河豚毒素

摘要： 目的:本实验建立一种有效的河豚毒素毒性检测细胞模型,为河豚毒素解毒药物高通量筛选奠定基础。方法:用不同浓度膜电位荧光探针DiBAC4(3)在全黑底透96孔细胞培养板中孵育SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞,利用不同浓度藜芦定使细胞去极化,利用荧光酶标仪测定不同浓度河豚毒素对细胞膜电位的影响。结果:以DiBAC4(3)1000nmol/L、藜芦定200μmol/L、河豚毒性100μmol/L作用于SH-SY5Y细胞,观察到河豚毒素使该细胞膜电位变化最显著。结论:通过测量毒素诱导的膜电位变化可以初步预测和量化河豚毒素的毒性,可用于筛选解毒剂。该方法操作简便,并且可以实现高通量自动化筛选。

摘要： 目的评估河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)对4种急性疼痛模型的镇痛效果,为其合理应用提供实验支持。方法动物肌内注射1 mg/kg盐酸吗啡或不同剂量TTX,TTX剂量为0、0.5、1、2、4、8μg/kg,给药后40 min,分别进行醋酸扭体实验、福尔马林刺激实验、热板实验和甩尾实验,记录动物疼痛反应或痛阈,计算疼痛抑制率;取动物血清,Elisa法测定花生四烯酸含量。结果盐酸吗啡对4种急性疼痛模型均有显著镇痛效应;TTX可减少醋酸诱导的小鼠扭体次数,降低福尔马林诱导的大鼠Ⅰ相和Ⅱ相疼痛反应,对两种疼痛模型的最高疼痛抑制率均达到80.00%以上;TTX在甩尾实验和热板实验中有一定的镇痛作用,最高疼痛抑制率分别为25.00%、19.79%。醋酸和福尔马林均能导致动物血清花生四烯酸升高,但是TTX对花生四烯酸无显著抑制作用。结论 TTX对醋酸和福尔马林诱导的化学性刺激疼痛模型具有良好的镇痛效果,而对热诱导(热板和热水)的物理性刺激疼痛模型的镇痛效果较弱,TTX可能通过阻断炎性介质介导的疼痛反应产生镇痛效果。

摘要： 本文对2015-2021年养殖河鲀中的河豚毒素含量进行分析,发现养殖河鲀中河豚毒素的总体检出率为4.81%,肌肉、皮、肝脏、性腺中河豚毒素的检出率分别为1.92%、2.83%、2.25%、10.42%,肌肉、皮、肝脏、性腺中河豚毒素检出值范围分别为2.28~6.08、3.93~13.92、3.64~4.40、2.97~28.88μg/kg。养殖河鲀中河豚毒素的食品安全指数(IFS)为0.00098~0.00642,均小于0.01(IFS<<1),说明养殖河鲀中的河豚毒素对食品安全没有影响,所以目前养殖河鲀的食用是安全的。我国目前缺乏河豚毒素的限量标准,而有关文件规定的限量值2.2 mg/kg存在安全隐患,所以建立符合我国国情的河豚毒素限量值势在必行。本文通过对河豚毒素毒理学数据的分析、讨论及计算,提出了45μg/kg的限量建议。

摘要： 河豚文化是我国饮食文化史上不可忽视的精彩篇章,河豚体内含有的河豚毒素作为一种强效的非蛋白质神经毒素,主要是通过对电压门控钠通道的高度选择性阻断起作用。河豚毒素是最为致命的毒素之一,人体摄入极低剂量(1.5–2.0 mg)便会致死,但目前发现在远低于LD50水平给药时,河豚毒素展现出对神经性疼痛、癌症相关疼痛和毒品戒断等独特的治疗特性。本文简述河豚毒素结构的解析过程,并简要介绍了作用机制和未来在医疗上的应用前景。

摘要： 建立血液、尿液、胃液以及鱼样中河豚毒素的液相色谱质谱联用测定方法。鱼样基质样品采用1%甲酸甲醇溶液去蛋白,上清液采用固相萃取法去除杂质,血液、胃液用乙腈提取,尿液静置沉淀,并均采用液相色谱质谱联用仪进行河豚毒素测定。实验结果表明,在线性范围内河豚毒素含量和峰面积具有良好的线性关系。本文所提出的测定中毒样品中河豚毒素的方法具有快速、高效、准确等优点,能够为河豚毒素中毒临床诊断、食品安全检测提供技术保障。

