基因工程疫苗

摘要： 2月21日,普莱柯发布公告披露,公司与中国农业科学院兰州兽医研究所开展技术合作的非洲猪瘟亚单位疫苗项目已取得积极进展。若获批上市,预计终端用户价在30元左右,两针接种每头猪免疫成本在60元左右。根据公开信息,非洲猪瘟基因工程疫苗与口蹄疫、高致病性禽流感基因工程疫苗同为普莱柯公司重点紧盯的战略需求产品。目前,普莱柯在活疫苗和灭活疫苗两条技术路线上均有参与。

摘要： 猪圆环病毒病(Porcine circovirus disease,PCVD)在全球范围内广泛流行,各生长阶段的猪均易发该病,因其致病性高、传染性强、能够引起严重的免疫抑制等特点,严重阻滞了全球养猪业的健康发展。猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是导致PCVD的主要病原,其对环境的耐受力强,对氯仿不敏感,在56°C或70°C均能够存活一段时间。

摘要： 动物生物疫苗企业,是指利用现代生物技术研发、生产、销售动物防疫用的活疫苗、灭活疫苗、合成多肽疫苗、基因工程疫苗等疫苗的企业。动物生物疫苗是动物养殖防疫的主要保障。随着我国国民生活水平的不断提高,动物养殖业发展迅速,极大地推动了动物生物疫苗产业的发展。

摘要： 兔出血症病毒2型毒株于2020年在我国首次发现并报道,目前尚无有效的疫苗可用于对该毒株的防控。针对我国兔出血症病毒2型SC毒株VP60蛋白,构建获得表达该毒株VP60蛋白的重组杆状病毒rBAC-RHDV2-VP60。以rBAC-RHDV2-VP60为疫苗毒种,接种昆虫细胞,表达获得重组VP60蛋白。以氢氧化铝胶为佐剂制成RHDV2 SC株VP60基因工程疫苗,结合前期制备的传统RHDV型WF株VP60基因工程疫苗,分别免疫2~3月龄健康易感兔,1.0 mL/只;免疫后21 d,检测2种疫苗分别对国内RHDV2流行株和传统RHDV毒株的免疫保护力。结果显示,用SC株攻毒,免疫RHDV2 SC株VP60基因工程疫苗的家兔,免疫组无死亡,而免疫生理盐水的对照组全部死亡;免疫传统RHDV WF株VP60基因工程疫苗的家兔,免疫兔6/10死亡,对照组兔全部死亡;用WF株攻毒,免疫RHDV2 SC株VP60基因工程疫苗的家兔,免疫组死亡7/10,而免疫生理盐水的对照组全部死亡;免疫传统RHDV WF株VP60基因工程疫苗的家兔,免疫兔无死亡,对照组兔全部死亡;提示传统RHDV型WF株疫苗不能对国内流行毒株RHDV2 SC毒株产生有效的免疫保护,RHDV2 SC株VP60基因工程疫苗也不能对国内传统RHDV毒株产生有效的免疫保护,两型毒株间交叉保护作用较低。本研究中针对我国流行RHDV2 SC毒株研制的基因工程疫苗对有效预防和控制国内流行的RHDV2将发挥重大作用。

摘要： 猪肺炎支原体(Mhp)是引起养猪企业损失的重大猪呼吸道疾病,而黏附因子P97蛋白是Mhp发病的主要致病因素。为了解P97蛋白对猪支原体肺炎致病机理,本综述分析了国内外关于猪肺炎支原体P97蛋白的研究论文,从黏附因子P97的分子结构、免疫原性,以及P97蛋白基因工程疫苗研发等多方面进行归纳,阐述了P97的研究现状。P97蛋白能够刺激机体产生特异性抗体,具有非常好的免疫原型,是构建重组蛋白疫苗的重要候选蛋白,能够为建立猪肺炎支原体实验室诊断和生物工程疫苗研制提供参考。

