重组抗原

摘要： 细粒棘球蚴病是由细粒棘球绦虫的幼虫细粒棘球蚴引起的人和动物重要的人畜共患寄生虫病。目前对该病并无有效的控制手段,因此有效的诊断方法对细粒棘球蚴病的防控尤为重要。根据在中间宿主体内细粒棘球蚴的生长阶段,可以把诊断抗原分为:六钩蚴时期抗原、原头蚴时期抗原和囊液时期抗原。文章主要从这几个时期的诊断抗原的最新进展进行综述,为细粒棘球蚴病免疫诊断所用抗原的研究提供参考。

摘要： Food-born trematodes which parasitize liver, lung and intestine cause various trematodes diseases. There are a few common trematodes such as Clonorchis sinensis, Fasciola, Opisthorchis, Paragonimus, and Echinostoma. This review provides recent progress in techniques and methods for their immunodiagnosis. These methods are mainly used to diagnose with excretory-secretary antigen, recombinant antigen and antibodies of hosts, by means of enzyme-linked immunosorbent assay, immunoblotting, immunefluorescence, immunehistochemistry, proteomics and a lateral flow detection system so on. It is beneficial to improve diagnostic and accuracy rates when all this methods are used synthetically.%寄生肝脏、肺及肠道的食源性吸虫可引起多种吸虫病,文中仅介绍了华支睾吸虫、片形吸虫属、后睾吸虫属、并殖吸虫属、棘口吸虫属等常见食源性吸虫当前免疫学诊断技术的研究进展.这些技术主要利用分泌抗原、重组抗原、寄主抗体,通过酶联免疫吸附试验、免疫印迹、免疫荧光、免疫组织化学、蛋白质组学及侧向流动检测系统等进行诊断,综合应用上述方法有利于提高诊断率及精确率.

摘要： 目的 探讨ROC曲线分析结核分支杆菌4种重组抗原CFP10、ESAT-6、MPT64和phoS2在结核病诊断中的实用价值.方法 采用间接ELISA法检测病例组和健康对照组人群的血清.构建ROC曲线,对4种重组结核抗原的诊断价值进行分析,根据ROC曲线下面积评价各种抗原的诊断效能.综合敏感度、特异度及约登指数确定有诊断价值的单个抗原和不同抗原的组合方式.结果 结果显示,单个抗原CFP10、phoS2、MPT64和ESAT-6曲线下面积分别为88.2％、85.3％、89.2％和93.2％,其中ESAT-6的诊断准确性最高.4种抗原并联后AUC面积均在90％以上,且灵敏度提高,在80.5％ ～ 89％之间.其中CFP10+ESAT-6+phoS2组合的灵敏度为89％,特异度为93.3％,约登指数为0.823.结论 应用ROC曲线对结核分支杆菌重组抗原的筛选及效能的评价有一定的理论和应用价值.

摘要： 为了调查巴州部分地区黑头羊和伊犁部分地区马新孢子虫病感染情况,运用NcSAG1和NcSRS2重组蛋白作为包被抗原,对采自巴州部分地区180份黑头羊血清样品和伊犁地区三个马场的270份血清样品进行了新孢子虫病rELISA方法检测.检测结果显示:两种抗原检测出羊新孢子虫平均阳性率为16.94%,阳性符合率为84.85%;检测出马新孢子虫平均阳性率为9.81%,阳性符合率为82.76%.通过本次实验,基本掌握了当地部分牧场羊和马新孢子虫感染情况,为今后新孢子虫病的调查和预防提供了科学依据和理论支持.

摘要： 目的制备和表达EB病毒重组抗原Rta蛋白,并建立筛查鼻咽癌的ELISA方法,为鼻咽癌的早期筛查提供科学依据。方法设计引物扩增BRLF1编码区全长序列,构建重组质粒p PICZαA-BRLF1,电转入毕赤酵母GS115,筛选His+Mut+表型转化子并用甲醇进行诱导表达和纯化;建立Ig G/Rta抗体的ELISA检测技术,用于300例鼻咽癌患者和200例健康对照者血清的筛查,对检测结果进行评价。结果成功构建p PICZαA-BRLF1重组质粒;目的蛋白在毕赤酵母GS115中高效分泌表达(50%),蛋白电泳显示在66.0 k Da处有相应条带;同时Western-blot也证明其有良好的免疫活性;利用该重组Rta蛋白建立的ELISA检测方法对鼻咽癌检测阳性率显著高于Ig A/VCA试剂盒(P<0.01)。结论本研究构建了EB病毒重组抗原Rta蛋白的真核表达载体,表达外源蛋白产量高,免疫活性好,可用于Ig G/Rta ELISA检测技术研究,适合于鼻咽癌的大规模筛查和早期诊断。

