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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议

召开年：2012
召开地：长春
出版时间： 2012-08

主办单位：中国畜牧兽医学会

会议文集：中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议论文集

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1.健康养殖，确保动物性食品的安全
- 万遂如
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：文章阐述了动物微生态制剂的概念与主要功能，介绍了动物微生态制剂在养猪生产中的应用，提出了使用微生态制剂的注意事项。指出，在养猪生产中使用微生态制剂，安全、效果好、使用方便，又无药物残留，不产生耐药性，能保障动物性食品的安全，是养殖业今后的用药方向。
2.猪疫病防控中抗病毒药物的选用
- 万遂如
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：目前猪群中感染的病毒常发生基因变异，毒力增强，新病毒与新毒株不断地出现，选好抗病毒的药物进行防治显得非常中药。文章在论述了抗病毒化学药物的危害性的基础上，提出发展中药制剂与生物工程药物是当前兽医药物研发抗病毒药物的发展方向，也是兽医临床上选用抗病毒药物防控动物疫病的最佳选择。
3.近期猪弓形体病发病特点及防治
- 高林;邢迪;王守峰
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：弓形体病是一种世界范围的人兽共患疾病，广泛寄生在人和动物的有核细胞内，分布于世界各地。全世界有超过10亿人感染弓形体，有的国家和地区人弓形体的感染率达到90％以上，我国不同地区人的弓形体的感染也不同，但是随着中国宠物饲养数量的增加，弓形体的感染开始提高，人的弓形体病主要引起孕妇和胎儿发生问题，也有报道在免疫抑制或免疫缺陷疾病中弓形体也是致死的合并感染的疾病之一。弓形体病对家畜的危害也很严重，许多畜禽都可以感染弓形体并且出现病症。其中猪的感染率也较高，在上个世纪的70到80年代，弓形体病在我国养猪场中出现大规模暴发和流行，死亡率甚至可高达60％以上，曾给养猪生产造成巨大经济损失。根据报道，各种动物弓形体的感染率各不相同，猪的感染率3．32％～66．39％，牛的感染率2．41％～67．46％，羊的感染率27.5％～33.33％，犬的感染率0．66％～40％，猫的感染率14．06％～78％。
4.布鲁氏菌的诊断与新型防控技术
- 何伯萍;韩东;雷连成
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：近年来，布鲁氏菌病疫情在人、畜间呈逐年上升的趋势。文章概述了目前中国动物布鲁氏菌病主要诊断技术方面以及动物布病新型防控技术所取得的新进展，为中国研究更为快速、敏感、易于操作的布鲁氏菌病诊断技术提供参考，为快速、精确地诊断本病提供技术支持，以有效地防控本病。
5.猪白细胞抗原(SLA)研究进展
- 冯磊;赵德;高凤山
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：猪白细胞抗原(swine leukocyte antigen，SLA)亦称为猪主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex，MHC)，属于猪重要的免疫应答基因群。随着猪SLA分子抗原多肽结合及T细胞信使生物学功能本质的揭示，关于猪SLA结构与功能的研究就进入了一个崭新时代，并在这一领域中取得了许多可喜的成果。本文论述了近年来猪SLA结构与功能方面的研究进展，包括SLA的分类及多态性、SLA分子结构特点、SLA分子功能及SLA分子相关领域的最新研究进展。
6.人血型就是附红细胞体
- 杜跃峰;巴拉;朱卫东;照日格图;陈国华;道勒玛;李希荣;张文兰;范彩琦;陈菊兰
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：目的：探讨人血型与附红细胞体关系。方法：对附红细胞体采用悬浮液观察法。人ABO血型系统采用血型检验法。结果：人体所有组织中都有附红细胞体。结论：人血型就是附红细胞体。
7.水貂阿留申病研究进展
- 杨莘;王建科;易立;许红丽;罗彬;程世鹏
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：本文从病原学、流行病学、致病特点、病毒分子生物学特点、病毒免疫特点方面对水貂阿留申病的研究现状进行概述。指出水貂阿留申病毒(ADV)的分子生物学和免疫学等方面的研究有了一定的理论基础，研究出新型的疫苗指日可待，但是鉴于ADV的潜在危害性与自身复杂性，应重视阿留申病毒的发生与发展，并寻求号的诊断与防治途径、严防病毒的增殖与扩散，建立合理的免疫程序，最终战胜阿留申病。
8.海豚链球菌的人畜共患病性质
- 贾鹏;阚式绂;史秀杰;刘荭
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：海豚链球菌病作为一种对水产养殖业危害严重的疫病，其他有的人畜共患病性质也引起世界极大的关注。研究表明，亚洲人或带有亚洲血统的人是海豚链球菌病的易感人群，另外，具有其他病史的人群也是海豚链球菌的易感人群。最后指出，在分离培养的基础上，通过扩增和分析16S rRNA基因是鉴定该病原的常用方法。随着海豚链球菌检测技术的发展，人感染海豚链球菌的病例将不断出现。
9.“探究式教学法”在《公共卫生传染病学》教学中的应用与探讨
- 常洪涛;王川庆;杨霞;赵军;王新卫;陈陆;姚慧霞
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：《公共卫生传染病学》是一门进展性和实用性极强的临床专业课，由于其教学内容繁多，病种复杂，疾病谱变化较快，学生普遍反映难以掌握，传统教学模式已不能较好地满足新形势教学需要。本课程组在教学过程中，结合目前国内外教育模式现状和学生实际情况，通过实施“探究式教学法”，可使学生积极主动地在自主、合作、探究的学习过程中，培养其创新精神和临床思维能力，活跃课堂气氛，提高《公共卫生传染病学》教学质量。
10.积极调整农牧专业设置，为区域产业发展服务
- 唐文山
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：学院要建立专业设置和调整的动态机制，围绕国家产业发展重点，结合区域产业发展需要，合理确定、不断优化专业结构和布局，要配合地方和行业主管部门联合建立人才需求预测机制和专业设置预警机制，定期发布人才需求信息，调整专业设置。本文结合学院现状和特色，以及建设百所国家级示范院校为契机，依据当前现代化大农业布局调整时机，提高专业办学水平，走产学研发展之路。
11.2009年～2011年新疆野生鸟类禽流感流行病学调查与分析
- 成进;阿不都热合曼;吐尔逊吐拉克;戴志刚;何健;初红军;赛力克拜;沙依兰古丽;夏俊;汪萍;史军;李雁冰;廖明;任涛;陆桂丽
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：本研究采集了新疆野鸟血清样品260份，进行了禽流感H1～H16亚型的血清学监测，结果显示，野鸭类血清样品2009年检出5个血清亚型，其中H8检出率高达15．38％，H13为9．62％;2010年检出11个血清亚型，H5亚型的阳性率最高，达14．292%;2011年检出12个血清亚型，其中H9检出率最高，达15．79％。不同品种野鸭的禽流感阳性检出率分析表明，绿头鸭禽流感抗体阳性率58．82％，赤麻鸭为68．66％，赤嘴浅鸭为34．09％，凤头浅鸭为44．44％。灰雁的血清样品检测结果表明，H13亚型的阳性率最高，为40．91％。1份天鹅血清样品检测出H13抗体阳性。对乌鸦、斑鸫、野鸽和红隼等野鸟血清样品检测，全部为阴性。本次在覆盖新疆边境的野生鸟类栖息地开展的禽流感血清学调查，掌握了新疆地区野生鸟类禽流感血清学监测数据，为新疆地区乃至全国的禽流感预警预测提供了科学依据。
12.宁夏鸡禽流感和新城疫抗体水平动态监测调查
- 周海宁;王进香;李知新
