柔嫩艾美耳球虫

摘要： 旨在探究屎肠球菌(Enterococcus faecium)对人工感染柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)肉鸡生长性能、存活率、盲肠损伤、粪便卵囊排出和肠道屏障功能的影响。选取体重相近的1日龄肉鸡(罗斯308)180羽,随机分为5组,包括空白对照组(NC)、感染对照组(PC)、70 mg·kg^(-1)盐霉素添加组(SAL)、E.faecium 1.0×10^(8) CFU·kg^(-1)添加组(EA)和E.faecium 2.5×10^(9)CFU·kg^(-1)添加组(EB)。NC和PC组饲喂基础饲粮,SAL、EA、EB组在分组后即开始饲喂添加盐霉素和E.faecium的饲粮,持续至试验结束。在15 d时,除NC组外所有试验组的鸡均口服感染1.0×10^(5)个E.tenella孢子化卵囊。通过分析平均日增重(ADG)、克粪便卵囊数(OPG)、盲肠损伤评分、组织病理学检查和盲肠屏障相关分子(iNOS、MUC2、Occludin、JAM2、ZO-1)的基因表达量来评价E.faecium的抗球虫效果。结果表明:1)相比于NC组,EA和EB组可以显著增加感染前ADG(P0.05);3)在整个试验期间各组存活率分别为100%(NC)、58.33%(PC)、83.33%(SAL)、58.33%(EA)、75.00%(EB);4)相比于NC组,PC组肠道iNOS、MUC2、Occludin、JAM2和ZO-1的表达均显著下降(P<0.05),而SAL、EA、EB组均能显著提高iNOS的表达量(P<0.05);EB组肠道MUC2、Occludin和JAM2的表达量也显著高于PC组(P<0.05)。综上所述,E.faecium具有一定的抗球虫效果,可能通过调节肠道屏障相关分子的表达发挥作用。

摘要： 为了对云南省玉溪市某散养土杂鸡场一例球虫病例进行虫种鉴定,本试验通过发病情况调查、病理剖检、虫卵检查、虫卵计数、特异性引物PCR扩增、18S rRNA基因序列测序等方法进行检测分析。结果显示:病鸡盲肠粗大肿胀,肠腔内有棕黑色黏液样内容物;虫卵大小在22.922~26.621μm×17.433~19.631μm之间,每个孢子化卵囊含4个孢子囊,每个孢子囊含有2个子孢子,符合柔嫩艾美耳球虫特征;柔嫩艾美耳球虫特异性基因检测为阳性;该虫种18S rRNA基因序列与柔嫩艾美耳球虫序列的同源性最高为99.61%~99.92%,且在进化树上构成一个分支;虫卵计数卵囊数(OPG)为1.7×10^(4)。试验表明该鸡场鸡群感染了柔嫩艾美耳球虫,且为中度感染;用磺胺类药物加祛湿中药治疗,疗效显著。

摘要： 为探究接种不同剂量柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)孢子化卵囊对京海黄鸡感染后不同时间点血液生化、抗氧化等指标的影响及动态变化规律,将180只30日龄京海黄鸡随机分为3组,分别感染0(对照组)、0.75万个·只^(-1)(感染Ⅰ组)和1.5万个·只^(-1)(感染Ⅱ组)E.tenella孢子化卵囊,分别测定感染后第0、3、7天血液中23个生化、抗氧化和免疫指标,分析不同感染剂量和时间点对测定指标的影响。结果表明:感染后第3天,只有感染Ⅱ组碱性磷酸酶(ALP)显著高于感染Ⅰ组和对照组,感染Ⅱ组葡萄糖(GLU)显著高于对照组;感染后第7天,不同剂量组ALP、总蛋白质(TP)、球蛋白(GLB)、肌酐(CRE)、三酰甘油(TG)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、白介素2(IL-2)、过氧化氢酶(CAT)、白介素6(IL-6)和白介素8(IL-8)指标之间有显著或极显著差异。综合而言,不同剂量E.tenella孢子化卵囊感染后,对京海黄鸡不同时间点血液指标的影响不同,这为京海黄鸡球虫病感染后机体在防御过程中所起的作用提供了参考依据。

