DNA疫苗

摘要： 新型冠状病毒肺炎引发的疫情对全球公众健康构成了严重威胁,全球新型冠状病毒疫苗研发正在从多条技术路线向前积极推进.核酸疫苗继传统减毒疫苗、灭活疫苗和基因工程亚单位疫苗之后被行业内称为“第三代疫苗技术”,包括DNA疫苗和mRNA疫苗,各有优势.本文回顾了DNA疫苗的发展简史,经过十几年的改进,DNA疫苗递送效率大幅度提升,尤其在应对严重急性呼吸综合征(SARS)、高致病性流感、中东呼吸综合征(MERS)、寨卡热(ZIKA)、裂谷热等突发性传染病方面,DNA疫苗在临床中的初步效果得到了验证.本综述旨在讨论对抗传染病大流行的DNA疫苗的研制,尤其是对新型冠状病毒DNA疫苗的设计、优化、安全性和有效性等方面的考虑,并提出DNA疫苗技术需要提升的方向.

摘要： 禽流感(avian influenza,AI)是由禽流感病毒(AIV)引起的一种禽类烈性综合征,威胁动物和人类公共健康,严重影响中国养禽业发展,接种疫苗一直是控制禽流感病毒传播最有效的手段.基于基因工程技术的不断发展,各种新型疫苗相继研发并投入使用.其中,禽流感DNA疫苗具有安全性高、制备方法简单、易于储藏和运输等优点,受到了广泛关注.常见的禽流感疫苗有HA DNA疫苗、NA DNA疫苗、M DNA疫苗、NP DNA疫苗等.禽流感DNA疫苗是将含有目的基因序列的重组质粒导入动物细胞,诱导动物机体产生体液和细胞免疫应答.为了提高禽流感DNA疫苗的免疫效果,国内外学者通过添加合适的佐剂、将目的基因导入理想质粒载体、对抗原序列优化,增强DNA疫苗的转染效率和基因表达水平,取得了一定的研究成果.自DNA疫苗开始研发至今,H1、H3、H5、H7、H9等众多亚型禽流感DNA疫苗逐步研发.2018年,由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所研制的禽流感H5亚型DNA疫苗获得国家一类新兽药证书,是中国首个获得批准的禽流感DNA疫苗,极大地推动了DNA疫苗的发展.文章主要论述了禽流感DNA疫苗的载体构建、免疫机制、佐剂和载体选择以及疫苗研发等方面的研究进展和创新,并对其应用前景进行简要分析,旨在为科研工作者研制新型禽流感疫苗提供新的思路和参考.

摘要： 水产病害是阻碍水产养殖业健康可持续发展的重要因子,渔用疫苗的研发和应用是预防水产动物疾病最安全有效的措施.DNA疫苗是20世纪90年代初出现的一种新型疫苗,与传统的疫苗相比,DNA疫苗具有免疫效果好、生产成本低、保存方便等优点,是疫苗研究的热点,而口服免疫途径具有适用性广、受体鱼应激反应低等优点,是较为理想的免疫方式.本文综述口服疫苗的免疫机制及水产DNA疫苗的研究现状,旨为研究安全、高效的新型口服疫苗提供一定的参考信息.

摘要： 沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)感染和淋病奈瑟球菌(Neisseria gonorrhoeae,NG)感染是常见的性传播疾病,目前尚未有针对它们的有效疫苗问世,但疫苗相关研究均取得了较大进展.CT疫苗CTH522已经通过Ⅰ期临床试验,有望填补CT疫苗的空白.同时,多种有效NG候选疫苗靶标抗原也被开发,给疫苗研发工作带来了很大的希望.本文对CT和NG疫苗研发工作中的进展、障碍和临床实验进行综述,旨在为后续的疫苗开发提供参考.

