支持细胞

摘要： 目的探究转录因子Jun在小鼠睾丸发育过程中的表达模式。方法采用半定量PCR和免疫印迹方法检测Jun在小鼠睾丸发育过程中的表达模式,采用免疫荧光染色方法观察Jun在成年小鼠睾丸生精上皮周期中的定位。结果半定量PCR和免疫印迹结果显示,Jun在小鼠出生6 d后的睾丸中已有表达,在第8 d达到峰值,之后随着睾丸发育其表达量逐渐下降。免疫荧光染色结果发现Jun在生精上皮各期与睾丸支持细胞细胞核的标志物SOX9均存在共定位,其在Ⅰ-Ⅶ期的支持细胞核中表达水平较低,Ⅷ-Ⅹ期支持细胞核中表达水平显著升高,进入Ⅺ-Ⅻ期后水平又下降;此外Jun在生精上皮Ⅷ期开始表达于精原细胞细胞核中,并一直持续到Ⅻ期。结论Jun在小鼠睾丸发育早期即开始表达,在成年小Ⅺ鼠睾丸中主要定位于支持细胞与精原细胞的胞核中,提示其可能对于睾丸支持细胞发挥正常功能和维持精原细胞增殖分化具有重要作用。

摘要： 目的:探讨香烟烟雾暴露对大鼠睾丸支持细胞的损伤作用,阐明微小RNA-138-5p(miR-138-5p)在此过程中发挥的保护作用。方法:200只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组和低、中及高剂量香烟暴露组(每天给予每只大鼠10、20和30支香烟),分别于2、4、6、8和12周麻醉处死动物,检测各组大鼠血浆中抑制素B水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠睾丸组织中miR-138-5p表达水平,免疫组织化学法检测各组大鼠睾丸支持细胞中波形蛋白表达水平。体外培养睾丸TM4细胞(对照组),将制备好的香烟烟雾提取物(CSE)原液稀释至5%和10%,并处理TM4细胞,作为5%CSE组和10%CSE组。采用MTT法检测各组细胞存活率和各组细胞中乳酸脱氢酶(LDH)活性,流式细胞术和TUNEL法检测各组细胞凋亡率。睾丸TM4细胞转染过表达miR-138-5p质粒后,分为对照组、5%CSE组、5%CSE+Pri-miRNA-138-5p Ctrl组、5%CSE+Pri-miRNA-138-5p组、10%CSE组、10%CSE+Pri-miRNA-138-5p Ctrl组和10%CSE+Pri-miRNA-138-5p组,采用上述方法检测各组细胞生存率、细胞中LDH活性和细胞凋亡率。结果:与对照组比较,各剂量香烟暴露组大鼠血浆中抑制素B水平降低;与对照组比较,第8周高剂量香烟暴露组和第12周各剂量香烟暴露组大鼠血浆中抑制素B水平降低(P<0.05)。光镜下观察,对照组大鼠睾丸细胞胞质出现阳性黄染,香烟暴露组大鼠睾丸TM4细胞中睾丸组织波形蛋白表达水平逐渐降低;与对照组比较,不同时间高剂量香烟暴露组大鼠睾丸TM4细胞中睾丸波形蛋白表达水平降低(P<0.05)。与对照组比较,第8周时中和高剂量香烟暴露组及12周时各剂量香烟暴露组大鼠睾丸组织中miR-138-5p表达水平均降低(P<0.05)。与对照组比较,5%CSE组和10%CSE组睾丸TM4细胞存活率明显降低(P<0.01)。与对照组比较,5%CSE组和10%CSE组大鼠睾丸TM4细胞中LDH活性降低(P<0.05或P<0.01)。过表达miR-138-5p后,与对照组比较,5%CSE组、5%CSE+Pri-miRNA-138-5p Ctrl组、5%CSE+Pri-miRNA-138-5p组、10%CSE组、10%CSE+Pri-miRNA-138-5p Ctrl组和10%CSE+Pri-miRNA-138-5p组大鼠睾丸TM4细胞增殖率降低(P<0.05或P<0.01);与5%CSE组比较,5%CSE+Pri-miRNA-138-5p组大鼠睾丸TM4细胞增殖率升高(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率降低(P<0.05或P<0.01);与10%CSE CSE组比较,10%CSE+Pri-miRNA-138-5p组大鼠睾丸TM4细胞增殖率升高(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:长期大量香烟烟雾暴露可引起睾丸支持细胞不可逆性损伤,miR-138-5p在其中发挥了重要的保护作用。

