免疫保护性

摘要： 目的:探究表膜蛋白(SjOST48)DNA疫苗对日本血吸虫感染的免疫保护效果.方法:通过PCR扩增将OST48基因序列连接到pcDNA3.1(+)质粒上,将构建成功的日本血吸虫表膜蛋白SjOST48的真核质粒pcDNA3.1/SjOST48(100μg)分别于0、2、4、6、8周免疫雌性BALB/c小鼠(小鼠左后腿股四头肌肌肉注射);末次免疫2周后,检测各组小鼠血清IgG及其亚类水平;无菌分离小鼠脾淋巴细胞,CCK-8法评估pcDNA3.1/SjOST48免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况;ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞上清中TNF-α、INF-γ、IL-4和IL-10水平;末次免疫2周后血吸虫尾蚴(20±1条)感染小鼠,感染6周后处死小鼠并无菌分离肝脏组织行HE染色,显微镜下观察肝脏虫卵肉芽肿大小及虫卵周围胶原沉积情况,计算肝组织减卵率.结果:pcDNA3.1/SjOST48转染HeLa细胞后成功在真核细胞内表达;ELISA结果显示,pcDNA3.1/SjOST48免疫小鼠在第2周即产生SjOST48特异性抗体,随后抗体水平逐渐增加,第8周达到峰值,且各实验组IgG2a/IgG1的比值均大于1;pcDNA3.1/SjOST48免疫小鼠脾淋巴细胞增殖水平最为显著(P0.05);日本血吸虫感染6周后,与SjOST48免疫小鼠相比,pcDNA3.1/SjOST48免疫小鼠肝脏炎症浸润较轻,表面虫卵结节较少、虫卵肉芽组织数量及周围胶原含量明显减少,肝脏减卵效果显著.结论:SjOST48 DNA疫苗能诱导高水平的特异性SjOST48抗体以及Th1型细胞免疫应答反应,显著增强其抗感染保护作用.

摘要： 目的:探究侵入后失活疟原虫(invaded and inactivated Plasmodium,IIP)接种的安全性及免疫保护性.方法:采用3种方法获取IIP.IIP免疫小鼠3次,末次免疫后第30天用约氏疟原虫BY265株感染的红细胞攻击.另外,将IIP于-20°C冻存30 d,解冻后同样方法免疫及攻击小鼠.检测IIP的免疫效果.结果:低剂量组(103个IIP/100μl)3次免疫均未出现疟原虫感染,而高剂量组(105个IIP/100μl)首次免疫即感染;低剂量免疫组小鼠攻击后原虫血症峰值明显低于未免疫组;冻存后IIP的免疫小鼠出现不完全免疫保护,但未免疫组小鼠分别于攻击后第8、10、16天死亡.结论:侵入后失活疟原虫具有一定免疫保护性和安全性.

摘要： 目的观察重组梅毒螺旋体(Tp)黏附素Tp0751(rTp0751)、Tp0136氨基端(rTp0136 ^(N))、Tp0435(rTp0435)诱生C57BL/6小鼠适应性免疫应答水平及免疫后抑制Tp在小鼠体内播散情况,为筛选梅毒疫苗候选分子提供依据。方法表达和纯化重组蛋白rTp0751、rTp0136 ^(N)和rTp0435。将C57BL/6小鼠随机分为PBS对照组、rTp0751组、rTp0136 ^(N)组、rTp0435组,分别以PBS、rTp0751、rTp0136 ^(N)及rTp0435免疫各组小鼠3次;ELISA检测各组小鼠免疫血清特异性IgG抗体水平;流式细胞术(FCM)检测末次免疫后2周小鼠脾细胞胞内白细胞介素-4(IL-4)与干扰素-γ(IFN-γ)含量;实时荧光定量PCR(qPCR)检测Tp攻击6周后小鼠心、脾、脑组织中Tp的DNA载量。结果各免疫组小鼠血清特异性IgG抗体随免疫时间增加而逐渐升高并于首次免疫第6周达到峰值。FCM检测结果显示各免疫组淋巴细胞胞内CD4^(+)IFN-γ+与CD8+IFN-γ+含量均高于PBS对照组(P<0.01),CD4^(+)T细胞产生IL-4水平均极低。qPCR检测结果显示,在脾脏、心脏和脑组织中,rTp0751与rTp0136 ^(N)组Tp-DNA载量均低于PBS对照组(P<0.05),rTp0435组与PBS对照组之间无明显差异。结论rTp0751、rTp0136 ^(N)、rTp0435均具有良好的免疫原性,Tp0751、Tp0136 ^(N)有望为梅毒候选疫苗分子。