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：2006～2010年，通过血凝抑制试验对宁夏22个个市县(区)规模场、散养户累计13134份的鸡禽流感、新城疫免疫抗体进行监测。结果显示：高致病性禽流感H5Nl(Re-1)、H5N1(Re-4)和H5N1(Re-5)抗体免疫合格率分别为94．10％、91．53％和93．39％;鸡新城疫合格率91．74％。
13.3株野鸟H9亚型禽流感病毒新疆分离侏HA基因遗传进化分析
- 沙依兰古丽;汪萍;孟春;成进;夏俊;陆桂丽;廖明;任涛;何健
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：本研究对分离自新疆雁形目鸭科类野鸟的3株H9亚型禽流感病毒的HA基因进行了扩增、序列测定和分析。结果显示，该3株禽流感病毒HA基因核苷酸序列长度分别为1831p、1655bp和1585 bp，分别编码561、536和497个氨基酸。同源性分析表明，该3株禽流感病毒株与国内鸡源毒株的同源率为92．8％～99．5％，与猪源毒株的同源率为91．9％～97．5％，与A／sparrow／Guangxi／31／2006的株同源率为97．1％～97．4％。遗传进化分析表明，该3株禽流感病毒株与禽源、猪源的H9亚型禽流感病毒均具有很近的亲缘关系。
14.甲型2009(H1N1)流感病毒和H1N1经典猪流感病毒感染猪肺泡巨噬细胞的蛋白质组学研究
- 朱记平;邹威;贾广敏;周红波;胡勇;彭梦云;陈焕春;金梅林
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：甲型H1N1／2009流感病毒能造成在人群中的大流行。已有报道，甲型H1N1／2009流感病毒存在人-猪的传播并造成零星的死亡。在本研究中，两株病毒均从猪体内分离得到，分别是A／swine／Nanchang/F9／2010(H1N1)(F9/10)和A/swine／GuangDong/34／2006(H1N1)(34／06)。进化分析显示，F9／10病毒与甲型H1N1／2009流感病毒高度同源，而34／06病毒是经典猪流感病毒。两株病毒感染猪肺泡巨噬细胞后，蛋白质组学分析不同时间点细胞蛋白的改变模式。使用2-DE并结合MALD1-TOF MS／MS技术，共鉴定了13个上调表达和21个下调表达的蛋白点，包括有骨架蛋白，细胞信号转导蛋白，生物代谢蛋白以及热休克蛋白。生物代谢蛋白和热休克蛋白在病毒感染的细胞中发生了显著的变化。同时分析了F9／10和34／06病毒体外的生物学特性。在PAM细胞上，F9／10比34／06有更强的致病性。该研究对于深入探讨甲型H1N1／2009流感病毒的生物学特性、潜在的毒力改变以及跨种传播机制提供了可依据的研究方向。
15.猪群中甲型H1N1流感病毒的抗体阻断ELISA建立
- 王灿;李淑云;赵刚;金梅林
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：2009年4月，甲型H1N1流感病毒出现以来，在世界各地迅速传播。我国也在5月中旬检测到首例甲型H1N1流感阳性病例。该病毒在猪群中迅速传播，且发生病原重组现象。为了更好的监测猪群中，甲型H1N1流感病毒流行以及变异趋势，本研究拟建立一种鉴别诊断甲型H1N1流感病毒的血清学诊断方法以用于生产实践。通过一系列条件摸索及优化，建立了抗体阻断ELISA。应用ROC曲线对该方法临界值进行确定：PI值≥89％为阳性，≤83％为阴性。特异性试验及敏感性试验表明，阻断ELISA能区分甲型H1N1流感病毒与其他A型流感病毒;且用2009-2012年不同年份血清验证表明，猪血清抗体呈现明显的时间趋势，与大流感疫情吻合。以上结果表明该阻断ELISA在鉴别猪群中甲型H1N1流感病毒感染与经典H1N1流感病毒感染具有一定的临床应用价值。
16.DP1/02株鸭源I型副粘病毒F基因真核质粒构建及实验免疫研究
- 张秀峰;王中华;刘佳旭;刘艳华;母连志;李国江;丁壮
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：应用RT-PCR方法从鸭源I型副粘病毒DP1／02株中扩增F基因并克隆入pMD18-T载体，经序列测定，分析，结果显示DP1／02株F基因与NDV国家标准强毒F48E9株的核苷酸、氨基酸序列同源性均达到99％。随后将F基因克隆入真核表达载体pC1—neo，构建真核表达质粒pC1—F，将阳性质粒体外转染Vero细胞，通过间接免疫荧光对真核质粒的表达进行鉴定，利用pCI-F质粒进行动物实验。结果表明构建的真核表达质粒pCI—F能够在vero细胞中表达，雏鸭免疫14天后在体内可检测到特异性抗体，二次免疫雏鸭后，对NDV强毒的攻毒保护率为73％。本实验为利用F基因构建的核酸疫苗提供了重要的技术支持。
17.PRRSV地方株ORF6基因克隆与序列分析
- 方剑玉;郭小参;方先珍;苗连叶;闫若潜;吴志明
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：试验设计了PRRSV M蛋白基因引物，对地方株的M基因进行了RT-PCR扩增，扩增出约649bp的基因片段。试验对扩增的M基因以pMD18-T载体进行克隆，筛选获得重组质粒pMD-ORF6，对重组质粒进行序列测定，结果显示地方株M基因全长525bp，编码174个氨基酸。将地方株M基因序列与其他分离株进行同源性比较，结果显示本实验用地方分离株与LV毒株ORF6基因核苷酸及推导氨基酸序列同源性为69％和79．2％。与美洲型毒株VR2332的同源性高达95％和97．1％，远远高于欧洲株LV，属于美洲型毒株。
18.欧洲型PRRS ORF3基因的克隆及原核表达
- 任静强;鲁会军;金扩世;刘昊;靖杰;陆飞;金宁一
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：为了研究欧洲型PRRSV ORF3基因的表达情况，从GenBank下载欧洲型PRRSV ORF3序列(M96262)，对其进行分析，稀有密码子优化后，送交公司合成。设计针对ORF3基因的特异性原核表达引物，通过PCR、酶切、回收等，构建PET-EU-ORF3原核表达系统，最后经SDS-PAGE验证其表达情况。结果显示，ORF3基因可以在PET-EU-ORF3原核表达系统中稳定表达，为下一步的多克隆克隆抗体制备及基因工程疫苗的研究奠定了基础。
19.高致病性猪蓝耳病弱毒活疫苗免疫后血液中持续带毒及抗体消长规律的研究
- 安春霞;闫若潜;王东方;张盼盼;赵雪丽;王淑娟;赵明军;吴志明
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：为科学评价高致病性猪蓝耳病(PRRS)弱毒活疫苗的临床应用效果，对猪蓝耳病防控提供参考依据;选择3个规模养猪场，涉及6个疫苗厂家，共采集样品600份，连续跟踪监测了PRRS弱毒活疫苗在猪群中首免、二免、三免后血液中持续性带毒时间和免疫后抗体消长情况。结果显示，用PRRS弱毒活疫苗经过首免和二免后，血液中持续带毒时间为4w;而经过三次免疫，血液中持续带毒时间为1w;血清抗体检测结果显示，抗体较低时(S／P值小于2．0)进行免疫可有效产生抗体，高抗体水平下，明显缩短机体带毒时间;抗体较高时(S/P值大于2．4)免疫弱毒活疫苗，高抗体可中和病毒，免疫效果较差。提示高致病性猪蓝耳病活疫苗可产生有效的保护抗体来阻断野毒的攻击。做好高致病蓝耳病防控工作，必须加强免疫，提高猪群PRRS抗体的水平与整齐度，同时加强饲养管理。
20.基因Ⅲ型乙型脑炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
- 陆飞;鲁会军;李国江;刘昊;刘振江;刘燕瑜;靖杰;任静强;金宁一
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：根据先前在云南地区分离的乙型脑炎病毒Yunnan0901株基因组核苷酸序列设计特异性引物，构建pMD18-T-JEV-E质粒作为模板进行SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线，摸索最佳反应体系条件，建立乙型脑炎病毒荧光定量PCR检测方法。建立的荧光定量PCR标准曲线呈现艮好的重复性和特异性，与模板浓度呈现良好的线性关系。而且与猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪圆环病毒、基孔肯雅病毒、辛德毕斯病毒核酸，均不发生非特异性扩增，具有良好的特异性。本实验建立了检测基因Ⅲ型乙型脑炎病毒的实时荧光定量PCR方法，具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点，可应用于临床检查工作为乙型脑炎病毒的监控提供技术支持。
