毛细胞

摘要： 目的探讨自噬在噪声性耳聋防治中的作用及机制。方法建立大鼠噪声性耳聋模型。随机分为3个组:对照组(每次2 mL生理盐水);自噬激动剂雷帕霉素(RAP)组(每次7.5 mg/kg);自噬抑制剂3-甲基嘌呤(3MA)组(每次30 mg/kg 3MA),以上各组均于噪声暴露前24、暴露前2 h和暴露后即刻进行腹腔注射。听觉脑干反应(ABR)阈值检测评估大鼠ABR情况。应用双重免疫荧光染色检测氧化应激(OS)标记物3-硝基酪氨酸(3-NT)阳性表达细胞。Western blot检测自噬标记LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin-1表达水平。使用TUNEL法检测细胞凋亡。结果噪声暴露后小鼠ABR阈值较暴露前升高。RAP组在噪声暴露后1、12、24 h各时间点的ABR阈值较对照组均明显增加;而3MA组在以上各时间点的ABR阈值较对照组则明显减少(均P<0.05);噪声暴露后各耳蜗毛细胞自噬标记蛋白表达水平较暴露前明显升高。RAP组噪声暴露1、12、24 h耳蜗毛细胞自噬标记蛋白表达水平明显高于对照组,而3MA组以上各时间点耳蜗毛细胞自噬标记蛋白表达水平则明显低于对照组(均P<0.05);噪声暴露后各组耳蜗毛细胞3-NT水平明显较暴露前增高,RAP组暴露1、12、24 h 3-NT水平较对照组增加;而3MA组以上各时间点3-NT水平较对照组减少(均P<0.05);噪声暴露后各组耳蜗毛细胞凋亡较暴露前明显增加,RAP组耳蜗毛细胞凋亡较对照组增加,而3MA组耳蜗毛细胞凋亡较对照组减少(均P<0.05)。结论在噪声性耳聋损伤的急性期,自噬表达明显上调,并通过OS途径诱导毛细胞凋亡;抑制自噬能够明显改善毛细胞程序性凋亡的发生,进而改善听力。

摘要： 目的评价不同噪声条件(100dB SPL白噪声,120dB SPL白噪声和116dB SPL,8-16kHz窄带噪声)对C57BL/6J小鼠听阈、I波幅值、I波潜伏期和耳蜗基底膜内、外毛细胞易损性的影响。方法采用听力正常的5-6周龄雄性的C57BL/6J小鼠,随机分为4组:100dB SPL白噪声组(100dB),120dB SPL白噪声组(120dB)和116dB SPL,8-16kHz窄带噪声组(116dB 8-16kHz)以及对照质控组(Ctrl),分别对白噪声和窄带噪声损伤进行观察研究。噪声暴露处理2h,24h后重复一次,于二次噪声结束后1天(NE-1d)、7天(NE-7d)、14天(NE-14d)进行相关数据采集。对各组小鼠ABR阈值、I波幅值、I波潜伏期进行数据统计,并对毛细胞损伤情况进行计数分析。结果100dB组噪声暴露后第1天仅有16k、24k阈值升高,于第7天继续轻度升高,于第14天基本恢复正常阈值水平;I波幅值统计显示,噪声暴露后第1天、第14天各频率(Click/4k/8k/16k/24k)I波幅值均有下降,且多数差异显著(P0.05)。120dB组会导致少数外毛细胞缺损情况且多于中、底回出现,其部分时间点数据有统计学差异(P<0.05)。116dB 8-16kHz组会导致外毛细胞大量丢失,顶回见少许残留外毛细胞且排列紊乱,与Ctrl组相比差异极显著(P<0.01)。结论100dB白噪声暴露4h会导致小鼠暂时性阈移,但出现I波幅值降低、潜伏期延长,考虑出现隐匿性听力损失;内、外毛细胞无明显损伤。120dB白噪声暴露4h会导致小鼠全频轻度永久性阈移,同时伴随全频I波幅值降低、潜伏期延长;外毛细胞轻度损伤,内毛细胞形态学无显著变化。116dB 8-16kHz噪声暴露4h会导致小鼠全频重度永久性阈移;内、外毛细胞严重受损。即噪声暴露后高频谱段听力和毛细胞更易受损,且噪声损伤与噪声暴露强度正相关,同时相似强度的窄带噪声比白噪声致损更加严重。