摘要： 目的 观察重组梅毒螺旋体(Tp)黏附素Tp0751(rTp0751)、Tp0136氨基端(rTp0136 N)、Tp0435(rTp0435)诱生C57BL/6小鼠适应性免疫应答水平及免疫后抑制Tp在小鼠体内播散情况,为筛选梅毒疫苗候选分子提供依据.方法 表达和纯化重组蛋白rTp0751、rTp0136N和rTp0435.将C57BL/6小鼠随机分为PBS对照组、rTp0751组、rTp0136N组、rTp0435组,分别以PBS、rTp0751、rTp0136N及rTp0435免疫各组小鼠3次;ELISA检测各组小鼠免疫血清特异性IgG抗体水平;流式细胞术(FCM)检测末次免疫后2周小鼠脾细胞胞内白细胞介素-4(IL-4)与干扰素-γ(IFN-γ)含量;实时荧光定量PCR(qPCR)检测Tp攻击6周后小鼠心、脾、脑组织中Tp的DNA载量.结果 各免疫组小鼠血清特异性IgG抗体随免疫时间增加而逐渐升高并于首次免疫第6周达到峰值.FCM检测结果显示各免疫组淋巴细胞胞内CD4+IFN-γ+与CD8+IFN-γ+含量均高于PBS对照组(P<0.01),CD4+T细胞产生IL-4水平均极低.qPCR检测结果显示,在脾脏、心脏和脑组织中,rTp0751与rTp0136N组Tp-DNA载量均低于PBS对照组(P<0.05),rTp0435组与PBS对照组之间无明显差异.结论 rTp0751、rTp0136N、rTp0435均具有良好的免疫原性,Tp0751、Tp0136 N有望为梅毒候选疫苗分子.

摘要： 为研究单增李斯特菌(Listeria monocytogenes, LM)内化素基因inlG编码蛋白的免疫原性和免疫保护效果,以标准株ATCC19111菌株基因组为模板,参照GenBank上inlG基因序列设计特异性引物,运用PCR方法扩增inlG基因,构建重组质粒pET-28a(+)-InlG,将其转化至表达菌BL21(DE3),加IPTG后优化表达条件进行SDS-PAGE分析,Western blot分析抗原性。接着将纯化后的重组蛋白与佐剂混合后皮下注射小鼠,免疫后测定效价,以单增李斯特菌进行攻毒试验,统计小鼠存活率来研究对小鼠的免疫保护效果。结果:扩增出inlG基因全长约为1 473 bp,inlG基因编码490个氨基酸;成功构建重组质粒且表达出相对分子质量约70 ku的蛋白,目的蛋白在上清中表达量较好;Western blot结果表明InlG蛋白具有良好的反应原性;重组蛋白免疫小鼠后小鼠效价达到1∶52 000以上,具有良好的免疫原性;用2倍半数致死量的LM菌液腹腔感染小鼠,免疫蛋白组小鼠死亡一半,小鼠存活率远远高于未免疫组(6.25%),表明InlG蛋白对小鼠具有较好的免疫保护性。本研究为进一步探讨inlG基因生物学功能奠定基础。