21.猪流行性乙型脑炎双抗体夹心ELISA检测试剂盒的研究
- 张芯铨;文心田;曹三杰;黄小波
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：猪流行性日本乙型脑炎对养猪业和人类健康有极大危害。本研究研制出了日本乙型脑炎病毒双抗体夹心ELISA试剂盒，可用于猪乙脑疫病的检测。文章对猪日本乙型脑炎双抗体夹心ELISA方法的建立及该试剂盒的稳定性与初步应用进行了综述。
22.分泌犬瘟热病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立
- 毕振威;王永山;范红结
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：用纯化的犬瘟热病毒(CDV)免疫BALB／c小鼠，制备脾细胞，与SP2／0骨髓瘤细胞融合，经间接ELISA筛选和克隆化，获得5株能稳定分泌CDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为3H11、1D7、2C9、lF8和3G3，抗体亚类分别为IgG2bk、IgG1K、IgG2bK、IgG1K和IgG1K，诱生腹水的抗体效价分别为109、107、106、107和106。细胞染色体分析表明，5株杂交瘤细胞株染色体平均数为88～96条，高于SP2／0骨髓瘤细胞或脾细胞的染色体数;间接免疫荧光试验(IFA)证明，5株单抗均与CDV发生特异性反应;免疫印迹(western blotting)分析，单抗1F8和3G3能特异地识别CDV的N蛋白;在病毒中和试验中，单抗3H11和1D7的病毒中和效价分别为105和106，其它3株单抗则没有中和活性;经ELISA相加试验证实，5株单抗作用的抗原位点不同。
23.西尼罗河病毒E蛋白原核表达蛋白间接ELISA方法的建立
- 吕喆;高玉伟;杨松涛;胡桂学;夏成柱
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：尽早做好西尼罗河病毒(MNV)检测技术储备是非常有必要的。目前，简介ELISA法是美国CDC推荐的检测MNV的主要方法。为了建立MNV抗体检测方法，本研究人工合成了MNV NY99株E蛋白结构域Ⅲ(DⅢ)基因序列，克隆入PET-28a表达载体，构建重组表达载体PET-28a-DⅢ。将醇化重组蛋白包被酶标板，优化简介ELISA反应条件，通过试验结果表明，简介ELISA法特异性强、敏感性高、重复性良好，为MNV感染的血清学诊断提供了技术储备。
24.猪乙型脑炎病毒E-Ⅲ抗原域蛋白间接ELISA检测方法的建立及初步应用
- 郭锐;田永祥;周丹娜;段正赢;杨克礼;闫少侠;郑尤佳;梁望旺;刘泽文
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：本研究克隆表达流行性乙型脑炎病毒E-Ⅲ抗原域蛋白将其作为包被抗原，建立了间接ELISA检测方法。试验的最佳反应条件为：最佳抗原浓度度为17．5ug／ml，血清稀释度为1：4，封闭液用含0．5％BSA的PBST，酶标二抗稀释度为1：5000，稀释液用含0．5％BSA的PBST，阴阳性临界值判定标准为OD630=0．30。采用该方法对127份临床样品进行检测，结果显示与商品试剂盒检测结果比较符合率达到88．8%,因此，本研究建立的流行性乙型脑炎间接ELISA检测方法具有良好的稳定性和可重复性，并具有较高的特异性和敏感性。
25.共表达Asia 1口蹄疫病毒P1-2A-3C基因和猪IL18基因重组鸡痘病毒构建及表达
- 鲁会军;霍晓伟;任静强;常巧呈;金扩世;金宁一
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：为构建Asia1型口蹄疫重组鸡痘病毒疫苗，采集口蹄疫发病牛的水泡液及水泡皮，用RT-PCR法扩增出Asia 1型口蹄疫病毒的前体蛋白基因P1-2A片段和蛋白酶基因3C片段，分别克隆至pMD18-T载体上，通过酶切连接获得质粒pMD18-T-P1-2A-3C。再将P1-2A-3C片段与pUTAL-IL18片段连接起来，构建鸡痘病毒中间转移质粒pUTAL-P1-2A-3C-IL18。通过脂质体转染法，将pUTAL-P1-2A-3CIL18与鸡痘病毒282E4株共感染鸡胚成纤维细胞(CEF)，通过BrdU三次加压筛选，筛选出重组鸡病毒株vUTAL-P1-2A-3C-IL18。经RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定，证明所筛选的1株重组鸡痘病毒在CEF中能正确表达P1-2A-3C基因。本研究为研制安全、高效的亚洲Ⅰ型FMD重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。
26.清道夫受体在树突状细胞提呈口蹄疫病毒VP1-VP4抗原中的作用
- 高云欢;李娜;安鹏丽;董昌海;李丽敏;王家鑫
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：目的：研究清道夫受体在树突状细胞提呈口蹄疫病毒抗原中的作用。方法：构建pET-32a-VP1-VP4原核表达载体，经IPTG诱导表达并纯化重组蛋白VP1-VP4。制备骨髓源树突状细胞(BMDC)和淋巴结T细胞，通过蛋白酶体抑制剂、溶酶体抑制剂和清道夫受体抑制剂以不同组合处理骨髓源树突状细胞(BMDCs)然后将VP1-VP4融合蛋白质负载处理后的BMDCs，与淋巴结T细胞共培养，以单独的BMDCs组和T细胞组为对照，收集不同时间点共培养上清液，ELISA检测其中IFN-γ含量。结果：本实验成功构建了pET-32a-VP1-VP4原核表达载体，并获得了VP1-VP4融合蛋白质。经poly(1)处理的试验组S4组除24h和经乳胞素和poly(1)共同处理的试验组S1组无统计学差异(P>0．05)之外，在每个时间点产生的IFN-γ，含量均明显高于其他各组，且差异极显著(P<0．01);S1组在每个时间点产生的IFN-γ含量均高于经乳胞素和氯喹及poly(1)处理的试验组S3组、经氯喹和poly(1)处理的试验组S2组、BMDCs组及T组，且差异极显著(P<0．01)。结论：清道夫受体在BMDCs提呈VP1-VP4抗原进而活化淋巴结T细胞过程中发挥负调节作用。
27.2011年我国部分地区猪瘟病毒分子流行病学研究
- 朱长康;徐璐;范学政;陈锴;张正兴;郑然;赵燕;徐志文;王琴
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：本研究对2011年我国部分地区养猪场采集组织样本209份，分别用FQ-RT-PCR和RT-nPCR两种方法检测猪瘟病毒(CSFV)。结果FQ-RT-PCR检测出55份阳性病料，RT-nPCR检测出53份阳性，2种方法符合率达96．3％。将53份阳性产物进行测序及同源性分析，显示这53流行株均为2．1基因亚型。所分离的流行株与疫苗株(HCLV)和石门株(SM)的核苷酸同源性分别为79．4％～83．1％和79．4％～82．5％。研究结果表明，目前我国部分地区的养殖场仍有猪瘟病毒的存在，且以2．1亚型为主;流行株与疫苗株同源性仍高于77．4%,说明目前使用的猪瘟疫苗依然有效。
28.猪瘟脾淋苗临床应用效果评估分析
- 郭小玲;吴志明;闫若潜;谢彩华;赵雪丽;盛敏;陈涛
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：为了掌握河南省招标猪瘟疫苗的临床应用效果及猪群猪瘟的整体抗体水平，本研究采用问卷调查和现场调查相结合的方式进行了该类疫苗的安全性调查，采用阻断ELISA试验对抽检的5824份猪血清进行了猪瘟抗体检测。结果表明：调查的猪瘟脾淋苗存在一定程度的免疫副反应，但副反应危害不严重;免疫抗体检测平均合格率为75．55％，免疫合格猪场(户)所占比率为79．88％。在5个疫苗生产厂家中，A、B、C厂家疫苗免疫效果明显好于D和E厂家，差异显著;在不同饲养规模之间比较，以规模化猪场获得的免疫效果最好，免疫抗体合格率达75．76％，而散养户的免疫抗体合格率仅为68．8％;在不同饲养阶段猪群之间比较中，母猪免疫抗体合格率最高，达到80．81％，仔猪免疫抗体合格率最低，仅为70．03％。