摘要： 目的探讨沉默环状RNA_单酰甘油酯酶(Circular RNA_monoglyceride lipase,circ_MGLL)表达对睾丸支持细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法应用siRNA沉默睾丸支持细胞中circ_MGLL和MGLL的表达。应用CCK-8和EdU检测沉默circ_MGLL对支持细胞增殖能力的影响。应用流式细胞术检测沉默circ_MGLL对支持细胞周期和凋亡的影响。应用生信网站预测与circ_MGLL具有结合潜能的miRNA。应用荧光素酶报告实验检测circ_MGLL与相关miRNAs的结合能力。结果沉默circ_MGLL的表达后,支持细胞增殖速度加快、增殖细胞比例和S期细胞比例升高(均P<0.05),而凋亡细胞比例和G1期细胞比例降低(P<0.05)。机制方面研究显示,circ_MGLL可结合miR-1228、miR-1233、miR-149和miR-924。结论circ_MGLL可结合miR-1228/miR-1233/miR-149/miR-924,并促进睾丸支持细胞增殖而抑制细胞凋亡。

摘要： 目的构建小鼠睾丸体外生精小管模型,探讨Rho/ROCK信号通路在生精小管重构过程中的作用。方法取新生10日龄小鼠睾丸,分离纯化睾丸支持细胞(Sertoli cells,SCs),培养3 d后利用免疫荧光染色技术检测分离细胞GATA结合蛋白4(GATA Binding protein 4,GATA4)表达情况,鉴定SCs纯度;以RPMI 1640为阴性对照组(cont组),人工合成血清替代物(KnockOut^(TM) Serum replacement,KSR)和FBS为实验组,倒置显微镜下观察原代SCs生精小管形成情况,建立生精小管体外培养模型;分别以RPMI 1640培养基组和KSR组为阴性对照和阳性对照组,以KSR+Y27632(K+Y)、缓激肽(Bradykinin,BK)为实验组,探讨Rho/ROCK信号通路在生精小管形成过程中的作用。结果(1)免疫荧光染色结果显示在分离得到的细胞中GATA4^(+)DAPI^(+)SCs占90%以上;(2)倒置显微镜下观察到与cont组相比,随着培养天数的增加,KSR组有大量管状结构形成,而FBS组只观察到细胞生长,并未有管状结构形成;(3)添加ROCK分子抑制剂Y27632后镜下观察到的管状结构被明显抑制,而当添加Rho/ROCK信号通路激动剂BK后,我们观察到类似于KSR组管状结构的形成。结论Rho/ROCK信号通路参与小鼠睾丸体外生精小管结构的形成。

摘要： 目的探索腺相关病毒载体Anc80L65对正常和不同程度损伤的成年小鼠椭圆囊前庭感觉上皮的转染特性。方法将6周龄小鼠分为以下三组。1)正常对照组:将携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的Anc80L65病毒液(Anc80L65-GFP),经后半规管注射途径导入小鼠内耳;2)中度损伤组:行水平半规管注射导入150μg链霉素,术后2周通过后半规管注射导入Anc80L65-GFP病毒液;3)重度损伤组:行水平半规管注射导入400μg链霉素,术后2周行后半规管注射导入Anc80L65-GFP病毒液。导入病毒后4周取椭圆囊行免疫荧光染色,观察椭圆囊的形态及GFP在椭圆囊感觉上皮的表达情况。结果正常对照组:Anc80L65-GFP病毒液注射后,正常椭圆囊毛细胞无明显缺失,纤毛形态正常,GFP广泛分布于整个感觉上皮区域。中度损伤组:椭圆囊前庭毛细胞数量明显减少,支持细胞仍存活,GFP广泛分布于整个感觉上皮区域。高倍镜下见前庭支持细胞和毛细胞被转染。重度损伤组:椭圆囊的前庭毛细胞和支持细胞均被损伤,前庭感觉上皮演化为细胞大小不一、形态不规则的扁平上皮结构。在前庭扁平上皮中,GFP阳性细胞数量与对照组及中度损伤组相比明显减少。结论Anc80L65能高效转染正常和中度损伤后的成年小鼠椭圆囊前庭感觉上皮,但对重度损伤后形成的前庭扁平上皮的转染效率较低,这可能与其细胞属性发生改变有关。在未来的前庭基因治疗研究中,须根据前庭感觉上皮的不同损伤程度来选择合适的载体。

