精原干细胞

摘要： 为研究枸杞多糖对山羊精原干细胞体外增殖的影响,使用机械分离法、两步酶解法及差速贴壁获取纯度较高的山羊精原干细胞,使用碱性磷酸酶(AKP)染色法及免疫荧光染色法对山羊SSCs进行鉴定;通过添加不同浓度的LBP培养山羊精原干细胞,利用CCK-8法检测细胞增殖数量,筛选最佳体外培养浓度;分别测试细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及总抗氧化能力(T-AOC)的含量,最后运用real time PCR技术检测各试验组中Bcl-2和Bax、Bad基因的相对表达量。结果表明,与对照组相比,培养液中添加20μg/mL或40μg/mL的LBP均可以显著促进山羊精原细胞增殖(P<0.05)。与其他试验组相比,40μg/mL的LBP添加组的MDA含量、Bax、Bad基因相对表达量均显著降低,SOD及T-AOC的含量、Bcl-2基因相对表达量均显著升高。因此,在山羊精原细胞体外过程中添加40μg/mL的LBP最有利于促进细胞自我更新。

摘要： 精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是成年动物睾丸中的成体干细胞,具有自我更新与分化的能力。小鼠(Mus musculus)精原干细胞来源于胚胎期的原始生殖细胞(primodial germ cells,PGCs),小鼠出生前原始生殖细胞处于有丝分裂静止状态,出生后恢复增殖并由曲细精管中央迁移至管壁基质,建立稳定的精原干细胞克隆。成熟小鼠的精原干细胞周期性地启动精子发生以维持雄性动物长期稳定的生殖能力。精原干细胞在其建立和成熟后是否具有特征上的差异目前尚不清楚。本研究在前期建立的不同年龄小鼠精原干细胞(表达多能性基因Pou5f1编码的OCT4)转录组数据基础上,对小鼠新生期(出生后3天)、幼年期(出生后7天)和成熟期(2~3月龄)精原干细胞的基因表达差异进行了生物信息学分析,包括差异表达基因(differentially expression genes,DEGs)的筛选、DEGs编码的蛋白相互作用网络(protein-protein interaction,PPI)的建立、功能聚类富集(Gene Ontology,GO)和通路分析(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG),以及使用基于GO、KEGG和HALLMARK的基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)。结果显示,OCT4阳性精原干细胞在小鼠新生期、幼年期和成熟期存在大量差异表达基因,所编码的蛋白主要生物学功能集中在生物合成和能量代谢、免疫反应、细胞连接和迁移以及细胞分化等方面。精原干细胞细胞膜成分的显著变化可能影响精原干细胞的超敏反应、细胞间相互作用以及对细胞外环境因子的应答反应。在能量代谢方式上,随着年龄的增加,OCT4阳性精原干细胞逐渐从线粒体氧化磷酸化作用转变为糖酵解作用,同时也显著减少了细胞内核糖体形成相关基因的转录。这些结果为进一步研究雄性生殖干细胞形成和成熟的调控机制提供了新的思路。

摘要： 目的本研究拟通过miR⁃let⁃7c抑制剂转染精原干细胞(SSCs)观察其对SSCs分化和小鼠精子质量的影响。方法SSCs从新生小鼠(3~6 d龄)的睾丸中分离出来,纯度通过流式细胞术对SSCs的标志物ID4和Thy1进行测定。细胞用miR⁃let⁃7c抑制剂转染并通过qRT⁃PCR检测转染效率,转染后48 h通过免疫组化和Western blot评估SSCs的增殖(GFRa1、PLZF和ID4)和分化(C⁃Kit)标志物的表达水平。体内实验中,60 mg/(kg·d)腹腔注射环磷酰胺被用于制备小鼠少弱精子症模型,附睾内注射转染miR⁃let⁃7c抑制剂的SSCs,以观察生精细胞、间质细胞等变化和分析精子浓度、活力及形态。结果miR⁃let⁃7c抑制剂组转染后SSCs分化标志物的表达明显升高,GFRa1、PLZF和ID4蛋白降低,并显著提高少弱精子症小鼠的精子浓度、精子活力和正常形态率。结论miR⁃let⁃7c抑制剂促进精原干细胞分化并改善小鼠精子质量。

