PEDV E蛋白的跨膜结构域对其细胞定位的影响研究

摘要

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)为猪流行性腹泻的病原体,感染上该病毒的仔猪出现脱水、腹泻和呕吐,给世界养猪业造成了经济损失。PEDV囊膜蛋白E在病毒包膜形成、病毒离子形成、病毒出芽和释放过程中发挥至关重要的作用。根据软件预测可知,PEDV E蛋白是一种有一个跨膜域的跨膜蛋白。研究将PEDV E蛋白设计好的截短基因(E-T1、E-T2和E-T3)连接至pCMV-myc真核表达载体中,经PCR和双酶切鉴定结果表明已构建成功。最后,将重组质粒pCMV-myc-E、E蛋白截短基因质粒Myc-E-T1、Myc-E-T2和Myc-E-T3转染HEK-293T细胞和IPEC-J2细胞,通过间接免疫荧光技术观察其E蛋白以及截短基因的细胞分布情况,并探究是否与内质网发生共定位。研究结果发现,E蛋白以及E-T1、ET2分布在细胞质并定位在内质网,而E-T3则分布在整个细胞且没有与内质网共定位。说明了E-T1、E-T2可能行使着与E蛋白类似的功能,而E-T3则没有。研究为进一步探讨PEDV的E蛋白功能和分子生物学特性奠定了基础。