摘要： 研究果蝇的心脏发育基因表达调控机制,其相应靶点的抗体必不可少.但目前市场上缺乏此类商用抗体,因此本研究选择果蝇心脏发育中的标记基因Svp(Seven-up),并采用DNA免疫技术来快速制备其抗体.首先通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出Svp基因编码区部分序列,然后将其连接到真核表达载体pCAGGS-P7上,再将重组质粒pCAGGS-P7-Svp直接注射进小鼠体内,使外源基因在活体内表达,产生的抗原激活了小鼠的特异性细胞免疫和体液免疫,从而分泌相应的抗体,取小鼠的血清收集获得抗体.最后用蛋白质印迹(Western blot)和胚胎免疫荧光技术检测Svp抗体的效价和特异性.结果表明,制备的Svp多克隆抗体具有高效价和特异性,为后续的果蝇心脏发育研究奠定了基础.

摘要： 目的 探讨铜绿假单胞菌二价组合DNA疫苗pOPRL+ pOPRF在小鼠体内的最佳免疫剂量.方法 分别以25 μg,50 μg,100 μg和200 μg的pOPRL+ pOPRF免疫BALB/c小鼠.对各剂量免疫后诱导的血清抗体水平、脾淋巴细胞增殖水平以及IFN-γ和Il-2分泌水平进行检测,强毒攻击后测定各组小鼠的存活时间及保护率.结果 100 μg和200 μg组小鼠的血清特异性抗体水平、SI值及IFN-γ和Il-2的分泌水平明显高于25μg和50μg组(F=8.414,P＜0.05).且三免后100 μg组小鼠脾淋巴细胞分泌的IFN-γ和Il-2的量高于200 μg组(F=6.375,P＜0.05).攻毒后25 μg、50 μg、100 μg和200μg组的保护率分别为35％、45％、85％和70％.结论 pOPRL+ pOPRF二价组合DNA的免疫效果与免疫剂量有一定的相关性,在小鼠中的最佳免疫剂量为100 μg.

摘要： 为了评价靶向犬细小病毒DNA疫苗pVAX1-CTLA-4125-VP2228在自然宿主体内的免疫应答和攻毒保护效果.试验选用CPV抗体阴性犬24只,设pVAX1-VP2228免疫组、pVAX1-CTLA-4125-VP2228免疫组、pVAX1免疫组和弱毒苗免疫组4组,间隔4周免疫1次,免疫3次.采用CPV酶联免疫吸附试验(ELISA)、CPV微量中和试验和CPV血凝抑制试验(HI)检测抗体水平.免疫3次后进行攻毒试验,观察保护效果.结果表明:血清中IgG含量pVAX1-CTLA-4125-VP2228免疫组抗体显著高于pVAX1-VP2228免疫组(P＜0.01);中和抗体效价,pVAX1-CTLA-4125-VP2228免疫组显著高于pVAX1-VP2228免疫组(P＜0.01);pVAX1-CTLA-4125-VP2228免疫组出现HI抗体,而pVAX1-VP2228免疫组未出现HI抗体;攻毒试验显示,pVAX1-VP2228免疫组、pVAX1-CTLA-4125-VP2228免疫组表现出较好的保护力.说明表明CTLA-4125能够有效增强自然宿主的对VP2228的免疫应答,为进一步研究靶向融合DNA疫苗的作用机制奠定基础.

摘要： 本文阐述了DNA疫苗生产工艺，包括受体菌的选择、质粒的设计、抗性筛选、下游纯化及发酵工艺，随着分子生物学技术的不断发展，许多公司针对DNA疫苗规模化生产工艺做了改进，并相应推出了专利产品，如Waisman针对客户的不同需求推出了GMP级别质粒DNA发酵和纯化服务，节省了客户的时间且降低了预算。由此，通过缩短在实验室研究的DNA疫苗进入规模化生产的平均周期，会极大推进各DNA疫苗产品化进程。