摘要： 目的探索腺相关病毒载体Anc80L65对正常和不同程度损伤的成年小鼠椭圆囊前庭感觉上皮的转染特性。方法将6周龄小鼠分为以下三组。1)正常对照组:将携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的Anc80L65病毒液(Anc80L65-GFP),经后半规管注射途径导入小鼠内耳;2)中度损伤组:行水平半规管注射导入150μg链霉素,术后2周通过后半规管注射导入Anc80L65-GFP病毒液;3)重度损伤组:行水平半规管注射导入400μg链霉素,术后2周行后半规管注射导入Anc80L65-GFP病毒液。导入病毒后4周取椭圆囊行免疫荧光染色,观察椭圆囊的形态及GFP在椭圆囊感觉上皮的表达情况。结果正常对照组:Anc80L65-GFP病毒液注射后,正常椭圆囊毛细胞无明显缺失,纤毛形态正常,GFP广泛分布于整个感觉上皮区域。中度损伤组:椭圆囊前庭毛细胞数量明显减少,支持细胞仍存活,GFP广泛分布于整个感觉上皮区域。高倍镜下见前庭支持细胞和毛细胞被转染。重度损伤组:椭圆囊的前庭毛细胞和支持细胞均被损伤,前庭感觉上皮演化为细胞大小不一、形态不规则的扁平上皮结构。在前庭扁平上皮中,GFP阳性细胞数量与对照组及中度损伤组相比明显减少。结论Anc80L65能高效转染正常和中度损伤后的成年小鼠椭圆囊前庭感觉上皮,但对重度损伤后形成的前庭扁平上皮的转染效率较低,这可能与其细胞属性发生改变有关。在未来的前庭基因治疗研究中,须根据前庭感觉上皮的不同损伤程度来选择合适的载体。

摘要： 临床上已经有文献报道,噪音暴露、耳毒性药物、人工耳蜗植入、衰老等因素会引起耳蜗的急性炎症或慢性退化。巨噬细胞作为耳蜗内主要的免疫细胞,参与耳蜗的发育成熟过程,并在耳蜗急慢性损伤后发挥它的免疫功能。本文主要综述耳蜗巨噬细胞在急性炎症和衰老状态下的分布表型,并分析其在耳蜗急慢性炎症中动态变化,为临床耳蜗炎症治疗提供一种新思路。

摘要： 内耳毛细胞(hair cell)是动物感知听觉和平衡信息的感受器细胞,负责将机械能信号转换为电信号(即机械-电转换,简称为MET),因位于其上表面的细胞突起——纤毛束(hair bundle)而得名。每个毛细胞的纤毛束包括一根以微管蛋白为骨架的动纤毛(kinocilium)和多根以肌动蛋白为骨架的静纤毛(stereocilia)。动纤毛在纤毛束的发育过程中发挥重要作用,而静纤毛对于机械-电转换必不可少。每个毛细胞中的静纤毛组织成多排高度不同的阶梯状结构,其发育和维持受到严格调控。近年来,随着蛋白质组学、转录组学、超高分辨显微镜等技术的发展,人们对静纤毛高度调控分子机制的认识越来越深入,但仍有很多问题亟待回答。文章对目前已知的静纤毛高度调控的分子机制进行简要介绍。

摘要： 有时像蝉鸣,有时如雷声,有时仿佛是昆虫嗡嗡振动翅膀……别误会,这不是在描写大自然,而是在形容耳鸣。它是在没有外部声源的情况下,耳内或颅内产生嗡嗡、嘶鸣等各式各样的异常声响。这种以往多见于中老年人的病症,已经盯上了年轻人。压力大、节奏快、生活不规律,再加上喜欢在运动、乘坐地铁公交或在高速路开车时使用耳机,音量大时间长,还有的塞着耳机睡觉,长期刺激让内耳的毛细胞得不到休息,导致听力下降,就有可能出现耳鸣。