摘要： 精原干细胞(spermatogonia stem cells,SSCs)是一类在睾丸中具有长期自我更新和分化潜能的生殖细胞(germ cells,GCs),即位于基底膜上的组织干细胞,其自我更新和分化受到周围微环境的调控。近年来对SSCs的研究取得了一系列重要进展,为临床治疗部分男性不育患者带来了曙光。其中,微环境对SSCs的调节功能的研究尤为重要,微环境负责整合不同类型的细胞成分、细胞外基质、细胞外调节分子及激素等对SSCs的作用,从而调节SSCs命运。关于SSCs微环境的研究已开始逐步成为干细胞研究的主要内容之一。本文主要对小鼠(Mus musculus)SSCs微环境的细胞组成、调控因子以及特点等研究现状进行了综述,为深入研究SSCs微环境的结构和功能提供背景资料,希望在未来能够通过多种研究模式复用,发现更为丰富的细胞表型和微环境因子。

摘要： [目的]研究猪睾丸组织注射白消安消融猪内源精原干细胞(Spermatogonialstemcell,SSC)的效果,以及猪SSC同种异体移植后对内源性SSC消融受体生殖能力恢复的影响.[方法]采用3 mg/kg剂量的白消安对9头6周龄大白公猪进行睾丸注射,另外3头注射2 mL二甲基亚砜作为对照.3周后,对试验组公猪以相同剂量进行第2次睾丸注射.第2次注射3周后,采集试验组和对照组公猪睾丸进行相关检测,评估内源性SSC消融情况.第2次白消安注射1个月后,以两步酶消化法处理5～7日龄大白仔猪睾丸分离得到睾丸单细胞悬液,并用明胶差速贴壁法进行纯化,纯化后以免疫荧光和流式细胞术分析SSC的纯度.异体移植SSC 4个月后,用微卫星标记检测受体公猪精液以及睾丸组织中供体来源SSC的存在.[结果]以3 mg/kg剂量的白消安处理大白公猪2次后,睾丸组织苏木精?伊红染色以及免疫组织化学染色结果显示,试验组睾丸曲细精管中各级生精细胞消融但其支持细胞结构完好,可以支持外源性SSC的定植及发育.免疫荧光以及流式细胞术结果表明,分离得到的睾丸单细胞悬液经纯化后UCHL-1阳性细胞占比由差速贴壁前的16.3％提高到了50.8％.苏木精?伊红染色以及免疫组织化学染色结果显示,猪SSC移植4个月后,移植组睾丸组织生精细胞恢复,在受体睾丸曲细精管基底膜上可检测到UCHL-1阳性SSC.受体睾丸组织的微卫星标记分析显示了供体SSC的存在,表明移植进入受体睾丸中的供体SSC可以在受体睾丸中定植存活超过4个月;精液微卫星标记未检测到供体来源的精子.[结论]以3 mg/kg剂量的白消安注射公猪睾丸能有效消融内源性SSC,可以用来制备SSC移植的受体猪.两步酶消化及明胶差速贴壁法可成功分离纯化猪SSC.猪SSC经同种异体移植后可以在受体睾丸中定植存活超过4个月.

摘要： 男性不育症正受到越来越多的关注,但其发生、发展的分子机制尚不明确,诊断、检测和治疗手段仍不完善.精原干细胞作为维持男性生育能力的基础,在男性不育症的发生和发展中起到决定性的作用.传统的测序技术是对大量的混合细胞进行分析,无法观察到各种类型细胞之间的区别,还会掩盖SSC这类重要且稀少细胞的独有特征.单细胞测序技术能够对单个细胞进行无偏倚、高通量和高分辨率的分析,为探究SSC在单细胞水平的变化提供了新的手段,同时也为发现新的生物学标志物和潜在靶点,促进男性不育症的个性化诊疗提供了新途径.