摘要： 过氧化物氧化还原酶5(PRDX5)是一种硫氧还蛋白,参与机体多种生物学过程。为了研究PRDX5基因在藏绵羊(Ovis aries)睾丸发育和精子发生过程中的作用,本研究以不同发育阶段(3月龄、1周岁和3周岁)的藏绵羊为研究对象,克隆了PRDX5基因的CDS区,并对其进行生物信息学分析;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot和免疫组织化学染色法,对PRDX5基因在藏绵羊睾丸不同发育阶段的表达和分布进行了检测。结果显示,PRDX5基因CDS区全长659 bp,可编码219个氨基酸;蛋白质结构预测显示PRDX5以α-螺旋为主,无信号肽;系统进化树显示,藏绵羊PRDX5基因与山羊(Capra hircus)亲缘关系最近;1周岁(性成熟期)和3周岁(成年)藏绵羊睾丸中PRDX5 mRNA相对表达量极显著(P<0.01)高于3月龄(性成熟前),但PRDX5蛋白表达量极显著(P<0.01)低于3月龄,且两者在性成熟后趋于稳定;PRDX5蛋白在藏绵羊睾丸不同发育阶段的支持细胞和间质细胞中均有表达。推测PRDX5基因可能通过调节细胞内ROS的水平影响精子发生微环境,从而调控精子发生过程。

摘要： 为了建立大泷六线鱼(Hexagrammos otakii)精巢支持细胞系,本研究通过对大泷六线鱼精巢支持细胞进行分离和培养,建立并优化了精巢支持细胞培养体系。首先,在精巢支持细胞分离方法上,相较于组织块培养法,利用酶解法分离获取的支持细胞纯度更高;其次,优化了精巢支持细胞的培养体系,即添加0.1 mmol/L非必需氨基酸或1%鱼胚胎提取液的L^(-1)5培养基(含10%胎牛血清(FBS))为最佳培养基;最后对分离和培养的精巢支持细胞进行了鉴定,结果显示贴壁培养的支持细胞呈多边形,碱性磷酸酶(AP)染色呈阴性,支持细胞标记基因wt1表达水平显著高于生殖细胞的标记基因plzf、vasa,确定了所培养的细胞为精巢支持细胞。

摘要： 目的·探究腺相关病毒血清型8型(adeno-associated virus serotype 8,AAV8)介导的野生型缝隙连接蛋白β2(gap junction proteinβ2,Gjb2)基因在Gjb2基因c.109G>A纯合突变小鼠(简称Gjb2纯合突变小鼠)耳蜗支持细胞区域的表达情况及安全性,以及对呋塞米引起的听力下降的影响。方法·将带有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的AAV8-GFP病毒,经耳蜗中阶注射入新生Gjb2纯合突变小鼠的内耳,注射14 d后取小鼠耳蜗,荧光显微镜观察基底膜GFP的表达情况。将载有野生型Gjb2基因的AAV8-GJB2-GFP病毒经中阶注射入新生Gjb2纯合突变小鼠内耳后,于4周后通过实时荧光定量PCR和Western blotting检测耳蜗Gjb2 mRNA及其编码的连接子蛋白(connexin 26,CX26)的表达水平,通过免疫荧光法观察其具体表达位置。通过听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)实验评价新生纯合突变小鼠中阶注射AAV8-GJB2-GFP后4周龄时5.66~45.00 kHz的听力阈值。采用呋塞米试验比较野生型小鼠及Gjb2纯合突变小鼠腹腔注射呋塞米前后的ABR阈值变化,以及观察Gjb2纯合突变小鼠经AAV8-GJB2-GFP治疗后能否缓解呋塞米导致的听力下降。结果·AAV8-GFP注射14 d后耳蜗顶圈、中圈、底圈支持细胞的转染率分别为(11.60±1.28)%、(10.33±1.55)%、(5.40±0.86)%。AAV8-GJB2-GFP注射4周后耳蜗Gjb2 mRNA水平约为未注射耳的1.26倍(P=0.014),CX26蛋白水平是未注射耳的1.31倍(P=0.001);注射后通过荧光显微镜观察到耳蜗支持细胞表达CX26,内毛细胞区域也有CX26异位表达。ABR检测显示,给药耳各频率听力阈值与对侧耳无明显差异,表明其安全性较好。Gjb2纯合突变小鼠经呋塞米诱导后较野生型小鼠产生更明显的听力阈移,注射AAV8-GJB2-GFP 4周后突变小鼠阈移小于未治疗小鼠,在8.00、11.32、16.00 kHz测得的阈值,2组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论·在新生Gjb2纯合突变小鼠中阶注射AAV8-GJB2-GFP,可使小鼠成年后耳蜗支持细胞表达外源性Gjb2,挽救呋塞米诱导的听力下降。

