插入结核抗原基因的重组痘苗病毒对结核分枝杆菌感染恒河猴模型的免疫保护性研究

摘要

目的：将痘苗病毒安卡拉株为载体的新型重组结核病疫苗用于结核分枝杆菌感染的猴模型体内观察其免疫预防及治疗作用。 方法：按国家药典建立BHK21细胞库及重组痘苗病毒库，大量扩增并用密度梯度离心法纯化病毒。按计划在27个猴体上分组进行长达42周的预防免疫、结核杆菌感染和免疫治疗研究，包括定期采集外周血进行血液学检测、外周血PBMC细胞增殖实验、X光检查、大体解剖及病理组织评分、组织细菌载量测定、计算存活率等。结果：成功建立了相关细胞库和毒种库，纯化后的重组MVA滴度达1010PFU/ml。预防组和治疗组的存活率为100％，与未免疫组相比差异明显(P<0.05)。经重组MVA免疫的猴PBMC细胞表现出增殖反应和抗原特异性IFN-γ分泌的增多。与仅BCG免疫组相比，BCG+A组病理组织总评分较低且感染肺组织细菌载量明显降低，而BCG+AE组并未表现出同样的优势。重组MVA-Ag85a-ESAT6治疗组组织总评分和细菌载量测定显示水平较低。结论：重组MVA-Ag85a作为BCG初次免疫后的加强免疫，对猴模型能产生较BCG单次免疫更好的免疫保护作用;而MVA-Ag85a-ESAT6的加强免疫并没有产生较BCG单次免疫更好的免疫保护作用;重组MVA-Ag85a-ESAT6的治疗效果更佳。