摘要： 目的 研究以卡介苗为载体的细粒棘球绦虫egG1Y162融合蛋白(rBCG-egG1Y162)免疫小鼠的免疫应答改变,评价其在小鼠实验中发挥的动物免疫保护作用,为研究新型有针对性的囊型包虫病疫苗奠定基础.方法 免疫保护性评价实验分为3组:rBCG-egG1Y162组、卡介苗(BCG)组和正常对照(NS)组,用重组疫苗免疫Balb/c小鼠,肌肉注射疫苗第8周后用攻虫实验感染各组一半数量小鼠,在第24周后获取小鼠相应的器官和血清标本.酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中IgG亚类IgG1、IgG2a、IgG2b和IgE抗体水平变化,评价疫苗的体液免疫水平.计算小鼠感染模型中细粒棘球蚴的包囊数量及其大小,对包囊湿重进行称量,评价该重组疫苗对小鼠的免疫保护性.结果 与BCG组和NS组相比,rBCG-egG1Y162免疫组小鼠血清中IgG2a、IgG2b和IgE抗体水平增高,差异有统计学意义(P<0.05),IgG1抗体水平降低,差异有统计学意义(P<0.05).各组小鼠在免疫后被动感染棘球蚴,rBCG-egG1Y162免疫组具有78.1％的囊泡抑制率,Eg囊湿重与BCG组和NS组相比差异有统计学意义(P<0.05),结论 以 BCG 为载体的 rBCG-egG1Y162 疫苗免疫小鼠后,攻虫实验中的囊泡抑制率显著增高,小鼠体内寄生虫的数量也显著减少,初步认为 rBCG-egG1Y162 可以作为囊型包虫病的候选疫苗进行深入研究.

摘要： 旨在获得产气荚膜梭菌β毒素(C PB)的重组突变体,并评价其毒力及免疫保护性.对已知的产气荚膜梭菌C PB编码基因进行优化设计,同时引入4个氨基酸突变位点,分别是第212位的精氨酸突变为谷氨酸,第268位的亮氨酸突变为甘氨酸,266位的酪氨酸和275位的色氨酸突变为丙氨酸.此外,在该基因5′端添加T h细胞表位(T)和鞭毛蛋白(flagellin)N末端的编码序列,经人工合成获得重组基因片段(GTFNCPBm4).将GTFNCPBm4克隆至原核表达载体pET-30a(+)中进行表达与纯化,获得重组蛋白rTFNCPBm4.利用Western blot方法检测rTFNCPBm4与C型产气荚膜梭菌毒素抗血清的反应性,并检测rTFNCPBm4对小鼠的毒力.随后,以rTFNCPBm4免疫家兔,按照《中华人民共和国兽药典》(2015年版)规定的方法检测家兔血清对C型产气荚膜梭菌毒素的中和抗体效价.结果表明,rTFN CPBm4主要以包涵体的形式表达且能与C型产气荚膜梭菌毒素抗血清反应.小鼠安全性试验显示,50μg的rTFNCPBm4对小鼠仍无致死性;免疫rTFNCPBm4后,每毫升家兔二免抗血清可中和10～20个小鼠最小致死量(M LD)的C型产气荚膜梭菌毒素;1个家兔M LD的C型产气荚膜梭菌毒素攻毒后,对照组家兔4/4死亡,免疫组家兔得到了100％(4/4)的保护.以上结果说明,rT FN CPBm4在丧失毒力的同时保留了良好的免疫原性,从而为C型产气荚膜梭菌病基因工程疫苗的研制提供了重要的数据.

摘要： 外膜蛋白A(OmpA)为副溶血弧菌主要表面蛋白之一,具有较强的免疫原性,在疫苗上有很好的应用前景.为评价副溶血弧菌OmpA的免疫效果,本研究通过PCR方法获得副溶血弧菌SH112株的ompA(VP0764)基因的全长片段,测序结果显示该蛋白编码区全长990 bp.对其编码蛋白质进行生物信息学分析,结果显示该蛋白是含有信号肽的稳定蛋白,无跨膜结构,有11个抗原决定簇,具有较高免疫原性.扩增去除信号肽序列的成熟蛋白基因903 bp,并构建重组表达载体pET28a-ompA进行原核表达,结果显示,获得分子量约为39 ku的重组蛋白His-OmpA(VP0764).采用该蛋白免疫ICR小鼠(0.1 mg/只)3次后收集血清制备鼠多克隆抗血清,利用ELISA检测抗血清效价,结果显示制备的鼠多克隆抗血清效价达1:32000以上.利用western blot检测制备的鼠多克隆抗血清,结果显示该血清可与表达蛋白和全菌蛋白发生特异性反应,表明所表达的目的蛋白具有良好免疫原性,能识别天然OmpA蛋白.将45只8周龄ICR小鼠随机分成3组,分别免疫灭活的SH112全菌疫苗(1×108 cfu/只)、His-OmpA(VP0764)重组蛋白(0.1 mg/只)及PBS(200μL/只),每两周免疫一次,三免后10 d采用副溶血弧菌SH112株(2×107 cfu/只)攻毒,结果显示免疫SH112全菌和His-OmpA(VP0764)重组蛋白的实验组小鼠免疫保护率分别是73％和40％,与对照组差异显著.本研究为副溶血弧菌OmpA的功能与疫苗开发研究奠定了基础.