摘要： 目的探讨5%聚维酮碘溶液对豚鼠中耳黏膜损伤程度及内耳毒性。方法选取26只体重及听力正常的豚鼠,随机分成4组,一次生理盐水给药组(Once saline,OS)4只,双耳经鼓室注射一次生理盐水0.2ml;一次聚维酮碘给药组(Once PVP-I,OP)9只,双耳经鼓室注射一次5%聚维酮碘0.2ml;连续生理盐水给药组(Continuous saline,CS)4只,双耳经鼓室注射生理盐水0.2ml;每日一次,连续7天;连续聚维酮碘给药组Continuous PVP-I,CP)9只,双耳经鼓室注射5%聚维酮碘0.2ml;每日一次,连续7天;全部给药结束后行ABR检测;检测后快速取出听泡,通过评分系统对中耳腔进行评分;将中耳和内耳渗出物进行HE染色;随后剥离耳蜗基底膜,经免疫荧光染色观察毛细胞数目。结果实验前,所有组豚鼠听力全部正常。实验后,OS组和CS组各有1耳听力稍有下降,但不超过10dB nHL,差异无统计学意义(P>0.05),OS组中耳黏膜未出现黏膜增厚、血肿、充血、粘连;CS组偶见黏膜增厚和充血,OS组和CS组免疫荧光染色中未见毛细胞丢失,毛细胞形态正常。OP组中有2耳听力无下降,其余16耳有10-65dB nHL听力下降,差异有统计学意义(P<0.05),中耳以黏膜充血和血肿为主要变化,无黏膜增厚和粘连现象,免疫荧光染色结果未见毛细胞丢失,细胞形态正常。CP组有14耳全聋,90dB nHL未能引出III波,其余4耳亦有听力损失,差异有统计学意义(P<0.05),全部中耳均有明显粘连、黏膜增厚、充血和血肿,各回毛细胞均有不同程度丢失。进一步分析发现CP组听力下降最明显,OP组次之,OS和CS组听力改变最不明显。结论5%聚维酮碘溶液可对中耳黏膜产生损伤并具有耳毒性。

摘要： 当你用设备录下自己的声音之后,再听起来会有所不同,怎么会这样?从科学角度来说,嗓音是由声带振动产生的,声音通过空气传播到其他人的耳膜上,这样别人就能听到你的声音了。这些声音从中耳传入内耳,然后经耳蜗处的毛细胞转变为生物电,再沿着听觉神经经由脑干传入大脑的听觉中枢,由听觉中枢对声音进行分析和理解。而当我们听到自己的声音时,声波的音高会被降低,也就是说,你会觉得自己的声音含有更多的低音成分,而当你听录音回放时,声音就减去了少许低音成分,这时你的声音就会变得尖锐,音调也更高。

摘要： 目的对低分子量鱼精蛋白(low molecular weight protamine,LMWP)修饰的PLGA纳米粒在内耳毛细胞的分布特性进行考察,旨在为防治内耳疾病的药物递送提供新载体。方法利用LMWP对PLGA纳米粒进行修饰,并进行表征;通过HEI-OC1细胞模型考察纳米粒的细胞毒性;采用激光扫描共聚焦荧光显微镜技术对纳米粒进入斑马鱼的能力进行评价,同时考察纳米粒在豚鼠耳蜗和基底膜的分布情况。结果 LMWP修饰PLGA纳米粒的分散性良好,粒径分布均匀;纳米粒具有较低的细胞毒性,且能够更有效地被斑马鱼侧线毛细胞摄取。与未修饰的纳米粒相比,LMWP修饰显著增强纳米粒在豚鼠耳蜗的分布,并且明显促进基底膜中回和顶回毛细胞的摄取。结论 LMWP修饰的PLGA纳米粒具有良好的细胞相容性,能有效递送至斑马鱼和豚鼠毛细胞,有望成为内耳给药的新型载体。

