免疫亲和柱

摘要： 本文建立了食品中玉米赤霉烯酮免疫亲和柱-高效液相色谱法定量检测方法。结果表明,玉米赤霉烯酮在5.00~50.00 ng/mL线性关系良好,相关系数为0.999 91,样品回收率为83.9%~95.9%,相对标准偏差为0.2%~8.7%。该方法准确性度高,精密度好,可用于食品中玉米赤霉烯酮含量的检测。

摘要： 为研究玉米及玉米制品被黄曲霉毒素B_(1)污染的情况,确保市场上玉米及玉米制品的食用安全,本文旨在建立免疫亲和柱净化-高效液相色谱-柱后光化学衍生-荧光法测定玉米和玉米制品中黄曲霉毒素B_(1)含量的方法。将玉米和玉米制品试样粉碎后,试样粉末在甲醇-水溶液(体积比为55:45)条件下提取,经免疫亲和柱富集和净化后,以甲醇-水溶液(体积比45:55)为流动相,采用XDB-C18色谱柱(5μm×4.6 mm×250 mm),由光化学柱后衍生,荧光检测器检测(Ex:360 nm,Em:440 nm)。结果表明:黄曲霉毒素B_(1)的最低检出限和定量检出限分别为0.009μg/kg和0.03μg/kg,标准曲线的线性范围为0.1~0.5 mg/L(R=0.9990),2个不同水平的加标平均回收率为88.4%~90.1%,RSD值为0.47%~1.07%。该方法具有操作简便、灵敏度高、重现性佳等特点,适用于玉米和玉米制品中黄曲霉毒素B_(1)的检测。

摘要： 建立酿酒原料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的免疫亲和柱净化-高效液相色谱串联质谱检测方法。样品经超纯水提取、免疫亲和柱净化,内标法定量,DON在10 ng/mL~640 ng/mL范围内,相关系数r>0.9999,线性关系良好;不同浓度DON标品测定值的相对标准偏差(n=6)在2.44%~2.52%之间,精密度良好;样品加标回收率81.53%~93.19%。该方法简单快速、灵敏度高,完全符合准确检测的要求。

摘要： 在1.0g充分匀质的样品中加入80%(体积分数,下同)甲醇溶液4mL,涡旋2min,超声10min,冷冻(4°C)离心5min,重复提取一次。合并上清液,用80%甲醇溶液稀释至10mL。分取5mL,加入20mL磷酸盐缓冲液(pH 7.3),涡旋混匀。上述溶液过活化好的免疫亲和柱,用20%(体积分数)甲醇溶液3mL淋洗柱子,加压抽干柱子后再加入甲醇3mL洗脱,净化过程中控制温度为室温,过柱速率为2~3mL·min^(-1)。收集洗脱液,分取1.0~1.5mL,离心10min,上清液用超高效液相色谱-三重四极杆复合线性离子阱质谱法测定。以Poroshell 120EC-C18色谱柱为固定相,以不同体积比的10mmol·L^(-1) 甲酸铵-0.1%(体积分数)甲酸溶液和甲醇的混合溶液为流动相进行梯度洗脱,用多反应监测-信息依赖性分析-增强子离子(MRM-IDA-EPI)扫描模式获得定量结果,并同时完成目标物二级质谱图的匹配。结果显示:短裸甲藻毒素的质量浓度在5~500μg·L^(-1) 内与其对应的峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)为30μg·kg^(-1);对阴性样品进行加标回收试验,回收率为80.5%~108%,测定值的相对标准偏差(n=6)为3.1%~6.0%。方法用于双壳贝类样品的分析,未检出短裸甲藻毒素,而加标样品中目标物的EPI二级质谱图与标准二级质谱图的匹配度值、反匹配度值和纯度值均达到60%以上,说明目标物和短裸甲藻毒素相似度较高。

摘要： 分别采用自主研发的全自动亲和纯化仪和人工免疫亲和柱对小麦、玉米、花生、饲料等样品进行前处理,并应用高效液相色谱法测定样品中的毒素含量,同时对2种前处理方法的操作时间、洗脱液体积、加标回收率进行比较。结果表明:当样品数量较少(1~8个)时,2种前处理方法所用时间区别不大;当样品数量大于8时,全自动亲和纯化仪的用时更短。2种前处理方法所用洗脱液体积差异不大。仪器的加标平均回收率在87.20%~105.50%之间,变异系数小于3.41%。手工操作的加标平均回收率为81.00%~106.00%,回收率变异系数为7.07%。在实际阳性样品检测中,仪器的检测结果稳定性优越,这表明全自动免疫亲和纯化仪可在食品安全检测领域得以应用。