29.表达猪圆环病毒2型Rep/Rep’蛋白的重组杆状病毒的构建及其鉴定
- 刘丹;刘长明;陆月华;吴洪丽;危艳武;唐青海;王一平;李胜斌;刘建波;魏萍
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：猪圆环病毒2型(PCV2)ORF1编码的Rep蛋白与病毒复制相关，其与转录中剪切所得的小Rep’蛋白是病毒复制所必须的。为了构建表达PCV2-Rep和Rep’蛋白的重组杆状病毒，采用PCR法从病毒感染细胞中扩增Rep和Rep’蛋白基因，并克隆到杆状病毒转移载体(pBlueBac4．5/V5-His-TOPO)。将重组质粒与线性化杆状病毒DNA共转染昆虫细胞(Sf-21)，经同源重组和蚀斑筛选，获得2株高效表达PCV2-Rep和Rep’蛋白的重组杆状病毒。经3次克隆的重组毒株毒价达7．0×107和3．0×107pfu／mL。蛋白表达分析表明，PCV2-Rep和Rep’蛋白分子量为36．0 ku和20．4 ku，占总蛋白含量的6．2％和10．1％;这两种重组蛋白均可与PCV2抗体产生特异性反应，具有良好的免疫活性。用Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白，其纯度达到92．5％和93．6％。本研究获得的PCV2-Rep和Rep’蛋白，为PCV2疫苗免疫与野毒感染之间鉴别诊断及病毒复制机制的研究奠定了基础。
30.猪群中戊型肝炎的流行病学调查与分析
- 张厚勇;陈东升;张佳思;侯康伟;伍宜权;张瑞竹;张仪;刘正飞
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：目的：调查华中地区不同猪群中戊型肝炎病毒(HEV)感染情况和流行特征，为控制HEV在人畜间的传播提供依据。方法：随机采集4个不同养猪场血清样品80份，采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测抗-HEV IgG抗体，用统一制定的流行病学调查表进行分析。在此基础上，从2007／2010年我们收集湖北、河南、安徽及湖南四省猪临床肝脏样品及肛拭子样品共583份，应用巢式PCR(逆转录套式聚合酶链，RT-nPCR)方法进行HEV RNA检测，将PCR扩增产物克隆到pMD18-T载体上，构建重组质粒并测序，利用生物学软件进行并对其进行遗传进化分析和绘制进化树。结果：4个猪场80份血清中HEV阳性血清56份，抗-HEV抗体阳性高达70．0％。四个猪场阳性率分别为分别为70％，80％，70％和60％。HEV RNA总阳率为9．6％(56／583)，肝脏中阳性率为15．55％(21／135)，肛拭子样品中阳性率为7．81％(35／448)。13个猪场中有8个猪场同时存在HEV，猪场阳性率达61．53％，其中肛拭子HEV RNA阳性率2．0％-18．33％，肝脏中阳性率为3．84％-28．37％，表明肝脏中HEV RNA的检出率明显高于肛拭子。遗传进化分析表明：所分离毒株均属于基因4型，38株阳性毒株之间同源性为92-100％，与戊型肝炎病毒基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、 Ⅳ型同源性分别为77％、77％、87％、96％。以该核苷酸片段绘制的遗传进化树显示，从肛拭子中分离的毒株(FJ445406)均与毒株D0279091株处在同一分支上，属于基因4型;但其中肝脏中分离的毒株(GQ202266．1)虽然处在4型分子上，但和4型人源毒株处在一个亚支，属于4型中另一亚型，提示该毒株可能是由人源毒株演化而来。结论：研究表明华中地区猪HEV在不同猪场普遍存在，但总体来讲，华中地区猪源HEV基因型相对稳定，属同一基因型，提示猪是HEV的主要传染源之一。该研究为掌握华中地区的猪HEV的流行及基因型分布奠定了基础。
31.宁夏部分养猪小区病毒病流行现状调查及分析
- 李知新;周秀玲;李靖宁;田进梅;赵燕;宋权儒
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：针对宁夏2007年以来部分地区调入生猪频繁发生猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)等疫情，对猪存栏较为集中的地区进行PRRSV、CSFV等病原学调查，并对其发展趋势进行分析。采用ELISA方法对297份血清样本进行抗体检测;采用RT-PCR方法对297份血清和送检的78份病料组织进行病原学检测。血清学调查结果显示，PRRSV隐性感染阳性样品111份，阳性率为37．4％。其中母猪带毒率较高，仔猪次之，育成猪最低，均不表现临床发病;病原学调查结果表明，对血清学检测PRRSV阳性样本111份进行RT-PCR检测，阳性率为100％;病料组织中单重感染PRRSV阳性样品18份，阳性率为23．0％，属于美洲型，与CH-1a遗传关系较近，归属同一基因亚型;猪群中PRRSV、CSFV、PCV-2、PRV和PPV不同混合感染比较严重，以二重感染为主，三重感染次之。调查发现，PRRSV隐性感染十分普遍，严重危害着宁夏的养猪业;同时由于其它病原微生物的混合感染日趋复杂化，使得对猪病防控的难度也越来越大。
32.传染性法氏囊病病毒VP2与C3d串联基因重组表达质粒的构建及其免疫功能分析
- 马金荣;欧阳伟;王永山;吴晓悠;朱向东;张海彬;范红结;王忠灿;唐雨德
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：为了提高传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因核酸疫苗的免疫效力，根据已发表的鸡源C3d序列，设计并合成在5’端添加连接肽(Gly4Ser)2序列的C3d基因。用同尾酶Bg1 Ⅱ和BamH Ⅰ建含有3拷贝C3d与VP2的的重组表达质粒pcDNA-VP2-3C3d。用脂质体法转染BHK21细胞，48 h后，Western blot分析表明，表达的重组蛋白为162 ku;间接免疫荧光试验检测转染细胞中具有特异性荧光。用重组表达质粒pcDNA-VP2-3C3d、与前期构建的真核表达质粒pcDNA-VP2免疫2周龄SPF鸡，二免14 d后，间接ELISA法检测IBDV抗体效价，pcDNA-VP2-3C3d组抗体水平显著高于pcDNA-VP2组，MTT法检测鸡脾淋巴细胞增殖活性，pcDNA-VP2-3C3d组免疫诱导的特异性淋巴细胞增殖活性显著高于pcDNA-VP2组(P<0．05)。本研究表明C3d可增强VP2基因免疫诱导的IBDV特异性体液和细胞免疫应答。
33.鸡IBV的分离鉴定及S1基因序列分析
- 李银;叶焕春;魏雪涛;黄欣梅;刘宇卓;张敬峰;牛囡囡
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：从江苏某鸡场疑似鸡传染性支气管炎(IB)的病料中，分离到1株鸡传染性支气管炎病毒(IBV)(命名为JS3)，对分离病毒进行了鸡胚致病性试验、对鸡新城疫病毒(NDV)的干扰试验、血凝特性试验、动物回归试验等生物特性鉴定及IBV S1基因高变区特异性片段RT-PCR扩增、克隆和序列分析。结果显示：分离毒株的传代物均有明显的致鸡胚矮小化作用;分离病毒在鸡胚上可干扰新城疫病毒Lasota株的增殖;病毒无直接血凝性，经1％胰酶处理后可凝集鸡红细胞;动物回归感染死亡鸡肾脏病变明显;采用RT-PCR方法从分离毒株扩增出特异的S1基因片段。序列分析显示，分离株JS3与各毒株的同源性均较低，说明分离毒株JS3和各毒株(包括疫苗株)存在差异。
34.禽博尔纳病毒分离鉴定及其恒温扩增检测分析
- 田纯见;唐羿;周小明;常彦磊;吴晓薇;朱道中;王宏;罗琼;林志雄;赵吟;罗长保;鱼海琼;刘志玲;陈茹