摘要： 本研究将鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)河北株EtMIC-2基因与鸡IL-2基因串联克隆到真核表达载体pcDNA3.0上,构建重组质粒pcDNA3.0-IL-2-EtMIC-2,并用动物试验验证其保护效果,为下一步E.tenella的免疫调节型DNA疫苗的研制提供基础.用RT-PCR方法克隆出鸡IL-2基因、E.tenella河北株EtMIC-2基因,并连接到pMD18-T载体上进行测序;将目的基因克隆到pcDNA3.0载体,构建重组质粒pcDNA3.0-IL-2-EtMIC-2,并转染293T细胞,用Western Blot方法验证表达.用构建好的重组质粒pcDNA3.0-IL-2-EtMIC-2+FCA经腿部肌肉免疫雏鸡,通过测定抗球虫指数(AIC)评价免疫效果.结果表明:重组质粒pcDNA3.0-IL-2-EtMIC-2在293T细胞中表达出融合蛋白,并具有良好的免疫保护效果.

摘要： 目的：构建表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)免疫优势抗原Ag85A的DNA疫苗,分析其加强免疫后提高卡介苗(BCG)初免小鼠的抗结核保护效力与T细胞免疫反应及其二者之间的相关性.rn 方法：以Mtb毒株H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增Ag85A抗原编码的结构基因并克隆至真核表达载体pVAX1中构建其DNA疫苗;接着,将纯化后的该DNA疫苗加强免疫BCG初免小鼠二针,以BCG和DNA单独免疫小鼠为对照,免疫8周后以低剂量Mtb标准菌株H37Rv攻击免疫小鼠,5周后分析感染小鼠肺/脾的荷菌载量及肺脏病理变化以评估其免疫保护效果;同时,在攻击当天分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,分别应用IFN-γ酶联免疫斑点实验(ELISPOT)和多因子胞内流式细胞术(intracellular staining)分析免疫小鼠的Mtb抗原特异性效应细胞免疫水平与分泌IFN-γ/TNF-α/IL-2的多功能CD4+T细胞频率及其强度并比较免疫保护效力及其T细胞免疫应答水平之间的相关性.rn 结果：与BCG免疫及DNA单独免疫组相比,Ag85A DNA加强免疫显著降低了感染小鼠脏器的细菌载量,且肺部CFU荷菌量下降与感染肺部的病变程度减轻及炎性细胞因子低水平表达相关;进一步分析这种BCG初免-DNA加强(B/D)免疫策略所诱导产生的免疫原性,结果发现B/D免疫策略所诱导增强的免疫保护效力与免疫接种后所诱导产生的脾脏IL-2分泌性CD4 T细胞频率或IL-2表达量的提高直接相关.rn 结论：本研究成功构建了表达Mtb免疫优势抗原Ag85A的DNA疫苗,证实了BCG初免-DNA加强的免疫策略可显著增强小鼠的T细胞免疫应答并提高其抗结核保护效力,相关性分析结果提示测定免疫接种后诱导的抗原特异性IL-2水平或者IL-2产生的CD4 T细胞频率可以预测新疫苗或免疫策略的抗结核保护效果(至少可预测B/D免疫策略),为抗结核新疫苗的免疫学评价提供了理论依据和实践基础,并为亚单位疫苗加强BCG初始免疫的保护效果提供了依据.