摘要： 兽用疫苗在畜禽养殖生产中预防、控制动物传染病的发生和流行具有重要作用。随着疫苗研发技术的成熟,政府的高度重视以及畜牧业发展的迫切需求,推动了我国疫苗的种类不断增加,疫苗的安全性、稳定性以及高效性逐渐提高。本文对国内常见的兽用疫苗进行了分析和探讨,并对其发展前景进行了展望。

摘要： 本文在构建罗非鱼无乳链球菌病亚单位疫苗基因工程菌的基础上,针对中试生产环节,进一步开展基因工程菌高密度发酵及目标蛋白提取条件的研究,从发酵培养基的筛选、诱导剂的使用剂量、诱导时间,以及目标蛋白提取与纯化等方面优化工艺条件,以实现基因工程菌高密度培养和获得较高目标产物浓度的目的,进一步节约疫苗生产成本并提高产出效率,解决规模化生产决定性环节的问题,为基因工程疫苗走向产业化奠定基础。

摘要： 新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的禽类的一种急性烈性传染病,严重危害养禽业的发展。在疫苗接种免疫压力下,NDV演化出不同的基因型,且各基因型毒株之间不能较好地提供交叉保护,导致临床上多见非典型新城疫与高抗体家禽发生NDV感染。目前,疫苗免疫仍是预防该病的重要措施,随着其病原学与分子生物学技术的发展,研究者研发了不同类型的ND疫苗。论文就新城疫病毒的病原分子特征、传统疫苗及新型基因工程疫苗的研究现状及发展前景进行综述,旨在为我国新城疫的防控及新城疫疫苗的研发提供一定的参考。

摘要： 新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的禽类的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告的动物疫病,我国农业农村部将其列为一类动物传染病,是世界上流行范围最广、对全球养禽业造成最严重经济损失的家禽传染病之一。目前,疫苗免疫仍是控制此病重要的手段,被广泛应用于禽业生产中。随着生物科学和技术的发展,新城疫疫苗的研制与创新也在不断进步。本文将从新城疫疫苗研究现状和主要新城疫疫苗及其优缺点作简要阐述,为新城疫疫苗的研究和合理应用提供参考。

摘要： 新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的禽类的一种急性烈性传染病,严重危害养禽业的发展.在疫苗接种免疫压力下,NDV演化出不同的基因型,且各基因型毒株之间不能较好地提供交叉保护,导致临床上多见非典型新城疫与高抗体家禽发生NDV感染.目前,疫苗免疫仍是预防该病的重要措施,随着其病原学与分子生物学技术的发展,研究者研发了不同类型的ND疫苗.论文就新城疫病毒的病原分子特征、传统疫苗及新型基因工程疫苗的研究现状及发展前景进行综述,旨在为我国新城疫的防控及新城疫疫苗的研发提供一定的参考.

摘要： 非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起猪的一种急性、热性、高度接触性虫媒病毒病,可致家猪网状内皮系统出血及高死亡率,是危害养猪业健康发展最严重的传染病之一.本文综述了非洲猪瘟病毒的特性、免疫应答及基因工程疫苗的研究进展.

摘要： 论文结合运用文本挖掘技术和共词分析方法对专利文献进行研究,通过对专利技术主题字段的内容分析从微观上了解我国基因工程疫苗(Gene Engineered Vaccine,GEV)领域技术的研究现状及发展趋势.论文使用汤森路透的数据分析工具从专利文献中提取技术主题字段主题词,根据主题词之间的共现关系对其进行聚类分析,得到GEV领域的六个技术主题,并借助战略坐标图对这六个技术主题进行分析.研究结果显示,我国GEV领域还没有完全成熟的技术;核酸疫苗相关技术、基因疫苗技术手段、树突状细胞疫苗相关技术和人源化基因工程改造技术四个技术主题具有一定的成熟度,仍然需要进一步的提高:免疫佐剂相关技术和病毒类疫苗相关技术两个技术主题尚不成熟.本文内容有助于研发人员或决策制定者了解我国GEV领域技术研究现状,预测其发展趋势,制定科学合理的技术布局,提高研发活动效率.