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：本研究利用哺乳动物细胞从腺胃扩张症(PDD)患病鹦鹉体内分离一种新的博尔纳病毒(BDV)。将鹦鹉“琉璃363”和“色彩”腺胃病料接种猪睾丸(ST)细胞单层出现圆缩、脱落，RT-PCR检测禽博尔纳病毒(ABV)基质蛋白(M)基因出现预计大小351bp产物条带，产物克隆序列进化树分析显示为ABV5基因型。利用DNAStar和PrimerExplorerV5．0(网络版)软件设计获得ID1，6，19，30和37共5组M基因LAMP引物，进行RT-LAMP反应后三组引物呈现阳性显色反应，并具有特异电泳条带。以钙黄绿素为荧光指示剂，实时RT-LAMP分别在36min(ID30)、38min(ID37)和49min(ID19)出现扩增反应曲线，60min内扩增达到峰值;浊度测定时三者出现扩增曲线的时间分别为56min、58min和65min。临床及有关样品检测RT-LAMP与RT-PCR结果一致，腺胃呈ABV阳性，大肠、小肠、十二指肠、心、肝、脾、肺、肾、肌胃、腺胃、腺胃内容物、胰腺、素囊、脑、肌肉等病料中未检出;病毒ST细胞培养物RT-LAMP检测10-1～10-5为阳性，RT-PCR检测10-3以后为阴性。新城疫、禽流感、法氏囊病、白血病J亚群、脑脊髓炎等有关病毒未见阳性反应。研究结果对鹦鹉及其他家禽致死性PDD防制提供新的技术手段，为BDV公共卫生研究提供有益的参考。
35.重组腺病毒Ad-GP的纯化
- 齐延新;李霄;金宁一
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：含有肿瘤特异性启动子PEG-3p和人5型腺病毒复制必需基因E1A和绿色荧光蛋白基因EGFP的重组腺病毒Ad—GP，采用阴离子交换色谱法制备纯化重组腺病毒Ad-GP，取代传统的氯化铯密度梯度离心方法纯化，获得稳定的、可扩大的、应用于大规模生产的纯化工艺，为建立重组腺病毒基因治疗药物的质量标准提供借鉴。
36.规模化蛋鸡场中沙门氏菌来源调查
- 雷昌伟;王红宁;张安云;杨蒲燕;杨帆;刘必慧
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：沙门氏菌是食品安全事件的重要微生物之一，被污染的饲料与饮水则是传播的主要媒介物，从源头上防控沙门氏菌显得尤为重要。本研究通过设置对照对规模化蛋鸡场中饲料、饮水、空气、鼠类进行沙门氏菌的分离培养与鉴定;利用平板凝集试验对试验组和对照组鸡群进行沙门氏菌血清抗体检测，分析饲料、饮水、空气、鼠类与蛋鸡沙门氏菌污染之间的相关性。结果在空气和饮水中未分离到沙门氏菌;检疫合格饲料入舍1d时分离率为0％，入舍10d即达到11．8％;23只鼠类中沙门氏菌分离率为26．1％;沙门氏菌血清抗体抽检结果发现试验组和对照组沙门氏菌鸡舍平均血清抗体阳性率分别为11．2％和8．0％，SPSS分析差异显著(P<0．05)。结果表明，饲料、鼠类与蛋鸡沙门氏菌污染密切相关，提示饲料的存放与鼠类的防治对蛋鸡沙门氏菌防控具有重要意义。
37.不同来源沙门氏菌对小鼠致病力的比较研究及毒力基因的检测分析
- 程琼;庞瑞亮;王若晨;苏方超;刘军军;魏建忠;孙裴;王桂军;李郁
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：为探究不同来源沙门氏菌的致病力及毒力基因分布的差异性。采用改良寇氏法对7株不同来源的沙门氏菌进行小鼠致病性试验、病理剖检和组织切片观察，应用PCR检测质粒毒力基因和部分毒力岛基因。结果显示，7株菌株的LD50按⑥、④、⑤、②、①、③、⑦依次降低，⑦、①、③引致的病理变化最为明显，4株猪源沙门氏菌致病力均高于3株鸡源菌株致病力。毒力基因检测结果显示，仅⑦菌株检出spvR、spvA、spvB、spvC、spvD质粒毒力基因;毒力岛毒力基因sscA、sseD、sseE 7株菌株全部检出sseC基因仅有③、④、⑤和⑦检出。结果表明，不同来源的沙门氏菌对小鼠的致病力具有明显差异，不同沙门氏菌对小鼠的致病力表型与其毒力基因的携带具有相关性。
38.猪链球菌血清2型河南分离株的毒力基因鉴定及其cps2J全基因序列分析
- 张九州;刘春生;王川庆
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：为了解SS2河南分离株的毒力基因型及cps2J全基因突变情况，本研究设计并合成了7对扩增SS2毒力基因gdh、cps2J、mrp、ef、sly、orf2和fbps的特异性引物，建立检测SS2的7种毒力基因的PCR方法，并对SS2的cps2J进行全基因序列测定和同源性分析。结果表明，gdh、cps2J、mrp、ef、sly、orf2和fbps基因在8个SS2分离株中的检出率分别为100％(8／8)、100％(8／8)、62．5％(5／8)、75％(6／8)、87．5(7／8)、100％(8／8)和100％(8／8);其中cps2J全基因核苷酸及推导的氨基酸序列与来源不同的SS2分离株同源性分别达98％和97％以上，以该基因构建的系统发育树表明8株SS2河南分离株与国内外不同参考株同源性高，亲缘关系密切。
39.猪链球菌2型分泌核酸酶(SsnA)的表达、ELISA方法建立及其在鉴别诊断中的应用
- 朱剑;康超;张安定;金梅林
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)是一种广泛分布的人畜共患病原菌，严重危害着人类健康和养猪业的发展。本文诣在研究SsnA基因做为分子诊断标识在对SS2感染的鉴别诊断中所起的作用。本实验中以SS2-LT菌株基因组DNA为模板，通过PCR扩增SsnA基因片段，将该片段克隆到表达载体pET-28a(+)中，在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达，获得大小为46 KD的融合蛋白，经SDS-PAGE和western-blot分析表明，重组蛋白质具有抗原反应活性。以纯化的融合蛋白作为包被抗原，建立了SsnA-ELISA鉴别诊断方法。对已知背景的人工感染及疫苗免疫血清和临床血清进行检测，比较感染血清和免疫血清的检测结果。发现两者具有显著的差异(P<0．05)，表明建立的SsnA-ELISA方法具有良好的检测效果。利用该方法对采集自8个省份的1446份血清进行检测，显示SS2的阳性率为0％～14．77％，平均阳性率为5．39％。本研究结果表明：猪链球菌2型分泌核酸酶(SsnA)可以作为一个良好的鉴别感染的分子诊断标识;对临床血清的检测结果表明感染及流行与气候环境存在明显的关系。
40.猪链球菌种及1、2、7、9型多重PCR方法的建立及应用
- 张九州;赵军;杨霞;常洪涛;陈陆;王新卫;刘红英;姚惠霞;王川庆
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：根据SS谷氨酸脱氢酶(gdh)基因序列和SS血清1(14)型、2(1／2)型、7型、9型的型特异的cps1I、cps2H、cps7H、cps9G基因序列，分别设计一对种特异性引物和4对型特异性引物，通过优化反应条件，建立了鉴定SS种及血清1(14)型、2(1／2)型、7型、9型的多重PCR检测方法，该方法的特异性和敏感性均良好。应用建立的多重PCR方法对采集到的的61份猪扁桃体进行了检测。结果显示，61份猪扁桃体SS检出率为77．0％(47／61)，其中SS2占14．8％(9／61)，SS7占4．9％(3／61)，SS9占32．8％(20／61)，无血清1型存在。该方法可作为猪链球菌快速诊断和流行病学调查的重要手段。
41.猪链球菌血清2型抗体IHA检测方法的建立及应用
- 张九州;赵军;杨霞;常洪涛;陈陆;刘红英;姚惠霞;王川庆
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：目的：建立适用临床上检测SS2抗体的IHA检测方法。方法：用SS2的荚膜多糖(capsular polysaccharide，CPS)致敏经戊二醛处理过的鸡红细胞，优化致敏醛化红细胞的抗原量和时间。结果：在37℃条件下CPS(2．25μg／mL)致敏鸡红细胞90分钟，IHA试验在25℃条件下操作，被检血清IHA效价在1：8及其以上时判为SS2抗体阳性。应用此方法对猪大肠杆菌、副猪嗜血杆菌、猪肠球菌、SS1、SS7、SS9、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、巴氏杆菌阳性血清进行检测，结果：SS2抗体均为阴性。对1044份无临床症状的猪血清进行检测，SS2抗体阳性率为61．69％。结论：该方法敏感性高，特异性较强，可用于大规模SS2抗体水平的检测和SS2的血清流行病学调查。
42.猪链球菌血清2型cps2H基因的克隆表达及免疫原性分析
- 张九州;刘春生;王川庆
