E蛋白

摘要： 探讨SARS-CoV-2病毒E蛋白诱发人肺腺癌(A549)细胞炎症反应机制。采用原核表达技术制备并导入大肠杆菌BL21菌株中诱导表达,经Ni-NTA介质纯化获得重组E蛋白。分别以终浓度10μg·L^(-1)和100μg·L^(-1)的重组E蛋白作用于A549细胞1 h,通过荧光定量PCR法检测细胞NLRP3,Caspase^(-1)和IL^(-1)β基因表达量。SARS-CoV-2病毒E蛋白被成功表达纯化,能够被新型冠状病毒肺炎治愈者血清所识别,并显著诱导A549细胞NLRP3,Caspase^(-1)和IL^(-1)β基因表达上调。表明细胞NRLP3炎症复合体被激活,同时产生大量IL^(-1)β促炎细胞因子,并可能会造成严重组织损伤。

摘要： 猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)为猪流行性腹泻的病原体,感染上该病毒的仔猪出现脱水、腹泻和呕吐,给世界养猪业造成了经济损失。PEDV囊膜蛋白E在病毒包膜形成、病毒离子形成、病毒出芽和释放过程中发挥至关重要的作用。根据软件预测可知,PEDV E蛋白是一种有一个跨膜域的跨膜蛋白。研究将PEDV E蛋白设计好的截短基因(E-T1、E-T2和E-T3)连接至pCMV-myc真核表达载体中,经PCR和双酶切鉴定结果表明已构建成功。最后,将重组质粒pCMV-myc-E、E蛋白截短基因质粒Myc-E-T1、Myc-E-T2和Myc-E-T3转染HEK-293T细胞和IPEC-J2细胞,通过间接免疫荧光技术观察其E蛋白以及截短基因的细胞分布情况,并探究是否与内质网发生共定位。研究结果发现,E蛋白以及E-T1、ET2分布在细胞质并定位在内质网,而E-T3则分布在整个细胞且没有与内质网共定位。说明了E-T1、E-T2可能行使着与E蛋白类似的功能,而E-T3则没有。研究为进一步探讨PEDV的E蛋白功能和分子生物学特性奠定了基础。

摘要： 为阐明猪流行性腹泻病毒(PEDV) E蛋白诱导Vero-E6细胞内质网应激分子机制,采用RT-PCR方法扩增得到E蛋白基因,经XhoⅠ和BamHⅠ酶切后与同样酶切的p-EGFP-N1载体使用T4 DNA连接酶进行连接,成功构建了表达载体,与pCDNA 3.1-GRP78共转染Vero-E6细胞,通过激光共聚焦试验和Western blot验证E蛋白的细胞定位,并揭示其激活细胞内质网应激的分子机制。结果表明,通过共聚焦荧光显微镜证实E蛋白定位在细胞中,Western blot方法验证E蛋白可以上调Vero-E6细胞GRP78蛋白表达水平,诱导Vero细胞内质网应激。进一步采用Western blot验证E蛋白通过PERK-eIF2α信号通路激活未折叠蛋白反应。本研究为探究PEDV致病机制提供了新的思路。

摘要： 1病原日本乙型脑炎是黄病毒属中的最小病毒,形状为球形,是单股正链RNA,主要的结构为E蛋白,在病毒的表面,是病毒毒力大小的主要影响因素。该蛋白是一种膜融合蛋白,能够实现病毒包膜和细胞膜的结合,在病毒进入细胞之后感染。

摘要： 日本乙型脑炎是由日本乙型脑炎病毒(JEV)引起的一种虫媒性、人兽共患急性流行性传染病。该病毒通过入侵人、猪、马和野生动物的脑神经引起病毒性脑炎,对人和动物造成严重的危害。E蛋白是JEV的毒力蛋白,E蛋白某些毒力氨基酸位点突变会改变JEV的致病性,这些位点通常被作为检测弱毒疫苗质量关键监测目标和判断野毒JEV变异毒力强弱的依据。本文对JEV E蛋白毒力相关氨基酸位点的研究进展进行综述,为研究JEV减毒分子机制和预防JEV变异提供理论基础。