摘要： 在前期工作中发现,截短的轮状病毒VP4*蛋白(aa 26-476)在大肠杆菌中能够以可溶形式表达,且在小鼠模型中具有较高的免疫原性和免疫保护性.本研究通过颗粒化进一步提高VP4*蛋白的免疫保护性.通过37°C水浴加热处理24 h使VP4*蛋白多聚化,通过高效液相色谱、透射电镜、分析超离等分析VP4*蛋白颗粒化程度,通过酶联免疫吸附试验分析颗粒化对VP4*蛋白与中和抗体反应性的影响;通过差示量热法分析VP4*高聚体的热稳定性;最后,通过小鼠母传抗体模型研究颗粒化对VP4*免疫原性和免疫保护性的影响.结果 表明,VP4*蛋白高聚体结构均一,并且相比三聚体,具有更高热稳定性和中和抗体结合活性;在内毒素＜20 EU/mg的条件下,与铝佐剂混合,刺激小鼠产生更高滴度的中和抗体;对轮状病毒导致的腹泻具有更高的免疫保护性.综上所述,VP4*高聚体的研究为轮状病毒基因工程亚单位疫苗的研制提供了更广阔的思路.

摘要： 目的:原核表达曼氏迭宫绦虫翻译控制肿瘤蛋白(Sm TCTP),对表达产物进行鉴定及纯化,并对Sm TCTP进行组织定位和观察重组抗原在小鼠抗曼氏裂头蚴感染中的免疫保护效果.rn 方法:构建Sm TCTP重组表达质粒pGEX-4T-1-Sm TCTP,并转入大肠埃希菌BL21菌株中.异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用GST树脂对表达产物进行纯化,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫蛋白印迹(Western blot)进行鉴定.免疫组织化学方法观察Sm TCTP在曼氏迭宫绦虫成虫中的组织定位.用小鼠实验对重组抗原的免疫保护效果进行初步的评价,即将30只小鼠随机分成3组,每组10只,分别为PBS对照组、空质粒对照组以及免疫组.免疫组小鼠注射重组蛋白与等体积完全佐剂混合物,空质粒对照组小鼠注射于重组蛋白等量的GST蛋白与等体积完全佐剂混合物,PBS对照组直接注射相同体积的PBS.每组动物均免疫3次,时间为0、2、4周,采用腹腔内部注射,每次免疫注射量为100μ1/只,抗原剂量为50μg/只.第3次免疫后的第2周,所有小鼠均经灌胃感染曼氏裂头蚴5条/只,并于感染后的第6周处死并解剖所有小鼠,收集曼氏裂头蚴计数,计算曼氏裂头蚴的减虫率.rn 结果:成功构建了pGEX-4T-1-Sm TCTP重组质粒,并在BL21菌中获得可溶性表达并且与GST融合的重组目的蛋白,GST树脂纯化获得重组目的蛋白.SDS-PAGE及Western Blot结果显示,表达及纯化产物为GST融合蛋白,分子量约45 kDa,与SmTCTP与GST融合蛋白理论分子量相符.免疫组化结果显示,Sm TCTP主要分布于曼氏迭宫绦虫成虫的子宫、睾丸和卵黄腺上.小鼠免疫保护性实验结果显示,与PBS对照组相比,免疫组小鼠减虫率为66.7％,统计学上差异有显著性(P＜0.01).rn 结论:成功进行了Sm TCTP的原核表达并获得了纯化的重组蛋白,且重组蛋白具有良好的免疫原性,Sm TCTP主要定位于曼氏迭宫绦虫成虫的子宫、睾丸和卵黄腺上,可诱导小鼠产生显著的抗曼氏迭宫绦虫的免疫保护作用,本工作为今后研究Sm TCTP的生物学功能奠定了理论基础.