摘要： 目的探讨高位隐睾患儿手术前后血管内皮生长因子(VEGF)、CD4^(+)/CD8^(+)水平变化与其支持细胞功能的关系。方法选取2018年1月至2020年12月恩施土家族苗族自治州中心医院收治的224例高位隐睾患儿作为观察组,另选取60例健康儿童作为对照组。观察组均行手术治疗,根据手术疗效分为疗效良好(n=204)与疗效不良(n=20)。对比两组VEGF、CD4^(+)/CD8^(+)、抗苗勒管激素(AMH)、抑制素B(INHB)水平,分析VEGF、CD4^(+)/CD8^(+)与AMH、INHB水平的相关性,对比不同疗效患儿手术前后VEGF、CD4^(+)/CD8^(+)、AMH、INHB水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价手术效果。结果观察组VEGF水平高于对照组,CD4^(+)/CD8^(+)、AMH、INHB水平均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);高位隐睾患儿VEGF水平与AMH、INHB水平均呈负相关,CD4^(+)/CD8^(+)与AMH、INHB水平均呈正相关(P<0.05);疗效不良患儿术后VEGF水平高于疗效良好患儿,CD4^(+)/CD8^(+)、AMH、INHB水平均低于疗效良好患儿,差异具有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析发现,VEGF、CD4^(+)/CD8^(+)与AMH、INHB水平联合评估手术疗效的曲线下面积(AUC)最大,为0.952,具有良好评估效能。结论高位隐睾患儿VEGF、CD4^(+)/CD8^(+)水平异常,且异常程度与支持细胞功能有关,联合检测可为临床评估手术效果提供参考。

摘要： 支持细胞的增殖力决定性成熟后睾丸支持细胞的数量,进而影响公猪的精子发育、成熟及精液品质。microRNA通过结合靶基因的3′-UTR,广泛参与调控支持细胞增殖、凋亡和分化等多种生物学过程。为了研究miR-139在猪未成熟支持细胞中的作用,试验将miR-139过表达试剂、抑制表达试剂及真核翻译起始因子(EIF4G2)的干扰试剂分别转染到猪的未成熟支持细胞中,采用实时荧光定量及流式细胞术等方法对其进行研究。结果显示:过表达miR-139,细胞周期进程加快,增殖能力显著增强,而细胞凋亡率则显著降低;抑制表达miR-139后,结果与之相反。干扰EIF4G2基因后,细胞周期进程加快,且促进了细胞增殖而抑制其凋亡,与过表达miR-139的结果相一致。结果说明miR-139促进猪未成熟支持细胞增殖而抑制其凋亡,且其作用机制可能是通过靶向EIF4G2基因实现。该研究为进一步探讨支持细胞增殖对精子发生的作用提供理论依据。

摘要： 目的：探讨TGF-β1在大鼠睾丸支持细胞增殖和掉亡中的作用以及对紧密连接相关蛋白基因表达的影响. 方法：体外分离和培养大鼠睾丸支持细胞,分空白对照组、TGF-β1受体阻滞剂组、TGF-β1刺激组和TGF-β1+受体阻滞剂组共4组.CCK-8检测细胞增殖;FMC检测细胞凋亡;建立支持细胞原代双室培养模型,应用跨上皮电阻测定法(trans-epithelia electrical resistance,TER)检测单层细胞两侧跨细胞电阻值;RT-PCR和Western blot检测支持细胞闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)和紧密连接蛋白II(ClaudinⅡ)的相对表达量. 结果：各组细胞增殖组间差异有统计学意义(F=5.05,P＜0.05),TGF-β1刺激组与空白对照组相比细胞增殖率增加(P＜0.05),而TGF-β1+受体阻滞剂组与TGF-β1刺激组相比细胞增殖率降低(P＜0.05);各组细胞掉亡率组间差异无统计学意义(F=1.13,P＞0.05);各组细胞间TER差异有统计学意义(F=38.99,P＜0.01),与对照组比较TGF-β1刺激组TER降低(P＜0.01),与TGF-β1刺激组比较TGF-β1+受体阻滞剂组细胞TER升高(P均＜0.01);各组支持细胞中ZO-1、ClaudinⅡmRNA及蛋白在各组中的表达量差异均无统计学意义(FmRNA=0.49,0.93,P均＞0.05;F蛋白=0.28,1.31,P均＞0.05),而Occlu din mRNA及蛋白在各组中的表达量差异均有统计学意义(F=6.86,6.87,P均＜0.05);与空白对照组相比,TGF-β1刺激组Occludin mRNA及蛋白表达明显降低(P均＜0.01),而加入受体阻滞剂后,Occ ludin mRNA及蛋白表达明显回升(P均＜0.05). 结论：TGF-β1对睾丸支持细胞的增殖有促进作用,并能通过调节Occludin蛋白的表达而影响大鼠支持细胞间的紧密连接.

