。

摘要： 在毕赤酵母中克隆表达黑曲霉CGMCC 3.7193中一个疑似金属蛋白酶基因MPase,分离纯化后对重组酶MPase进行理化特征分析。结果显示,纯化后的MPase:比酶活达到1859.2 U/mg,最适反应温度35°C,最适反应pH7.0;在低于40°C,pH5.0~8.0之间稳定;偏好水解大豆分离蛋白,K_(m)和V_(max)分别为3.9 mg/mL、892.7 mg/(mL·min);金属离子Co^(2+)和Zn^(2+)对其有激活作用,Cu^(2+)和Fe^(2+)对其有抑制作用;酶解大豆分离蛋白水解度可达到14.7%,并且产物分子量大小均匀;可耐受5000 mmol/L NaCl,在50°C保持30 min即可完全失活。其酶学特征表明:MPase在食品工业尤其在发酵食品加工中具有较大应用潜力。

摘要： 以霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)基因组DNA为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)法扩增β-胡萝卜素9,10’双加氧酶基因,构建重组质粒,在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达,并采用高效液相色谱(HPLC)法检测9,10’双加氧酶活性。结果表明,通过镍柱亲和层析和分子筛Sephacryl TM S-200,得到纯化重组β-胡萝卜素9,10’双加氧酶,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果表明,该酶分子质量约57 k Da,最适反应温度为40°C,最适反应p H值为8.5;当底物β-胡萝卜素质量浓度为500 mg/L,β-胡萝卜素9,10’双加氧酶酶活为0.4 U/m L时,β-紫罗兰酮产量为142.3 mg/L,产率达到79.4%。

摘要： 利用毕赤酵母表达系统首次克隆表达了一个油菜籽来源的Kunitz蛋白酶抑制剂基因(RTI;rti),分离纯化后对该抑制剂进行了理化特征分析。结果显示:在摇瓶发酵水平,重组RTI诱导表达水平达到628 mg·L^(-1),抑制剂比活性达到69.6 TIU·mg^(-1)蛋白;重组RTI在30~90°C可保持70%以上抑制活性,在pH 2.0~11.0保持80%以上抑制活性;金属离子Cu^(2+)和Co^(2+),有机试剂甲醇、乙醇、丙酮和氯仿对其有抑制作用;重组RTI以非竞争性抑制方式与胰蛋白酶作用,对胰蛋白酶具有很强的、专一性抑制作用,属于典型的植物Kunitz型胰蛋白酶抑制剂。结合其良好的理化特性,重组RTI具有开发为抗虫蛋白的潜力。

摘要： 为了发掘产物单一的甲壳素酶,本文从杆菌状链霉菌(Streptomyces bacillaris)中克隆表达了甲壳素酶SbChiAJ143,并对其酶学性质进行了表征。研究表明,该酶的基因全长为1734 bp,分子量为59.2 kDa,属于糖苷水解酶18家族。以胶质甲壳素为底物,其最适温度为55°C,最适pH为6.0(50 mmol/L磷酸盐缓冲液)。Ca^(2+)和Ba^(2+)对其酶活有轻微的促进作用,Cu^(2+)、Fe^(3+)和SDS可明显抑制其酶活。在最适条件下,其纯化后的比酶活为5.29 U/mg。动力学分析结果显示,该酶的Km为3.54 mg/mL,Vmax为17.14μmol/(min·mg)。高效液相色谱分析显示,其酶解胶质甲壳素2 h只产甲壳二糖(GlcNAc)_(2),酶解24 h有少量N-乙酰氨基葡萄糖GlcNAc存在。研究结果显示,在可控条件下,甲壳素酶SbChiAJ143能够高效酶解生产甲壳二糖,该酶可应用于高纯度甲壳二糖的工业化生产。