摘要： 目的 对低分子量鱼精蛋白(low molecular weight protamine,LMWP)修饰的PLGA纳米粒在内耳毛细胞的分布特性进行考察,旨在为防治内耳疾病的药物递送提供新载体.方法 利用LMWP对PLGA纳米粒进行修饰,并进行表征;通过HEI-OC1细胞模型考察纳米粒的细胞毒性;采用激光扫描共聚焦荧光显微镜技术对纳米粒进入斑马鱼的能力进行评价,同时考察纳米粒在豚鼠耳蜗和基底膜的分布情况.结果 LMWP修饰PLGA纳米粒的分散性良好,粒径分布均匀;纳米粒具有较低的细胞毒性,且能够更有效地被斑马鱼侧线毛细胞摄取.与未修饰的纳米粒相比,LMWP修饰显著增强纳米粒在豚鼠耳蜗的分布,并且明显促进基底膜中回和顶回毛细胞的摄取.结论 LMWP修饰的PLGA纳米粒具有良好的细胞相容性,能有效递送至斑马鱼和豚鼠毛细胞,有望成为内耳给药的新型载体.

摘要： 目的：综合分析哺乳类耳蜗毛细胞再生的热点和难点问题,探讨中西医联合用药促进毛细胞再生的方法。rn 方法：采用Math1基因和Notch抑制因子导人内耳,再使用中药复聪合剂联合治疗.rn 结果：Math1和Notch信号分子靶向性诱导耳蜗毛细胞再生,中药整体促进耳蜗组织细胞修复,供给营养物质.rn 结论：应用Math1基因和Notch抑制因子可靶向性诱导耳蜗毛细胞再生,而复方中药制剂具有清除损失死亡的毛细胞,修复损害的组织结构,疏通崩溃塌陷组织导致的血管和神经阻滞,保证血液流通和供给充足营养,为保证组织修复和毛细胞再生建立了良好的基础.这也是发现毛细胞损害消失处支持细胞转分化为再生毛细胞的机制所在，说明应用Mathl基因和Notch抑制因子导人耳蜗靶向性的诱导毛细胞再生，联合特效的复聪中药整体治疗感音神经性聋的方案值得探索。

摘要： 本文以经过400μM新霉素处理过出膜后5天斑马鱼仔鱼躯干部初级神经丘毛细胞为研究对象,分析了再生过程中毛细胞的数量、神经丘的组织结构和相关基因的表达情况.首先，利用生物荧光染料FM1-43标记神经丘中的活性毛细胞，还观察了再生侧线神经丘的组织学变化，最后，用实时定量PCR检测毛细胞发育过程中发挥重要作用的Eya1-Six1信号在毛细胞再生过程中的作用，在新霉素处理后的4h,Eya1,Six1和Atohla的表达量都显著高于对照组，而sox2在处理后的12h表达量显著上升。结果表明:斑马鱼侧线神经丘毛细胞的再生经历了细胞死亡、分化和重排等过程，且重新启动了毛细胞早期发育基因的表达。

摘要： 本文探讨卡那霉素耳慢性中毒与豚鼠耳蜗毛细胞凋亡的关系,及耳蜗毛细胞凋亡是否与凋亡蛋白酶Bcl-2有关。卡那霉素耳慢性损害与耳蜗毛细胞的凋亡有关；耳蜗毛细胞的凋亡过程中有Bcl-2的激活。

摘要： 本文探讨不同周龄C57BL/6小鼠内耳内、外毛细胞数量及形态学变化。噪声致聋后，经鼓阶打孔途径基因导入，耳蜗转导成功率高，目的基因表达在支持细胞，螺旋神经节细胞，螺旋韧带及鼓阶、前庭阶间皮细胞，在转导后2周表达持续、稳定。