摘要： 2014年5月诏安某育苗场斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)幼鱼发病.选取患病鱼带回实验室进行检测,经过初步鉴定结果为感染神经坏死病毒(nervous necrosis virus,NNV).病鱼制成病毒的粗提液,低温保存.通过RT-PCR检测,粗提液为NNV阳性,可用于后续感染试验.2014年7月厦门小嶝水产科技有限公司孵育出一批健康的斜带石斑鱼幼苗,随机取20尾幼苗,提取其眼球部位的基因进行RT-PCR检测,均为NNV阴性.挑选全长(3.0±0.5)cm健康的斜带石斑鱼苗种,进行初步的人工感染实验,并选取合适的感染浓度.本研究初步确定NNV人工肌注感染石斑鱼苗种的用量，测定了该NNV基因工程疫苗的保护效果，认为在石斑鱼幼苗培育过程中使用该种疫苗能够很好地降低幼鱼感染NNV的风险。

摘要： 戊型肝炎(HE)是由戊型肝炎病毒(HEV)引起的病毒性肝炎,以水源性暴发和急性散发为特点,主要通过粪-口途径传播,是一种新发重要人兽共患传染病,呈全球分布,严重危害人们身体健康和动物养殖业健康发展,是发展中国家的主要公共卫生问题之一.很多研究及病例证明了HE是一种可以通过食物或水源环境传播的人兽共患疫病,猪是HEV的重要储库.HEV编码病毒衣壳蛋白pORF2有多个重要免疫抗原表位,目前HEV基因工程疫苗的研究主要集中在ORF2,且对ORF2的研究主要集中在C端,有关ORF2N端及中间部分的研究报道甚少.对ORF2不同区域进行研究,筛选反应原性好、免疫原性高的抗原片段,对于HEV基因工程疫苗的研发具有重要意义.本研究将广西HEV地方毒株ORF2三个连续片段的PCR产物克隆于CMV启动子高效表达的载体中，成功获得三个真核表达质粒pEASY-LB1、pEASY-LB2、pEASY-LB3。重组真核表达质粒分别转染293T细胞，经实时荧光定量PCR检测证实pEASY-LB1, pEASY-LB2,pEASY-LB3已分别在293T细胞中转染成功。经Western-Blot证实构建的pEASY-LB1,pEASY-LB2, pEASY-LB3具生物学活性。HEV ORF2三个真核表达质粒构建为后期动物免疫试验及深入研究猪戊型肝炎基因工程疫苗奠定了基础。

摘要： 新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒引起的一种高度接触性传染病,是危害养鸡业发展最为严重的疫病之一,被OIE列为必须报告的传染病之一.本文对灭活疫苗、活疫苗及基因工程疫苗等主要新城疫疫苗的研究现状及发展动态进行了简要综述.

摘要： 伪狂犬病毒是一个重要的活病毒载体,具有安全性好、基因组容量大、重组病毒遗传稳定、生产成本低等特点,外源基因可稳定地插入其DNA,能刺激机体的非特异性免疫反应.本研究采用目前运用比较成熟的伪狂犬基因缺失株TK-/gE-/LacZ+为载体,利用同源重组的原理,选取针对猪链球菌和副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)具有良好保护力的新型抗原基因Sao、HP0197、HPS_ 06257以及palA,构建出携带有SS和HPS抗原基因的重组伪狂犬病毒,对其进行动物免疫评价,为更好的预防这两种病原提供新思路.