摘要： 为了探究粗枝云杉(Picea asperata)病程相关蛋白PR10的核糖核酸酶活性,该研究以粗枝云杉一年生针叶为材料,以响应云杉落针病菌(Lophodermium piceae)侵染而显著上调的一个PR10基因(PaPR10)序列为研究对象,设计特异性引物,采用RT-PCR技术克隆获得PaPR10基因的cDNA序列全长,使用生物信息学软件预测该基因编码蛋白的序列特征,将该基因进行原核表达和纯化,利用底物法检测纯化蛋白的核糖核酸酶活性,为解析PR10基因的抗菌活性机理奠定基础。结果表明:(1)成功克隆到PaPR10基因(GenBank登录号为OM743228)的ORF长456 bp,编码151个氨基酸序列,相对分子量为16.52 kD,理论等电点为5.73。(2)PaPR10蛋白无信号肽、不含跨膜区、定位在细胞质中,具有典型的病程相关蛋白Bet_v_1家族保守结构域和一个富含甘氨酸环(P-Loop)的保守结构域,但PaPR10蛋白的P-Loop结构域存在一个碱基突变;PaPR10蛋白与北美云杉等多种裸子植物和部分苔藓植物的PR10蛋白相似性较高。(3)IPTG诱导下,PaPR10蛋白以可溶性蛋白和包涵体的形式并存,且以终浓度为0.8 mmol/L的IPTG在30°C下诱导10 h时表达量最佳,但纯化后的PaPR10可溶性蛋白没有核糖核酸酶活性。研究发现,PaPR10蛋白不具备核糖核酸酶活性。

摘要： 人工设计并合成2条等电点分别为12.01和3.18的短肽PF1、PF2,基因全长均为309 bp。以PF1-F、PF1-R、PF2-F和PF2-R为引物,扩增至pET-30a(+)载体中进行克隆表达。经Ni-NTA分离纯化得到纯蛋白。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳与Western Blot分析表明:表达出的目的蛋白与预期估算大小一致。纯化后的短肽加入葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)催化作用体系中,表明纯化后的短肽分别使GOD活力提高8.34%和降低6.88%。因此可以说明,人工设计的不同电短肽PF1、PF2可以促进或抑制GOD的催化作用,进一步拓宽GOD在食品发酵和食品保鲜方面的应用范围。

摘要： 琼胶是存在于红藻细胞壁多糖间的粘性多糖,是目前世界上应用最广泛的三大海藻胶之一.琼胶酶(Agarase)是可催化水解琼胶的一类多糖降解酶的总称,在海水养殖业、食品、医药、分子生物学研究等方面中具有非常重要的应用价值.本课题从不同环境中筛选得到40株产琼胶酶微生物,从中获得16条琼胶酶基因片段,且克隆得到一条全长基因并在大肠杆菌中实现异源表达,随后对其酶学性质进行研究.具体实验结果如下：rn 从南日岛鲍鱼养殖场、广西红树林及舟山群岛等地采集的样品中筛选得到40株产琼胶酶微生物;通过形态观察和分子生物学鉴定，这些产酶菌株主要分布在Pseudoalteromonas sp.,Vibiro sp.以及Streptomyces sp.等种属中。rn 设计6对简并引物从25株产琼胶酶菌株中扩增得到16条不同的琼胶酶基因片段。其中包括9条GH50的琼胶酶基因片段，7条GH 16的琼胶酶基因片段;从中选取1条来源于Vibirosp.ZC-1的GH50琼胶酶基因片段序列用于扩增全长基因。利用TAIL-PCR的方法扩增得到Vibrio sp. ZC-1来源的琼胶酶基因，该基因全长2853bp，编码950个氨基酸，其中1-25位氨基酸为预测的信号肽。rn 成功构建了表达载体pET-agaZC-1，并在大肠杆菌BL21中实现了重组表达。利用亲和层析法纯化重组酶rAgaZC-1，并对其酶学性质进行研究，结果表明:其最适反应pH为7.0,在pH6.0-8.0的范围内稳定;最适反应温度为40°C,45°C时该酶不稳定，处理10min以上就完全失活，而低于35°C时则比较稳定;Ca2+、Mg2+,β-ME对该酶活力具有明显的促进作用。酶的动力学研究表明，rAgaZC-1对琼脂底物的Km、 Vmax和kcat,分别为2.428mg/mL,36.90μmol/(mg·min)和62.847s-1。底物特异性研究表明该酶对琼胶底物具有很强的专一性，其降解琼胶的主要产物是新琼二糖和新琼四糖。rn 本课题通过从不同环境中筛选产琼胶酶微生物，并进行基因克隆表达以及酶学特性的研究，旨在寻找新的琼胶酶基因和为琼胶酶的开发应用奠定基础。