摘要： 旨在研究褪黑素(melatonin,MT)对体外培养猪精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)的作用机制.本研究采集3头7日龄健康大白公猪睾丸,利用差速贴壁法获得SSCs.后经形态学观察、碱性磷酸酶染色、标记基因检测及免疫荧光染色鉴定后以SSCs作为试验材料,设置MT浓度梯度(0、50、250、500、1 000 μmol·mL-1)组处理SSCs,每组设3个重复(n=3),空白对照组加入0.1％DMSO处理,分别检测添加MT后猪SSCs的细胞活力、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量及凋亡基因表达变化.结果显示:1)分离的克隆团细胞具有SSCs的生长特性,可被碱性磷酸酶染色并表达干细胞标志基因OCT4、SOX2和SSCs标志基因NANOG、PLZF、UCHL 1;2)50 μmol·mL-1以上的MT在处理48 h后可显著提高SSCs的细胞活力(P＜0.05);3)MT可显著降低猪SSCs内ROS水平(P＜0.05),极显著增加细胞内GSH含量(P＜0.01);4)MT可显著抑制猪SSCs内凋亡蛋白Bax和Caspase3的表达(P＜0.05).MT具有清除猪SSCs中的ROS,提高总GSH含量,抑制凋亡基因表达进而提高细胞活力的作用,可为养殖过程中提高公猪繁殖性能提供参考.

摘要： 精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是精子发生的基础.SSCs的数量减少或功能缺陷会导致雄性生殖障碍.鼠SSCs的分离主要采用两步法,通过机械分离和酶消化睾丸组织后,采用差速贴壁法、密度梯度法、免疫磁珠分选法或流式细胞分选法等纯化SSCs.SSCs的鉴定主要是以胶质细胞源性神经营养因子家族受体α1、死盒解旋酶4、锌指和BTB结构域包含16等特异性标志物为基础,结合荧光定量PCR法和免疫组织化学法完成.SS?Cs的体外培养体系中基础培养基和适宜的温度是培养的必要条件,常用的SSCs培养基主要有DMEM、MEM以及SFM等,StemPro-34SFM适用于培养大鼠SSCs.32～37°C适合小鼠SSCs的体外培养,而34°C更有利于提高SSCs的增殖及维持其细胞活性.饲养层细胞可更好地延长SSCs的体外培养时长.在体外培养体系中加入血清及生长因子有助于促进SSCs的增殖.

摘要： 精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是雄性哺乳动物精子发生及具有生育能力的保障.精原干细胞的体外培养不仅为精子发生的研究提供材料,还有助于开发新的家畜保种方法和动物遗传修饰.为了探索猪精原干细胞体外培养体系的建立方法,本研究采用胶原酶Ⅳ-胰酶两步酶法对3～7日龄大白仔猪睾丸进行消化得到单细胞悬液,利用不同时间程序的差速贴壁对精原干细胞进行纯化,选择大白仔猪睾丸支持细胞作为饲养层,添加不同细胞因子研究精原干细胞的增殖情况以期得到最佳的培养体系.结果显示,通过差速贴壁得到的UCHL-1阳性生殖细胞比例最高为18.59％ ±0.94％;不同细胞因子组合添加试验发现精原干细胞添加20 ng·mL-1 GDNF、10 ng·mL-1 IGF和20 ng·mL-1 bFGF的增殖效果最佳;以支持细胞作为饲养层、在DMEM/F12中添加1％FBS以及上述细胞因子组合对精原干细胞进行培养15 d后可见大量的精原干细胞集落,通过免疫荧光、AKP染色、荧光定量PCR等试验证明精原干细胞进行了大量增殖.本研究初步建立了猪精原干细胞的体外培养体系,可通过体外培养大量增殖精原干细胞,为后续精原干细胞的研究奠定基础.

摘要： 以5日龄、10日龄和15日龄湖北白猪睾丸为主要研究对象,采用浓度为4 mg/mLⅣ型胶原蛋白酶联合0.25％胰蛋白酶两步酶法消化法获取湖北白猪精原干细胞,通过低速离心和差异贴壁法对湖北白猪精原干细胞进行纯化,以湖北白猪睾丸支持细胞作为饲养层进行体外培养,结合碱性磷酸酶(AKP)进行染色鉴定.结果表明,培养获得的细胞即为目的细胞SSCs.