摘要： 泛素是真核生物中普遍存在的一种小分子蛋白,广泛参与细胞内蛋白质的平衡代谢过程,对维持细胞内环境的稳态具有重要作用。为研究泛素在柔嫩艾美耳球虫中的功能,本研究利用PCR方法克隆了柔嫩艾美耳球虫泛素(Et Ub)基因,将其亚克隆至原核表达载体pET28a(+),转入大肠杆菌BL21,诱导表达制备rEt Ub蛋白,用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔获得多克隆抗体。用qPCR和Western blot方法检测柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段EtUb基因的转录和蛋白质翻译水平。结果显示:EtUb基因在柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子中的转录和翻译水平均高于未孢子化卵囊、孢子化卵囊和子孢子阶段;间接免疫荧光实验显示该蛋白主要分布于子孢子和第二代裂殖子的顶端表面;抗体入侵抑制实验显示兔抗rEt Ub-IgG能明显抑制子孢子入侵BHK细胞,浓度为300μg/mL时,抑制率达到36%;免疫共沉淀实验共筛选出10个与Et Ub潜在互作的虫体蛋白,包括Myosin A、Microneme protein 3等。研究结果为深入研究EtUb基因在球虫中的功能奠定了基础。

摘要： 鸡球虫在全球已知范围内有14种,中国已发现有9种,比较常见且在我国可以感染鸡的球虫大概有7种[1]。在自然界中鸡感染了球虫,往往是几种球虫的混合感染。鸡球虫的生活史分为两个生殖阶段:第一阶段是孢子生殖,第二阶段是性配子生殖,通过不断繁殖发育直至新的卵囊排出体外,从而完成生殖的一个循环。孢子生殖阶段是在体外进行的,所以对于环境因素有很大的要求。球虫卵囊须在一定的温度下才能发育成孢子化卵囊,如柔嫩艾美耳球虫需要的最适宜环境温度是26~29°C,这样才可以正常进行孢子生殖[2]。

摘要： 将60只健康罗曼粉鸡随机分为正常组和模型组,每组30只,模型组灌服1×10^(4)个孢子化卵囊进行人工复制鸡球虫病模型,正常组灌服等体积生理盐水,感染5 d,剖杀试验鸡,无菌采集鸡盲肠内容物,并通过Illumina PE250型高通量测序仪对肉鸡盲肠内菌群进行16SrDNA基因V3~V4可变区检测,对肠道菌群可操作分类单元(OTUs)数、α多样性、β多样性及差异菌门与菌属进行综合性分析与评价,探究柔嫩艾美耳球虫感染对鸡盲肠菌群结构和多样性的影响。结果表明:与正常组相比,感染柔嫩艾美耳球虫后鸡肠道菌群的OTUs数、Chao1指数极显著降低,Shannon指数显著降低,Simpson指数显著升高;门水平上,模型组变形菌门的相对丰度极显著升高,而厚壁菌门的相对丰度显著降低,拟杆菌门和柔膜菌门的相对丰度显著降低;属水平上,正常组的优势菌属为拟杆菌属、瘤胃菌属-UCG014、副拟杆菌属,而模型组瘤胃球菌属-uncultured、球藻菌属、埃希菌-志贺菌属相对丰度极显著升高。可见,艾美耳球虫破坏了盲肠菌群的完整性,促进潜在致病菌的建立和生长,尤其使埃希菌-志贺菌属大量繁殖,快速生长。