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：为了研究SS2的cps2H重组蛋白的免疫原性，将扩增出的SS2 ZMDSC-2株的cps2H全基因产物与pMD18-T克隆载体连接，重组质粒经PCR、酶切鉴定后进行测序;构建pET32a(+)-cps2H原核表达载体，转化至大肠杆菌BL21中，经IPTG诱导表达，表达产物进行SDS-PAGE和Western—blotting分析。将纯化的cps2H重组蛋白免疫小鼠，用ELISA检测其血清抗体水平。结果显示：cps2H全基因为1371bp，表达的重组蛋白大小为66．2KDa，最佳的诱导条件为1．0mmol·L-1的IPTG诱导3h，与SS2阳性血清的Western-blotting分析呈阳性反应;小鼠免疫1周后血清中即可检测到抗cps2H重组蛋白的特异性抗体，并于免疫后28天达到高峰。上述结果表明：cps2H重组蛋白具有良好的免疫原性，可作为SS2的疫苗候选分子和免疫诊断抗原。
43.规模化猪场猪感染肺炎克雷伯菌的分离鉴定及耐药性调查
- 管中斌;王红宁;曾博;周英顺;高荣;徐昌文;张安云
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：改进肺炎克雷伯氏菌分离鉴定方法，研究西南地区规模化猪场肺炎克雷伯氏菌感染情况及其耐药性。2008～2011年中国西南地区(四川、重庆、云南省)送检至动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室的病死猪及组织样品。通过西蒙氏柠檬酸盐肌醇(SCAI)培养基初筛，结合肺炎克雷伯氏菌16s rDNA特异性的127bp片段扩增检测确证，改进肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定方法，并对鉴定出的肺炎克雷伯氏菌进行小鼠致病性试验。参照CLSI(2009)推荐的琼脂稀释法，对分离鉴定出的肺炎克雷伯氏菌进行9种氨基糖苷类药物和9种β-内酰胺类药物的MIC值测定。从26个猪场送检病料中鉴定出猪肺炎克雷伯菌69株，占11．22%，仅次于大肠杆菌(31．87％)和葡萄球菌(20．81％)，其中18株对小鼠具有致死性，占26．09％。表明在该地区猪感染肺炎克雷伯菌已成为规模化猪场主要病原菌之一。测定了69株菌对18种常用抗菌药物的MIC值，结果表明：阿莫西林、苯唑西林、氨苄西林、头孢氨苄、头孢羟氨苄耐药率均为100%，卡那霉素、妥布霉素、庆大霉素耐药率分别为85．51％、81．16％和78．26%，对头孢噻呋、氨苄西林／舒巴坦、阿莫西林／克拉维酸和阿米卡星较为敏感，耐药率分别为14．8％、17．2％、17．2％和30．43％。本文为猪感染肺炎克雷伯菌的诊断防治提供科学依据。
44.副猪嗜血杆菌Taqman-MGB荧光定量PCR检测方法的建立及应用
- 王东方;刘梅芬;闫若潜;赵明军;王淑娟;赵雪丽;张林海;吴志明
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：根据GenBank中副猪嗜血杆菌16s rRNA基因序列，利用生物学软件Primer Express 2．0设计1对特异性引物和Taqman-MGB探针，建立Taqman-MGB荧光定量PCR方法。对引物浓度、退火温度等反应条件进行优化，建立了Taqman-MGB探针荧光PCR标准曲线，进行灵敏度、特异性、重复性及临床应用试验。结果：该检测方法最低检出限为10 copies／μL;与普通PCR相比，该荧光实时定量PCR方法灵敏度更高;该方法可以扩增出猪嗜血杆菌目的基因，而扩增不出大肠杆菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪链球菌基因，表明该检测方法特异性强;不同浓度的pGEM-T／HPS重组质粒分别进行了组间和组内验试验结果显示，重复性稳定性良好。结论：该荧光实时定量PCR方法能够很好地用于副猪嗜血杆菌的临床检测。
45.猪丹毒杆菌临床分离鉴定与药敏实验
- 邱美珍;杜丽飞;杨爱梅;王慧;杨俊;周望平
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：笔者对患败血症、关节炎和心内膜炎的病猪进行细菌分离，根据分离菌的形态特征、培养特性和PCR鉴定，确定为猪丹毒杆菌，共分离2株猪丹毒杆菌。对2株猪丹毒杆菌进行药敏试验，结果其对青霉素、氨苄青霉素、头孢噻肟、先锋必、先锋Ⅳ、头孢曲松、诺氟沙星、恩诺沙星表现较高的敏感性，特别是对青霉素、头孢噻肟、先锋必、恩诺沙星最为敏感，而对复方新诺明、链霉素、新霉素、庆大霉素、林可霉素、阿米卡星、大观霉素耐药性严重。结果还显示，不同地区猪场平时使用的抗菌药物不同，所分离菌株对同一药物的敏感性存在不同程度的差异。临床治疗用药应避免盲目，应在药敏试验指导下进行。
46.产气荚膜梭菌a毒素基因的定点突变与表达
- 许崇利;许崇波;惠远峰;胡静涛
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：目的：选择可能影响α毒素生物活性的氨基酸相关碱基位点进行定点突变，构建α毒素基因的突变体并在大肠杆菌中表达。方法：利用PCR定点突变技术，进行68位组氨酸→亮氨酸的定点突变，构建了含α毒素突变基因表达质粒的重组菌株BL21(DE3)pLys(pXMCPA02)。结果：α毒素突变基因287位核苷酸由A→T，经酶切鉴定和序列测定证实，构建的重组质粒pXMCPA02含有α-毒素突变基因，且基因序列和阅读框架正确。重组菌株BL21(DE3)pLys(pXMCPA02)表达产物经SDS—PAGE分析，其表达量占菌体总蛋白相对含量的33．82％。结论：已成功构建了α毒素基因突变体，并实现了在重组大肠杆菌中的表达。
47.细胞信号转导和骨架在人源福氏志贺菌侵袭鸡肠上皮原代细胞中的作用
- 师润;陈陆;杨霞;王川庆;刘红英;王新卫;常洪涛;姚惠霞
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：目的：研究细胞信号转导和骨架在人源福氏志贺菌对鸡肠上皮原代细胞中的作用。方法：分别用酪氨酸蛋白激酶、酪氨酸蛋白磷酸化酶、蛋白激酶C、Ca2+通道的信号转导抑制剂和微丝蛋白聚合抑制剂Genistein、sodium orthovanadate、staurosporine、Nifedipine和Cytochalasin B处理鸡肠上皮原代细胞，采用细胞免疫组织化学的方法研究人源福氏志贺菌对鸡肠上皮原代细胞侵袭力，计算人源志贺菌细胞侵袭率的变化。结果：感染4h后，志贺菌鸡原代肠上皮细胞细胞侵袭率为11．2％。Genistein、Nifedipine和Cytochalasin B能显著抑制ZD02株内化，Stauroprine和Sodium onhovanadate对细菌的内化几乎无影响。结论：人源福氏志贺菌侵袭过程需要酪氨酸蛋白激酶、Ca2+通道活化以及细胞微丝重排，从而使细菌进入细胞内，损害细胞。
48.牛分枝杆菌CFP-10基因的表达和重组蛋白的纯化
- 谢志勤;谢芝勋;邓显文;谢丽基;庞耀珊;刘加波;范晴
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：根据Genbank中牛分枝杆菌的基因序列，设计合成一对扩增CFP—10基因完整ORF的特异性引物，以pET32a(+)为载体构建重组表达载体CFP-10／pET32a(+)。重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)，经0．9 mmol／L IPTG 37℃诱导3h后表达，收集菌体并裂解，裂解后上清和沉淀经SDS—PAGE分析，结果表明融合蛋白分子量分别为30kda，表达产物以可溶性存在于上清中，后经Ni-NTA吸附柱方法对目的蛋白进行纯化，经薄层凝胶扫描分析，纯化后的His融合蛋白纯度达95％，该CFP-10表达蛋白可作为体外诊断抗原，为进一步建立检测牛分枝杆菌的方法奠定基础。
49.BOVIGAM(R)牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测方法与皮内变态反应对比试验
- 赵景义;徐继鹏;蒋益民;韦海涛;刘晓冬;徐发荣;关建民;彭秀华;焦万亮;齐亚洲
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：本试验通过对来自三个不同地区239头奶牛同时应用皮内结核菌素试验和牛结核分枝杆菌γ-干扰素试验两种方法进行对比验证试验。结果表明，牛结核分枝杆菌γ-干扰素试验能检出早期感染结核杆菌的牛，可以作为皮肤试验的平行试验，以最大限度地检出被感染动物，可作为系列试验对皮内变态反应结果进行确诊或否定。