摘要： 精原干细胞(SSCs)的形成为精子的发生提供了基础.成纤维细胞生长因子家族对SSCs的形成至关重要,FGF8调控SSCs生成的功能需要深入研究. 目的：本试验旨在研究FGF8对鸡胚胎干细胞(ESCs)向精原干细胞分化的作用,为进一步提高SSCs体外诱导效率,研究SSCs形成的分子调控机制奠定理论基础. 方法：前期利用RNA-seq技术对胚胎干细胞(ESCs)、原始生殖细胞(PGCs)和精原干细胞(SSCs)转录本进行高通量测序,分析筛选了SSCs发育分化过程的关键生长因子;在体外ESCs分化为SSCs模型中对FGF8进行过表达和干扰处理,观察细胞的形态变化.通过qRT-PCR、细胞免疫化学和流式细胞分析检测PGCs和SSCs的标记基因表达以及生成效率;在体内,通过胚盘注射方法对FGF8过表达和干扰处理,研究FGF8对鸡SSCs形成的影响. 结果：结果表明:在ESCs向SSCs分化过程中共检测到6078个差异表达基因,其中包括大量生长因子家族(TGFB、EGF、GDNF、FGF等),qRT-PCR显示FGF8表达趋势与RNA-seq中的结果一致.体外模型中,敲低FGF8,生殖标记基因Cvh(2.55±0.121)、Integrinα6(2.396±0.154)表达量与对照组相比显著上调(P＜0.01),而过表达FGF8显著上调Nanog(1.453±0.093)、Cvh(1.432±0.082),但极显著下调Integrinα6(0.782±0.043)(P＜0.01);干扰FGF8后CVH+细胞(5.3％±0.25)和Integrinα6+细胞(7.9％±0.45)的比例显著高于对照组(4.4％±0.23和4.3％±0.21;P＜0.01).鸡胚盘注射实验中,敲低FGF8,生殖标记基因Cvh(7.914±0.471)、Integrinα6(5.066±0.362)表达量均呈极显著上调(P＜0.01);同时,CVH+细胞(16.6％±1.02)和Integrinα6+细胞(7.54％±0.43)显著高于对照组(10.48％±0.93和6.07％±0.37;P＜0.01);过表达FGF8后Cvh(1.136±0.083)显著上调,Integrinα6(0.632±0.043)表达量极显著下调,CVH+细胞比例(23.5％±1.13)显著高于对照组(20.1％±1.24;P＜0.05),极显著低于干扰组(26.2％±1.43;P＜0.01)。 结论：结果表明FGF8在鸡ESCs向SSCs分化过程为负调控作用,敲低FGF8,能够促进鸡ESCs向SSCs的分化,而过表达FGF8能促进PGCs的自我更新,同时抑制其向SSCs分化.

摘要： 精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是指睾丸内存在于曲细精管基底膜上,既可以自我更新维持,又可定向分化为精子的一类精原细胞.作为精子生成源泉的精原干细胞,在研究及治疗非梗阻性无精症患者中的有着广阔的临床前景,本文就睾丸支持细胞对精原干细胞的作用及主要相关因子进行综述.在睾丸成体细胞中，SCs对SSCs的影响最大，SCs为包括SSCs在内的各级生精细胞提供了发育的外部支架之外，还为其中的生精细胞提供了生长发育的微环境。作为“保姆细胞”的SCs通过分泌各类因子及物质对SSCs的自我更新和分化进行精确的调节，同时为SSCs提供了特殊的免疫豁免环境。SCs还能通过调控其他成体细胞，从而间接影响SSCs的功能，在精子发生中发挥着无可替代的作用。

摘要： 中国是水牛数量居第二位的国家,与牛相比,水牛的基因改造尤其是遗传进展更依赖于新兴动物繁殖生物技术,特别是在干细胞领域,其中精原干细胞介导的转基因技术为水牛的遗传改良带来了广阔的发展空间,而精原干细胞移植是检测精原干细胞功能活性的一项重要技术手段,本文对畜禽精原干细胞移植进行了综述,特别对近几年水牛精原干细胞方面的研究进行了重点介绍,尽管跨物种的精原干细胞移植没有提供直接的实际应用,但是它是对分离得到的生殖细胞进行干细胞潜能评定的生物模型,同时有利于探索雄性生殖系干细胞和睾丸生物学功能,以及雄性不育的潜在原因.