摘要： 棘球蚴病是一种对人畜危害极为严重的人兽共患寄生虫病，严重威胁我国流行区农牧民身体健康和畜牧业的发展，对该病的预防迫在眉睫。EG95蛋白在细粒棘球蚴发育过程中必不可少、高度保守，是目前为止已发现的最具潜力的疫苗候选抗原之一。国内外学者在EG95重组抗原的构建、表达、应用等方面进行了大量的工作，本文对其进行综述。%Echinococcosis (hydatid disease) caused by the metacestodes of Echinococcus granulosus tapeworm is a seri-ous zoonotic infection ,which leads to a large amount of economic loss in human and animals .It needs to be prevented urgently . The EG95 protein is highly conserved and crucial for survival and development of E .granulosus in the host ,which means that it is one of the potential candidate antigens for vaccines characterized so far .Great effort has been made to construct and ex-press the recombinant EG95 (rEG95) gene in various kinds of expression systems in order to obtain an efficient defined antigen . This review will summarize research progress on expression of rEG95 in different vector systems .

摘要： 猪囊尾蚴病(Cysticercosis cellulosae)俗称囊虫病(Cysticercosis)是由猪带绦虫(Taenia solium,Ts)中绦期幼虫猪囊尾蚴(cysticercus cellulosae)引起的一种严重的人兽共患寄生虫病.该病呈全球性分布,主要流行于中非、南非、拉丁美洲、东亚和南亚等地区.我国主要流行于黑龙江、吉林、河南、河北、山东、广西、云南、四川和贵州等31个省市自治区.采用分子生物学技术对Ts生活史不同阶段的抗原基因进行克隆、表达及生物学功能研究是当前研究的热点.本文就Ts六钩蚴、囊尾蚴、成虫阶段重要重组抗原的研究进展作一介绍.

摘要： 目的 比较弓形虫rSAG1、rHXGPRT和rAK三种重组蛋白作为混合抗原在弓形虫病血清免疫诊断中检测结果与进口试剂盒检测结果的差异,评价三种重组蛋白混合抗原检测在弓形虫病免疫诊断中的应用价值.方法 收集经美国产Zeus Toxo-ELISA试剂盒筛选的阳性血清136例,阴性血清30例.复苏、诱导、表达含有弓形虫pET-28a/SAG1,pET-28a/HXGPRT和pET-28a/AK表达载体的3个菌株,纯化3种重组蛋白.以3种混合蛋白作为诊断抗原,采用间接ELISA法,以正交叉方法优化检测条件,检测66例弓形虫IgM阳性、70例IgG例阳性血清和30阴性血清,比较混合抗原检测和ZeusToxo-ELISA试剂盒检测结果的差异;以Zeus Toxo-ELISA弓形虫试剂盒检测结果为标准,评价重组蛋白混合抗原检测的敏感性、特异性、总符合率以及约登指数.结果 IgM:混合抗原与Zeus Toxo-ELISA试剂检测结果经x2检验,x2值为3.12,P＞0.05,差异无显著性.混合重组抗原的敏感性为89.4％,特异性为96.7％,总符合率为91.7％,约登指数为0.861.IgG:混合抗原与Zeus Toxo-ELISA试剂检测结果经x2检验,x2值为0.25,差异无显著意义(P＞0.05).采用混合重组抗原的敏感性为97.1％,特异性为93.3％,总符合率为96.0％,约登指数为0.904.结论 本研究3种重组抗原(rSAG1+ rHXGPRT+ rAK)混合的间接ELISA法检测弓形虫IgM和IgG,与进口ELISA试剂检测的总符合率高,具有较高的敏感性、特异性;更经济.