摘要： 酯酶是一种催化酯键水解和合成的酶的总称,具有α/β折叠结构,是一类丝氨酸水解酶.微生物酯酶具有来源广、种类多、反应条件温和、稳定性好、底物专一、催化活性高等特点,是工业用酯酶的主要来源.本文从不同环境中筛选产酯酶微生物并进行基因克隆、表达和酶学性质研究,具体研究结果如下:rn 采用三丁酸甘油酯琼脂平板法对来自盐碱湖、红树林、湿地公园等不同环境样品中的产酯酶微生物进行筛选.通过菌株形态观察及分子生物学鉴定,共鉴定了60株产酶菌株,主要为芽孢杆菌属、假单胞菌属与不动杆菌属.rn 对筛选得到的酶学性质较好的产酯酶菌株进行酯酶基因的克隆，共获得18个酯酶基因片段，与己知的酯酶的蛋白序列一致性在67%至100%之间。基于获得的片段序列，采用同源克隆技术与TAIL-PCR方法克隆得到2个酯酶基因全长。来源于盐湖嗜盐嗜碱菌SL3与来源于舟山群岛巨大芽胞杆菌ZB7-11的酯酶基因全长分别为636bp与774bp，各编码211与257个氨基酸。Blastp分析表明这两个酯酶与Alkalibacterium sp. AK22和Bacillus megaterium来源的酯酶蛋白一致性最高分别为69%与98%。rn 将estSL3、estZB7-11两个基因分别在大肠杆菌中进行异源表达，并对重组酯酶rEstSL3与rEstZB7-11进行纯化和酶学性质研究。rEstSL3与rEstZB7-11最适作用底物分别为对硝基苯乙酸酯(pNPC2)和对硝基苯丁酸醋(pNPC4)，比活分别为256.86U/m和104.57U/mg;最适作用pH分别为9.0与8.0，在pH 6.0-10.0均具有良好的稳定性;最适作用温度均为30°C，且rEstSL3与rEstZB7-11分别在0°C与20°C可保持68%与80%左右的酶活，在低于60°C时均具有良好的热稳定性。在最适条件下，rEstSL3与rEstZB7-11对底物pNPC2与pNPC4的Vmax分别为769.23μmol/(mg`min)与96.15μmol/(mg`min),Km分别为0.15 mmol/mL与0.10mmol/mL;同时两者对Mn2+、CO2+、Ni2+等金属离子，Tween 80、EDTA及甲醇、乙醇等溶剂均具有一定抗性。而且rEstSL3对高浓度NaCl具有良好的耐受性，为耐盐耐碱性的低温碱性酯酶。

摘要： 热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是细胞或生物体在一定时间内遭受热刺激及其它环境、生理或病理胁迫时,新合成或含量增加的一类蛋白质.根据分子量大小和序列的同源性比对,可分为HSP110、HSP100、HSP90、HSP70、HSP60、HSP40和HSP20等.HSP21与WSSV囊膜蛋白VP26具有相互作用，并且HSP21与VP26蛋白的相互作用随HSP21蛋白量的增加而增强，进一步研究发现HSP21与重组VP37也有互作。VP26被认为是WSSV-种主要的被膜蛋白，连接囊膜蛋白和核衣壳，而VP37为WSSV粘附蛋白之一，HSP21与VP26和VP37有互作，表明HSP21参与WSSV感染。该研究对于深入阐明热休克蛋白在WSSV感染中的作用具有重要意义。

摘要： 猪表皮生长因子(porcine epidermal growth factor,pEGF)作为一类重要的乳源性生长因子,能够刺激小肠DNA合成及细胞增殖,促进肠道发育,从而提高断奶动物生产性能及免疫功能等.本研究比较分析了胞内EGF、胞外EGF以及含His标签EGF在断奶仔猪中的生物学活性,为研发一种更适用于畜牧生产及临床医学的表达方式是具有重要意义.