摘要： 采用免疫磁珠净化法对小麦、玉米等样品进行样本的前处理分析研究,完成多种样品基质的净化和富集,随之利用高效液相色谱法对样品中的黄曲霉毒素B1含量进行检测分析.为了验证免疫磁珠法快速提取的可行性,在相同的实验条件下采用免疫亲和柱完成对样品提取,对比两种净化方式对样品检测结果的差异性,结果表明两种提取方式的检测结果误差在可接受的范围内.采用免疫磁珠净化法对添加AFB1的空白小麦、花生、饲料、辣椒酱等样品进行加标检测,平均回收率在88.58％ ～107.61％,变异系数小于10％,表明免疫磁珠法可规模化地应用于食品安全检测领域.

摘要： 通过采用《GB5009.24—2016食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M族的测定》中高效液相色谱法来测定生鲜乳中黄曲霉毒素M1的含量,在测定过程中使用免疫亲和柱法进行精确定性、定量,然后对生鲜乳及其加标的阳性样品中的黄曲霉毒素M1含量进行测定.结果显示,待测组分的标准系列工作溶液线性关系良好(R2=0.9995),加标回收率为95.00％～105.00％,相对标准偏差为0.50％～2.00％.结果表明,本方法结果准确、重复性好,可用于生鲜乳中黄曲霉毒素M1的检测.

摘要： 目的 建立免疫亲和柱前处理、超高效液相色谱串联荧光检测器(UPLC-FLD)分析,同时用于检测逍遥片原料药材柴胡、当归、炙甘草、炒白术、白芍及中间提取物1和2中赭曲霉毒素A(ochratoxinA,OTA)的方法.方法 样品用80％甲醇-水溶液(体积比)超声提取,离心,免疫亲和柱纯化,ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱分离,流动相A为0.5％冰醋酸溶液(pH值为2.97),流动相B为乙腈,梯度洗脱.激发波长310 nm,发射波长465 nm,柱温30°C,体积流量0.3 mL/min,进样体积2 μ.L,荧光检测器检测.结果 OTA在1.5～37.5 ng/mL显示良好的线性关系,R2≥0.999 1.OTA加标回收率为92.36％～119.89％,RSD为2.50％～9.12％.样品在48 h内稳定.共检测42批次样品,33批呈阳性,柴胡和炙甘草被污染.结论 建立的免疫亲和柱前处理、UPLC检测的方法可用于中药和中间提取物中OTA的检测,排除假阳性结果,适合痕量分析,结果准确可靠.

摘要： 目的:建立高效液相色谱-荧光检测器测定安神益脑丸中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的方法;分析安神益脑丸中黄曲霉毒素的污染情况.方法:待测样品采用80％乙腈作为提取溶剂,经免疫亲和柱净化、高效液相色谱分离、光化学柱后衍生后,通过荧光检测器测定其中黄曲霉毒素的含量;采用超高效液相色谱串联三重四极杆质谱法对以上实验测定结果进行进一步的确证.结果:在优化条件下,黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1分别在0.19～0.95,0.53～2.65,0.22～1.08,0.51～2.55 ng·mL-1的范围内有良好的线性关系,r＞0.999 5,回收率在86.2％～104.9％之间.结论:该方法操作简便,灵敏度高、重复性好、结果准确,可运用于安神益脑丸中黄曲霉毒素的检测.5批样品中有2批检出黄曲霉毒素,检出率为40％,建议增订该品种黄曲霉毒素的检查项.

摘要： 目的:考察免疫亲和净化HPLC柱后光化学衍生荧光检测法在中成药中黄曲霉毒素测定的可行性,并对其污染情况进行筛查,为中成药黄曲霉毒素污染监管提供依据.方法:采用免疫亲和净化HPLC柱后光化学衍生荧光检测法对含有土鳖虫的中成药中黄曲霉毒素的含量进行测定.样品经有机溶剂提取、免疫亲和柱净化后,利用高效液相色谱-光化学衍生-荧光检测器进行分析测定.对3种含土鳖虫的中成药,考察加样回收率,测定黄曲霉毒素残留量,并对测定结果进行分析.采用高效液相色谱-串联质谱法对部分超出限度批次进行结果确认.结果:3种中成药中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的回收率均在80％～113％.3种24批中成药中,21批检出黄曲霉毒素,检出率为87.5％,部分批次黄曲霉毒素含量明显偏高.结论:免疫亲和净化HPLC柱后光衍生荧光检测法结果准确,重现性好,可用于中成药中黄曲霉毒素的测定.含土鳖虫药材的中成药,个别品种黄曲霉毒素污染情况较为严重,存在安全隐患,应引起生产企业的重视,保障用药安全.