摘要： 目的：HUMSCs在体外能够向生殖细胞诱导分化,移植到不育小鼠体内后能够分化表达生殖细胞标记,能够促进不育小鼠睾丸组织修复.本研究旨在前期研究基础上,进一步探讨人脐带间充质干细胞移植对不育小鼠睾丸生殖细胞、支持细胞及间质细胞的作用.rn 方法：采用组织块贴壁法分离、培养、扩增HUMSCs;采用腹腔内单次注射白消安的方法构建不育小鼠模型；通过显微注射法将HUMSCs移植到不育小鼠睾丸曲细精管内，移植后常规饲养；分别于移植后第l周、2周、1月、2月解剖收取小鼠睾丸。rn 结果：采用组织块贴壁法，用无血清培养体系体外培养、扩增HUMSCs能正常生长2个月以上；腹腔内单次注射白消安4周后，小鼠睾丸体积明显缩小，包膜松弛，管腔变小、质脆，镜下见生精上皮损伤，生精细胞脱落，绝大部分管腔呈“空泡样”改变，不育小鼠模型构建成功；通过显微注射法成功将细胞移植到小鼠睾丸曲细精管，移植l周后HuMSCs主要存在于睾丸曲细精管的官腔内，且有逐渐向基底膜移行的趋势，1月后即可观察到细胞分布在生精上皮近基底膜处，2月时定植于基底膜。rn 结论：采用无血清培养体系，运用组织块贴壁法，HuMSCs体外扩增培养能正常生长至少2个月；HUMSCs移植不育小鼠曲细精管后能够存活并发生迁移，1月后分布在生精上皮近基底膜处，2月时定植于基底膜；HUMSCs对不育小鼠生殖细胞生长有促进作用，并持续增强；HUMSCs对支持细胞的生长有促进作用，但2周后逐渐减弱；HUMSCs对间质细胞生长初期有促进作用，但两周后转为抑制。

摘要： 本文研究三聚氰胺(melamine,MA)对支持细胞的毒性作用,从体外水平揭示支持细胞对MA刺激作用的敏感性及损伤作用特征.结果表明，MA可引起TM4细胞存活率显著下降，破坏细胞超微结构，引起细胞变性坏死和凋亡，下调细胞骨架蛋白表达量，表明MA对TM4支持细胞可以产生明显的损伤作用，为进一步探究MA的雄性生殖毒性作用的发病机理提供一定的科学数据。

摘要： 目的:研究小鼠支持细胞(TM4)中睾丸组织特异性诱导型热休克蛋Hsp70-1基因(Hsp70-B)启动子控制的miRNA干扰载体以及干扰载体在43°C热激条件下启动表达miRNAs干扰uPA基因的表达情况.rn 方法:以Hsp/miR-HSP70-2载体为模板PCR方法扩增Hsp70-B启动子,并进行测序验证,将成功获取的Hsp70-B启动子取代pGL3-BasicCMV启动子,依据有效的uPA-siRNA序列,设计合成MIR-30结构寡核苷酸序列,构建睾丸组织特异性诱导型热休克蛋白Hsp70-1基因(Hsp70-B)启动子控制的miRNA-uPA干扰载体.rn 结果：成功构建睾丸组织特异性诱导型热休克蛋白Hsp70-1基因启动子控制的pGL3-Basic-Hsp70B-EGFP-MIR30-uPA干扰载体，实验组pGL3-Basic-Hsp70B-EGFP-MIR30-uPA干扰载体)、阴性对照(Hsp70-B)(靶向(pGL3-Basic-Hsp70B-EGFP-MIR30- NC)、空白载体(pGL3-Basic-CMV-EGFP)分别转染TM4细胞，Hsp70B在43°C热激3min即可启动同时并不影响支持细胞的增长。rn 结论：除热激本身导致细胞超微病理结构的变化而影响uPA蛋白及mRNA表达量。将组织特异性、可逆性及时空表达调节相结合，为建立uPA沉默双向开启可控的动物模型打下基础，可望实现睾丸组织内uPA基因表达的有效调控，干扰精子发生等多种生理过程，达到男(雄)性避孕的目的，进而可能发展“基因避孕”药物。