摘要： Q:感染新冠病毒后,抗体可以维持多长时间?A新冠病毒(SARS-CoV-2)表面有多种蛋白质(S蛋白、E蛋白),内部也具有与病毒的遗传物质(RNA)结合在一起的蛋白质(N蛋白)。感染新冠病毒后,人体会产生多种与这些蛋白质相对应的抗体。

摘要： 猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)能够引起仔猪的大量死亡,造成重大经济损失.PEDV E蛋白在病毒的出芽以及复制过程中起重要作用.将重组质粒pCMV-Myc-E与真核表达载体pCMV-Myc分别转染HEK-293T和PK15细胞系,验证PEDVE蛋白在宿主细胞的正确表达和亚细胞定位情况.同时验证未折叠蛋白反应(Unfold protein response,UPR)关键蛋白葡萄糖调节蛋白78(Glucose regulated protein of 78 KDa,GRP78)的表达情况.免疫荧光和Western Blot的结果表明,PEDV E蛋白在HEK-293T和PK15细胞中都得到正确表达,且定位于细胞质中.与对照组相比,重组质粒pCMV-Myc-E能够特异性引起GRP78蛋白表达量升高,且GRP78表达水平随E蛋白剂量与感染时间的增加而增强.以上结果表明,PEDV E蛋白能诱导UPR关键蛋白GRP78蛋白的表达,激活UPR反应.为后续研究PEDV E蛋白诱导UPR反应的分子机制提供参考.

摘要： 近些年,基孔肯雅病毒(chikungunya virus,CHIKV)由地方流行继续向非本土栖息地传播,逐渐变成全球大范围流行.中国等非流行地区也逐渐成为CHIKV流行的潜在地,CHIKV的血清学检测是诊断以及控制流行的关键.本文主要综述了 E蛋白在CHIKV血清学检测的进展,为CHIKV的血清学检测提供新的思路.

摘要： 目的 建立基于登革病毒E蛋白特异性抗原的荧光素酶免疫吸附法(DENV-LISA),用于检测DENV IgG抗体.方法 分别构建DENV1-E1、DENV2-E2与荧光素酶的融合表达质粒,转染293T细胞后获得含特异性抗原与荧光素酶的融合蛋白,建立DENV-LISA,评价其特异度和灵敏度,并与商用登革病毒IgG抗体检测试剂盒比较.结果 DENV-LISA阳性检出率32.4％,特异度96.6％,商用检测试剂盒阳性检出率35.3％,差异无统计学意义(P>0.05);阳性样本稀释6400倍可判断阳性,灵敏度高;同批板间、板内检测值差异无统计学意义(P>0.05);重复性良好.结论 建立基于登革病毒E蛋白的荧光素酶免疫吸附法,对登革病毒IgG抗体有较高特异度和灵敏度,可用于登革病毒感染的早期筛查、监测预警、流行病学调查等.

摘要： 为建立一种更好的鸭坦布苏病毒(DTMUV)检测方法,本实验室分离了一株DTMUV,并根据其E蛋白保守区域设计了一对扩增348bp目的 片段的特异性引物,并对该引物进行了特异性试验.本研究建立了一种纳米PCR检测方法,并通过相关试验确定了最佳的纳米PCR检测方法,这种方法快速、灵敏.纳米PCR的最小检出量为3.7×10-4,PCR的最小检出量为3.7×10-3,通过DTMUV的敏感性试验表明纳米PCR方法的敏感性是普通PCR的10倍.通过研究表明该DTMUV纳米PCR是一种高效的检测手段,具有较高的敏感性和特异性,既可以应用于流行病学调查,同时也为DTMUV的及时检测、预防和治疗奠定基础.