摘要： 将柔嫩艾美耳球虫重组配子体蛋白rEtGAM22、rEtGAM56和rEtGAM59分别单独免疫(单免)或联合免疫(联免)雏鸡,同时设未免疫攻虫组和空白对照组为对照,分别用柔嫩艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫进行攻虫试验,以存活率、排出血便数、平均增重、相对增重率、病变记分、卵囊减少率、抗球虫指数和血清特异性抗体水平为指标来评价这3种重组蛋白免疫雏鸡的抗球虫免疫保护效果。结果显示:各试验组的成活率均为100%。与空白对照组比较,各免疫组鸡排血便堆数减少、平均增重显著(P<0.05)增加;用柔嫩艾美耳球虫攻虫后,rEtGAM22与rEtGAM59联免组相对增重率(86.71%)最高,rEtGAM59单免组平均病变记分最低、卵囊减少率(59.61%)最高,rEtGAM22与rEtGAM59联免组抗球虫指数值(163.71)最高。用毒害艾美耳球虫攻虫后,rEtGAM22与rEtGAM59联免组相对增重率(83.06%)最高,rEtGAM56与rEtGAM59联免组平均病变记分最低,rEtGAM56单免组卵囊减少率(66.97%)最高,rEtGAM56与rEtGAM59联免组抗球虫指数(158.23)最高。各免疫组血清特异性抗体水平均显著(P<0.05)高于空白对照组,其中rEtGAM56单免组血清特异性抗体水平最高,且显著(P<0.05)高于其他免疫组。结论:rEtGAM59单免或与rEtGAM22联免的抗柔嫩艾美耳球虫的保护效果较好,rEtGAM56单免或与rEtGAM59联免的抗毒害艾美耳球虫的保护效果较好。

摘要： 鸡球虫病是由艾美耳球虫引起的一种危害严重的肠道寄生虫病,每年都会给世界各地的养禽业带来巨大的经济损失。目前,该病主要依靠抗球虫药物进行防治,但由于药物的长期及不合理使用导致鸡球虫几乎对所有使用过的抗球虫药均产生耐药性。为研究球虫耐药性产生的分子机制,本实验室前期对柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株以及敏感株进行了转录组测序并获得了敏感株与耐药株的差异表达基因,发现柔嫩艾美耳球虫含HD域蛋白(Et HDCP)在耐药株中上调表达。本研究以柔嫩艾美耳球虫敏感株孢子化卵囊cDNA第一链为模板,成功克隆出Et HDCP基因,构建了原核表达重组质粒pGEX-4T-Et HDCP,并成功诱导表达了重组蛋白r Et HDCP。利用qRT-PCR和Western blot对柔嫩艾美耳球虫敏感株不同发育阶段的转录和翻译水平进行分析,结果显示,Et HDCP在第二代裂殖子的转录和翻译水平高于其他三个阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊和子孢子)。同时利用Western blot分析了Et HDCP在柔嫩艾美耳球虫敏感株、地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株中的翻译水平,结果显示,Et HDCP在耐药株中的蛋白翻译水平显著高于敏感株。间接免疫荧光定位结果显示,该蛋白主要定位在子孢子和裂殖子的表面以及裂殖子的胞质内。入侵抑制试验表明,抗r Et HDCP多克隆抗体可有效抑制子孢子对宿主细胞的入侵。这些结果说明该蛋白可能参与了虫体在宿主细胞内的生长发育、耐药性的产生以及子孢子入侵宿主细胞的过程。

摘要： 为研究联合使用抗球虫和抗损伤药对鸡球虫病的疗效,本试验选取11日龄SPF鸡90只,分为C组(空白对照)、T0组(感染不给药)、T1~T4组(感染给药组)6个组,感染组感染柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)5.0×10^(4)个/只鸡,并于72 h后用药,T1组(妥曲珠利+磺胺氯吡嗪钠+硝苯地平+VE+Se+Zn+止血敏)、T2组(妥曲珠利)、T3组(磺胺氯吡嗪钠)、T4组(妥曲珠利+磺胺氯吡嗪钠),通过检测血便记分、OPG、盲肠病变记分、死亡率、相对增重率和抗球虫指数,测定其药效。试验结果:感染加药组的相对增重率均高于T0组,其中T1组最高;感染加药组的平均血便率和病变值均低于T0组,其中T1组鸡平均血便率最低,病变值极显著(P<0.01)低于T0组;感染加药组OPG均极显著(P<0.01)低于T0组;T1组ACI值最高,为181.04,达高效;感染加药组的成活率均高于T0组,且T1、T3、T4组成活率为100%。本试验结果表明,联合使用抗球虫和抗损伤药对鸡球虫病的疗效达高效,并优于使用单一抗球虫药或两种抗球虫药的联合使用。