摘要： 为了构建表达猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒PRRSV GP5蛋白口服重组减毒猪霍乱沙门氏菌活载体疫苗株,通过PCR克隆去除信号肽序列的PRRSV ORF5基因,将其插入到表达载体pYA3493中,构建了重组质粒pYA3493－dORF5.将该重组质粒电转入猪霍乱沙门菌基因缺失株(缺失crp,asd基因),获得PRRSV ORF5基因减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔasdC78-1(pYA－dORF5)重组菌。通过对重组菌表型性状、生长特性、稳定性及安全性和定制能力进行测定,并对重组菌表达的GP5蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果显示,该菌株保留了在DAP阴性环境中生存的能力;不能利用麦芽糖、蔗糖及果糖等碳源,但保留了利用葡萄糖的能力,其生长速度低于强毒株C78-1,而与ΔcrpΔasdC78-1相比变化不明显;在体外连续传代能够稳定遗传dORF5目的基因片段。Western-blot证实重组菌表达的GP5蛋白能与PRRSV阳性血清特异性结合;通过口服途径与强毒株C78-1及猪霍乱沙门菌弱毒疫苗株C500相比,ΔcrpΔasdC78-1(pYA－dORF5)毒力分别下降492倍和1.3倍。通过侵袭力实验测得重组菌在血液,肠系膜淋巴结和脾脏均定植能力良好。结果表明,成功构建了能稳定表达PRRSV GP5蛋白的口服重组减毒猪霍乱沙门菌,为研究PRRSV口服基因工程疫苗奠定了良好的基础。

摘要： 本研究以表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5m和M蛋白的重组伪狂犬病毒rPRV-GP5m-M为亲本毒株，CMV-SynORFS-polyA(表达优化后的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的ORF5基因)，CMV-ORF4-polyA(表达高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒WUH1株ORF4基因)和CMV-ORF5-ORF2m-polyA(融合表达高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒WUH1的ORF5基因和猪2型圆环病毒修饰型ORF2(ORF2m))插入rPRV-GP5-M株的gG位点，构建重组病毒rPRV-PRRSV-3。期望达到同时预防猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒感染的目的，简化免疫程序，降低免疫成本。

摘要： 目的：通过引入免疫增强因子GM-CSF,提高重组病毒的免疫原性。方法：将牛GM-CSF克隆到pcDNA3.1载体中,构建GM-CSF基因表达盒;将tk基因上游同源臂、GM-CSF基因表达盒、tk基因下游同源臂克隆到pcDNA3.1载体中,得到转移载体pTK-GM-CSF.将亲本病毒BHV-1gG–/TK–/EGFP+基因组与转移载体pTK-GM-CSF采用磷酸钙法共转染MDBK细胞,得到重组病毒BHV-1 gG–/TK–/GM-CSF+.并对重组病毒的生物学特性和对日本大耳白兔的免疫原性进行了评价。结果：利用PCR和RT-PCR证实GM-CSF基因表达盒已正确插入重组病毒的tk基因位置,并具有转录活性。亲本株和重组株的空斑形态、空斑直径大小无明显差异;两者病毒滴度无明显变化,生长曲线相似;体外遗传稳定性良好。兔体实验表明在免疫早期重组毒株能产生较亲本株更高水平的IFN-β(P＜0.05).但中和抗体水平、攻毒后的临床症状及病毒排毒时间等各项指标检测表明,亲本株和重组毒株之间无明显差异。结论：在免疫早期重组株刺激机体产生的IFN-β高于亲本株,具有一定的应用前景。

摘要： 目的：通过引入免疫增强因子GM-CSF,提高重组病毒的免疫原性。方法：将牛GM-CSF克隆到pcDNA3.1载体中,构建GM-CSF基因表达盒;将tk基因上游同源臂、GM-CSF基因表达盒、tk基因下游同源臂克隆到pcDNA3.1载体中,得到转移载体pTK-GM-CSF.将亲本病毒BHV-1gG–/TK–/EGFP+基因组与转移载体pTK-GM-CSF采用磷酸钙法共转染MDBK细胞,得到重组病毒BHV-1 gG–/TK–/GM-CSF+.并对重组病毒的生物学特性和对日本大耳白兔的免疫原性进行了评价。结果：利用PCR和RT-PCR证实GM-CSF基因表达盒已正确插入重组病毒的tk基因位置,并具有转录活性。亲本株和重组株的空斑形态、空斑直径大小无明显差异;两者病毒滴度无明显变化,生长曲线相似;体外遗传稳定性良好。兔体实验表明在免疫早期重组毒株能产生较亲本株更高水平的IFN-β(P＜0.05).但中和抗体水平、攻毒后的临床症状及病毒排毒时间等各项指标检测表明,亲本株和重组毒株之间无明显差异。结论：在免疫早期重组株刺激机体产生的IFN-β高于亲本株,具有一定的应用前景。