摘要： 建立了一种可靠、简便易行的黄曲霉毒素免疫亲和柱性能对比评价的方法.应用该方法对国内外五个不同品牌亲和柱进行了验证评价实验,依据评价结果指导采购,经过一年多的使用证明了方法的可靠性.性能评价结果既是亲和柱采购依据又能倒逼生产商提高产品质量.

摘要： 建立了海洋生物中河豚毒素的免疫亲和柱净化-液相色谱-串联质谱分析方法.采用1％乙酸甲醇提取样品,提取液通过磷酸盐缓冲液稀释,调节pH 至7～8,经免疫亲和柱富集和净化后,LC-MS/MS测定,外标法定量.在ACQUITY UPLC BEH Amide 亲水柱上进行分离,流动相为乙腈和含有0.1％甲酸的5 mmol/L 乙酸铵溶液,梯度洗脱,电喷雾正离子多反应模式监测.河豚毒素在0.3～20.0 μg/L线性范围内,相关系数大于0.997,定量限为0.3 μg/kg,回收率为88.7％～102.3％,相对标准偏差1.99％～6.36％.本方法重现性好、灵敏度高,适用于海洋生物中河豚毒素的测定.

摘要： 目的：采用免疫亲和柱-高效液相色谱法检测粮食及饲料中的呕吐毒素.方法：样本经纯水提取后,由免疫亲和柱净化,通过高效液相色谱法检测定.结果：实验结果表明:流动相采用甲醇-水(18-82),检测波长为218nm条件下,呕吐毒素在0.1-3.0mg/L范围内呈现良好的线性关系,线性相关系数为1.0000.该法检出限(S/N=3)为0.06mg/kg,定量限为0.2mg/kg,加标回收率为101％.结论：建立了免疫亲和柱-高效液相色谱法检测粮食及饲料中的呕吐毒素的方法.该法简便快速、准确可靠,是测定呕吐毒素的一种理想方法.

摘要： 本文将免疫亲和柱技术和HPLC测定结合起来,达到快速测定的目的,将蜂蜜样品在几十分钟内即可完成其黄曲霉毒素或其它真菌毒素的分离测定,大大提高了工作效率.

摘要： 伏马毒素(Fumonisins)是由串珠镰刀菌和多誉镰刀菌产生的真菌毒素,目前已知有11种衍生物,其中以FB1、FB2最为常见。研究证实伏马毒素可导致马产生白脑软化症,对猪产生肺水肿综合症。并可诱发人类的食道癌和肝癌、胃癌等疾病,从而对畜牧业和人类的健康构成威胁。因此,测定玉米和玉米饲料中伏马毒素含量,对保护人们身体健康具有重要意义。本文研究确定了色谱柱、流动相组成和配比、检测波长等色谱分离条件，采用了单克隆免役亲和和固相萃取净化技术，建立了两种净化方法；采用邻苯二甲醛作为衍生化试剂，研究确定了衍生剂的浓度和用量等条件。

摘要： 呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)是F-镰刀菌霉的二级代谢产物,这类真菌大多在低温、潮湿和收获季节,在谷物庄稼中漫漫生长,主要污染玉米、麦类等。自呕吐毒素被发现以来,受到世界各国的普遍重视。本文采用了单克隆免役亲和和固相萃取净化技术，建立了两种净化方法。研究确定色谱柱、流动相组成和配比、检测波长等色谱分离条件。

摘要： 以克仑特罗单抗为配基制备免疫亲和色谱柱，建立了简单、快速、特异的样本净化技术，动态柱容量达到200ng/mL基质。饲料样品经超声及萃取后，经免疫亲和柱纯化，再用GC/MS检测，建立了免疫亲和色谱-气/质联用(IAC-GC/MS)方法。空白猪尿添加浓度为0.025μg/g、0.05μg/g、0.1μg/g时，回收率分别为(89.2±3.3)％，(88.9±3.1)％，(81.0±1.9)％。同时以NY438-2001标准中检测方法为对照，回收率分别为(102±10.2)％，(94.5±8.5)％，(78.6±7.7)％，偶联非特异抗体的对照组亲和柱对样品保留值为5.55％。方法的最低检测浓度为0.004μg/g。数据表明：免疫亲和柱作为提纯方法，与统固相萃取提纯方法相比平行性好，提纯后样本杂质少。本文建立的检测饲料中克仑特罗的IAC-GC/MS法为国内初次报道。

摘要： 利用免疫亲和柱技术荧光计法测定了饼干中的黄曲霉毒素(AFT),实验经过甲醇-水提取,提取液经过滤、水稀释、用键合有黄曲霉毒素B1特燃体的免疫亲和柱净化后,荧光光度计上测定黄曲霉毒素.测定黄曲霉毒素B1的检出限为1μg/kg.通过与薄层色谱法做对比实验,可知该方法具有准确、简单、快速、安全的优点.