摘要： (目的)本文旨在进行沙门氏菌invH基因融合蛋白表达的基础上，制备该融合蛋白的亚单位疫苗，研究invH基因表达蛋白的免疫保护功能。(方法)采用PCR技术对鼠伤寒沙门氏菌(DT104株)的入侵基因H进行扩增，将其克隆到原核表达载体PGEX-4T-3中，将重组克隆进行融合蛋白表达、纯化和Western blot检测，然后采用油乳剂佐剂将融合蛋白制备亚单位疫苗，将该疫苗通过三种不同剂量(40μg／只、60μg／只、80μg／只)免疫注射小鼠进行免疫保护功能测定。(结果)结果表明，构建的重组克隆成功表达了44KD的融合蛋白GST-invH，且该蛋白具有良好的免疫原性；用纯化融合蛋白制成的制备了亚单位疫苗，三种剂量疫苗间的免疫效果差异不显著，与对照组相比差异显著(p<0．05)，IL-4的含量三种剂量亚单位疫苗与灭活疫苗组相比差异均不显著，IFN-γ含量均低于灭活疫苗组；灭活疫苗组保护率为90％，三种剂量亚单位疫苗组的保护率均在60％以上，虽然亚单位疫苗的保护效果不及灭活疫苗，但与对照组相比差异均极显著(p<0．01)；体外黏附抑制试验结果发现，抗融合蛋白GST-invH的抗体能抑制沙门氏菌对靶细胞的黏附。(结论)该研究结果表明GST—invH融合蛋白具有良好的免疫保护性，为开发利用应用invH融合蛋白亚单位疫苗防制动物沙门氏菌病提供了理论依据和技术支持。

摘要： 本试验之目的以杆状病毒表现一株台湾一型禽传染性支气管炎病毒(IBV)之纤突蛋白(S),并评价其对于台湾一型毒株的免疫保护力.本试验采用之IBV-3575毒株来源于免疫台湾一型毒株IBV-2575疫苗之禽场,该毒株表现强致病性,在病毒中和试验中表现与台湾一型毒株2575、台湾二型毒株2296及麻州疫苗株H120具有交叉保护力.以IBV-3575之纤突蛋白序列为模板,建构带有纤突蛋白基因之Baculovirus-S重组杆状病毒并感染Sf9昆虫细胞,收取昆虫细胞,并进行纯化,通过西方墨点法检测重组蛋白.将重组纤突蛋白作为抗原免疫7日龄SPF鸡,在免疫后4、8、12、16日检测其抗体水平,并在免疫后16日进行攻毒试验,通过临床症状、病理变化、病毒分布等指标评估其免疫保护性.

摘要： 本文从E.Tenella扬州株纯化的配子体中提取总RNA,经RT-PCR扩增出Etgam22基因片段.将目的片段插入到pGEM-T-Easy载体,常规转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,蓝白斑筛选后,对经酶切和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序.以黄羽肉鸡为试验动物,以平均增重、相对增重率、病变记分与卵囊减少率等为评价指标,对重组蛋白的免疫保护效果进行了初步研究,并对其诱导的特异性免疫应答水平进行了检测.结果显示:重组蛋白免疫后均能诱导一定的细胞免疫和体液免疫水平,抗体水平、CD4+水平、CD8+水平等免疫指标均高于未免疫未攻虫组;与未免疫未攻虫组相比,重组蛋白免疫组在一定程度上能提高增重,降低病变记分和减少卵囊产量,其中又以重组蛋白中剂量组的免疫保护效果稍好,但均未达到卵囊免疫组的免疫保护水平.