摘要： 本发明生长抑素基因疫苗(DNA疫苗)的基因工程体，属生物新技术领域。其构建过程是：人工合成生长抑素(SS)基因，构建pUC12-SS质粒。并将其改造成pUC12-SS2质粒。然后，从pWR13-HBs/6质粒切下HBs片段，与切开的pUC12/SS2连接，构建成带HBs/SS融合基因的pUC13/-HBs/SS质粒。最后用PCR扩增出该质粒中的HBs/SS与pcDNA3.1质粒连接，构建成pcDNA3.1-HBs/SS质粒。将其转化感受态大肠肝菌，即成本发明的基因工程体-Ecoli-pcDNA3.1-HBs/SS。图为：pcDNA3.1质粒的构建。

摘要： 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒基因工程毒株及灭活疫苗和疫苗的制备方法，毒株是通过对高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）毒株进行定点突变，使其GP5第35位和第44位的糖基化位点缺失的方式构建而成；灭活疫苗的有效成分为灭活的该毒株病毒液。本发明首次采用过氧化氢为灭活剂，通过过氧化氢灭活浓度、时间优化和免疫佐剂的优化获得新型灭活疫苗。与其他灭活剂和佐剂相比，该毒株制备的新型灭活疫苗可以有效诱导仔猪产生PRRSV细胞免疫应答和中和抗体，保护仔猪抵抗PRRSV强毒攻击的效果更好。该基因工程灭活疫苗比传统灭活疫苗更为有效，相比商品化的PRRSV活疫苗更为安全，具有很好的应用前景。

摘要： 本发明是有关于一种蛋白质疫苗的制备方法，包括：(a)取得一标的抗原蛋白质至少一抗原决定位胜肽的胺基酸序列；(b)将抗原决定位胜肽的野生型核酸序列，进行改质；(c)合成此合成型核酸序列的复数个引子；(d)于体外合成此合成型核酸；(e)将此合成型核酸结合成一合成质体；(f)将此合成质体转形入宿主细胞，以生产合成型核酸所编码的抗原决定位胜肽；以及(g)收集并纯化抗原决定位胜肽。对于高致病性高危害性的疾病，由本发明的逆向基因工程平台技术，可快速的发展出具有抗体诱发效果的高安全性疫苗。

摘要： 本发明生长抑素基因疫苗(DNA疫苗)的基因工程体,属生物新技术领域。其构建过程是:人工合成生长抑素(SS)基因,构建pUC12－SS质粒。并将其改造成pUC12－SS2质粒。然后,从pWR13－HBs/6质粒切下HBs片段,与切开的pUC12/SS2连接,构建成带HBs/SS融合基因的pUC13/－HBs/SS质粒。最后用PCR扩增出该质粒中的HBs/SS与pcDNA3.1质粒连接,构建成pcDNA3.1－HBs/SS质粒。将其转化感受态大肠肝菌,即成本发明的基因工程体－Ecoli－pcDNA3.1－HBs/SS。

摘要： 本发明畜禽去势基因疫苗(DNA疫苗)的基因工程体,属生物高新技术领域。其构建过程是:人工合成畜型的LHRH(M)和禽型LHRH(A)基因,构建pBS－LHRH质粒。然后从pWR－HBs质粒,切下HBs片段,将其插入pBS－LHRH质粒,构建成pBS－HBs/LHRH质粒。最后,用PCR从pBS－HBs/LHRH质粒中,扩增出HBs/LHRH融合基因片段,将其插入pcDNA3.1质粒,获得pcDNA3.1－HBs/LHRH(M)和pcDNA3.1－HBs/LHRH(A)2株重组质粒。分别转化大肠杆菌,即构建成本发明的基因工程体——Ecoli－pcDNA3.1－HBs/LHRH(M)和Ecoli－pcDNA3.1－HBs/LHRH(A)。图为:pcDNA3.1－HBs/LHRH重组质粒构建。