50.稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体细胞株的筛选与应用
- 王艳;王新卫;陈陆;赵军;杨霞;王川庆;刘红英;常洪涛;姚慧霞
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：研制抗羊种布鲁菌脂多糖抗原的单克隆抗体，同时应用单克隆抗体建立检测布病的双夹心ELISA方法。本研究采用热酚水法提纯羊种布鲁菌(16M菌株)的脂多糖抗原，用脂多糖和灭活的羊种布鲁菌16M作为免疫抗原，交替免疫6～8周龄BALB／c雌鼠。将脂多糖作为包被抗原建立间接ELISA方法，筛选针对抗羊种布鲁菌(16M菌株)脂多糖的单克隆抗体杂交瘤细胞株。筛选出3株能稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为5H3、6B8和3H7，细胞培养上清的ELISA效价在1：1000～1：5000，小鼠腹水单克隆抗体ELISA效价在1：10000～1：160000;抗体亚类鉴定表明：5H3、6B8属于IgM亚类，3H7属于IgG3亚类;特异性试验结果显示：3株杂交瘤细胞分泌的抗体与大肠杆菌O157裂解抗原、鸡白痢沙门氏菌裂解抗原、鸭源鸡杆菌脂多糖抗原以及福氏志贺菌裂解抗原不反应，仅与灭活的羊种布鲁菌(16M)发生反应。布鲁菌虎红平板凝集试验和试管凝集试验检测结果显示，获得的单抗可与标准检测抗原形成明显的颗粒凝集物和伞状凝集物。利用所建立的单克隆抗体细胞株，建立了一种检测布鲁菌的双夹心间接ELISA方法，并进行了特异性和敏感性检测。对模拟样品和临床样品进行了检测，准确性均很高。
51.大肠杆菌O157：H7双重SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立
- 程海卫;杨霞;陈陆;赵军;王新卫;常洪涛;刘红英;姚慧霞;王川庆
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：目的：建立一种快速、敏感、特异的大肠杆菌O157：H7双重SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法，实现对大肠杆菌O157：H7菌体抗原基因和鞭毛抗原基因的同步检测。方法：根据Genbank公布的大肠杆菌O157：H7 rfbE和fliC基因序列设计两对引物，并对荧光定量PCR反应条件进行优化，建立了检测大肠杆菌O157：H7的双重实时荧光定量PCR反应体系，并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了评价。结果：应用该二重实时荧光定量PCR对所有大肠杆菌O157：H7菌株的检测结果均为阳性，方法中rfbE的Tm值为79．4±0．5℃，fliC的Tm值为83．1±0．5℃，对其他供试的沙门菌、志贺菌、枸橼酸杆菌、巴氏杆菌、肠球菌、链球菌1型、链球菌2型等菌株则为阴性;该方法检测的灵敏度可达2．95×100拷贝／μL，比普通PCR的灵敏度高103倍;定量检测的批内与批间变异系数均小于2％;结论：本研究建立的荧光定量PCR方法、灵敏度高、特异性强、稳定性高、操作简便快捷、结果准确可靠，为大肠杆菌O157：H7的临床诊断、食品安全检测提供了新的鉴定方法，同时也为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。
52.大肠杆菌0157：H7单克隆抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制
- 夏兴霞;王永山;孟祥升;朱国强;张雪寒;何孔旺
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：用E．coli O157：H7菌体免疫BALB／c鼠，制备免疫脾细胞，与SP2／0骨髓瘤细胞融合，获得了16株分泌单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。其中，1D3、2E7和2H7三株为O157：H7特异单克隆抗体，Ig亚类分别为IgMκ、IgG2bκ和IgG2bκ，腹水抗体ELISA效价分别为103、105和106。用纯化的单克隆抗体2E7标记胶体金，制备金标抗体玻璃纤维素膜;将纯化的2H7和羊抗鼠IgG分别作为检测和对照捕捉抗体包被于硝酸纤维素膜(NC)上;组装成双抗夹心法O157：H7胶体金免疫层析检测试纸条。用该试纸条可特异检测O157：H7，敏感度为106CFU／ml，与相同单克隆抗体2H7和2E7建立的O157：H7夹心ELISA检测方法的敏感度相当，试纸条简便快速，在1～5 min内可得出检测结果，便于O157：H7的临床快速诊断与现场检测样品的快速筛查。
53.牛支原体、巴氏杆菌A型和化脓隐秘杆菌多重PCR快速检测方法的建立
- 肖淦文;陈颖钰;彭清洁;胡长敏;崔朋;巴晓亮;陈焕春;郭爱珍
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：本实验旨在建立一种多重PCR方法，用于同时鉴别牛支原体和两种常见混合感染菌。分别针对多杀性巴氏杆菌A型特异的hyaC—hyaD基因区段、化脓隐秘杆菌的16S rRNA基因上保守区段和牛支原体的UvrC基因设计特异性引物，多重PCR的最佳扩增条件确定为：95℃ 10分钟预变性后;95℃ 1min，56℃ 50s，72℃ 1min，循环30次;72℃ 10分钟进行延伸反应。特异性试验证明，该多重PCR可同时扩增出以上三种致病菌的特异性片段，不能扩增出其他病原菌的相关片段;敏感性试验证明可检测到多杀性巴氏杆菌A型、化脓隐秘杆菌和牛支原体的最低浓度分别为8×105CFU／mL，8×105CFU／mL和4×106CFU／mL。用该方法检测了牛支原体肺炎患牛的鼻拭子与肺组织，发现12 h预增菌后肺组织检测与牛支原体培养的阳性符合率为92％。鉴于对临床样本进行牛支原体分离培养需要3-4天时间，而该多重PCR结合12h预增菌，能在24h内出结果，显著加快了临床诊断速度，具有推广应用价值。
54.快速检测志贺毒素2基因的LAMP方法的建立与评价
- 张雪寒;何孔旺;叶青;倪艳秀;温立斌;李彬;王小敏;周俊明;郭容利
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：目的：建立志贺毒素2的LAMP快速检测方法，更好的适应临床和实验室等的检测需求。方法：利用LAMP技术，以stx2及多个变异体(stx2v)基因为靶序列，设计LAMP引物，建立LAMP反应体系与条件，进行灵敏度和特异性实验。结果：整个检测过程仅需1 h，即可通过肉眼直接目测实验结果。stx2-LAMP对纯菌和临床样品的最低检测限分别为1CFU／M1和10CFU／g;以不能产生志贺毒素的大肠杆菌以及沙门氏杆菌基因组DNA为模板对stx2基因进行检测，结果显示均没有发生非特异性扩增反应。结论：stx2-LAMP能够快速检测stx2基因，且可直接观察到实验结果，实现了检测结果的可视化。具有操作简单安全、检测灵敏度高、特异性高的特点，能够满足基层实验室、应急检测或现场监测等方面的使用需求，具有良好的应用价值。
55.高通量鉴定病原菌表面蛋白与宿主细胞表面分子之间的相互作用
- 陈博;张安定;许仲曼;陈焕春;金梅林
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：病原菌与宿主蛋白质之间的相互作用参与着病原菌所有的感染过程。研究病原菌与宿主之间的相互作用能够我们全面理解细菌病的致病机理。尽管目前这个领域已有少量的研究，但仍有待于全面的系统鉴定病原菌与宿主之间的蛋白质相互作用过程。在本研究中，我们建立了一种名为基于亲和层析的表面蛋白质组学(Affinity Chromatography-based Surface Proteomics;ACSP)的新研究方法，该方法将亲和层析技术和shotgun蛋白质组学技术(LC-MS／MS)相结合，可以用来大尺度系统的研究病原与宿主之间的相互作用。为了完成ACSP实验，我们以锚定了天然的Hep-2细胞表面分子的树脂为诱饵，用来从S．suis表面蛋白中捕获潜在的互作分子。随后，我们利用LC-MS／MS技术从捕获物中鉴定出40个潜在的表面互作蛋白，这些蛋白中有3个蛋白已在前期的研究中被证实。我们选取了8个重要的表面互作蛋白，并证实了其与Hep-2细胞的粘附作用。另外，3个新鉴定的表面互作蛋白的重组蛋白以及多克隆抗体能够显著的抑制S．suis与Hep-2细胞的粘附过程，因此这3个蛋白极有可能在S．suis与Hep-2细胞的相互作用过程中发挥着重要的作用。通过使用这个例子，我们证实了ACSP技术是一个非常有价值的研究病原菌与宿主相互作用的实验工具。