摘要： 目的：rn 研究卡波金在急性噪声性声损伤中对听性脑干诱发电位(auditory brainstem response,ABR)和毛细胞的影响。rn 方法：rn 纯白健康豚鼠40只随机分为噪声暴露组(A组)、噪声暴露后吸入卡波金组(B组).每组实验动物均为20只.噪声系稳态噪声,平均声强为120±2dB SPL(sound pressure level),连续暴露5小时.对两组豚鼠均进行ABR测试、耳蜗基底膜铺片、动脉血气分析,测试结果进行对比分析。rn 结果：rn B组较A组平均反应闽降低约17dB SPL,ABR的II波潜伏期B组较A组缩短并恢复速度快于A组，差异显著(P<0.05)，有统计学意义。两组动物耳蜗基底膜铺片中耳蜗各周毛细胞未见明显毛细胞的缺失、倒伏和散乱.rn 结论：rn 卡波金可使噪声暴露后听性脑干诱发电位闰移值减小，潜伏期恢复加快，提示卡波金对急性声损伤耳蜗有促进愈合作用。

摘要： 本文观察神经生长因子在正常豚鼠耳蜗毛细胞和螺旋神经节细胞中的定位分布,为进一步研究其在听觉通路中的作用机制提供依据。

摘要： 本文通过研究声损伤中毛细胞分泌Glu的特点、NMDA和AMPA参与耳蜗毛细胞/传入神经突触传递的作用、谷氨酸通过活性氧在耳蜗中堆积.形成兴奋毒的可能机制等等来探讨毛细胞的神经递质—谷氨酸在声损伤中对耳蜗的作用和防护.

摘要： 目的：探究冲击波导致斑马鱼听觉损伤的初步研究。研究并确立斑马鱼在冲击波导致听觉损伤的声学参数，观察不同时间点听力损伤与恢复变化。rn 方法:斑马鱼冲击波暴露声学参数的确定。斑马鱼暴露于不同能量参数的冲击波观察斑马鱼存活情况。斑马鱼冲击波暴露听觉分5组实验，冲击波暴露前后斑马鱼听觉诱发电位(auditory evokedpotential,AEP)的检测。利用斑马鱼AEP检测系统于隔音室中分别检测和记录，冲击波暴露前后斑马鱼内耳毛细胞的变化。rn 结果:斑马鱼冲击波听觉损伤模型参数为200J/1000V-1000J/1500V时，暴露次数1次以上均导致斑马鱼死亡.斑马鱼在冲击波暴露后，AEP阂值升高，在暴露后0-32天内听力逐渐恢复。暴露3周后，不同组波形和幅值仍存在显著差异。冲击波暴露后斑马鱼内耳毛细胞出现损伤、凋亡和毛细胞再生。毛细胞的数量恢复在暴露后20天左右，但是100J/1800V组在32天后AEP阂值仍然没有恢复到对照组水平，尤其是低频100Hz-600Hz。rn 结论:成功建立斑马鱼冲击波听觉损伤模型;冲击波暴露后导致听觉损伤和中枢神经损伤。斑马鱼是冲击波导致的神经系统损伤和再生机制研究的极佳动物模型。

摘要： 采用免疫组织化学、激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)及图像分析技术,研究噪声预暴露后毛细胞内丝状肌动蛋白(F-actin)、钙调蛋白(CaM)、热休克蛋白70(HSP70)的表达及游离Ca2+度的变化,探讨噪声预暴露对听觉保护作用的机制。结果显示,噪声预暴露后损伤暴露组的F-actin和HSP70的表达均明显增多,CaM的表达具有增加趋势。噪声损伤暴露组毛细胞内游离Ca2+浓度明显高于噪声预暴露组和预暴露后损伤暴露组。表明噪声预暴露使毛细胞对于其后声刺激的保护性反应增强,毛细胞内细胞骨架系统的加强及胞内钙稳态的维持可能是噪声预暴露的保护机制之一。