摘要： 目的研究河豚毒素对斑马鱼的急性毒性。方法在斑马鱼中用最大非致死浓度(MNLC)和10%致死浓度(LC10)测定和评估河豚毒素的急性毒性。结果经Origin 8.0软件模拟,得出河豚毒素对斑马鱼急性毒性MNLC为8.62μmol/L,LC10为15.2μmol/L。在本实验条件下,16.0μmol/L及以上浓度河豚毒素可诱发斑马鱼心包水肿和心律异常,终点时出现部分或全部死亡。河豚毒素的急性毒性靶器官是心脏和肝脏,主要表现为心包水肿、心律异常和卵黄囊吸收延迟,毒性出现浓度为0.958μmol/L。结论河豚毒素对斑马鱼具有一定的心脏和肝脏毒性,且其毒性与河豚毒素的浓度相关。

摘要： 建立了分散固相萃取结合UPLC-MS/MS测定闽东地区贝类中河豚毒素含量的分析确证方法。对样品前处理及色谱条件进行优化,贝类均质样品用90%甲醇0.5%乙酸溶液提取,离心后上清液用石墨化碳黑(GCB)和C18混合粉末快速净化。上清液经尼龙膜过滤以及Waters AQUITY UPLC BEH HILIC色谱柱分离,以乙腈0.1%甲酸溶液作为流动相梯度洗脱,采用UPLC-MS/MS分析,外标法基质标准曲线定量。结果表明:在优化的试验条件下,贝类河豚毒素在5.4 min内完成色谱分离分析,在0.5~100 ng·mL^(-1)范围内线性关系良好,相关系数(r^(2))=0.995;方法的检出限(LOD)为5μg·kg^(-1),定量下限(LOQ)为15μg·kg^(-1),在15、30、150μg·kg^(-1)3个不同加标水平下,贝类河豚毒素的加标回收率为89.4%~99.0%,相对标准偏差(RSD,n=6)为7.2%~15.2%。该方法准确、简单快捷、前处理成本低、实用性强,能满足目前快速定量检测贝类中河豚毒素含量的技术要求。

摘要： 建立了直接稀释结合超高效液相色谱(Ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)同时测定闽东地区贝类中河豚毒素(Tetradotoxin,TXT)和微囊藻毒素(Microcystin-leucine arginine,MC-LR)含量的分析确证方法。贝类中的TTX和MC-LR用1%乙酸90%甲醇水溶液提取,0.5%乙酸甲醇稀释后,TTX与MC-LR分别用亲水色谱柱Acquity HILIC和Shim-pack GIST C18-AQ HP反相色谱柱分离,乙腈0.1%甲酸水溶液作为流动相梯度洗脱,UPLC-MS/MS分析,基质匹配标准曲线外标法定量。TTX和MC-LR的方法检出限分别为10μg·kg^(-1)和5μg·kg^(-1),定量限分别为30μg·kg^(-1)和15μg·kg^(-1)。两种毒素的标准添加水平为50、100、500μg·kg^(-1)(鲜重计),回收率范围分别为84.0%~97.6%和85.5%~92.2%,相对标准偏差(RSD,n=6)分别为5.3%~10.0%和6.9%~7.6%。该方法准确、可靠,适用于闽东地区贝类中河豚毒素与微囊藻毒素的同时测定。

摘要： 螳螂是多食性捕食者,可以说是昆虫里的“吃货”。它们的捕食对象小到各种节肢动物如毛毛虫,大到脊椎动物如蝾蛾。这些食物并非都是可口的,有些甚至是有剧毒的。例如,红色斑点蝾螈含有河豚毒素——自然界中发现的毒性最大的神经毒素之一,取食马利筋属植物的帝王斑蝶幼虫体内保留了这种植物中的强心苷——一种类固醇类毒剂。

摘要： 多数人听说过河豚毒素,知道它有剧毒,而不知道有一种叫雪卡毒素的剧毒,毒性比河豚毒素还要高百倍。2017年,珠海有一家人吃了海鳗鱼后发生了食物中毒。经检测,这家人的食物中毒竟是由雪卡毒素引起的。毒性比河豚毒素要高百倍雪卡毒素中毒潜伏期一般为2~10小时,表现为神经系统、消化系统和心血管系统的多种症状,包括头晕、乏力、恶心、呕吐、腹痛、腹泻、四肢麻木、关节肌肉酸痛,还会出现心律失常、血压降低等症状,病程持续2~3周。

摘要： 河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)是神经毒素,兼有镇痛、麻醉、降压以及戒毒等功效,可辅佐用于治疗各种疾病.为实现通过基因工程的方法大规模生产河豚毒素,非常有必要掌握河豚毒素生物合成途径.通过KEGG分析,TTX前体物的合成主要集中在胍基和碳骨架的来源.胍基来源是通过非核糖体肽合成酶模块纳入精氨酸和(或)通过脒基转移酶将脒基从精氨酸附着到丙氨酸上形成胍基.碳骨架起源的假说主要包括聚酮,C5支糖和C5异戊二烯的起源.阐明河豚毒素的合成途径揭示其新颖的生物合成机制和独特的生物合成的酶,为利用基因工程的方法稳定地生产河豚毒素解决技术上的瓶颈问题.