摘要： 采用免疫亲和层析净化高效液相色谱法与酶联免疫分析法(ELISA)试剂盒免疫亲和净化柱对添加了特定的黄曲霉毒素B1标样的花生和玉米样品进行黄曲霉毒素B1检测分析。实验显示采用德国LCTech公司的AflaCLEAN免疫亲和净化柱高效液相色谱法对加标玉米样品的平均回收率为80-103%；对加标花生样品的平均回收率为90-103%。AflaREAD Fast黄曲霉毒素B1酶联免疫分析法试剂盒对同样加标玉米样品的回收率介于99-127%;对加标花生样品的回收率介于86-97%。此俩种方法回收率高，重新性好，准确性高，灵敏度高、特异性强等特点，并且操作简单、快速，是分析黄曲霉毒素十分理想的检测方法。

摘要： 采用免疫亲和层析净化高效液相色谱法与酶联免疫分析法(ELISA)试剂盒免疫亲和净化柱对添加了特定的黄曲霉毒素B1标样的花生和玉米样品进行黄曲霉毒素B1检测分析。实验显示采用德国LCTech公司的AflaCLEAN免疫亲和净化柱高效液相色谱法对加标玉米样品的平均回收率为80-103%；对加标花生样品的平均回收率为90-103%。AflaREAD Fast黄曲霉毒素B1酶联免疫分析法试剂盒对同样加标玉米样品的回收率介于99-127%;对加标花生样品的回收率介于86-97%。此俩种方法回收率高，重新性好，准确性高，灵敏度高、特异性强等特点，并且操作简单、快速，是分析黄曲霉毒素十分理想的检测方法。

摘要： 本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种纳米抗体荧光亲和柱以及利用该亲和柱纯化HbeAg抗原的方法。所述纳米抗体荧光亲和柱以琼脂糖构建基架，在琼脂糖基架上偶联有含抗His蛋白的纳米抗体，以及荧光基团和/或荧光染料。本发明通过凝胶柱结合特定的含抗His蛋白的纳米抗体，能够实现对目标HbeAg抗原的有效且高效的纯化，减少杂质干扰，纯化效果优异、纯化后检测精度高。

摘要： 本发明涉及净化二乙酸镳草镰刀菌烯醇免疫吸附剂。所述的免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体上偶联的抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体，所述的抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇抗体为由保藏编号为CCTCC NO:C201881的杂交瘤细胞株DAS5G11E7分泌产生的单克隆抗体。本发明提供的净化二乙酸镳草镰刀菌烯醇免疫亲和柱可以用于用于二乙酸镳草镰刀菌烯醇的净化前处理，性能稳定。进而本发明基于此亲和柱建立了一种经济，快捷，精确，安全的二乙酸镳草镰刀菌烯醇的高效液相色谱‑质谱检测方法。

摘要： 本发明公开了净化环匹阿尼酸免疫吸附剂及免疫亲和柱。所述的净化环匹阿尼酸免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体偶联的抗环匹阿尼酸单克隆抗体，所述抗环匹阿尼酸单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201871的杂交瘤细胞株YTT‑2分泌产生。本发明提供的净化环匹阿尼酸免疫亲和柱可以用于待测环匹阿尼酸样品的净化前处理，进而基于本免疫亲和柱建立了一种经济、快捷、精确、安全的环匹阿尼酸高效液相色谱‑质谱联用仪检测方法。

摘要： 本发明提供了净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮免疫吸附剂及免疫亲和柱及应用。黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体偶联的抗黄曲霉毒素单克隆抗体、抗环匹阿尼酸单克隆抗体、抗赭曲霉毒素A单克隆抗体和抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体，所述的环匹阿尼酸单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201871的杂交瘤细胞株YTT‑2分泌产生的单克隆抗体。本发明提供的免疫亲和柱可用于同时含有黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮样品的净化‑检测前处理，四种之间无相互干涉影响，性能稳定，进而通过使用本亲和柱建立了一种经济，快捷，精确，安全的高效液相色谱‑质谱联用仪检测方法。