摘要： 本文主要通过基因沉默技术来筛选和验证支持细胞中功能分子对骨髓间充质干细胞分化的调控作用。首先对支持细胞中的己报道过的功能分子进行基因沉默，然后证明其功能。主要选择了生长转化因子-β3(Transforming growth factor beta 3,TGF-β3)和胰岛素样生长因子1(Insulin-like growth factor 1,IGF-1)两因子，通过NCBI上的基因信息设计高效特异性的3-4条针对靶基因的siRNA，合成设计好的DNA并退火形成双链DNA，克隆到特异性载体上后转染导入支持细胞中后进行筛选。采用电转和脂质体转染两种转染方法优化后得到的转染率达到了8.9%。通过200ug/ml的G418浓度进行单克隆筛选，得到稳定的靶基因沉默的细胞。将筛选后的细胞与大鼠骨髓间充质干细胞进行共培养，在分析验证其对大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)分化的促进作用。在此实验基础上，在支持细胞二级质谱分析结果的基础上筛选几种未知因子，利用RNA干扰技术可以进一步研究其对MSC细胞分化是否起到相关作用。

摘要： 目的：研究恒河猴睾丸支持细胞对间质细胞分泌睾酮的调节作用。方法：采用无血清培养的方法，分析了促性腺激素释放激素(GnRH)、卵泡刺激素(FSH)、表皮生长因子(EGF)、内皮素1(ET-1)和白细胞介素1(IL-1)对原代共培养恒河猴睾丸支持细胞与间质细胞睾酮分泌水平的影响。结果：GnRH、FSH、EGF和ET-1对原代共培养恒河猴睾丸支持细胞与间质细胞睾酮分泌水平具有促进作用，并且这种影响与共培养的支持细胞数量呈线性关系，即共培养的支持细胞数量增加，睾酮分泌水平亦明显上升;而IL-1对原代共培养恒河猴睾丸支持细胞与间质细胞睾酮分泌水平没有产生影响。结论：支持细胞对间质细胞分泌睾酮具有重要的调节作用。

摘要： 公猪的精子产量主要与支持细胞群体的功能和使用效率有关.大多数支持细胞在妊娠70d开始并且一直持续到产后3周通过有丝分裂进行增殖.第二阶段细胞分化从产后20d开始直到50d完全停止.因此,人们普遍认为成年公猪的支持细胞群体是在公猪2月龄形成,公猪在5～6月龄时,支持细胞开始每3～4d释放一次精子,并且在之后的5～7周精子成熟并获得受精的能力,这个过程会一直持续、不间断的进行,并且会随着公猪生长呈现螺旋状上升,一直到公猪20～24月龄时达到稳定的状态.

摘要： 本文将从Sertoli细胞的结构、功能，电磁辐射致Sertoli细胞的损伤效应、损伤机制及对精子发生影响等方面的研究进展做一简要综述。随着电磁技术在日常生活和国防领域的广泛应用,电磁辐射的生物效应及防护研究日益受到人们的关注并成为研究的热点.电磁辐射可致神经、免疫、心血管、造血、生殖、眼等器官、系统的损伤.其中睾丸是电磁辐射较为敏感的靶器官之一,目前对电磁辐射对睾丸生精细胞损伤效应及机制的研究较多.而电磁辐射对睾丸生精小管内支持细胞(Sertoli细胞)的损伤效应、致伤机制及其对精子发生的影响等方面尚有较多的研究空间。

摘要： 目的：建立一种有效的干细胞体外扩增体系,并在体内观察扩增的干细胞在骨髓、肝脏的植入和及其对造血微环境的影响,进一步分析Notch信号在维持造血干/祖细胞自我更新、促进植入的重要作用及相关机制.方法：以人脐静脉内皮细胞作为培养体系的支持细胞,模拟造血干细胞生长的微环境,联合应用外源性生长因子SCF、TPO、FL、IL-6、IL-3及一种内皮细胞靶向的Notch配体或人D1R(hDlR),与造血干/祖细胞共培养,建立一种有效的体外扩增体系,并通过给辐射小鼠体内直接注射D1R,重点观察了其对HSPC在骨髓、肝脏的植入和对造血微环境的影响,进一步分析了内皮细胞靶向的D1R激活的Notch信号在维持造血干/祖细胞自我更新、促进植入的重要作用及相关机制.