摘要： 猪链球菌是危害当前养猪业的一种重要病原菌,会引起猪的脑膜炎、败血症、肺炎、关节炎,甚至急性死亡等.有效疫苗的缺乏是防控该病原菌的难题之一.翻译延伸因子(EF-Tu)是最近用免疫蛋白组学方法鉴定的一个表面蛋白,该蛋白在猪链球菌各血清型中具有极高的保守性.本研究以猪链球菌2型菌株SC19基因组为模板,扩增编码EF-Tu蛋白的基因tuf,构建原核表达载体pET30a-tuf,并转化大肠杆菌BL21 (DE3)菌株进行大量诱导表达.用纯化的EF-Tu蛋白免疫小鼠,能显著地引发小鼠的体液免疫应答.用致死剂量的猪链球菌2型菌株SC19对免疫小鼠进行攻毒,结果显示该蛋白对小鼠具有较好的免疫保护作用.本研究为开发EF-Tu作为猪链球菌2型的基因工程亚单位疫苗和猪链球菌不同血清型的通用疫苗奠定了基础.

摘要： 通过动物实验用生物信息学方法分析刚地弓形虫尿昔磷酸化酶(TgUPase)基因编码蛋白，探讨rTgUPase作为弓形虫疫苗候选抗原的可能性。生物信息学分析结果显示刚地弓形虫UPase基因编码的蛋白为可溶性蛋白，具有抗原性，成功构建重组质粒pET30a-TgUPase并在大肠杆菌中高效表达可溶性蛋白，并通过western blot证实rTgUPase具有抗原性。rTgUPase滴鼻免疫能有效诱导薪膜和系统免疫应答，并有效抵抗弓形虫感染，是一个很有望的弓形虫疫苗候选抗原。

摘要： 布鲁氏菌病(布病)是由布鲁氏菌引起的一种重要的人畜共患病，对畜牧业和人类健康均构成严重威胁。疫苗免疫是预防和控制布病的重要措施之一，但当前疫苗干扰临床诊断而限制了其进一步应用，解决这一问题的有效途径是研究粗糙型布病疫苗。本研究以布鲁氏菌S2株基因组为模板，PCR扩增wboA基因左、右侧同源臂，将左侧同源臂L用Sac I和Xba I酶双酶切后，克隆进同酶处理的puc18质粒中，构建重组质粒pUC-L；将右侧同源臂R用Xba I和Sph I双酶切后，克隆进pUC-L中，筛选重组质粒pUC-L-R。以pUC-L-R为模板，扩增包含左侧同源臂L和右侧同源臂R的基因片段LR，并将其通过sal I和Sma I酶切克隆含蔗糖敏感基因(SacB)的载体质粒pUC-SacB中，筛选获得重组质粒pLR-SacB。将pLR-SacB质粒电转化进S2的感受态细胞中，经过氨苄平板和蔗糖平板2次筛选后，筛选获得wboA基因无痕缺失的粗糙型布鲁氏菌rS2-ΔWboA株。用1×108 CFU rS2-ΔWboA免疫Balb/c小鼠4周后均能通过平板凝集试验检测到粗糙型抗体，并且能抵抗200CFU强毒M28的攻击，1×1010CFu rS2-ΔWboA菌感染Balb/c小鼠后，不会引起小鼠死亡。用1×1011CFU rS2-ΔWboA皮下免疫6个月左右的未成年黄牛2次后，4/5能够抵抗5×107CFU剂量2308强毒株的感染，只有1只牛从颌下淋巴结和脾脏中分离到少量布鲁氏菌，其免疫保护效果与s2疫苗按推荐剂量口服免疫效果相似。rS2-ΔWboA免疫黄牛7天后，即能通过凝集试验检测到粗糙型布鲁氏菌抗体。本研究结果表明，重组菌rS2-ΔWboA具有良好的安全性和免疫保护性，可以作为粗糙型布鲁氏菌疫苗候选菌株。