摘要： 本文为了研究克隆盘羊杀菌性/通透性增加蛋白基因,在巴斯德毕赤酵母中表达重组BPI蛋白,并检测重组BPI蛋白的抑菌活性，从盘羊外周血多形核粒细胞(PMN)中提取总RNA,经RT-PCR和RACE技术克隆盘羊BPI基因的cDNA全长,将其克隆至pPIC9K载体中,经PCR、酶切及测序鉴定正确后,电转化至毕赤酵母GS115中并用甲醇进行诱导表达,通过微量肉汤稀释法检测重组BPI蛋白的抑菌活性.结果表明克隆的盘羊BPI基因cDNA序列全长1922bp,其中开放阅读框为1452bp,共编码483个氨基酸.SDS-PAGE检测结果表明重组BPI蛋白成功表达,抑菌试验表明表达的重组BPI蛋白具有明显的抑菌活性.

摘要： 目的：获得小鼠肝炎病毒(MHV)S1、S2、M及N结构蛋白基因,构建4个相应基因的重组质粒.rn 方法：依据Genbank公布的MHV A59毒株RNA全序列设计S1、S2、M及N结构蛋白基因4对特异性引物,以A59毒株RNA反转录得到的cDNA为模板,通过PCR扩增出S1、S2、M及N结构蛋白基因的4个片段,分别将其通过A-T连接入pMD-20 T载体,构建重组质粒.经双酶切鉴定正确后,测序确认.将测序结果与Genbank序列比对.rn 结果：确认扩增得到的S1、S2、M及N核酸序列与Genbank序列公布的相似度分别为100％,99％,100％和99％.rn 结论：成功扩增出S1、S2、M及N的核酸序列,其构建的重组质粒可以作为检测MHV的阳性对照,为建立了RT-PCR快速检测实验小鼠MHV的方法奠定基础.

摘要： 目的：获得小鼠肝炎病毒(MHV)S1、S2、M及N结构蛋白基因,构建4个相应基因的重组质粒.rn 方法：依据Genbank公布的MHV A59毒株RNA全序列设计S1、S2、M及N结构蛋白基因4对特异性引物,以A59毒株RNA反转录得到的cDNA为模板,通过PCR扩增出S1、S2、M及N结构蛋白基因的4个片段,分别将其通过A-T连接入pMD-20 T载体,构建重组质粒.经双酶切鉴定正确后,测序确认.将测序结果与Genbank序列比对.rn 结果：确认扩增得到的S1、S2、M及N核酸序列与Genbank序列公布的相似度分别为100％,99％,100％和99％.rn 结论：成功扩增出S1、S2、M及N的核酸序列,其构建的重组质粒可以作为检测MHV的阳性对照,为建立了RT-PCR快速检测实验小鼠MHV的方法奠定基础.

摘要： 目的：获得小鼠肝炎病毒(MHV)S1、S2、M及N结构蛋白基因,构建4个相应基因的重组质粒.rn 方法：依据Genbank公布的MHV A59毒株RNA全序列设计S1、S2、M及N结构蛋白基因4对特异性引物,以A59毒株RNA反转录得到的cDNA为模板,通过PCR扩增出S1、S2、M及N结构蛋白基因的4个片段,分别将其通过A-T连接入pMD-20 T载体,构建重组质粒.经双酶切鉴定正确后,测序确认.将测序结果与Genbank序列比对.rn 结果：确认扩增得到的S1、S2、M及N核酸序列与Genbank序列公布的相似度分别为100％,99％,100％和99％.rn 结论：成功扩增出S1、S2、M及N的核酸序列,其构建的重组质粒可以作为检测MHV的阳性对照,为建立了RT-PCR快速检测实验小鼠MHV的方法奠定基础.