摘要： 目的 探讨重组日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(rSjSDISP)用于血吸虫病的诊断价值.方法 利用经原核表达并纯化的rSjSDISP,建立基于重组抗原的快速酶联免疫吸附试验(F-ELISA),检测血吸虫感染不同时期的兔血清、健康人血清、寄生虫病患者血清(其中包括血吸虫病患者血清、肝吸虫病患者血清、肺吸虫病患者血清),比较rSjSDISP F-ELISA与SEA-IHA两者的早期诊断价值及对rSjSDISP F-ELISA诊断方法的诊断效能做出评价;并与SEA-IHA法和SEA F-ELISA法平行检测血吸虫病疫区335份待测人血清比较3者的敏感性和特异性.结果 成功构建pET32a/rSjSDISP重组质粒,当IPTG终浓度为0.1 mmol/L,28 °C诱导6 h时SjSDISP重组蛋白表达量达到最大.rSjSDISP F-ELISA与SEA-IHA可区别出血吸虫感染28 d后的兔血清,两者检测结果差异无统计学意义;rSjSDISP F-ELISA敏感度为94.4,特异度为93.0,Youden指数为0.88.在诊断335份血吸虫病疫区现场血清中,该方法与SEA-IHA 、SEA F-ELISA具有相似的敏感性和特异性(P>0.05).结论 rSjSDISP重组抗原可作为一种成分均一的优势诊断抗原,替代成分复杂的虫卵可溶性抗原(SEA)用于血吸虫病的诊断.rSjSDISP F-ELISA方法操作简便、快速,抗原制备易于标化,稳定性强,在血吸虫病诊断上具有较大的应用潜能.

摘要： 本研究应用重组抗原,成功建立了检测猪伪狂犬病毒血清抗体的间接ELISA诊断方法.通过方阵滴定确定了抗原最适包被量为1.45μg/孔,血清最适稀释度为1∶80,,其作用时间为60min,酶标抗体最适作用时间为60min.其阳性临界值为OD≥0.123.此外,该抗原不与猪其他疾病的阳性血清反应,具有良好的特异性;批内重复试验,变异系数小于10％.该方法与进口诊断试剂盒的符合率为96.3％.本研究为现地免疫猪群抗体检测和进行PRV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法.

摘要： 目的:筛选HEVORF2和ORF3的重组抗原用于抗HEV-IgM试剂盒的研制与开发. 方法:在ORF2区构建表达了三个不同的重组抗原,EA、EB及EC.从中利用公司内部的参考品进行筛选,以EC抗原加上ORF3的重组抗原接酶,用于研制抗HEV-IgM试剂盒. 结果:能全部通过公司内部的参考品,在临床标本的测试中表现良好,并且灵敏度优于GENELAB的同类试剂盒. 结论:EC抗原加上ORF3的重组抗原能作为优化原料抗原应用于抗HEV-IgM试剂盒.

摘要： 目的：将HIV-2的跨膜蛋白gp36进行截短与串联，表达出的目的蛋白用于HIV体外检测。方法：PCR方法扩增序列，产物经BamH I和Xho I双酶切后，分别连入pET32a、pET28MBP质粒，得到两株重组表达载体，分别导入表达宿主细胞，经IPTG诱导表达出两株目的蛋白。结果：扩增出目的片段，得到正确的重组载体，并表达出与理论分子量一致的两种融合蛋白，用于ELISA检测相应抗体具有良好的敏感性和特异性。结论：构建出可用于HIV检测的gp36表达载体，为跨膜蛋白gp36的进一步应用研究奠定基础。

摘要： 目的：克隆和表达日本血吸虫天冬酰胺酰基内肽酶(Sj32)，探索该重组抗原在动物血吸虫病诊断方面的应用潜能。rn 方法：用PCR法从sj32前体编码基因中克隆编码成熟体的基因片段，以pET-28(a)为表达栽体，用大肠埃希菌表达，制备重组抗原(rSj32);应用ELISA方法检测待检血清，并比较rsj32、日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)以及重组诊断诊断抗原rSj23对人工感染兔、小鼠及水牛血吸虫病的检测效果。rn 结果：成功表达了Sj32成熟体，表达产物rSj32的分子量为41 kDa，可用His柱纯化，得率约为68.8 mg/l培养物。用rSj32检测人工感染兔、小鼠和水牛血清以及对照兔、小鼠和水牛血清，特异性分别为100.0％、96.7％和96.9％，敏感性分别为88.9％、85%和71.8％，该抗原对牛血清的敏感性略低于SEA和rSj23，其余检测结果三者相比元显著差异。rn 结论：rSj32在诊断动物血吸虫病方面具有研究和应用价值。