摘要： 鸡球虫病是由艾美耳科,艾美耳属的球虫寄生于鸡的肠道引起的。目前全国范围内鸡的球虫被公认的有7种,凡是有鸡的地方,均有鸡球虫存在,生产中多以一种以上的球虫混合感染为主。发病最多、危害最大的球虫主要有柔嫩艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫。柔嫩艾美耳球虫寄生于盲肠,致病力最强,在感染后第5天引起宿主的盲肠严重出血和高度肿胀,后期出现干酪性肠芯,因此又被称为盲肠球虫。毒害艾美耳球虫主要寄生在小肠中1/3段,以卵黄蒂前后最为常见,是小肠球虫中致病力最强的一种。鸡小肠球虫病主要是由毒害艾美耳球虫引起,多发生在散养草鸡的30-70日龄,临床症状可见棕色粪便,以及褐灰色粪便,病鸡表现精神不振、缩颈、厌食、消瘦、血便,并带有腹泻症状,零星死亡,是散养草鸡常见的疾病。

摘要： 为了探讨细胞色素C（cyt-c）在柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）宿主细胞凋亡中的作用及其机制。采用原代培养鸡胚盲肠上皮细胞、酶联免疫分析和流式细胞等技术，于不同时间对cyt-c抑制剂（TMPD、抗坏血酸钠）处理和非处理的感染E.tenella鸡胚盲肠上皮细胞凋亡率、caspase-9酶活性及宿主细胞线粒体及胞浆内cyt-c、smac的蛋白表达量进行动态检测。表明cyt-c在E.tenella诱导宿主细胞凋亡通路中发挥重要作用，释放入胞浆的cyt-c可通过caspase依赖途径使E.tenella宿主细胞凋亡增加，并且胞浆内氧化态的cyt-c降低可使E.tenella宿主细胞线粒体释放入胞浆中的smac蛋白减少。

摘要： 分离疑似球虫病病鸡的盲肠,刮取其内容物;经多级筛网滤过,获得含有大量卵囊的混合物;饱和盐水法初步分离卵囊;梯度浓度的蔗糖溶液纯化卵囊;将纯化卵囊置于2.5％的重铬酸钾溶液、28°C条件进行孢子化;将孢子化的卵囊用2％琼脂溶液包囊,用高倍显微镜观察,用刀片分割琼脂球虫块至单个卵囊;接种鸡进行回归实验;分别纯化由单个卵囊裂殖的球虫卵囊;将获取的单卵囊饲喂至7日龄雏鸡,获得了5组球虫卵囊;分别用形态学和分子生物学方法鉴定所获得的5组卵囊均为鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊;该卵囊的获得为后续研究中草药对鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊作用机理的研究提供了材料基础.

摘要： 本实验根据BWl-B02的EST序列,利用RACE技术扩增获得了一个含完整开放阅读框的cDNA序列,结果显示其具有1个HSPs家族alpha-crustallin-HSPs_p23-like superfamily的保守结构域.与柔嫩艾美耳球虫基因组进行同源性比对,发现该基因与柔嫩艾美耳球虫的Hsp20有高度同源性,为了进一步研究该蛋白在虫体发育过程中的功能,将获得的EtsHSP基因与原核表达质粒pET-28a(+)连接,构建重组表达质粒(pET28a(+)-EtsHSP)后转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达获得了重组表达蛋白rEtsHSP.用获得的重组蛋白免疫兔制备了兔抗rEtsHSP的多克隆抗血清.Western blot分析显示制备的兔抗rEtsHSP多克隆抗血清能识别大约20 kDa的虫体天然蛋白,且蛋白的表达在孢子化卵囊阶段高于其他3个阶段.利用间接免疫荧光抗体标记对EtsHSP在柔嫩艾美耳球虫子孢子的分布进行了分析,发现该蛋白主要位于细胞核周围.体外抑制试验结果显示,子孢子与所制备的抗体孵育后,其入侵DF-1细胞的能力减弱.以上研究结果,为进一步深入研究球虫sHSP的功能提供了重要参考依据.