摘要： 建立了海洋生物中河豚毒素的免疫亲和柱净化-液相色谱-串联质谱分析方法.采用1％乙酸甲醇提取样品,提取液通过磷酸盐缓冲液稀释,调节pH 至7～8,经免疫亲和柱富集和净化后,LC-MS/MS测定,外标法定量.在ACQUITY UPLC BEH Amide 亲水柱上进行分离,流动相为乙腈和含有0.1％甲酸的5 mmol/L 乙酸铵溶液,梯度洗脱,电喷雾正离子多反应模式监测.河豚毒素在0.3～20.0 μg/L线性范围内,相关系数大于0.997,定量限为0.3 μg/kg,回收率为88.7％～102.3％,相对标准偏差1.99％～6.36％.本方法重现性好、灵敏度高,适用于海洋生物中河豚毒素的测定.

摘要： 目的:研究快速检测河豚毒素的方法,最终发展成为实用的免疫检测试剂盒.方法:免疫小鼠产生血清多克隆抗体上,以偶联抗原包被酶联板,利用直接竞争酶联免疫吸附方法建立快速检测河豚毒素的方法.结果:建立的方法对TTX的检测限可达到0.5ng/mL,检测的线性范围为0.5-4000ng/mL,回归系数r2=0.9914,组内和组间变异系数均＜9％.结论:该方法快速、简单、灵敏,可满足实际工作需要,可进一步发展为TTX检测试剂盒.

摘要： 河豚毒素因其毒性大,性质稳定而成为国外实施化学战或恐怖分子实施恐怖袭击的手段之一.本文介绍了采用高效液相色谱与紫外光谱和质谱检测器串联检测河豚毒素，通过实验表明：利用高效液相色谱与离子阱质谱来检测质荷比(m/z)320作为母离子，其子离子的302和284作为监测离子，以确证河豚毒素的存在。虽然仪器分析的设备费用较高，对技术要求难度大，但由于其检测的高灵敏度及特异性，特别是对未知样品分析的强大功能，已受到人们越来越多的关注。

摘要： 河豚毒素是一种海洋神经毒素。由于多种海产品中含有河豚毒素，并且河豚毒素在医学方面有着重要的药用价值，因此河豚毒素的检测在食品安全及医学方面都有着重要的意义。本文简要地综述了河豚毒素检测方法的研究进展.

摘要： 目的:考察河豚毒素对8种不同组织类型人源性肿瘤体外抑瘤活性，以初步了解其作用机制、敏感肿瘤类型和作用强度；方法:以经典细胞毒类药物顺铂作阳性对照，采用MTS法测定其对肿瘤细胞生长抑制作用；结果:河豚毒素对A549、MGC-803、MCF-7、Hela、BEL-7402、HepG2、MKN-45、Tca-8113细胞增殖没有很强的抑制作用，抑制率均低于50％；结论:河豚毒素对肿瘤细胞没有显著的细胞毒作用。

摘要： 采用高效液相色谱法测定了野生型、人工养殖型以及由养殖型培育出来的子一代黄鳍东方鲀的内脏（性腺、肝脏）以及肌肉的河豚毒素（TTX）的含量。得出黄鳍东方鲀内脏含毒有强毒，其肌肉无毒；而经人工养殖后毒力会减弱。在一定程度上支持了河豚毒素的微生物起源学说，也为黄鳍东方鲀进一步作食用性研究奠定基础，从而促进黄鳍东方鲀资源的开发和利用；采用105 °C恒温烘干失水法( GB/T643521986）测定水分；蛋白质测定采用考马斯亮蓝法；脂肪测定采用气相色谱法；氨基酸测定采用氨基酸自动分析仪。蛋白质和氨基酸差异采用t-检验法进行比较分析。得出养殖型黄鳍东方鲀与野生型黄鳍东方鲀具有同等的营养价值，为保护野生黄鳍东方鲀和发展黄鳍东方鲀养殖提供了科学和理论依据。