摘要： 目的：筛选出梅毒螺旋体嵌和抗原TpN15-TpN17-TpN47的重组嵌和抗原用于梅毒检测试剂盒的研制与开发。rn 方法：以构建的重组抗原配以相应的试剂，利用公司内部考评以及临床考评的方式，研制梅毒检测试剂盒。rn 结果: 经过内部考评、临床考评，本试剂盒在特异性、灵敏度指标上接近100％。rn 结论: 本试剂盒是临床快速、准确诊断梅毒疾病的一个好产品。

摘要： 目的：探索人巨细胞病毒(human cytomegalovirus HCMV)UL83基因两种不同编码区的重组外膜磷酸化蛋白pp65按比例混合成一种组合抗原后在检测HCMV IgM血清中的诊断价值。rn 方法：分别对两种不同编码区重组pp65抗原(以下简称重组抗原1、2)及其两者按不同比例的混合物(简称组合抗原)采用间接ELISA法判定最适包被浓度及抗体的最适稀释度，各阶段最适反应条件等，并用经商品化试剂盒反复验证的40份HCMV IgM阳性及阴性的血清标本进行检测。rn 结果: 经棋盘滴定后，已知40份HCMV IgM阳性血清标本中重组抗原1、2以及组合抗原的阳性数分别为30份、32份、39份；其中20份与两种抗原均发生了反应，另外分别有10份、12份只与其中一种抗原发生了反应，所有标本中只有1份未与组合抗原反应。40份阴性血清标本与三种抗原均未发生反应。与试剂盒反复验证的结果相比较，三种抗原特异性均为100％，敏感性分别为75％，80％和97.5％，一致率分别为75％，80％和97.5％。rn 结论: 利用不同的重组pp65抗原对标本进行检测后发现，组合抗原在保证特异性的同时，提高了检测的敏感性，同时与试剂盒反复验证的结果具有高一致性，说明组合抗原可作为HCMV急性/原发感染诊断的试剂。

摘要： 本发明一种包含重组融合抗原A和B的丙型肝炎病毒抗体检测试剂及应用和重组融合抗原A和B，属于生物工程技术领域。所述一种包含重组融合抗原A和B的丙型肝炎病毒抗体检测试剂，其中重组融合抗原A包含的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述重组融合抗原B包含的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；所述检测试剂由R1试剂、R2试剂、R3试剂和R4试剂组成。本发明具有以下优点：本发明的两个重组融合抗原具有特异性高、稳定性好的特点，通过一定的比例混合使用，可用于丙型肝炎病毒抗体检测试剂的制备，试剂的临床检测效果显著。同时该检测试剂对乳糜微粒、胆红素以及血红蛋白具有很强的抗干扰能力，可极大满足丙型肝炎病毒临床诊断的需求。

摘要： 本申请提供一种嗜吞噬细胞无形体重组蛋白抗原的制备方法，包括：含有p44基因的基因片段的反转录及PCR扩增、扩增产物的回收和克隆、目标基因的提取及再确认、重组蛋白抗原rP44‑47E合成的步骤。本申请的嗜吞噬细胞无形体重组蛋白抗原的制备方法，能单一、高效且大量制备重组蛋白抗原rP44‑47E；所制备的重组蛋白抗原rP44‑47E表达量和稳定性高，克服了p44全基因组抗原表达量低且不易制备的缺点，所制得的重组蛋白抗原rP44‑47E作为抗原蛋白具有特异性高、能有效降低检测成本、易于标准化的特点。

摘要： 本发明实施例公开了一种重组乙型肝炎抗原冻干保护剂，包括以下原料组分：甘氨酸0.1‑0.5mg/ml；蔗糖10‑100mg/ml；吐温80(0.1‑0.3mg/ml)；以及渗透压调节剂。本发明还公开了相应的重组乙型肝炎抗原冻干疫苗及其制备方法。实施本发明，可大大提高疫苗中重组乙型肝炎抗原的耐热性和安全性，降低疫苗的保存条件。