摘要： 本研究构建了重组质粒pET32a-E,该重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,经IPTG诱导得到了高效表达,Western-blot分析表明该蛋白能与DTMUV阳性血清产生特异性反应.将纯化好的DTMUV E蛋白作为包被抗原,建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法.经过条件优化,确定了抗原最适包被浓度为0.093μg/孔,血清的最佳稀释度为1∶100.批内和批间重复试验的最大变异系数分别为3.53％和9.73％.用建立的ELISA方法对免疫鸭坦布苏病毒灭活疫苗的鸭血清和对照鸭血清进行抗体检测,同时与攻毒保护试验进行比较,试验结果表明两者的阳性符合率为86.67％,阴性符合率为100％.

摘要： 本研究构建了重组质粒pET32a-E,该重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,经IPTG诱导得到了高效表达,Western-blot分析表明该蛋白能与DTMUV阳性血清产生特异性反应.将纯化好的DTMUV E蛋白作为包被抗原,建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法.经过条件优化,确定了抗原最适包被浓度为0.093μg/孔,血清的最佳稀释度为1∶100.批内和批间重复试验的最大变异系数分别为3.53％和9.73％.用建立的ELISA方法对免疫鸭坦布苏病毒灭活疫苗的鸭血清和对照鸭血清进行抗体检测,同时与攻毒保护试验进行比较,试验结果表明两者的阳性符合率为86.67％,阴性符合率为100％.

摘要： 本研究构建了重组质粒pET32a-E,该重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,经IPTG诱导得到了高效表达,Western-blot分析表明该蛋白能与DTMUV阳性血清产生特异性反应.将纯化好的DTMUV E蛋白作为包被抗原,建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法.经过条件优化,确定了抗原最适包被浓度为0.093μg/孔,血清的最佳稀释度为1∶100.批内和批间重复试验的最大变异系数分别为3.53％和9.73％.用建立的ELISA方法对免疫鸭坦布苏病毒灭活疫苗的鸭血清和对照鸭血清进行抗体检测,同时与攻毒保护试验进行比较,试验结果表明两者的阳性符合率为86.67％,阴性符合率为100％.

摘要： 本研究构建了重组质粒pET32a-E,该重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,经IPTG诱导得到了高效表达,Western-blot分析表明该蛋白能与DTMUV阳性血清产生特异性反应.将纯化好的DTMUV E蛋白作为包被抗原,建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法.经过条件优化,确定了抗原最适包被浓度为0.093μg/孔,血清的最佳稀释度为1∶100.批内和批间重复试验的最大变异系数分别为3.53％和9.73％.用建立的ELISA方法对免疫鸭坦布苏病毒灭活疫苗的鸭血清和对照鸭血清进行抗体检测,同时与攻毒保护试验进行比较,试验结果表明两者的阳性符合率为86.67％,阴性符合率为100％.

摘要： 本研究构建了重组质粒pET32a-E,该重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,经IPTG诱导得到了高效表达,Western-blot分析表明该蛋白能与DTMUV阳性血清产生特异性反应.将纯化好的DTMUV E蛋白作为包被抗原,建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法.经过条件优化,确定了抗原最适包被浓度为0.093μg/孔,血清的最佳稀释度为1∶100.批内和批间重复试验的最大变异系数分别为3.53％和9.73％.用建立的ELISA方法对免疫鸭坦布苏病毒灭活疫苗的鸭血清和对照鸭血清进行抗体检测,同时与攻毒保护试验进行比较,试验结果表明两者的阳性符合率为86.67％,阴性符合率为100％.