摘要： 本实验室研究发现,运用Transwell小室将球虫与宿主细胞隔离开来,进行短时间的间接共培养,测定共培养期间宿主细胞培养上清中细胞凋亡相关因子Caspase家族主要蛋白的活性后的结果表明,间接共培养下球虫会在一定程度上抑制宿主细胞的凋亡.制备裂殖子多抗,收集共培养期间宿主细胞所处的下室的培养上清中的所有柔嫩艾美耳球虫裂殖子的蛋白,并对这些蛋白进行高效液相色谱串联质谱分析.结果分析出部分柔嫩艾美耳球虫裂殖子的外分泌蛋白,这些蛋白或许与细胞凋亡抑制相关.将这些蛋白进行单个研究,为今后的研究提供明星因子的参考以及理论依据.

摘要： 鸡球虫病是严重危害养鸡业的主要原虫病之一，该病经常呈爆发性流行，可以感染不同日龄的鸡，其中雏鸡最易感，在感染球虫第5-6天后，盲肠壁增厚，严重出血、肿大，发病率和死亡率最高，给养鸡业带来巨大的经济损失。为了分析柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)河北株SO7基因生物信息学,并用毕赤酵母表达其SO7蛋白,为研究SO7蛋白功能及E.tenella疫苗的研制奠定基础.利用RT-PCR方法克隆出E.tenella河北株SO7基因连接到pMD18-T载体中,进行测序及生物信息学分析;将SO7基因克隆到毕赤酵母分泌表达载体pPIC9中,构建重组表达载体pPIC9-SO7线性化后,转化巴斯德毕赤酵母GS115细胞中,甲醇诱导表达,采用SDS-PAGE和Western-blotting方法验证蛋白的表达.结果显示:E.tenella河北株SO7基因编码215个氨基酸,具有一个开放阅读框,大小为645bp,与GenBank中登录的参考株氨基酸序列的同源性在98.1％～99.1％之间,与HN株同属一个分支,遗传关系较近;蛋白结构预测编码蛋白无跨膜区,342个氨基酸编码蛋白的都在细胞膜外.SDS-PAGE和Western-blotting结果表明,重组表达载体pPIC9-SO7,在毕赤酵母菌中表达出大约87kDa的目的蛋白.综上所述,E.tenella河北株SO7基因可以作为构建核酸疫苗候选基因之一.

摘要： 为了探讨柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)宿主细胞钙稳态与线粒体凋亡通路的关系,采用原代鸡胚盲肠上皮细胞培养、酶联免疫分析和流式细胞术等技术,通过对E.tenella宿主细胞凋亡率、MPTP开放性、胞质内游离钙离子浓度([Ca2+]c)和胞浆内细胞色素C(cytc)含量的动态变化进行测定.结果显示感染E.tenella组(T0组)24-120h宿主细胞凋亡率、[Ca2+]c、MPTP开放程度和胞浆内cytc含量显著(P＜0.01或P＜0.05)高于空白对照组.感染E.tenella的宿主细胞添加胞内钙离子螯合剂(BAPTA/AM),细胞凋亡率(48h、96h、120h)、MPTP开放程度(96h、120h)和cytc的含量(24h、96h、120h)显著(P＜0.01或P＜0.05)低于T0组;添加胞外钙离子螯合剂(EGTA),细胞凋亡率(48h)、MPTP开放程度(48-120h)和cytc的含量(96h、120h)显著(P＜0.01或P＜0.05)低于T0组;添加内质网上的IP3R和RyR钙离子通道阻断剂(肝素钠和Ryanodine),细胞凋亡率(48-96h)、MPTP开放程度(72h、120h)和cytc的含量(24h、120h)显著(P＜0.01或P＜0.05)低于T0组.表明Ca2+在E.tenella诱导宿主细胞线粒体凋亡通路中发挥重要作用,宿主细胞外Ca2+浓度的变化和内质网Ca2+通道在线粒体凋亡通路中发挥重要调控作用.