摘要： 目的：为了掌握食蟹猴(Macaca fascicularis)精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)体外培养生长特性,建立其食蟹猴精原干细胞(MSSCs)分离纯化培养及初步鉴定方法.rn 方法：经手术获取2岁又14天食蟹雄猴单侧睾丸,采用三步酶消化法分离获得单细胞悬液和差异贴壁法富集精原干细胞.将细胞培养于经丝裂酶素处理的STO细胞上,使用添加GDNF,bFGF,GFRa1三个重要生长因子的无血清培养液在体外培养超过20天后,应用CDH1标记分子免疫荧光染色和RT-PCR对培养的食蟹猴细胞进行SSCs初步鉴定.rn 结果：通过差速贴壁法分离纯化富集的SSCs,经接种到丝裂霉素C处理的STO饲养层细胞上的第二天开始分裂增殖.用含有生长因子的培养基培养2天细胞形成小集落,5天后细胞集落明显.培养20天后,SSCs呈葡萄串状细胞簇,符合SSCs的形态特征,这些细胞经CDH1标记分子免疫荧光染色和RT-PCR均呈阳性表达.rn 结论：该研究成功建立了食蟹猴SSCs的分离纯化培养方法,通过形态学观察鉴定所培养细胞集落形态与SSCs形态相似,免疫荧光染色和RT-PCR鉴定CDH1是食蟹猴SSCs的标记分子.

摘要： 精原干细胞(SSCs)通过自我更新产生大量分化的生殖细胞并在出生以后形成精子,能够将遗传信息传递给下一代.因为所有雌性生殖干细胞在出生前已停止增殖,所以SSCs是成年后唯一的生殖干细胞。本文先介绍SSCs的发展情况,然后阐述SSCs与在组织中体干细胞和在体外的多功能干细胞之间的联系,如胚胎干细胞。接下来介绍一种移植技术,将有生育能力的雄性供体睾丸细胞移植到不育症雄性睾丸细胞中,不育症的雄性可以重新进行精子发生和恢复生育能力.该移植技术已经用来研究SSCs的生物学特性，在体外进行老鼠精原干细胞自我更新和增殖有可能有外部因素进行识别。研究所有哺乳动物的精原干细胞,包括人类,可以发现它在小鼠的曲细精管进行复制,然后迁移,精原干细胞所需自我更新的生长因子保存在哺乳动物中.因此该培养技术很快就被应用于人类的精原干细胞中.最后讨论了现有的和潜在的方法运用移植技术和体外培养精原干细胞。由于辅助的生殖技术能使圆形或长形的精子细胞进入卵母细胞使之受精，在体外培养分化的精原干细胞成为成熟的生殖细胞技术的发展将促使临床培养人的精原干细胞的应用。

摘要： 精原干细胞的研究有重要意义,其原因在于它们能将遗传信息传递给子代,并具有强大的发育潜能.本文将主要介绍以下内容:1)精原干细胞自我更新的小分子RNA (miRNA)调控;2)精原干细胞转分化为成熟肝细胞及其信号转导通路.本文首次研究了多种miRNA在小鼠睾丸中的表达,发现miRNA-20 and miRNA-106a主要在精原干细胞高水平表达.体内和体外功能实验显示miRNA-20 and miRNA-106a对精原干细胞的自我更新起重要作用.进一步论证STAT3、Fos和Ccndl是miRNA-20 and miRNA-106a的作用靶位.该研究(Zuping He,et al.StemCells,published online on July 8,2013)为精原干细胞的自我更新提供了新的分子调控机理,并为新型男性避孕的研发提供新的靶标.供体肝脏和肝细胞的严重短缺是肝移植治疗面临的最大难题.肝外来源的干细胞可作为肝细胞的重要来源,为肝病的治疗带来新的希望.