摘要： 为鉴定鸭坦布苏病毒(DTMUV)E蛋白的抗原表位,本研究以纯化的抗DTMUV E蛋白单克隆抗体(mAh)3B6为固相筛选分子,利用噬菌体表面展示技术,通过结合、洗脱、扩增的顺序筛选噬菌体随机12肽库,确定出DTMUV E蛋白模拟表位的氨基酸序列.设计合成针对表位的寡核苷酸序列,与GST蛋白融合表达进行Weslern-Blot分析,成功鉴定出了DTMUV E蛋白的一个线性抗原表位374EVEPPFG380.通过对DTMUV以及黄病毒属几种病毒E蛋白序列之间的比对,结果显示鉴定出的线性抗原表位在DTMUV中具有高度的保守性,无氨基酸位点的差异,且在其他黄病毒中也具有一定的同源性.利用Dot-Bloltting方法验证了该表位与DTMUV阳性血清具有良好的亲和性,同时该抗原表位与寨卡病毒(ZIKV)、登革热病毒(DENV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)、西尼罗河病毒(WNV)、黄热病度(YFV)阳性血清具有交叉反应性.因此该表位可能为黄病毒属所共有的一个线性抗原表位,这对了解坦布苏病毒及黄病毒属其他病毒E蛋白的抗原表位结构功能以及研制表位疫苗和诊断抗原等具有重要意义.

摘要： 为鉴定鸭坦布苏病毒(DTMUV)E蛋白的抗原表位,本研究以纯化的抗DTMUV E蛋白单克隆抗体(mAh)3B6为固相筛选分子,利用噬菌体表面展示技术,通过结合、洗脱、扩增的顺序筛选噬菌体随机12肽库,确定出DTMUV E蛋白模拟表位的氨基酸序列.设计合成针对表位的寡核苷酸序列,与GST蛋白融合表达进行Weslern-Blot分析,成功鉴定出了DTMUV E蛋白的一个线性抗原表位374EVEPPFG380.通过对DTMUV以及黄病毒属几种病毒E蛋白序列之间的比对,结果显示鉴定出的线性抗原表位在DTMUV中具有高度的保守性,无氨基酸位点的差异,且在其他黄病毒中也具有一定的同源性.利用Dot-Bloltting方法验证了该表位与DTMUV阳性血清具有良好的亲和性,同时该抗原表位与寨卡病毒(ZIKV)、登革热病毒(DENV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)、西尼罗河病毒(WNV)、黄热病度(YFV)阳性血清具有交叉反应性.因此该表位可能为黄病毒属所共有的一个线性抗原表位,这对了解坦布苏病毒及黄病毒属其他病毒E蛋白的抗原表位结构功能以及研制表位疫苗和诊断抗原等具有重要意义.

摘要： 为鉴定鸭坦布苏病毒(DTMUV)E蛋白的抗原表位,本研究以纯化的抗DTMUV E蛋白单克隆抗体(mAh)3B6为固相筛选分子,利用噬菌体表面展示技术,通过结合、洗脱、扩增的顺序筛选噬菌体随机12肽库,确定出DTMUV E蛋白模拟表位的氨基酸序列.设计合成针对表位的寡核苷酸序列,与GST蛋白融合表达进行Weslern-Blot分析,成功鉴定出了DTMUV E蛋白的一个线性抗原表位374EVEPPFG380.通过对DTMUV以及黄病毒属几种病毒E蛋白序列之间的比对,结果显示鉴定出的线性抗原表位在DTMUV中具有高度的保守性,无氨基酸位点的差异,且在其他黄病毒中也具有一定的同源性.利用Dot-Bloltting方法验证了该表位与DTMUV阳性血清具有良好的亲和性,同时该抗原表位与寨卡病毒(ZIKV)、登革热病毒(DENV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)、西尼罗河病毒(WNV)、黄热病度(YFV)阳性血清具有交叉反应性.因此该表位可能为黄病毒属所共有的一个线性抗原表位,这对了解坦布苏病毒及黄病毒属其他病毒E蛋白的抗原表位结构功能以及研制表位疫苗和诊断抗原等具有重要意义.