摘要： 目的：探讨龙葵碱对小鼠睾丸支持细胞波形蛋白表达的影响。rn 方法：将40只雄性昆明小鼠随机分为4组,A组腹腔注射等剂量0.9%NaCl,B、C、D组分别腹腔注射龙葵碱5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg,连续染毒14天,取出睾丸组织。利用HE染色、睾丸重量、脏器系数的改变观察小鼠睾丸的病理学变化;利用免疫组织化学法检测睾丸波形蛋白的表达和变化。结果实验表明,与对照组相比20mg/kg组的小鼠睾丸组织切片病理变化明显,曲细精管明显萎缩,大量细胞脱落至管腔及管腔外面,生精细胞与支持细胞分离,管腔内细胞排列紊乱,精子生成数大量减少;10mg/kg组和20mg/kg组的小鼠睾丸脏器系数(0.346±0.020、0.222±0.050)明显低于对照组(0.416±0.065),rn 结果：具有统计学意义;20mg/kg组小鼠睾丸波形蛋白表达明显下降,排列无序,阳性支持细胞脱落至曲细精管官腔之中。rn 结论：龙葵碱可能通过影响支持细胞波形蛋白的表达产生雄性生殖毒性。

摘要： 本发明提供了一种高效感染支持细胞和毛细胞的AAV载体。具体地，本发明提供了一种用于治疗听觉障碍疾病的基因表达载体，所述的表达载体为AAV载体，其中，所述的AAV载体中，插入有或携带有用于治疗听觉障碍疾病的治疗基因的表达盒；其中，所述的AAV载体选自下组：AAV‑PHP.eB、AAV‑DJ，或其组合。本发明所提供的AAV载体在内耳的毛细胞和支持细胞中感染效率高、易生产、安全性好，并且靶向性高。

摘要： 本发明公开了一种新生牛睾丸支持细胞永生化细胞系及其建立方法和应用。所述的新生牛睾丸支持细胞永生化细胞系，命名为新生牛睾丸支持细胞永生化细胞系hTERT‑NBSC，其保藏编号CCTCC NO：C2018201。试验发现，hTERT‑NBSC可以连续传代65代以上，且生长增殖特性保持不变。该细胞系对接种ORFV较为敏感，可以高效增殖ORFV病毒，且可以保证病毒的均一、稳定。用该细胞系所增殖的ORFV病毒滴度与新生牛睾丸支持细胞相当，且细胞分种率高于NBSC，分种率可达1:3。同时利用该传代细胞系来制备疫苗，简化了生产工艺、缩短了生产周期，降低了生产成本，同时还保证了制备得到的羊传染性脓疱病疫苗的质量稳定。因此，本发明的提出对羊传染性脓疱病疫苗的规模化生产提供了新的技术手段。

摘要： 本发明公开了一种羔羊睾丸支持细胞永生化细胞系及其建立方法和应用。所述的羔羊睾丸支持细胞永生化细胞系，命名为羔羊睾丸支持细胞永生化细胞系hTERT‑LSC，其保藏编号为CCTCC NO：C2018202。试验发现，hTERT–LSC细胞系可以连续传代60代以上，且生长增殖特性保持不变，该细胞系对接种羊痘病毒较为敏感，可以高效增殖羊痘病毒，且可以保证病毒的均一、稳定。用该细胞系所增殖的羊痘病毒滴度与羔羊睾丸支持细胞LSC相当，且细胞分种率高于LSC，分种率可达1:3。同时利用该永生化细胞系来制备疫苗，简化了生产工艺、缩短了生产周期，降低了生产成本，同时还保证了制备得到的羊痘病毒疫苗的质量稳定。因此，本发明的提出对羊痘病毒疫苗的规模化生产提供了新的技术手段。

摘要： 本发明提供了用于诱导内耳的细胞(例如，耳蜗毛细胞和椭圆囊毛细胞)重新进入细胞周期并增殖的方法和组合物。更具体地，本发明涉及使用增加c‑myc的活性和/或Notch活性的药剂，用于诱导耳蜗毛细胞或椭圆囊毛细胞和/或耳蜗支持细胞或椭圆囊支持细胞重新进入细胞周期并增殖。本发明的方法和组合物可以用于促进毛细胞和/或支持细胞的增殖，以治疗有听力损失风险或患有此病的对象，或有前庭功能障碍风险或患有此病的对象。