摘要： 美国国家医学图书馆于1989提出了"可视化人体计划(Visible Human Project,VHP)".美国国家医学图书馆与Colorado大学健康科学中心于1991年8月签署协议,由Colorado大学进行人体结构数据的采集,10月完成三维重构.Colorado大学采用的方法是将人体标本低温冰冻后,首先获得标本的CT和MR,然后用工业铣床逐层铣切、逐层照相,输入计算机获取人体连续横断面图像,然后进行人体结构的三维重建.该研究小组获得了世界上第一套人体结构数据集.我国钟世镇和张绍祥分别获得中国人数字化人体数据,并开展相应计算机辅助解剖研究.目前数字化人体即"数字化虚拟人体"研究已经取得很大的进展.而且在相应的器官、组织细胞甚至亚微和超微水平都已经得到广泛地应用,尤其是结合CT、MRI为临床诊断和手术提供了丰富的指导性的解剖学资料.本文将以解剖结构研究为主要内容分为5个部分阐述人体、器官(脑组织、颞骨、听觉器官)、组织细胞以及亚微和超微水平数字化研究的现状和进展,尽量结合一些相关的临床应用来描述数字化人体研究的意义和应用前景.

摘要： 本发明提供一种能够进行脑毛细血管内皮样细胞的稳定供给的技术。从多能干细胞向脑毛细血管内皮样细胞的分化诱导用涂布剂包含层粘连蛋白221片段和N末端玻连蛋白中的至少一种成分。

摘要： 本发明提供了一种高效感染支持细胞和毛细胞的AAV载体。具体地，本发明提供了一种用于治疗听觉障碍疾病的基因表达载体，所述的表达载体为AAV载体，其中，所述的AAV载体中，插入有或携带有用于治疗听觉障碍疾病的治疗基因的表达盒；其中，所述的AAV载体选自下组：AAV‑PHP.eB、AAV‑DJ，或其组合。本发明所提供的AAV载体在内耳的毛细胞和支持细胞中感染效率高、易生产、安全性好，并且靶向性高。

摘要： 本发明提供一种将诱导多能干细胞定向分化为内耳毛细胞样细胞的方法。主要是利用化学成分明确的培养基，适时添加小分子化合物将iPSC诱导分化为内耳祖细胞，再经鸡胚椭圆囊细胞与内耳祖细胞共培养，从而获得内耳毛细胞样细胞。本发明所述方法能够有效地将诱导多能干细胞定向分化为内耳毛细胞样细胞，分化获得的内耳毛细胞样细胞具有纤毛毛束结构，表达内耳毛细胞特异蛋白，具有毛细胞电生理功能。

摘要： 本文提供了包含至少两种不同的核酸载体的组合物，所述至少两种不同的载体，当被引入到灵长类动物细胞中时，经历彼此串联或同源重组，从而形成编码全长靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白或毛细胞靶蛋白)的重组核酸。还提供了包含单一AAV载体的组合物，所述单一AAV载体，当被引入到灵长类动物细胞中时，在支持细胞靶基因的基因座处产生了编码全长靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白或毛细胞靶蛋白)的核酸，并且所述灵长类动物表达靶蛋白(例如，支持细胞靶蛋白或毛细胞靶蛋白)。