摘要： 研究目的：探讨线粒体通透性转变孔(MPTP)对柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)宿主细胞凋亡的作用,为进一步研究鸡球虫病损伤机制提供理论依据.rn 研究方法：取鸡胚盲肠进行上皮细胞培养并对球虫子孢子进行扩繁,然后将体外培养的贴壁率达到90％以上的鸡胚盲肠上皮细胞(6孔板)分为3组,分别为空白对照组(C组),非处理组(T0组)和处理组(T1组).C组为不接种且不加药组;T0组为接种子孢子不加药组;T1组为接种子孢子且添加环孢菌素A(Ciclosporin A,CsA)组.于接种子孢子后4h、24h、48h、72h、96h、120h取样,每组设5个重复,采用Annexin V-FITC/PI荧光标记流式细胞技术分别测定C组、T0组以及T1组宿主细胞的早期凋亡率以及晚期凋亡和坏死率.rn 研究结果：与对照组比较，在接种E.tenella子孢子后4h，非处理组细胞的早期凋亡率、晚期凋亡和坏死率均显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）降低，24h至120h时，非处理组细胞的早期凋亡率、晚期凋亡和坏死率均显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）升高，均说明处于发育前期的E.tenella抑制了宿主细胞的凋亡，以有利于其在细胞内发育，在发育中后期，明显促进了细胞凋亡以有利于E.tenella扩散；与非处理组比较，在接种子孢子后24h～120h，处理组细胞的早期凋亡率、晚期凋亡和坏死率均显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）降低，说明CsA，作为一种特异的MPTP开放性抑制剂，可明显降低宿主细胞的凋亡率，进一步表明抑制MPTP的开放可明显降低宿主细胞的凋亡率。rn 研究结论：MPTP开放度下降导致宿主细胞的凋亡率明显降低。表明MPTP在调节E.tenella宿主细胞线粒体凋亡通路中起着至关重要的作用。

摘要： 探讨线粒体释放的关键因子AIF在柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)鸡宿主细胞凋亡中的作用.rn Daugas研究发现，细胞凋亡时，胞浆内AIF可促使线粒体释放更多的AIF，此过程为自放大调节。E.tenella子孢子感染宿主细胞后4h内，虫体的发育促使宿主细胞胞浆中AIF量及AIF蛋白总量降低，抑制了宿主细胞凋亡，而胞浆内AIF通过AIF的自放大调节促使线粒体内AIF表达量增高，虫体为适应胞内环境而抑制了线粒体AIF向胞浆的释放;在感染子抱子后24h~120h,宿主细胞内AIF由线粒体释放进入胞浆，促使宿主细胞线粒体内AIF蛋白表达量降低、胞浆内AIF蛋白量升高。E.tenella感染宿主细胞时，凋亡信号的刺激会促使MPTP呈持续开放状态，促使线粒体内AIF释放进入胞浆，引起宿主细胞的凋亡，而环保菌素A药物的添加，可抑制MPTP的开放，使线粒体内AIF释放进入胞浆减少，导致线粒体内的AIF蛋白表达量增加，而胞浆内AIF量降低，可使细胞凋亡率降低，凋亡刺激信号的减弱导致AIF总量的降低。E.tenella子孢子感染宿主细胞后，细胞接受凋亡信号刺激时，MPTP开放，AIF由线粒体释放进入胞浆，转移至细胞核内，引起DNA片段化及核染色体凝聚，DNA损伤将会诱发PARP-1释放增多。PARP-1能够促使线粒体AIF的释放并进入胞核。4-AN可抑制PARP-1的激活，进而抑制了AIF诱导的凋亡。表明AIF通过PARP-1/AIF途径参与了E.tenella诱导的宿主细胞凋亡。

摘要： 探讨线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)在鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)引起宿主细胞凋亡机理中的作用.rn mitoKATr通道开放，引起K+内流，导致线粒体基质容积轻微增加。适度的线粒体基质容积增加可以提高线粒体电子传递链的活性，增加ATP的生成。线粒体通透性转运孔(MPTP)组成成分包含腺甘酸转运蛋白(ANT)，ATP的充分生成可以使ANT保持非胞质构象从而阻止MPTP的开放，并促使CytC ,AIF,EndoG,Smac等凋亡因子释放入胞浆，引发凋亡。mitoKATr通道的开放还可以维持△Ψm，降低Cyt-c,caspase-3,Bax的表达，提高Bcl-2的产生，同时抑制Ca2+内流。caspase-9和caspase-3是线粒体凋亡途径中的关键酶，本试验结果中处理组的caspase-9和caspase-3酶活性均低于非处理组，表明mitoKATr通道的开放可以抑制E.tenella宿主细胞线粒体凋亡通路的激活，从而减少宿主细胞的凋亡。rn 开放mitoKATr通道减少宿主细胞凋亡，可为E.tenella发育提供稳定的细胞内环境。因此，感染后24h-120h，有充足且发育良好的虫体从细胞中释放，再次入侵其它细胞，扩大感染范围。试验发现，感染后24h-120h，处理组虫体感染率均极显著高于非处理组，处理组细胞凋亡减少。表明开放mitoKATr通道可以抑制宿主细胞凋亡，延长E.tenella在细胞内的发育时间，利于其发育，提高宿主细胞的感染率。