摘要： 本研究利用上述2个具有报告基因特性的质粒(pcDNA3.1-EGFP和pDRVISV1.0-Fluc)来分别模拟DNA疫苗，通过3种处理手段(新鲜制备、反复冻融、酶切)以构建不同构象形式的质粒，来研究不同超螺旋比例的DNA疫苗在体内外表达量的差异，从而为DNA疫苗特别是艾滋病疫苗临床前研究的质量控制标准提供实验依据。目的:研究DNA疫苗构象对体内和体外表达的影响.方法:分别构建绿色荧光蛋白表达质粒(pcDNA 3.1-EGFP)和萤火虫荧光素酶表达质粒(pDRVISV1.0-Fluc),对其存在的3种拓扑形式(包括超螺旋、线性、闭环切刻等)和反复冻融状态对表达效率的影响进行分析,前者用脂质体介导转染293Fr细胞,用流式细胞仪检测EGFP的表达情况;后者通过接种BALB/c小鼠,用活体成像技术监测荧光素酶的表达情况.结果:对pcDNA3.1-EGFP质粒,流式细胞仪检测其转染293FT细胞48h后显示,4种处理组的质粒表达EGFP的效率和荧光强度有所差异,依次为新鲜制备质粒(89.76％,2682.68)＞反复冻融处理质粒(76.35％,2313.48)＞闭环切刻质粒(68.45％,1245.95)＞线性质粒(38.28％,929.5).对pDRVISV1.0-Fluc质粒,采用小鼠活体成像技术持续观察接种后18d的体内荧光素酶的荧光信号强度情况,结果显示:接种后0.2d观察到荧光,之后强度持续开始增强,至第5d达到平台期,维持至18d.质粒各处理组的荧光强度组间有显著差异,依次为新鲜制备质粒(108.6)＞反复冻融处理质粒(108.4)＞线性质粒(108.3)＞切刻质粒(108.0).2种质粒不同构象的体内体外表达中,均是新鲜制备质粒的表达量最高,因其中超螺旋为其主要构象.结论:质粒中超螺旋比例高时其转染效率及表达量最高,提高超螺旋比例是DNA疫苗质量控制的关键.

摘要： 研究结果表明编码3-磷酸甘油醛脱氢酶的gapA基因广泛存在于15种标准血清型菌株中而且基因序列比较保守,是一种很好的疫苗候选抗原.因此构建了GAPDH蛋白的DNA疫苗pCgap,并在小鼠感染模型中评价了该DNA疫苗免疫反应和针对血清4型菌株MD0322和血清5型菌株SH0165的攻击所提供的免疫效力.结果表明,DNA疫苗通过肌内免疫小鼠之后能够产生显著的抗体反应.而且产生的抗体具有杀菌作用.DNA疫苗免疫小鼠7天之后能够在肌肉、肝脏、脾脏和肾脏中检测转录产物.IgG亚类分析表明DNA疫苗可以同时诱导Th1和Th2型免疫反应,但是IgG1型免疫反应强于IgG2a型免疫反应.此外,DNA疫苗能够提供分别针对血清4型菌株MD0322攻击的保护率83.3％和血清5型菌株SH0165攻击的保护率50％.免疫组免疫保护力显著高于阴性对照组和空白对照组.以上结果提示DNA疫苗pCgap为控制副猪嗜血杆菌的感染提供一个新的策略.

摘要： Ii是MHC-Ⅱ伴随分子，在MHC-Ⅱ合成、组装及其介导的抗原呈递中起重要作用。Ii分为胞内区、跨膜区、内质网区三个结构域，分别对应于Ii内体定位、Ii-key-hybrid、CLIP三个功能区。基于Ii以上功能构建的DNA疫苗、抗原表位疫苗、嵌合体疫苗成为免疫学研究的热点。本文就这一领域的研究进展作一综述。

摘要： 本研究是在首次完成Tp单基因DNA疫苗筛选构建及免疫活性初步研究工作的基础上，将具有显著免疫佐剂效应的IL-2基因插入己真核表达重组体pcDNA3.1(+)/Gpd中，融合构建多价DNA疫苗，用壳聚糖(CS)纳米颗粒包被后导入新西兰兔体内，利用CS纳米颗粒高效的基因转导能力及IL-2的佐剂效应诱导动物细胞表达免疫原性更强的融合蛋白，强化免疫应答;同时采用核酸疫苗初免、含CpG序列的寡脱氧核苷酸(CpG ODN)-Tp膜蛋白黏膜免疫加强的疫苗接种策略，以期全面激发机体免疫系统，尤其黏膜免疫，建立高效抗Tp感染的动物模型，为研制人用的高效疫苗预防梅毒打下基础。