摘要： 目的：获得小鼠肝炎病毒(MHV)S1、S2、M及N结构蛋白基因,构建4个相应基因的重组质粒.rn 方法：依据Genbank公布的MHV A59毒株RNA全序列设计S1、S2、M及N结构蛋白基因4对特异性引物,以A59毒株RNA反转录得到的cDNA为模板,通过PCR扩增出S1、S2、M及N结构蛋白基因的4个片段,分别将其通过A-T连接入pMD-20 T载体,构建重组质粒.经双酶切鉴定正确后,测序确认.将测序结果与Genbank序列比对.rn 结果：确认扩增得到的S1、S2、M及N核酸序列与Genbank序列公布的相似度分别为100％,99％,100％和99％.rn 结论：成功扩增出S1、S2、M及N的核酸序列,其构建的重组质粒可以作为检测MHV的阳性对照,为建立了RT-PCR快速检测实验小鼠MHV的方法奠定基础.

摘要： 本文为了构建牛皮蝇的皮蝇A(hyderminA,HA)基因的分泌型真核表达载体pEF1 α-HA-AcGFP,并在Cos7细胞中表达与鉴定,试验从牛皮蝇中提取RNA,反转录成cDNA,扩增出HA基因,并在HA序列的上游加一段信号肽序列.通过双酶切将带有信号肽的HA基因序列克隆到真核表达载体pEF1 α-IRES-AcGFP,得到重组真核表达载体pEF1 α-HA-AcGFP.利用脂质体法转染Cos7细胞,分别用RT-PCR和Western blot方法在RNA和蛋白水平上检测HA基因在Cos7细胞中的表达.结果表明:经双酶切及测序鉴定,分泌型真核表达载体pEF1α-HA-AcGFP构建成功,转染Cos7细胞后,在RNA和蛋白水平上检测到HA基因的表达.说明成功构建了HA基因的分泌型真核表达载体.

摘要： 本发明提供了无需利用杂交瘤细胞技术的人单克隆抗体的制备方法，采用所述的方法制备的抗体，以及采用该抗体治疗和预防病症(如人类免度缺陷病毒的病原体感染)的方法。

摘要： 本发明提供了鸡ACE2基因的克隆、蛋白的表达和纯化及其多克隆抗体的制备。提供了ACE2蛋白的氨基酸序列和基因序列，构建了ACE2原核表达载体，利用大肠杆菌原核表达系统表达ACE2蛋白，并对蛋白进行纯化。纯化后的蛋白能够制备效价较高的多克隆抗体，并且本发明中的抗原和多克隆抗体可以为进一步开发检测试剂盒奠定基础。ACE2作为RAS系统的负调节分子，通过靶向降解AngII，发挥抗损伤、抗纤维化等机体保护功能；作为急性严重呼吸系统综合征冠状病毒(SARS‑CoV)主要功能性受体，具有保护肺损伤的功能；ACE2协同氨基酸转运载体转运，与氨基酸吸收不良、肠道微生态平衡和胃肠道炎症发挥重要作用。所以本发明无论是从基础研究还是临床运用上的意义都是十分重大的。

摘要： 本发明提供了鸡CR2基因的克隆、蛋白的表达和纯化及其多克隆抗体的制备。提供了ChCR2蛋白的氨基酸序列和基因序列，构建了含有不同标签的ChCR2原核表达载体，利用大肠杆菌原核表达系统表达ChCR2蛋白，并对蛋白进行纯化。纯化后的蛋白能够制备效价较高的多克隆抗体。ChCR2基因，在鸡免疫系统中的作用十分重大。CR2能将先天性补体介导的免疫应答与病原体和外来抗原联系起来，通过与共价附着于靶标的C3d结合而产生的适应性免疫应答，其导致的细胞信号传导现象，能极大程度降低B细胞活化的阈值。B细胞在免疫系统中的位置举足轻重，所以本发明发现的ChCR2无论是从基础研究还是临床运用上的意义都是十分重大的。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，特别涉及分子伴侣在促进单克隆抗体的形成和/或提高单克隆抗体的表达量中的应用。本发明以E.coli MG1655为出发菌株，提供了一种在大肠杆菌中表达全长IgG抗体的方法，同时共表达了分子伴侣，促进全长IgG的正确形成，提高IgG抗体的产量，为将来的工业化生产提供理论依据。