摘要： 本发明公开了一种绿色荧光蛋白融合蛋白免疫亲和柱的制备方法，其包括如下步骤：S1、制备N个绿色荧光蛋白单克隆抗体，N为正整数；S2、针对每一所述绿色荧光蛋白单克隆抗体制备与其对应的免疫亲和柱，以获得N个免疫亲和柱；以及S3、运用N个免疫亲和柱中的一个或多个对同一绿色荧光蛋白融合蛋白进行纯化，选取纯化效果达到预期值的免疫亲和柱作为目标绿色荧光蛋白融合蛋白免疫亲和柱。其运用多个免疫亲和柱对同一绿色荧光蛋白融合蛋白进行纯化，选取纯化效果达到预期值的免疫亲和柱作为目标绿色荧光蛋白融合蛋白免疫亲和柱，再通过该目标绿色荧光蛋白融合蛋白免疫亲和柱对绿色荧光蛋白融合蛋白进行纯化，以提高纯化效率和效果。

摘要： 本发明公开了一种硫氧还蛋白标签融合蛋白免疫亲和柱的制备方法，其包括如下步骤：S1、制备N个硫氧还蛋白单克隆抗体；S2、针对每一所述硫氧还蛋白单克隆抗体制备与其对应的免疫亲和柱，以获得N个免疫亲和柱；以及S3、运用N个免疫亲和柱中的一个或多个对同一硫氧还蛋白标签融合蛋白进行纯化，选取纯化效果达到预期值的免疫亲和柱作为目标硫氧还蛋白标签融合蛋白免疫亲和柱。其运用多个免疫亲和柱对同一硫氧还蛋白标签融合蛋白进行纯化，选取纯化效果达到预期值的免疫亲和柱作为目标硫氧还蛋白标签融合蛋白免疫亲和柱，再通过该目标硫氧还蛋白标签融合蛋白免疫亲和柱对硫氧还蛋白标签融合蛋白进行纯化，以提高纯化效率和效果。

摘要： 本发明公开了抗原结构类似物及其在免疫亲和柱柱容量实时监测中的应用、方法和产品。本发明首次提出了采用抗原结构类似物用于免疫亲和柱的实时监测，并基于此开发了一系列抗原结构类似物及免疫亲和柱实时监测产品，解决了包括国标在内的行业方法均无法解决的技术问题，在免疫亲和柱质检领域有着巨大的应用前景。

摘要： 本发明涉及净化二乙酸镳草镰刀菌烯醇免疫吸附剂。所述的免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体上偶联的抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体，所述的抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇抗体为由保藏编号为CCTCC NO:C201881的杂交瘤细胞株DAS5G11E7分泌产生的单克隆抗体。本发明提供的净化二乙酸镳草镰刀菌烯醇免疫亲和柱可以用于用于二乙酸镳草镰刀菌烯醇的净化前处理，性能稳定。进而本发明基于此亲和柱建立了一种经济，快捷，精确，安全的二乙酸镳草镰刀菌烯醇的高效液相色谱‑质谱检测方法。

摘要： 本发明提供了净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮免疫吸附剂及免疫亲和柱及应用。黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体偶联的抗黄曲霉毒素单克隆抗体、抗环匹阿尼酸单克隆抗体、抗赭曲霉毒素A单克隆抗体和抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体，所述的环匹阿尼酸单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201871的杂交瘤细胞株YTT‑2分泌产生的单克隆抗体。本发明提供的免疫亲和柱可用于同时含有黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮样品的净化‑检测前处理，四种之间无相互干涉影响，性能稳定，进而通过使用本亲和柱建立了一种经济，快捷，精确，安全的高效液相色谱‑质谱联用仪检测方法。

摘要： 本发明公开了净化黄曲霉毒素‑环匹阿尼酸免疫吸附剂及免疫亲和柱。所述的净化黄曲霉毒素‑环匹阿尼酸免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体偶联的抗环匹阿尼酸单克隆抗体，所述抗环匹阿尼酸单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201871的杂交瘤细胞株YTT‑2分泌产生。本发明提供的净化黄曲霉毒素‑环匹阿尼酸免疫亲和柱可以用于待测环匹阿尼酸样品的净化前处理，进而基于本免疫亲和柱建立了一种经济、快捷、精确、安全的环匹阿尼酸高效液相色谱‑质谱联用仪检测方法。