摘要： 目的:建立肠道病毒71型(EV71)抗原的定量ELISA检测方法。可用于EV71疫苗研发及生产过程中的病毒抗原含量检测、EV71的TCID50试验及病毒免疫原性与免疫保护性的关系分析。方法：EV71或其重组抗原免疫小鼠制备的高亲和力抗EV71的中和单抗用作包被抗体和HRP标记抗体，构建定量检测EV71抗原的双抗体夹心ELISA方法，该方法经方法验证。以EV71国家抗原标准品为定量依据检测样品中的EV71抗原量，比较本法与显微观察法检测的EV71‘TCID50。对EV71抗原的特异比活与免疫血清中和抗体水平进行相关性分析。结果： 本方法检测抗原的线性范围为0.125-4.0U／ml、R2=0.9911、灵敏度达到0.125 U/ml，试剂特异性、准确性、精密度和稳定性良好。本法与显微观察法检测的EV71TCID50的相关性高，r=0.990。21株EV71病毒抗原的特异比活与免疫血清中和抗体间存在强相关性。结论：构建了性能良好的EV71抗原的ELISA定量检测方法，取代显微观察法准确、客观和特异的分析EV71的TCID50，本方法用于检测EV71抗原的特异比活，有望取代动物效力实验评价疫苗的免疫保护性。

摘要： 目的：将痘苗病毒安卡拉株为载体的新型重组结核病疫苗用于结核分枝杆菌感染的猴模型体内观察其免疫预防及治疗作用。 方法：按国家药典建立BHK21细胞库及重组痘苗病毒库，大量扩增并用密度梯度离心法纯化病毒。按计划在27个猴体上分组进行长达42周的预防免疫、结核杆菌感染和免疫治疗研究，包括定期采集外周血进行血液学检测、外周血PBMC细胞增殖实验、X光检查、大体解剖及病理组织评分、组织细菌载量测定、计算存活率等。结果：成功建立了相关细胞库和毒种库，纯化后的重组MVA滴度达1010PFU/ml。预防组和治疗组的存活率为100％，与未免疫组相比差异明显(P<0.05)。经重组MVA免疫的猴PBMC细胞表现出增殖反应和抗原特异性IFN-γ分泌的增多。与仅BCG免疫组相比，BCG+A组病理组织总评分较低且感染肺组织细菌载量明显降低，而BCG+AE组并未表现出同样的优势。重组MVA-Ag85a-ESAT6治疗组组织总评分和细菌载量测定显示水平较低。结论：重组MVA-Ag85a作为BCG初次免疫后的加强免疫，对猴模型能产生较BCG单次免疫更好的免疫保护作用;而MVA-Ag85a-ESAT6的加强免疫并没有产生较BCG单次免疫更好的免疫保护作用;重组MVA-Ag85a-ESAT6的治疗效果更佳。

摘要： @@产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起仔猪、犊牛等幼畜发生腹泻的重要病原。菌毛和肠毒素是ETEC的两个主要致病因子，菌毛的作用是使细菌定植于小肠，从而ETEC能够大量繁殖，产生肠毒素引起小肠生理功能紊乱，分泌大量液体并最终导致腹泻的发生。

摘要： 本发明提供保护性帽子，其包括：一壳体(26)，它具有在使用中面向帽子使用者头部(10)的向内的表面，以及在使用中面离使用者头部(10)的向外的表面。一重叠在壳体(26)面向外的表面的至少一部分的外层(28)，以及设置一破碎装置(30)，它用来在一个或多个部位处将外层(28)固定地连接到帽子的其余部分上。破碎装置(30)构造成：当一大于选定阈值的力施加在帽子的外表面(28)上时，力沿至少部分的切向方向作用，转动帽子和使用者的头部(10)，此时，破碎装置失效。一旦破碎装置(30)在一个或多个部位处失效，施加的力致使接受力的外层(28)的至少部分相对于壳体(26)移动，其方式类似于人头皮(18)相对于头骨(16)的保护性的运动。本发明还涉及保护性盔甲(100)以及修改保护性帽子和保护性盔甲的方法。