摘要： 本研究从山东株柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子RNA中反转录扩增得到EtMIC2基因全序列,进一步扩增得到EtMIC2 CDS序列将其克隆到pJETl.2载体后,酶切得到EtMIC2片段,克隆到pPIC9真核表达载体,阳性质粒用SacⅠ线性化后转染毕赤酵母GSll5,PCR筛选表达重组子.经过BMGY培养、BMMY诱导表达,获得分泌表达到上清中的重组蛋白His-EtMIC2.经镍柱纯化浓缩重组蛋白免疫实验兔,获得兔抗EtMIC2蛋白多克隆抗体.应用制备血清做间接免疫荧光实验检测酿酒酵母表面展示EtMIC2蛋白.结果显示,成功用GSll5酵母表达了EtMIC2蛋白,并且,以该蛋白制备的多抗也具有免疫学活性.本研究为进一步研究EtMIC2蛋白的生物功能及和其它入侵因子的相互作用奠定了基础.

摘要： 本发明提供一种柔嫩艾美耳球虫AN1样锌指蛋白及其在抑制球虫入侵中的应用，对柔嫩艾美耳球虫AN1样锌指蛋白进行克隆，表达和纯化。通过荧光定量PCR(qPCR)检测EtAN1‑ZnFP在虫体不同发育阶段的转录水平，通过免疫保护实验评估EtAN1‑ZnFP对鸡感染球虫后的免疫保护作用。本研究结果表明EtAN1‑ZnFP可能参与了柔嫩艾美耳球虫的入侵和生长发育。

摘要： 本发明涉及一种柔嫩艾美耳球虫原生质体的染色方法，包括以下步骤：(1)取新鲜分离的未成熟柔嫩艾美耳球虫卵囊，冻融循环；(2)采用盐酸‑乙醇处理冻融循环后的卵囊，作用后，离心洗涤去除作用液；(3)加入染料，进行柔嫩艾美耳球虫原生质体的荧光染色。本发明建立了一种保留未成熟柔嫩艾美耳球虫卵囊壁完整形态的破壁技术，首次报道了柔嫩艾美耳球虫原生质体的染色方法，程序简便，方法可信，结果鲜明，易于观察和判断。

摘要： 本发明涉及一种柔嫩艾美耳球虫超氧化物歧化酶及其应用，公开了一种辅助鉴定柔嫩艾美耳球虫的抗药性的分子标记EtSOD。分子标记EtSOD是以待测嫩艾美耳球虫的基因组cDNA为模板，采用引物F和引物R进行PCR扩增，得到的cDNA片段。实验证明，分子标记EtSOD可以辅助鉴定待测柔嫩艾美耳球虫的抗药性，具有快速、低成本以及限制少等特点，可大大提高筛选效率。本发明具有重大的应用价值。

摘要： 本发明提供一种柔嫩艾美耳球虫敏感株与耐药株的分子标记及其应用，其中的分子标记为柔嫩艾美耳球虫ASNA1同源的ATP酶（EtASNA1），发现在地克珠利耐药株和马杜拉霉素耐药株的mRNA的转录和蛋白表达明显高于敏感株；通过体外培养实验和体内实验检测了药物刺激对EtASNA1转录水平的影响，发现药物的加入会引起其表达的上调。抗体抑制试验检测EtASNA1参与了虫体入侵宿主细胞。本研究结果表明EtASNA1可能参与了柔嫩艾美耳球虫的入侵和生长发育，可能与柔嫩艾美耳球虫耐药性的形成密切相关，可能在对抗药物方面发挥着重要的功能。