56.中草药制剂与细胞因子制剂在猪疫病防控中的联合应用
- 万遂如
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：目前我国猪群中发生的疫病主表现为多病原混合感染与继发感染，同时又广泛存在免疫抑制，病原体不断发生变异，滥用抗生素造成“超级细菌”的出现，霉菌毒素的危害加重，以及饲养环境的恶劣和不重视生物安全体系的建立等，致使疫情常年不断，临床上呈现病原多元化，病症复杂化，发病率与死亡率至高不下，不仅给猪病的防控工作带来许多新问题，而且造成了重大的经济损失。为此，建议当前的猪病防控工作要在“养重于防、防重于治、预防为主、养防结合”方针的指导下，认真的做好免疫预防，积极落实各项生物安全措施，采取中草药制剂与细胞因子制剂联合使用，进行综合防控，减少抗生素的使用量，做到提高机体自身的免疫力、抗病毒、抗细菌、抗应激同时并举，猪病的防控工作定会取得预期的效果。
57.猪肺炎支原体黏附基因P216片段的表达及黏附活性研究
- 刘茂军;杜海霞;冯志新;熊祺琰;白方方;王海燕;邵国青
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：本研究旨在研究猪肺炎支原体P216蛋白的黏附活性并初步建立猪肺炎支原体蛋白黏附模型。根据软件分析和文献报道从P216全基因中选取亲水性、抗原性、黏附性较好的目的片段，利用PCR从Mhp NJ株扩增P216基因片段，克隆到表达载体pET-32a(+)中，获得重组质粒pET-32a(+)／P216，经IPTG诱导获得重组蛋白，通过Western-blot和间接免疫荧光试验检测重组蛋白的免疫原性及黏附活性。结果表明，PCR扩增的目的基因大小为1636bp;SDS-PAGE检测重组蛋白分子量为80．1kDa;Western-blot检测表明重组蛋白能与Mhp阳性血清发生特异性反应;间接免疫荧光试验表明该蛋白对猪肺炎支原体黏附SJPL细胞产生占位抑制作用。结果提示，P216蛋白具有良好的黏附活性，能黏附SJPL细胞，从而为猪肺炎支原体其他黏附因子的研究奠定基础。
58.六品系猪SLA-2多肽结合区分子结构差异研究
- 白婧;李云岗;张强;赵德;冯磊;高凤山
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：为研究我国饲养的不同品系猪SLA-2抗原多肽结合区分子结构差异，设计引物，克隆了六品系猪SLA-2基因cDNA全长序列，并通过分子生物学软件分析其基因特征，比较各品系猪SLA-2分子结构差异，并通过同源模建显示变异位点的空间位置。结果显示，六品系猪SLA-2 cDNA全长为1119bp，其中3～1097为编码区，共编码364个氨基酸，分别在第125，188，227和283位置出现半胱氨酸残基，含有两对链内二硫键。六品系猪SLA-2胞外区氨基酸差异主要集中在α1区的62-70及77—82和α2区的143-156。同源模建显示这些变异位点均位于SLA-2多肽结合区的α螺旋结构上，推测可能与动物的抗病毒免疫特性有关。该研究结果为今后猪品系的改良及抗病毒免疫提供数据。
59.大豆异黄酮对蛋鸡小肠肠道黏膜结构的影响
- 王英华;姜义宝;杨玉荣
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：目的：本实验旨在研究大豆异黄酮对蛋鸡小肠肠道黏膜结构的影响。方法：选取200只1日龄健康的蛋鸡，随机平均分为2组：实验组(T组)日粮中添加大豆异黄酮提取物20 mg／kg，对照组(C组)饲喂基础日粮，分别于10，15，22，29，37日龄取材，制作石蜡切片及HE染色，显微成像系统测定十二指肠、空肠和回肠的绒毛长度、隐窝深度和肌层厚度。结果：随着日龄(15-37)的增长，T组蛋鸡十二指肠、空肠和回肠的肌层厚度和V／C值都有低于C组蛋鸡的趋势。结论：说明20 mg／kg的大豆异黄酮提取物的添加量对蛋鸡的小肠肠道黏膜结构有负面影响，不利于蛋鸡的生长。
60.食品中VBNC细菌检测的研究
- 王立新;李莹;袁翔;王甲慧;李文博;李影
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：细菌活的非可培养状态的发现，拓展了微生物学的研究领域。作为微生物学的一个全新概念，它的提出对传统的食品安全、水质监测、检验检疫、微生态制剂以及人畜共患病研究提出了新的挑战。本文结合VBNC细菌生物学特性和检测方法两个方面对VBNC细菌在食品安全监测中存在的隐患做一综述。
61.复合微生物饲料添加剂．金倍素产品在蛋鸡上的应用研究
- 白子金;贾卿;华霜
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：应用复合微生物饲料添加剂是畜牧行业发展的必然趋势，本文主要研究了复合微生物饲料添加剂在蛋鸡上的应用，采用三个添加剂浓度梯度，应用于38周龄的海兰褐蛋鸡，研究结果表明，微生物饲料添加剂能够提高蛋鸡的生产性能，其中0．1％的添加量最有利于蛋鸡产蛋率的提高，有利于改善鸡蛋蛋黄颜色和蛋壳强度，提高蛋鸡对钙和磷的表观消化率，且改善作用为最佳。当浓度提高到0．2％时，有利于减少蛋鸡产蛋不合格率、提高鸡蛋哈氏单位和增加蛋鸡对粗蛋白的表观消化率。当浓度提高到0．4％时，蛋鸡各项性能并无更加优化，因此，复合微生物饲料添加剂-金倍素在蛋鸡中应用时浓度以0．1％和0．2％最佳。
62.玛纳斯地区犬弓形虫病的血清流行病学调查
- 齐亚银;袁莎;屈勇刚;张再清;剡根强;王静梅
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：为了解玛纳斯地区犬弓形虫病的感染流行情况，本实验应用间接血凝试验对玛纳斯地区的13l份犬血清进行了弓形虫抗体检测。结果显示阳性血清为16份，阳性率为12．21％(16／131);公犬阳性率为12．33％(9／73)，母犬阳性率为12．07％(7／58)，玛纳斯县城镇犬的阳性率为10．53％(4／38)，农村犬的阳性率为14．29％(5／35)，养殖场及警犬基地犬的阳性率为3．23％(1／31)，流浪犬的阳性率为22．22％(6／27);健康犬的感染率为2．17％(1／46)，体温升高并伴有呼吸道疾病犬的感染率为17．65％(15／85)。结果显示不同生活环境和临床症状犬的弓形虫感染率有显著差异，不同性别犬感染率无明显差异(P>0．05)。
63.不同细菌中质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrD调查及原核表达研究
- 张安云;王红宁;雷昌伟;刘必慧
- 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议》 | 2012年
摘要：本试验旨在调查不同地域采集的不同菌种，对喹诺酮类药物(Quinolones)的耐药表型和质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrD的分子流行情况，并对qnrD基因进行克隆，原核表达。2006～2009年从四川、河南等地分离到的大肠杆菌(141株)，沙门氏菌(31株)，肺炎克雷伯氏菌(46株)，奇异变形杆菌(20株)，共238株，采用微量稀释法测定试验菌株对环丙沙星(CIP)等四种喹诺酮类药物的MIC值;运用PCR方法调查qnrD基因的流行、分布情况;将qnrD基因定向克隆到表达载体DET-30b(+)中，转化大肠杆菌感受态BL21(DE3)，经IPTG诱导阳性菌，通过SDS-PAGE检测qnrD基因的表达。试验菌株的总耐药率分别为：沙门氏菌(88．41％)，奇异变形杆菌(82．65％)，肺炎克雷伯氏茵(78.36％)，大肠杆菌(60．25％);qnrD基因的检出率分别为大肠杆菌(42．19％)，沙门氏菌(28．57％)，肺炎克雷伯氏菌(28．57％)，奇异变形杆菌(20．37％);SDS-PAGE分析表明，重组载体pET-qnrD可成功的在大肠杆菌中表达qnrD蛋白。本研究首次报道了qnrD基因在不同细菌中的流行情况，首次在大肠杆菌，肺炎克雷伯氏菌中发现了qnrD基因，对qnrD基因进行原核表达为后续试验提供了基础材料。