摘要：IBDV超强毒GX8/99株在SPF鸡胚连传10代后,再在鸡胚成纤维细胞(CEF)上连续传了25代,然后在96孔细胞培养板上用无限稀释法连续克隆2次后取其中3个细胞克隆毒GXCL2,GXCL4,GXCL5分别连续回传3～6周龄SPF鸡20代.分别比较原代囊毒GX8/99,25代细胞毒GXC25及其回传SPF鸡后20代毒GXCL2B20,GXCL4B20,GXCL5B20对4～6周龄SPF鸡的致病性及其VP5基因的变化.结果表明超强毒GX8/99经CEF传代后的25代毒GXC25已被致弱,对4～6周龄SPF鸡的致死率为0～5％,再回传SPF鸡20代后,三株回鸡毒GXCL2B20,GXCL4B20,GXCL5B20致死率不同但仍较低,仍在0～5％之间.VP5基因序列分析表明GX8/99,ZZ,XZ,JL 4株野毒与超强毒HK46,UK661,D6987同源性较高,在98％～99.8％之间,与经典弱毒D78,CU-1仅为94.5％～96.6％,而GXC25及GXCL2B20,GXCL4B20,GXCL5B20则与经典弱毒D78,CU-1同源性较高,在98％～99.3％之间,与超强毒HK46,UK661,D6987仅为95.2％～96.6％,强毒株的VP5比弱毒株的多4个氨基酸(MLSL),另外还有5处有规律的变异.克隆纯化的细胞适应毒在回鸡20代后对鸡的致病性无显著变化,其VP5基因也保持原有的变异.