摘要： 分子佐剂具有增强免疫原性的功能,DNA疫苗的分子佐剂就是与DNA疫苗所编码的抗原基因共同作用于机体后,分子佐剂的基因表达产物通过一系列抗原递呈途径,调节DNA疫苗抗原基因所诱导的免疫应答的强弱和类型,提高免疫的效果的一类分子.本研究的目的是评价单个复制子DNA载体共表达IL-4和抗原增强疫苗的免疫原性，以筛选有效的疫苗载体用于DNA疫苗的研究;同时确定共表达是递送抗原和分子佐剂有效的方式，能够增强疫苗的免疫原性和有效性，可以使抗原和分子佐剂同时表达于一个环境，更好地诱导机体产生强的免疫应答。此外，共表达这种方式能够减少疫苗载体的数量，仅仅一个单一载体代替两个载体，更适合于DNA疫苗的研发与应用。

摘要： [目的]构建猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)ORF2 DNA核酸疫苗,并评价其免疫效果和安全性。[方法]设计一对特异性引物,扩增PCV2-ORF2,利用T载体对其进行克隆,与真核表达载体PcDNA3.1在同等条件下进行双酶切,并进行连接,转化感受态细菌DH5 α并克隆,经双酶切鉴定筛选阳性重组质粒,即DNA核酸疫苗,命名为PcDNA3.1-ORF2。将该核酸疫苗瞬时转染Vero细胞,通过ST-PCR鉴定其在细胞内的表达情况;并且将该核酸疫苗按100μg/只腿部肌肉注射免疫Balb/c小鼠,同时设PBS和PcDNA3.1空载体为对照,免疫2次,间隔2周.分别于首免后第14d和第28d采血,用ELISA方法检测其血清抗体.取首免后56d小鼠的心、肝、脾、肺、肾和脑等实质器官,采用PCR方法检测该核酸疫苗的安全性。[结果]成功地构建了PcDNA3。1-ORF2核酸疫苗,在体外Vero细胞中得到了瞬时表达,并且能诱导小鼠产生较强的免疫应答.安全性试验表明该核酸疫苗未整合到小鼠染色体上.[结论]PcDNA3。1-ORF2核酸疫苗可以诱导小鼠产生较强的免疫应答,并且是安全的。

摘要： 一种HIV多表位DNA疫苗和HIV复合多表位DNA疫苗，属于生物工程领域，特别是涉及一种HIV复合多表位DNA疫苗。本疫苗基因全长634bp，优选了HIV基因组中九个高度保守的免疫优势表位，一个HIV-1分离株共有抗体表位，另外加入了一个MHC非限制性的辅助性T淋巴细胞表位，各表位间用三个丙氨酸连接，同时在上述融合基因的中引入ER信号肽引导序列。以HIV-1CNB gag基因为模板，利用PCR方法获得全长693bp的HIV衣壳蛋白P24后插入权利要求1所述基因中，获得了以p24核心蛋白为载体分子的全新HIV复合多表位DNA疫苗。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，公开了一种避孕节育DNA疫苗，其包含编码和表达SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的质粒。本发明以Bin1b的cDNA第35个碱基至第371个碱基核酸序列作为靶抗原基因、以pSG.SS.YL和pSG.SS.C3d.YL为适宜的质粒载体，成功构建了pSG.SS.YL.Bin1b和pSG.SS.C3d.YL.Bin1b重组真核表达质粒作为DNA疫苗，可有效达到避孕节育效果。

摘要： 本发明公开一种杀香鱼假单胞菌DNA疫苗、制备方法及其应用，其特征在于：该疫苗为pCI‑pcrV。该疫苗以杀香鱼假单胞菌NB2011基因组DNA为模板，经引物P1/P2进行PCR扩增，扩增产物经纯化后与质粒pCI‑neo连接，获得重组质粒pCI‑pcrV，即为杀香鱼假单胞菌DNA疫苗；其中靶基因pcrV为SEQ ID NO：1所示的序列。本发明的疫苗对杀香鱼假单胞菌感染的免疫保护率达70％以上，因此具有较高的保护率，本发明的疫苗在免疫后的8周内的免疫保护率没有明显减弱，因此具有长效优势。