摘要： 本文首先介绍了男性不育，分析了长链非编码RNAs，精原干细胞--SSCs，SSCs起源、更新、维持。精子中的tsRNA可以跨代遗传。

摘要： Stra8是在哺乳动物生殖细胞中有丝分裂转变为减数分裂时表达的特异性基因,在哺乳动物和鸟类的减数分裂发生中起关键作用.因此,cSSCs(鸡精原干细胞)中Stra8通路的研究可以更深入地了解鸟-类精子发生.miRNA也是SSCs减数分裂的重要调控因子.然而,目前没有数据表明miRNA通过Stra8调节SSCs的减数分裂.在这里,使用在线生物信息学数据库-Targetscan预测靶向Stra8的miRNA,并对双荧光素酶重组载体pG13-CMV-LUC-MCS-Stra8-3'UTR进行了分析.将miR-31模拟物(miR-31m),miR-31抑制物(miR-31i),对照(miR-NC)转染到cSSC中;通过RT-qPCR,免疫荧光和Western blot分析Stra8和miRNA;通过流式细胞术检测单倍体.结果表明,miR-31通过体外和体内靶向Stra8调节cSSC的减数分裂.我们的研究确定了miR-31靶向Stra8并抑制精子发生的新调控途径.

摘要： 本文就GDNF介导的信号通路以及下游转录因子POU3F1、ETV5、BCL6B、LHX1和基因H19、A-myb、N-myc等做一综述,并对存在的问题及今后的研究方向提出初步意见.结果表明GDNF可通过多条信号通路促进SSCs的自我更新，该过程中还存在信号分子间的交联现象，同时，GDNF又可影响其他信号通路和相关因子来调控SSCS。

摘要： Human Sertoli cells were isolated from the testes of NOA and OA patients by a two-step enzymatic digestion and differential plating. Sertoli cells were identified by RT-PCR and immumochemistry. Sertoli cells obtained from OA patients with normal spermatogenesis served as the control. Nodal signaling genes and proteins expression profiles were investigated by PCR, immunochemistry. CCK8 was adopted to demonstrate whether Nodal promotes the proliferation of human Sertoli cells. Quantitative-PCR was used to detect the genes expressions of Nodal signaling after treatment of Nodal and its receptors inhibitors SB431542.

摘要： 本发明属于细胞生物学领域，涉及精原干细胞(SSCs)向神经细胞分化的体外高效培养方法。本发明通过多聚赖氨酸处理培养器皿，增加SSCs贴壁能力，添加神经因子B27和N2，以及去除生长因子条件下，结果显示SSCs可高效向神经细胞分化。本发明建立的方法适合流程化操作、重复性高、成功率高、操作简单，无需特殊化条件就能达到效果，可极大的节省时间和试验材料，以往多应用多能干细胞进行神经细胞诱导，存在诱导的不彻底性。本发明应用SSCs，对比胚胎干细胞(ESCs)显示出SSCs向神经细胞分化高效性和彻底性，本研究结果显示SSCs诱导效果明显具有优势。可能成为应用到修复神经组织损伤的一种更优化的干细胞来源，成为一个新的技术方案。

摘要： 本发明涉及可以长期维持且无饲养细胞的未分化的精原干细胞的产生和培养。所得的无饲养细胞的群体可以用于许多方案中的任一种，包括子代公牛的产生。本发明包括成功富集牛精原干细胞所需的新方法、新细胞系和用于成功富集牛精原干细胞的其他组分，以及所得的干细胞组合物。

摘要： 本发明公开一种建立可持续传代的树鼩精原干细胞细胞系的方法，专用培养基成分主要包括bFGF、LIF、EGF、GDNF、wnt3a和FBS，分离和培养方法是将消化成单细胞的树鼩睾丸组织标记抗体后，利用流式细胞术或磁珠筛选获得Thy1+细胞群，将分选获得的树鼩睾丸Thy1+细胞转入培养皿中培养，至培养皿中出现三五成群的精原干细胞集落时，转入新的有丝裂霉素处理过的专用饲养层包被的培养皿中传代培养。本发明的细胞分选效率高，专用培养基成分确定，并避免了异源细胞的污染。培养方法简单高效，对树鼩精原干细胞的分离具有获得目标细胞率高，建立可持续传代细胞系成功率高、细增殖传代能力强和安全稳定的优点。

摘要： 本发明提供了一种牙鲆精原干细胞培养液及建立牙鲆精原干细胞系的方法，涉及生物技术领域。所述培养液包含以下成分：10％‑18％的FBS、0.8％‑1.2％的牙鲆血清和40‑60μmol/L的β‑巯基乙醇(β‑ME)。本发明通过摸索牙鲆精原细胞的体外培养及纯化方法，提供了适于精原干细胞的培养液并建立了适宜精原干细胞稳定传代的培养条件，最终获得了比例较高的精原干细胞，并提供了全方面鉴定精原干细胞的方法。