摘要： 本发明公开的是一种基于反向疫苗学技术的猪肺炎支原体多表位基因工程亚单位疫苗的制备方法及其应用，通过反向疫苗学的方法筛选了猪肺炎支原体基因组中的毒力因子，从筛选出的毒力因子中筛选出可以结合MHC‑I/II类分子的抗原表位。将抗原表位整合为重组蛋白MhpMEV并与佐剂混合，获得猪肺炎支原体多表位基因工程亚单位疫苗，具有安全性好、成本低、使用简便及易区分感染动物和免疫动物的优势而具有良好的应用前景。应用反向疫苗学方法开发疫苗不需要培养病原微生物，并且该病原体在不同时期和环境表达的抗原蛋白都会被分析作为候选抗原，因此可以提高疫苗的普遍适用性，对一些变异毒株也能够发挥保护作用。

摘要： 本发明提供了SEQ ID NO.2所示核苷酸序列或其简并序列所编码的禽减蛋综合征病毒tFiber蛋白片段，以及该蛋白片段制备的疫苗组合物，该片段具有良好的免疫原性，其低免疫量即能产生良好的免疫效果，保护率为100％，其免疫原性较Fiber全长蛋白更好，并能与多种抗原制备联苗，对鸡和鸭群产生完全保护。

摘要： 本发明公开了一种靶向传递疫苗抗原的基因工程乳酸菌口服疫苗株及其在防治鸡大肠杆菌病中的用途。所述的疫苗株是通过将表达鸡致病性大肠杆菌ompC蛋白和fimA蛋白以及靶向M细胞和DC细胞的靶向肽的融合蛋白的表达载体转入乳酸菌中得到的，其中ompC蛋白和fimA蛋白之间通过柔性序列连接，所述的融合蛋白的连接顺序为ompC‑fimA‑M细胞靶向肽‑DC细胞靶向肽。本发明以鸡致病性大肠杆菌fimA和ompC蛋白为免疫原并融合能够靶向M细胞和DC细胞的靶向肽，利用乳酸菌为抗原传递载体，构建了预防鸡大肠杆菌病的靶向传递疫苗抗原的基因工程乳酸菌亚单位口服疫苗，可有效地抑制鸡致病性大肠杆菌的感染，并且使用方便、安全，对环境友好。

摘要： 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒基因工程毒株及灭活疫苗和疫苗的制备方法，毒株是通过对高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）毒株进行定点突变，使其GP5第35位和第44位的糖基化位点缺失的方式构建而成；灭活疫苗的有效成分为灭活的该毒株病毒液。本发明首次采用过氧化氢为灭活剂，通过过氧化氢灭活浓度、时间优化和免疫佐剂的优化获得新型灭活疫苗。与其他灭活剂和佐剂相比，该毒株制备的新型灭活疫苗可以有效诱导仔猪产生PRRSV细胞免疫应答和中和抗体，保护仔猪抵抗PRRSV强毒攻击的效果更好。该基因工程灭活疫苗比传统灭活疫苗更为有效，相比商品化的PRRSV活疫苗更为安全，具有很好的应用前景。

摘要： 本发明是有关于一种蛋白质疫苗的制备方法，包括：(a)取得一标的抗原蛋白质至少一抗原决定位胜肽的胺基酸序列；(b)将抗原决定位胜肽的野生型核酸序列，进行改质；(c)合成此合成型核酸序列的复数个引子；(d)于体外合成此合成型核酸；(e)将此合成型核酸结合成一合成质体；(f)将此合成质体转形入宿主细胞，以生产合成型核酸所编码的抗原决定位胜肽；以及(g)收集并纯化抗原决定位胜肽。对于高致病性高危害性的疾病，由本发明的逆向基因工程平台技术，可快速的发展出具有抗体诱发效果的高安全性疫苗。