摘要： 为鉴定鸭坦布苏病毒(DTMUV)E蛋白的抗原表位,本研究以纯化的抗DTMUV E蛋白单克隆抗体(mAh)3B6为固相筛选分子,利用噬菌体表面展示技术,通过结合、洗脱、扩增的顺序筛选噬菌体随机12肽库,确定出DTMUV E蛋白模拟表位的氨基酸序列.设计合成针对表位的寡核苷酸序列,与GST蛋白融合表达进行Weslern-Blot分析,成功鉴定出了DTMUV E蛋白的一个线性抗原表位374EVEPPFG380.通过对DTMUV以及黄病毒属几种病毒E蛋白序列之间的比对,结果显示鉴定出的线性抗原表位在DTMUV中具有高度的保守性,无氨基酸位点的差异,且在其他黄病毒中也具有一定的同源性.利用Dot-Bloltting方法验证了该表位与DTMUV阳性血清具有良好的亲和性,同时该抗原表位与寨卡病毒(ZIKV)、登革热病毒(DENV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)、西尼罗河病毒(WNV)、黄热病度(YFV)阳性血清具有交叉反应性.因此该表位可能为黄病毒属所共有的一个线性抗原表位,这对了解坦布苏病毒及黄病毒属其他病毒E蛋白的抗原表位结构功能以及研制表位疫苗和诊断抗原等具有重要意义.

摘要： 为鉴定鸭坦布苏病毒(DTMUV)E蛋白的抗原表位,本研究以纯化的抗DTMUV E蛋白单克隆抗体(mAh)3B6为固相筛选分子,利用噬菌体表面展示技术,通过结合、洗脱、扩增的顺序筛选噬菌体随机12肽库,确定出DTMUV E蛋白模拟表位的氨基酸序列.设计合成针对表位的寡核苷酸序列,与GST蛋白融合表达进行Weslern-Blot分析,成功鉴定出了DTMUV E蛋白的一个线性抗原表位374EVEPPFG380.通过对DTMUV以及黄病毒属几种病毒E蛋白序列之间的比对,结果显示鉴定出的线性抗原表位在DTMUV中具有高度的保守性,无氨基酸位点的差异,且在其他黄病毒中也具有一定的同源性.利用Dot-Bloltting方法验证了该表位与DTMUV阳性血清具有良好的亲和性,同时该抗原表位与寨卡病毒(ZIKV)、登革热病毒(DENV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)、西尼罗河病毒(WNV)、黄热病度(YFV)阳性血清具有交叉反应性.因此该表位可能为黄病毒属所共有的一个线性抗原表位,这对了解坦布苏病毒及黄病毒属其他病毒E蛋白的抗原表位结构功能以及研制表位疫苗和诊断抗原等具有重要意义.

摘要： 本发明的目的在于，提供可抑制弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体形成的弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体形成抑制剂、弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体形成抑制用组合物、具有弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体形成抑制作用的物质的筛选方法、抑制弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体的形成的方法、抑制变性弹性蛋白的分解降低的方法及维持正常的弹性蛋白纤维的方法等。本发明涉及一种变性弹性蛋白的分解降低的抑制剂等，其特征在于，含有选自西番莲萃取物、金盏菊萃取物、白芥萃取物、药蜀葵萃取物、白柳萃取物、菖蒲萃取物、桃仁萃取物及大豆萃取物中的1种以上的植物萃取物作为有效成分。

摘要： 本发明涉及含有抑制纤维粘连蛋白与免疫抑制性受体LILRB4的结合的物质作为有效成分的免疫检查点抑制剂、免疫检查点相关疾病的治疗剂、含有活化免疫抑制性受体LILRB4的物质作为有效成分的免疫抑制剂、抗纤维粘连蛋白抗体或其衍生物、纤维粘连蛋白类似物、用于检测纤维粘连蛋白或其部分蛋白质的试剂盒和使用所述试剂盒检测生物样品中的纤维粘连蛋白或其部分蛋白质的方法。

摘要： 本发明提供一种糖化蛋白质测定试剂，其至少包含Trinder’s试剂、4‑氨基安替比林、蛋白酶、蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物，其中，至少Trinder’s试剂包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物中，至少4‑氨基安替比林包含在含有4‑氨基安替比林的部分组合物中，蛋白酶的稳定剂是使亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，氧化还原电位是包含蛋白酶的稳定剂和亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。