摘要： 本发明公开了一种羔绵羊睾丸支持细胞、睾丸支持细胞亚克隆及其分离方法和应用，其中，所述支持细胞SCST的保藏编号为CCTCC No.C2019203，将其转染SV40大T抗原基因使其永生化，然后进行压力粗筛、压力分种以及持续传代，得到细胞亚克隆SCST‑T F13，其保藏编号为CCTCC No.C202130，可用于牛结节性皮肤病、羊痘及羊口疮等病毒的分离及规模化繁殖。所述细胞亚克隆可以用含国产血清的培养基培养，降低了生产成本，适合规模化生产应用。本发明的细胞亚克隆与常规原代细胞相比，而且能够明显提高牛结节性皮肤病毒的分离率，且牛结节性皮肤病毒的致病变时间明显缩短、分离病毒的拷贝数比传统细胞提高100倍以上，可以为牛结节性皮肤病毒的规模化繁殖及病毒感染致病机制研究提供工具。

摘要： 本发明属生物技术领域，涉及生殖细胞-支持细胞共培养的细胞凋亡检测方法。本发明采用在培养皿中对短期共培养生殖细胞和支持细胞进行直接TUNEL染色，染毒，检测共培养中整体细胞凋亡情况。本发明在培养皿中直接进行TUNEL染色，可保持生殖细胞-支持细胞共培养形态，准确地反应细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征；同时不需要细胞爬片涂片等需要相应技术的过程，提高了实验的成功率。本发明可用于利用生殖细胞-支持细胞共培养系观察化学物的急性生殖毒性和细胞凋亡。经实验验证，方法可信。

摘要： 本发明提供一种将哺乳动物成纤维细胞重编程为类睾丸支持细胞(CiSCs)的方法，通过该方法获得的类睾丸支持细胞(CiSCs)及其应用。本发明的方法易于操作，且未引入外源性基因，有望开发为一种广泛应用的获取非睾丸来源支持细胞的方法，不仅为生殖系统疾病的基础研究和药物开发提供细胞模型和理论基础，还为睾丸支持细胞在再生医学领域的应用带来广泛前景。

摘要： 本文提供了包含至少两种不同的核酸载体的组合物，所述至少两种不同的载体，当被引入到灵长类动物细胞中时，经历彼此串联或同源重组，从而形成编码全长靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白或毛细胞靶蛋白)的重组核酸。还提供了包含单一AAV载体的组合物，所述单一AAV载体，当被引入到灵长类动物细胞中时，在支持细胞靶基因的基因座处产生了编码全长靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白或毛细胞靶蛋白)的核酸，并且所述灵长类动物表达靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白或毛细胞靶蛋白)。

摘要： 本发明提供了用于诱导内耳的细胞(例如，耳蜗毛细胞和椭圆囊毛细胞)重新进入细胞周期并增殖的方法和组合物。更具体地，本发明涉及使用增加c‑myc的活性和/或Notch活性的药剂，用于诱导耳蜗毛细胞或椭圆囊毛细胞和/或耳蜗支持细胞或椭圆囊支持细胞重新进入细胞周期并增殖。本发明的方法和组合物可以用于促进毛细胞和/或支持细胞的增殖，以治疗有听力损失风险或患有此病的对象，或有前庭功能障碍风险或患有此病的对象。

摘要： 本发明公开了Lgr5基因在保护内耳毛细胞及促进支持细胞再生上的应用。所述Lgr5的C端具有如SEQ NO.1所示的核苷酸序列，且N端的第190位具有编码丙氨酸的核苷酸序列。首先构建了Lgr5、Lgr5‑C（Lgr5上823位氨基酸后全部截断）和Lgr5‑190（Lgr5上190位氨基酸由丙氨酸变为天冬氨酸）的腺病毒，分别探究Lgr5基因的C末端和N末端对毛细胞的保护作用和内耳干细胞的再生作用，最后分别研究Lgr5基因的C末端和N末端在内耳中的作用机制，从而确定Lgr5基因对毛细胞的保护和支持细胞再生为毛细胞的作用机制，为治疗耳聋提供新的理论思路，代替助听器和人工耳蜗帮助患者恢复和重建听觉功能。