摘要： 本发明涉及一种细胞保护性、神经保护性和视网膜保护性组合物。在本发明的一个实施方式中，所述组合物包含（i）雷米普利或雷米普利拉及（ii）叶酸。本发明的组合物可用于，特别是用于视力丧失的预防，甚至提高正常个体的视力和视野，以及用于治疗眼科疾病，特别是青光眼、糖尿病视网膜病变、年龄相关性黄斑变性、遗传性视网膜营养不良、葡萄膜炎、屈光不正（近视、老花）。这种活性成分的组合物也可用于治疗一般疾病（癌症……）的一般病态。

摘要： 本发明涉及保护性膜、具有该保护性膜的磁性记录介质、以及保护性膜的制备方法。本发明在降低保护性膜的膜厚度的同时改善保护性膜的持久性和耐腐蚀性，并提升保护性膜表面与润滑膜的粘结强度。本发明还提供具有保护性膜和优异电磁转换特性的磁性记录介质。用于磁性记录介质的保护性膜的特征在于含氟和氮。还提供了一种制备用于磁性记录介质的保护性膜的方法，该方法包括以下步骤：在含有基片和形成于基片顶面上的金属膜层的堆叠体顶面上形成保护性膜，以及在含氟气体和含氮气体中对所述保护性膜进行等离子体处理。

摘要： 本发明涉及保护性涂层，所述保护性涂层具有化学组成C

摘要： 本发明描述了诱导针对人免疫缺陷病毒(HIV)感染的保护性免疫性的组合物、疫苗和方法。一或多个病毒表达载体与分离的抗原性多肽的异源疫苗组合诱导针对一或多个HIV进化枝感染的强力保护性免疫性。

摘要： 本发明提供保护性帽子，其包括：一壳体(26)，它具有在使用中面向帽子使用者头部(10)的向内的表面，以及在使用中面离使用者头部(10)的向外的表面。一重叠在壳体(26)面向外的表面的至少一部分的外层(28)，以及设置一破碎装置(30)，它用来在一个或多个部位处将外层(28)固定地连接到帽子的其余部分上。破碎装置(30)构造成：当一大于选定阈值的力施加在帽子的外表面(28)上时，力沿至少部分的切向方向作用，转动帽子和使用者的头部(10)，此时，破碎装置失效。一旦破碎装置(30)在一个或多个部位处失效，施加的力致使接受力的外层(28)的至少部分相对于壳体(26)移动，其方式类似于人头皮(18)相对于头骨(16)的保护性的运动。本发明还涉及保护性盔甲(100)以及修改保护性帽子和保护性盔甲的方法。

摘要： 本发明涉及保护性膜、具有该保护性膜的磁性记录介质、以及保护性膜的制备方法。本发明在降低保护性膜的膜厚度的同时改善保护性膜的持久性和耐腐蚀性，并提升保护性膜表面与润滑膜的粘结强度。本发明还提供具有保护性膜和优异电磁转换特性的磁性记录介质。用于磁性记录介质的保护性膜的特征在于含氟和氮。还提供了一种制备用于磁性记录介质的保护性膜的方法，该方法包括以下步骤：在含有基片和形成于基片顶面上的金属膜层的堆叠体顶面上形成保护性膜，以及在含氟气体和含氮气体中对所述保护性膜进行等离子体处理。

摘要： 本发明涉及一种细胞保护性、神经保护性和视网膜保护性组合物。在本发明的一个实施方式中，所述组合物包含（i）雷米普利或雷米普利拉及（ii）叶酸。本发明的组合物可用于，特别是用于视力丧失的预防，甚至提高正常个体的视力和视野，以及用于治疗眼科疾病，特别是青光眼、糖尿病视网膜病变、年龄相关性黄斑变性、遗传性视网膜营养不良、葡萄膜炎、屈光不正（近视、老花）。这种活性成分的组合物也可用于治疗一般疾病（癌症……）的一般病态。

摘要： 本发明涉及保护性涂层，所述保护性涂层具有化学组成C

摘要： 本发明描述了诱导针对人免疫缺陷病毒(HIV)感染的保护性免疫性的组合物、疫苗和方法。一或多个病毒表达载体与分离的抗原性多肽的异源疫苗组合诱导针对一或多个HIV进化枝感染的强力保护性免疫性。