摘要： 本发明属于玉米基因克隆技术领域，具体涉及一种玉米Zm‑Prx5克隆、克隆方法及表达方法。Zm‑Prx5基因的克隆方法包括玉米总RNA提取，反转录成cDNA第一链以及基因克隆，表达方法包括融合表达载体的构建，制备农杆菌感受态细胞，pCAMBIA 1304‑Zm‑Prx5‑GFP质粒转化杆菌农杆菌感受态细胞，得到重组质粒转化菌，重组质粒转化菌转化植物体，并使Zm‑Prx5在植物体中表达等步骤。本发明提供的玉米Zm‑Prx5基因的克隆及表达方法，为玉米Zm‑Prx5基因功能的研究奠定了基础。

摘要： 本发明提供了鸡CR2基因的克隆、蛋白的表达和纯化及其多克隆抗体的制备。提供了ChCR2蛋白的氨基酸序列和基因序列，构建了含有不同标签的ChCR2原核表达载体，利用大肠杆菌原核表达系统表达ChCR2蛋白，并对蛋白进行纯化。纯化后的蛋白能够制备效价较高的多克隆抗体。ChCR2基因，在鸡免疫系统中的作用十分重大。CR2能将先天性补体介导的免疫应答与病原体和外来抗原联系起来，通过与共价附着于靶标的C3d结合而产生的适应性免疫应答，其导致的细胞信号传导现象，能极大程度降低B细胞活化的阈值。B细胞在免疫系统中的位置举足轻重，所以本发明发现的ChCR2无论是从基础研究还是临床运用上的意义都是十分重大的。

摘要： 本发明涉及尼罗罗非鱼淋巴细胞抗原75(OnLy75)的克隆、原核表达和抗罗非鱼OnLy75多克隆抗体制备的方法。公开了OnLy75基因全长序列，该序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。所述OnLy75的编码序列位于SEQ ID NO.1的5’端第88～5286位脱氧核苷酸，编码1732个氨基酸，氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示。公开了用于制备OnLy75多克隆抗体的多肽序列，具体为序列表SEQ ID NO.4所示的序列，以及用于制备所述多克隆抗体的组合物。公开了制备抗罗非鱼OnLy75多克隆抗体的方法、由该方法获得的兔多克隆抗体及其在Western Blot检测中的应用。

摘要： 一种汉坦病毒S基因克隆、表达、单克隆抗体制备方法，包括设计扩增汉坦病毒S基因完整开放阅读框特异性引物，扩增汉坦病毒S基因；将扩增的汉坦病毒S基因克隆到pGM－T载体，转化Ecoli.TOP10感受态细胞，得到TA克隆阳性质粒，克隆到pGEX－6p－2原核表达载体，得到重组质粒pGEX－6P－2/S；将重组质粒pGEX－6P－2/S转化Ecoli.BL21菌体中，经IPTG诱导表达，得到包涵体；包涵体经溶解与复性得到重组蛋白；重组蛋白免疫Balb/c小鼠；小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，选择性培养；阳性克隆筛选；单克隆抗体制备、亚型鉴定及效价检测。同时提供一种汉坦病毒S基因单克隆抗体应用。

摘要： 本发明从金银花中克隆酰基转移酶基因LjHQT，与其他植物HQT的同源性介于42～71％之间。经试验验证，LjHQT在转基因株系中的表达量与绿原酸含量呈正相关，有效提高了植物的抗病性。本发明从金银花中克隆酰基转移酶基因LjHQT，与其他植物HQT的同源性介于42～71％之间。经试验验证，LjHQT对奎尼酸的亲和力更高。在香豆酰辅酶A饱和时，LjHQT对奎尼酸的亲和力(Km＝77±45μmol/L)比莽草酸(Km＝5579±371μmol/L)高70倍。LjHQT能显著提高转基因株系中绿原酸含量，有效提高转基因植株的抗病性。

摘要： 发明涉及protocadherin1(