摘要： 本发明涉及内耳干细胞领域，具体的是Rassf2调控内耳干细胞增殖分化方法及在毛细胞再生中的应用。调控方法，包括以下步骤：一、在野生型小鼠中检测Shh或Hippo和Rassf2在耳蜗中的表达情况；二、在离体实验中研究Shh或Hippo和Rassf2对流式分选出的内耳干细胞增殖分化的作用；三、在活体毛细胞新霉素损伤模型上，研究Shh或Hippo和Rassf2的作用。本发明使用Lgr5‑EGFP‑CreERT2工具鼠可使得内耳干细胞(Lgr5阳性细胞)的分离准确且大量，可达到较好的研究前提：分选出的小鼠Lgr5阳性内耳干细胞。此外，在离体实验中研究Shh、Hippo和Rassf2对分选出的内耳干细胞进行成球和分化实验后，可以深入探究Shh、Hippo和Rassf2在调控内耳干细胞增殖分化及毛细胞再生中的具体作用机制。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体的是Gpm6b调控内耳干细胞增殖分化方法及在毛细胞再生中的应用。分化方法的步骤：OC‑1细胞培养；siRNA敲低Gpm6b基因，采用N1301、N885、N1082三种不同的siRNA敲减OC‑1细胞中的Gpm6b基因；Lgr5+祖细胞的分离培养及Gpm6b基因敲低，Lgr5+祖细胞消化成单细胞后，采用流式细胞分选技术进行分选，经培养后再Gpm6b基因敲低；Gpm6b基因敲低对Lgr5+祖细胞增殖/分化的影响，采用细胞成球实验、EdU染色实验和免疫荧光实验研究Gpm6b基因敲减对Lgr5+细胞增殖/分化的影响，再评估Lgr5+细胞增殖、分化为毛细胞的能力；数据分析，采用GraphPadPrism 6进行数据统计分析。本发明敲低Gpm6b基因后对于Lgr5+细胞成球有抑制作用，即Gpm6b敲低抑制Lgr5+细胞增殖。而Gpm6b基因敲减对Lgr5+细胞分化再生毛细胞无调控作用。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体的是Hippo调控内耳干细胞增殖分化方法及在毛细胞再生中的应用。Hippo调控内耳干细胞增殖分化方法，包括以下步骤；一、在野生型小鼠中检测Hippo信号通路成员在耳蜗中的表达情况；二、在离体实验中研究Hippo信号对流式分选出的内耳干细胞增殖分化的调控机制；三、在离体实验中研究Hippo和Wnt信号对内耳干细胞的协同调控机制等。本发明使用Lgr5‑EGFP‑CreERT2工具鼠可使得内耳干细胞(Lgr5阳性细胞)的分离准确且大量，可达到较好的研究前提：分选出的小鼠Lgr5阳性内耳干细胞。此外，在离体实验中研究Hippo信号通路对分选出的内耳干细胞进行成球和分化实验后，可以深入探究Hippo信号通路在调控内耳干细胞增殖/分化及毛细胞再生中的具体作用机制。

摘要： 本发明涉及内耳干细胞领域，具体的是Pcolce2调控内耳干细胞增殖分化方法及在毛细胞再生中的应用。Pcolce2调控内耳干细胞增殖分化方法，包括以下步骤：一、siRNA的选择；二、Lgr5+祖细胞的分离培养及Pcolce2基因敲除；三、Pcolce2基因敲除对Lgr5+祖细胞增殖/分化的影响；四、数据分析。本发明将从Pcolce2这个基因调控方面着手研究其对内耳毛细胞再生的作用。通过OC‑1细胞利用不同siRNA敲除Pcolce2基因，RT‑qPCR检测转染效果；分离培养Lgr5+内耳干细胞转染后检测增殖及分化，通过Lgr5+干细胞上进行成球分化实验表明Pcolce2基因敲低后，Lgr5+内耳干细胞的增殖显著降低，说明Pcolce2基因有促进内耳干细胞增殖的作用。

摘要： 本发明提供了用于诱导内耳的细胞(例如，耳蜗毛细胞和椭圆囊毛细胞)重新进入细胞周期并增殖的方法和组合物。更具体地，本发明涉及使用增加c‑myc的活性和/或Notch活性的药剂，用于诱导耳蜗毛细胞或椭圆囊毛细胞和/或耳蜗支持细胞或椭圆囊支持细胞重新进入细胞周期并增殖。本发明的方法和组合物可以用于促进毛细胞和/或支持细胞的增殖，以治疗有听力损失风险或患有此病的对象，或有前庭功能障碍风险或患有此病的对象。

摘要： 本发明公开了Lgr5基因在保护内耳毛细胞及促进支持细胞再生上的应用。所述Lgr5的C端具有如SEQ NO.1所示的核苷酸序列，且N端的第190位具有编码丙氨酸的核苷酸序列。首先构建了Lgr5、Lgr5‑C（Lgr5上823位氨基酸后全部截断）和Lgr5‑190（Lgr5上190位氨基酸由丙氨酸变为天冬氨酸）的腺病毒，分别探究Lgr5基因的C末端和N末端对毛细胞的保护作用和内耳干细胞的再生作用，最后分别研究Lgr5基因的C末端和N末端在内耳中的作用机制，从而确定Lgr5基因对毛细胞的保护和支持细胞再生为毛细胞的作用机制，为治疗耳聋提供新的理论思路，代替助听器和人工耳蜗帮助患者恢复和重建听觉功能。