摘要： 本发明提供了一种柔嫩艾美耳球虫的免疫抗原、抗体及其制备方法和应用，属于重组蛋白制备技术领域。一种柔嫩艾美耳球虫的免疫抗原，所述免疫抗原为氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的柔嫩艾美耳球虫水通道蛋白2的胞外区。一种抗柔嫩艾美耳球虫的多克隆抗体，由所述免疫抗原免疫动物得到。本发明首次成功通过转染细胞的方式免疫小鼠制备抗柔嫩艾美耳球虫水通道蛋白EtAQP2多克隆抗体，填补了目前市场上柔嫩艾美耳球虫EtAQP2抗体的空白，为柔嫩艾美耳球虫基因的功能鉴定和疫苗的研发奠定基础。

摘要： 本发明涉及用于治疗鸡球虫病的多肽，具体涉及用于防治柔嫩艾美耳球虫的多肽及含有其的药物组合物。该多肽对宿主无明显毒害作用，对环境无污染。经试验证实，该多肽对柔嫩艾美耳球虫的MIC50为63.15μg/ml，具有较好的抗柔嫩艾美耳球虫作用。

摘要： 本发明公开了一种柔嫩艾美耳球虫棒状体蛋白41及其制备方法和应用。该蛋白是新发现的、柔嫩艾美耳球虫子孢子阶段高表达的蛋白，是与子孢子入侵宿主细胞相关蛋白，该蛋白的氨基酸序列包含编码SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。将EtROP41基因与大肠杆菌表达载体相连获重组表达载体，在大肠杆菌中表达重组EtROP41蛋白，将重组蛋白纯化并与佐剂混合，制得鸡柔嫩艾美耳球虫ROP41重组蛋白疫苗，该疫苗免疫雏鸡后能有效抵抗柔嫩艾美耳球虫感染，提高雏鸡存活率、增高雏鸡的相对增重率、减少球虫卵囊排出量，是一种新的具有良好免疫保护效果的重组蛋白疫苗，具有作为预防鸡柔嫩艾美耳球虫病疫苗研发的潜力。

摘要： 本发明提供一种柔嫩艾美耳球虫AN1样锌指蛋白及其在抑制球虫入侵中的应用，对柔嫩艾美耳球虫AN1样锌指蛋白进行克隆，表达和纯化。通过荧光定量PCR(qPCR)检测EtAN1‑ZnFP在虫体不同发育阶段的转录水平，通过免疫保护实验评估EtAN1‑ZnFP对鸡感染球虫后的免疫保护作用。本研究结果表明EtAN1‑ZnFP可能参与了柔嫩艾美耳球虫的入侵和生长发育。

摘要： 本发明公开了一种复方中药(简称加味葛根芩连汤)，包括以下重量分数的药材：厚朴30‑35％、黄连15‑20％、甘草10‑15％、葛根15‑20％、黄芩15‑20％。发明人利用柔嫩艾美尔球虫病原制作鸡球虫病模型，对加味葛根芩连汤进行研究，结果表明，五味中药联合应用，对鸡球虫病具有良好的预防和治疗作用，具有显著的抑制柔嫩艾美耳球虫的效果，其抗虫指数高达233.47，抗虫效果优于市面上常规抗虫药物地克珠利。本发明是一种疗效好、无公害、无残留、提高免疫力、肉质品质及体重、使用方便的防治鸡球虫病的药物，为替代防治球虫的化学药品提供了新选择。

摘要： 本发明涉及分子标记技术领域，具体公开了与鸡柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药性相关的SNP分子标记及其应用。本发明的与鸡柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药性相关的SNP分子标记，其含有如SEQ ID NO.1所示序列第166位多态性为A/C的核苷酸序列。所述SNP分子标记的多态性位点为A，对应于地克珠利敏感；多态性位点为C，对应于地克珠利耐药。经鸡柔嫩艾美耳球虫不同临床耐药虫株的验证，该SNP位点可用于鉴别地克珠利耐药的鸡柔嫩艾美耳球虫和敏感的鸡柔嫩艾美耳球虫，具有较高的地克珠利耐药性检测准确性。