摘要： 本发明的目的在于提供可抑制弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体形成的弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体形成抑制剂及弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体形成抑制用组合物等。本发明涉及一种变性弹性蛋白的分解降低的抑制剂，其特征在于，含有下述通式(I)所表示的化合物及/或其衍生物作为有效成分。(式(I)中，R1～R4相同或不同，为氢原子或羟基，R1为氢原子时R2为羟基，R1为羟基时R2为氢原子，R3为氢原子时R4为羟基，R3为羟基时R4为氢原子。)

摘要： 由下述氟树脂形成了与蛋白质或包含蛋白质的组合物接触的表面的容器及用于制造蛋白质或包含蛋白质的组合物的器材具有显著的低蛋白质吸附性，其中，所述氟树脂为选自四氟乙烯‑六氟丙烯系共聚物及四氟乙烯‑全氟烷基乙烯基醚系共聚物中的至少1种氟树脂，并且，所述氟树脂的熔点为320°C以下，所述氟树脂中的相对于每1×10

摘要： 本发明提供能减小使用了特异性地结合的物质的测定中的由肝型脂肪酸结合蛋白质引起的测定值的变动幅度的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂、评价该制剂的方法、制作肝型脂肪酸结合蛋白质的校准曲线的方法、以及定量该蛋白质的方法。一种用使用了用10mM的氧化剂在25°C下进行1小时的氧化处理的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂的测定值与使用了未进行上述氧化处理的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂的测定值的比表示的氧化变动系数设定为1.4以下的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂、用于该制剂的肝型脂肪酸结合蛋白质、编码该蛋白质的DNA、由该DNA转化得到的细胞、该蛋白质的制造方法、评价该制剂的方法、抑制使用该制剂的测定中的测定值的变动幅度的方法、制作该蛋白质的校准曲线的方法、以及定量该蛋白质的方法。

摘要： 一种由使具有免疫球蛋白折叠结构的蛋白和能够形成亚单元结构的蛋白融合而得到的单体蛋白组成的多聚体蛋白的制备方法，该制备方法包括下述步骤：步骤(A)，准备在微生物的菌体内呈不溶性颗粒形态的蛋白，该蛋白为上述单体蛋白；步骤(B)，利用含有月桂酰-L-Glu的水溶液增溶步骤(A)中准备的单体蛋白；步骤(C)，在含有精氨酸盐酸盐的缓冲液中稀释步骤(B)中得到的溶液，降低月桂酰-L-Glu的浓度；以及步骤(D)，利用凝胶过滤层析等将步骤(C)中得到的溶液的溶剂置换成缓冲液。

摘要： 由具有糖蛋白生成抑制活性的序列表中序列1记载的氨基酸序列构成的蛋白质、其变异体蛋白质、由序列表中序列2记载的核苷酸序列组成的DNA、其DNA变异体以及使用上述蛋白质和DNA的糖蛋白异常症(例如囊性纤维化症)的包括基因治疗在内的治疗药。

摘要： 本发明提供检测血清中抗Rv1860抗体、抗RV3881c抗体、抗Rv2031c抗体和抗Rv3803c抗体水平的产品在制备区分或辅助区分活动性肺结核患者与潜伏性结核感染患者用途的产品中的应用。上述4种抗原的生物标志物组合，可有效区分ATB患者和LTBI人群。在验证阶段进一步用300多份血清样品用ELISA方法对生物标志物面板进行了验证，最终结果表明微阵列检测结果与ELISA检测结果基本一致。

摘要： 本发明涉及疾病诊断领域，具体涉及一种Rv1860蛋白、RV3881c蛋白、Rv2031c蛋白和Rv3803c蛋白在制备诊断活动性肺结核感染中的用途。本发明提供一种检测血清中抗Rv1860抗体、抗RV3881c抗体、抗Rv2031c抗体和抗Rv3803c抗体水平的产品在制备具有鉴别、诊断、辅助诊断、筛查和/或辅助筛查活动性肺结核感染患者用途的产品中的应用。实验证明得到含有4种抗原的生物标志物组合，可有效筛查活动性肺结核感染患者。