摘要： 本发明涉及一种体外诱导人多能干细胞分化为精原干细胞样细胞的方法，包括以下步骤：S1、将人多能干细胞铺在基底胶包被的培养皿中，加入mTeSR培养基培养至细胞汇合度为80％‑90％；S2、将mTeSR培养基更换为SSCLC诱导培养基培养12天，每天更换培养基，即可诱导得到精原干细胞样细胞；所述SSCLC培养基为在MEM‑α培养基的基础上添加了血清替代物、L‑丙氨酰‑L‑谷氨酰胺二肽、胰岛素、转铁蛋白、亚硒酸钠、乙醇胺、脂质浓缩物、青霉素、链霉素、人胶质源性神经营养因子、人碱性成纤维细胞生长因子、维生素C和丙戊酸。本发明在SSCLC诱导培养基中加入丙戊酸，提高了精原干细胞样细胞的诱导效率。

摘要： 本发明涉及诱导猪精原干细胞转变为多能性干细胞的技术，可以在不改变细胞基因组的前提下，使猪精原干细胞发生细胞形态和分子表达水平向胚胎干细胞转变，且高表达多能性相关基因0ct4、Nanog和Klf4等，同时克隆为碱性磷酸酶阳性克隆。本发明具有高效、安全性好、应用前景广泛等优点。

摘要： 本发明提供了一种体外诱导人的多能干细胞分化为精原干细胞的方法，其特征在于，包括：步骤1：首先将人的多能干细胞培养在饲养层细胞上或在TeSR培养基中培养1‑2天，然后在第一分化培养基中继续培养8‑15天，其中，前面4‑6天在37°C，5％CO

摘要： 本发明公开了一种水牛精原干细胞样细胞纯化过程中细胞类型的鉴定方法，包括以下步骤：(1)采用差异贴壁分选法对水牛睾丸单细胞悬液进行分离纯化，并收集纯化过程中得到的不同类型细胞；(2)用总RNA试剂盒提取步骤(1)收集到的不同类型细胞的总RNA，然后使用反转录试剂盒进行反转录生成cDNA；(3)再用步骤(2)得到的不同类型细胞的cDNA作为样本，并分别以特定基因的引物，做定量PCR，再绘制相应的图谱即可。本发明采用分子特异性检测方法，可以快速、准确地鉴定差异贴壁过程中细胞的类型。

摘要： 本发明公开一种水牛精原干细胞样细胞的体外培养及传代方法，将原代水牛精原干细胞样细胞放入含有水牛支持细胞的培养皿上，培养60‑120h，完成体外培养；在体外培养得到的的水牛精原干细胞样细胞中加入PBS缓冲液，收集表层细胞，在该表层细胞中加入胰酶细胞消化液消化10‑60s，再加入IMDM培养液终止酶消化反应，收集表层细胞，将第二次收集的表层细胞移至铺有明胶的培养皿中，培养1.5‑4h，取上清细胞转移至含有水牛支持细胞的饲养层，完成传代培养；本发明的体外培养及传代方法操作简便，安全可靠，重复性高，对于哺乳类动物的不孕不育治疗以及濒临灭绝物种资源的保护具有重要意义。

摘要： 本发明公开一种用于体外培养的水牛精原干细胞样细胞的纯化方法，将水牛睾丸单细胞悬液接种在铺有明胶的培养皿I中，加入干细胞培养液培养6‑20h；收集培养皿I中悬浮及贴壁不牢的细胞并移至铺有鼠尾胶原蛋白的培养皿II中培养2‑6h，收集培养皿II中的上清细胞并移至铺有层粘连蛋白的培养皿III中培养20‑60min，然后收集培养皿III中的贴壁细胞，即可获得纯化后的水牛精原干细胞样细胞；本发明使用差异贴壁法对水牛精原干细胞样细胞进行纯化，大大减小水牛精原干细胞样的培养时间，且能维持细胞活性，为获得大规模的优良水牛品系提供了实践基础，对于哺乳类动物的不孕不育治疗以及濒临灭绝物种资源的保护具有重要意义。