摘要： 河豚毒素(Tetrodotoxin, TTX)是一种剧毒的非蛋白天然毒素，具有选择性阻断快钠离子通道作用，是一种快速可逆的钠离子通道阻滞剂，阻止钠离子进入细胞，影响细胞膜动作电位的产生从而阻断神经肌肉产生兴奋活动。长期以来，TTX仅作为工具药广泛地用于生理学和药理学研究，目前其潜在的临床应用价值研究越来越多。其中河豚毒素耐受性钠通道在损伤组织中的高表达为寻找新一代有效镇痛药提供了重要的理论依据。近来，因发现神经系统存在河豚毒素耐受性钠通道，并且对痛觉有影响，因此人们越来越多的关注河豚毒素的镇痛作用。本文将就河豚毒素的化学结构、理化性质及可能的镇痛作用和机制做一综述。

摘要： 为了充分利用河豚鱼资源,我们开展了养殖河豚鱼的安全性研究。利用直接竞争抑制性ELISA法对养殖河豚鱼鱼体各部位的河豚毒素进行定量检测,结果为所有样品的皮、肌肉均属于无毒级,食用较为安全;样品1的肝脏为强毒,样品4的性腺为弱毒。同时我们讨论了养殖河豚鱼的控毒机理以及由于河豚毒素的产生条件受鱼种、季节和生活环境等因素的影响,现行养殖控毒条件也不能使所有河豚鱼完全脱毒,所以我们不能认为所有养殖河豚鱼都是安全的,都是可以不加控制地安全食用。

摘要： 一种产河豚毒素的气单胞菌Aeromonas molluscorum从暗纹东方鲀Takifugu fasciatus组织分离、发酵培养和所产河豚毒素的检测方法，包括细菌分离、细菌鉴定、细菌发酵培养、气单胞菌所产河豚毒素的竞争性ELISA检测和LC-MS检测等方法。在本发明中，采用从暗纹东方鲀卵巢中分离细菌，采用TCBS培养基进行筛选，首次从河豚鱼体中分离到能产河豚毒素的气单胞菌，所分离的细菌采用了16S rDNA法进行了鉴定，分离到的气单胞菌所产的河豚毒素首次采用竞争性ELISA和LC-MS同时检测的方法，明确所产河豚毒素与从河豚体内提取的河豚毒素为同一种物质。本发明所分离的气单胞菌，经培养后可从细菌中大规模分离河豚毒素。

摘要： 本发明涉及河豚毒素的提取，另外还涉及河豚毒素的制剂。河豚毒素的提取，第一步原液提取：取菊黄东方豚卵巢，HAC溶液浸泡取得原液；第二步树脂交换：树脂为D152阳性大孔丙烯酸弱酸性树脂，经常法处理转NH4型，双柱两次交换，A柱为玻璃柱内下层装树脂，上层装硅藻土；B柱为玻璃柱内下层装中性氧化铝，上层装树脂；双柱交换后再进行第三步洗脱：双柱洗脱后合并交换和洗脱收集的强毒馏分，结晶得河豚毒素粗品结晶。本发明河豚毒素提取方法提高了产品的收率和纯度。制剂贮藏期限更长，用于脱瘾治疗，具有起效快，控制症状彻底，过度平稳，易接收等特点。

摘要： 本发明公开了一种工厂规模化生产河豚毒素的制备方法。原料为河豚鱼内脏，采用一种提取罐提取、二步树脂法纯化和二次结晶生产工艺，得以使河豚毒素产品达到工厂规模化生产。生产过程中操作安全、简便，获得的产品质量高，产品收率高，产品纯度达到96%-99%。符合作为医学临床应用和生物试剂应用所需的品质质量。二步树脂法生产河豚毒素的制备方法，适用河豚毒素产品的批量生产。其产品可作为临床戒断生物碱类成瘾性依赖药物综合症(戒毒)用药，以及可作为镇痛用药替代吗啡、度冷丁等。还可作为解痉、镇静、局部麻醉、抗瘙痒、及心动过速和降血压等临床用药。同时也可作为离子通道阻断作用研究的生物试剂。

摘要： 本发明公开了一种原代产河豚毒素的河豚共栖菌及其应用，该原代产河豚毒素的河豚共栖菌命名为Bacillus cereus He‑1，于2019年12月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC NO.19109。本发明通过对Bacillus cereus He‑1在培养基中扩培得到不产毒的Bacillus cereus He‑2的菌液，通过在Bacillus cereus He‑2的培养液中添加自诱导肽，诱导其产河豚毒素。添加自诱导肽作为群体感应信号分子，使不产毒的二代菌Bacillus cereus He‑2恢复产河豚毒素能力，在后期离体培养过程中产河豚毒素。本发明解决了原代产河豚毒素的河豚共栖菌进行传代后，失去产河豚毒素能力的问题。