摘要： 本发明提供了一种包括JEV抗原基因的重组载体、重组菌株和递呈JEV抗原的外膜囊泡及其应用，属于免疫学技术领域，所述包括JEV抗原基因的重组载体，包括JEV抗原基因和pBAD‑18‑ClyA初始载体；所述重组菌株包括上述重组载体，并且能够生产递呈JEV抗原的外膜囊泡；方法如下：1)将重组菌株进行液体培养；2)将预培养菌液转接入诱导液体培养基中进行诱导培养，离心；3)将上清液依次进行过滤除菌体、超滤浓缩和离心，收集固相组分，获得递呈JEV抗原的外膜囊泡。所述递呈JEV抗原的外膜囊泡能够激发高效的特异性免疫反应，具有优秀的抗原性，能够产生较高的特异性抗体，既能引发体液免疫又能引发细胞免疫。

摘要： 本发明公开一种可有效地适用于恙虫感染与否的诊断并作为恙虫疫苗进行使用的从TSA56抗原的保守序列导出的全新重组蛋白抗原以及使用上述重组蛋白抗原的疫苗组合物。

摘要： 本发明提供了一种口蹄疫病毒抗原、表达口蹄疫病毒抗原的基因TB1‑Co1及其重组载体和重组乳酸乳球菌，属于基因工程疫苗技术领域，所述抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。经动物免疫试验证实，本发明的口蹄疫病毒抗原具有较好的免疫原性。本发明还提供了一种表达上述方案所述口蹄疫病毒抗原的基因TB1‑Co1，通过在多表位蛋白的C末端融合M细胞的靶向配体Co1，靶向配体Co1与C5a受体相互作用不仅能够递送连接配体的模型抗原到M细胞，而且也能激发抗原特异性免疫应答包括全身性免疫应答和局部黏膜免疫应答。

摘要： 本发明涉及一种脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原、重组抗原表达基因、重组表达载体及其制备方法和应用。脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原包括DGP‑1肽段、白介素15蛋白和DGP‑2肽段，所述DGP‑1肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述DGP‑2肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供的脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原用于乳糜泄检测时灵敏度好、特异性高且制备成本低，可以测定血清中的IgG‑DGP抗体，特别是能够用于IgA缺陷患者以及婴幼儿人群中潜在乳糜泄患者的检测。

摘要： 本发明公开了一种梅毒重组多价融合抗原、梅毒重组抗原质粒和梅毒重组抗原菌株及其制备方法及试剂盒。所述梅毒重组多价融合抗原的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示。所述梅毒重组抗原质粒包括如SEQ ID NO:2所示的梅毒重组多价融合抗原基因。所述试剂盒包括氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示的梅毒重组多价融合抗原。该梅毒重组多价融合抗原所选取的蛋白具有较高的免疫原性，且该梅毒重组多价融合抗原可以对所有时期的梅毒患者血清进行有效识别，同时，该梅毒重组多价融合抗原可以对所有时期的梅毒患者血清进行有效识别。

摘要： 本发明涉及一种脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原、重组抗原表达基因、重组表达载体及其制备方法和应用。脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原包括DGP‑1肽段、白介素15蛋白和DGP‑2肽段，所述DGP‑1肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述DGP‑2肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供的脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原用于乳糜泄检测时灵敏度好、特异性高且制备成本低，可以测定血清中的IgG‑DGP抗体，特别是能够用于IgA缺陷患者以及婴幼儿人群中潜在乳糜泄患者的检测。

摘要： 本发明提供一种N‑甲基‑D‑天冬氨酸受体重组抗原、其制备方法及含有该重组抗原的试剂盒。本发明的重组抗原包括亚单位GluN1a重组蛋白，其氨基酸序列为将SEQ ID NO:1所示的序列中Asn61、Asn350、Asn471和Asn771突变为Gln，将Cys22突变为Ser，将Glu595和Glu597突变为Ser，将Glu598突变为Thr。该N‑甲基‑D‑天冬氨酸受体重组抗原还包括天然亚单位GluN2A重组蛋白和/或亚单位GluN2B重组蛋白，其氨基酸序列为将SEQ ID NO:3所示的序列中Asn348突变为Asp，Cys838和Cys849突变为Ser。