沙门氏菌invH基因融合蛋白表达及其免疫保护性研究

摘要

(目的)本文旨在进行沙门氏菌invH基因融合蛋白表达的基础上，制备该融合蛋白的亚单位疫苗，研究invH基因表达蛋白的免疫保护功能。(方法)采用PCR技术对鼠伤寒沙门氏菌(DT104株)的入侵基因H进行扩增，将其克隆到原核表达载体PGEX-4T-3中，将重组克隆进行融合蛋白表达、纯化和Western blot检测，然后采用油乳剂佐剂将融合蛋白制备亚单位疫苗，将该疫苗通过三种不同剂量(40μg／只、60μg／只、80μg／只)免疫注射小鼠进行免疫保护功能测定。(结果)结果表明，构建的重组克隆成功表达了44KD的融合蛋白GST-invH，且该蛋白具有良好的免疫原性；用纯化融合蛋白制成的制备了亚单位疫苗，三种剂量疫苗间的免疫效果差异不显著，与对照组相比差异显著(p<0．05)，IL-4的含量三种剂量亚单位疫苗与灭活疫苗组相比差异均不显著，IFN-γ含量均低于灭活疫苗组；灭活疫苗组保护率为90％，三种剂量亚单位疫苗组的保护率均在60％以上，虽然亚单位疫苗的保护效果不及灭活疫苗，但与对照组相比差异均极显著(p<0．01)；体外黏附抑制试验结果发现，抗融合蛋白GST-invH的抗体能抑制沙门氏菌对靶细胞的黏附。(结论)该研究结果表明GST—invH融合蛋白具有良好的免疫保护性，为开发利用应用invH融合蛋白亚单位疫苗防制动物沙门氏菌病提供了理论依据和技术支持。