摘要： 本发明涉及河豚毒素的检测技术领域，尤其涉及贵金属掺杂的金属有机框架复合材料在检测河豚毒素中的应用、河豚毒素的检测方法。本发明提供了贵金属掺杂的金属有机框架复合材料在检测河豚毒素中的应用，贵金属掺杂的金属有机框架复合材料包括金属有机框架和掺杂在所述金属有机框架多孔结构中的贵金属纳米颗粒；检测河豚毒素的方法为荧光检测或表面增强拉曼检测；检测河豚毒素的过程中，以Cy3荧光染料标记的河豚毒素适配体为识别元件。所述贵金属掺杂的金属有机框架复合材料可以提高对河豚毒素的检测灵敏性和准确性，同时还可以实现检测手段的多样性，应用性较好。

摘要： 本发明公开了一种河豚毒素在制备护肤品中的应用。还公开了一种含河豚毒素的护肤品，该护肤品中包含0.001‑1mg/g的河豚毒素和/或其衍生物，所述护肤品为乳液、霜、膏、精华液或面膜。本发明的含河豚毒素的护肤品性质较稳定，不但对皮肤无任何刺激，其可以最大限度的提供给肌肤最有效的防护。可以直接涂于身体任何部分。本申请的护肤品具有去皱、无损伤、见效快、使用方便等优点，与早、晚霜合用效果更佳。

摘要： 本发明涉及微生物和水处理领域，公开了一种酒曲在降解河豚毒素和净化处理含河豚毒素水体中的用途；该酒曲以粮食作物和白术为原料，每100g原料中接入5～10g的米根霉种曲和黑曲霉种曲制备而得。该酒曲发酵后的微生物群可用于降解河豚毒素，可用于河豚毒素的降解。本发明将上述微生物群用于河豚毒素降解，工艺较简单，处理效率高，成本低，具有较好的应用前景。

摘要： 一种产河豚毒素的气单胞菌Aeromonas molluscorum从暗纹东方鲀Takifugu fasciatus组织分离、发酵培养和所产河豚毒素的检测方法，包括细菌分离、细菌鉴定、细菌发酵培养、气单胞菌所产河豚毒素的竞争性ELISA检测和LC-MS检测等方法。在本发明中，采用从暗纹东方鲀卵巢中分离细菌，采用TCBS培养基进行筛选，首次从河豚鱼体中分离到能产河豚毒素的气单胞菌，所分离的细菌采用了16SrDNA法进行了鉴定，分离到的气单胞菌所产的河豚毒素首次采用竞争性ELISA和LC-MS同时检测的方法，明确所产河豚毒素与从河豚体内提取的河豚毒素为同一种物质。本发明所分离的气单胞菌，经培养后可从细菌中大规模分离河豚毒素。

摘要： 本发明涉及河豚毒素的提取，另外还涉及河豚毒素的制剂。河豚毒素的提取，第一步原液提取：取菊黄东方豚卵巢，HAC溶液浸泡取得原液；第二步树脂交换：树脂为D152阳性大孔丙烯酸弱酸性树脂，经常法处理转NH4型，双柱两次交换，A柱为玻璃柱内下层装树脂，上层装硅藻土；B柱为玻璃柱内下层装中性氧化铝，上层装树脂；双柱交换后再进行第三步洗脱：双柱洗脱后合并交换和洗脱收集的强毒馏分，结晶得河豚毒素粗品结晶。本发明河豚毒素提取方法提高了产品的收率和纯度。制剂贮藏期限更长，用于脱瘾治疗，具有起效快，控制症状彻底，过度平稳，易接收等特点。

摘要： 本发明公开了一种工厂规模化生产河豚毒素的制备方法。原料为河豚鱼内脏，采用一种提取罐提取、二步树脂法纯化和二次结晶生产工艺，得以使河豚毒素产品达到工厂规模化生产。生产过程中操作安全、简便，获得的产品质量高，产品收率高，产品纯度达到96％－99％。符合作为医学临床应用和生物试剂应用所需的品质质量。二步树脂法生产河豚毒素的制备方法，适用河豚毒素产品的批量生产。其产品可作为临床戒断生物碱类成瘾性依赖药物综合症(戒毒)用药，以及可作为镇痛用药替代吗啡、度冷丁等。还可作为解痉、镇静、局部麻醉、抗瘙痒、及心动过速和降血压等临床用药。同时也可作为离子通道阻断作用研究的生物试剂。