摘要： 本发明涉及以成纤维激活蛋白α为靶点肿瘤DNA疫苗和病毒载体疫苗领域。具体地说，本发明涉及重组DNA载体CpVR‑FAP、重组腺病毒Ad‑FAP和重组痘病毒MVA‑FAP疫苗，以及DNA疫苗和病毒载体疫苗以及病毒载体疫苗之间免疫方式的优化组合或联合环磷酰胺在制备抗肿瘤疫苗中的用途。

摘要： 本发明一种由口服酵母携带DNA片段活体靶向水产动物肠道免疫细胞，诱导水产动物产生免疫反应的制备方法。该疫苗生产成本低，使用方法简单，适合大规模生产，而且与传统减毒疫苗相比对动物无毒力威胁。可用在鱼类贝类等水产动物的多种细菌性、病毒性和寄生虫等口服DNA疫苗的开发应用上，使水产动物健康生长，减少水产业在疾病方面的损失，同时避免目前DNA疫苗所存在的弊端。

摘要： 本公开内容涉及新的用于预防和治疗单纯疱疹病毒‑2(HSV‑2)感染的DNA疫苗，并提供编码改组UL39蛋白的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体和包含所述载体的DNA疫苗组合物。

摘要： 本发明涉及疫苗领域，尤其涉及特异性针对SARS‑COV‑2病毒的DNA疫苗。本发明公开了一种融合蛋白，其包含SEQ ID NO:10中14‑1294位的氨基酸序列或SEQ ID NO:9编码的成熟多肽；一种融合蛋白，其包含SEQ ID NO:12中14‑1094位的氨基酸序列或SEQ ID NO:11编码的成熟多肽；以及编码所述融合蛋白的多核苷酸或包含所述多核苷酸序列的核酸分子。本发明还公开了相关的组合物、方法、用途和试剂盒。

摘要： 本发明涉及含编码VEGF受体蛋白的重组DNA分子的减毒的沙门氏菌突变菌株。特别地，本发明涉及所述减毒的沙门氏菌突变菌株在癌症免疫疗法中的使用。

摘要： 一种HIV多表位DNA疫苗和HIV复合多表位DNA疫苗，属于生物工程领域，特别是涉及一种HIV复合多表位DNA疫苗。本疫苗基因全长634bp，优选了HIV基因组中九个高度保守的免疫优势表位，一个HIV－1分离株共有抗体表位，另外加入了一个MHC非限制性的辅助性T淋巴细胞表位，各表位间用三个丙氨酸连接，同时在上述融合基因的中引入ER信号肽引导序列。以HIV－1CNB gag基因为模板，利用PCR方法获得全长693bp的HIV衣壳蛋白P24后插入权利要求1所述基因中，获得了以p24核心蛋白为载体分子的全新HIV复合多表位DNA疫苗。

摘要： 本发明公开了一种结核分枝杆菌的重组DNA疫苗及其制备方法。本发明的重组DNA疫苗通过将基因Ag85B、Rv2029c和Rv1738重组入真核表达载体获得。本发明研究发现，免疫6‑8周龄C57BL/6雌性小鼠后，DNA疫苗Ag85B‑Rv2029c‑Rv1738‑pVAX1可以显著提高小鼠外周血中CD4⁺，CD8⁺T淋巴细胞的比例，增加小鼠脾淋巴细胞抗原特异性Th1型细胞因子IL‑2，IFN‑γ，TNF‑α的分泌，降低小鼠肺、脾的BCG细菌计数，提示该重组DNA疫苗可以有效控制分枝杆菌在小鼠体内的生长繁殖。因此，本发明的重组DNA疫苗可用于结核分枝杆菌感染的预防和治疗。