睾丸支持细胞

摘要： 旨在通过转录组测序和生物信息学分析评价PTD-FNK蛋白对猪睾丸支持细胞抵抗热应激能力的作用机制。将原代培养的睾丸支持细胞分为对照组、热应激(HS)组和热应激+PTD-FNK蛋白(HS+PR)组,HS+PR组添加0.1 nmol/L的PTD-FNK蛋白溶液作用1 h,对照组和HS组分别用等体积的PBS作用1 h,而后HS组和HS+PR组43°C热处理1 h,对照组37°C处理1 h。分别提取3组细胞总RNA,通过转录组测序进行分析,共获得76.75 Gb的有效数据(clean reads),各样品有效数据均达到7.11 Gb以上,测序质量较好。对照组与HS组相比共有270个差异表达基因(DEGs),其中上调基因193个,下调基因77个;HS组与HS+PR组相比共有3649个DEGs,其中上调基因1430个,下调基因2219个。基因本体(GO)注释结果显示,对照组与HS组相比以及HS组与HS+PR组相比,DEGs主要富集在细胞过程、细胞成分、结合、生物调节、代谢过程上,京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路主要富集在磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路以及癌症通路等。综合基因表达水平的分析,挖掘到包括分化抑制剂3(ID3)、组蛋白2A变异体(H2AX)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1C(CDKN1C)、肿瘤抑制蛋白p53(TP53)、诱导DNA损伤的转录因子3(DDIT3)、重组酶(RAD51)等调控细胞增殖与凋亡的DEGs。本研究为分析PTD-FNK蛋白的作用提供了新的参考和理论依据。

摘要： 【目的】建立一种高效制备从江香猪睾丸支持细胞(Sertoli cells, SCs)体外分离培养方法,为后续香猪雄性繁殖研究提供细胞材料,为同类小型香猪支持细胞的分离培养提供参考。【方法】采用0.1%Ⅳ型胶原酶和0.25%胰酶-EDTA组合酶消化法消化睾丸组织,差速贴壁法纯化支持细胞,使用含10%胎牛血清完全培养基培养支持细胞,观察其形态特征并记录生长曲线,经苏木精—伊红(HE)染色、RT-PCR及免疫荧光染色进行支持细胞的鉴定。【结果】组合酶法消化后可获得大量生精上皮细胞混悬液,刚分离的支持细胞呈圆形或椭圆形,分离培养5~6 h后SCs贴壁,贴壁后细胞形态呈梭形或不规则形,培养3~4 d后细胞之间呈紧密连接,可清晰观察到细胞核及细胞质中的颗粒状物质或小空泡;SCs分离后1~2 d增殖速度缓慢,培养3~6 d细胞增殖速度加快,活性增强,进入对数生长期,培养7~8 d后细胞增殖速率下降,原代支持细胞生长曲线呈S形;HE染色显示SCs细胞核为深紫色,细胞质呈淡红色;RT-PCR结果显示支持细胞特异性基因WT1、SOX9均表达;免疫荧光染色结果显示特异性基因GATA-4抗体免疫阳性率达90%以上。【结论】成功建立从江香猪睾丸支持细胞的原代培养方法。

摘要： 在哺乳动物中褪黑素尤为重要。褪黑素是松果体分泌的一种激素,具有调控动物生理节律、季节性繁殖和睾丸功能的作用。睾丸支持细胞自身更新分化能力很强,对精子生成发育非常重要,也是"保姆细胞"。很多研究已经表明褪黑激素对其他细胞和支持细胞调节有非常重要的作用,如增殖、分化、凋亡、炎症和氧化应激的改善作用。褪黑素不仅可以直接作用于睾丸支持细胞,还可以通过介导信号通路进而影响细胞核转录,达到调控目的。

摘要： 为探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对玉米赤霉烯酮(ZEA)致睾丸支持细胞(SCs)乳酸下降的保护效应,试验以Wistar大鼠原代睾丸支持细胞为材料,在采用CCK-8法确定ZEA及NAC处理细胞浓度的基础上,试验设对照组、ZEA组、NAC组及ZEA+NAC组,用乳酸测试盒检测各组SCs产生的乳酸含量;丙酮酸测试盒检测SCs中丙酮酸的含量;Western-blot检测SCs乳酸代谢中相关蛋白的表达情况。结果显示,CCK-8法确定的NAC保护ZEA致SCs乳酸下降保护效应试验中所采用的ZEA和NAC处理细胞的浓度分别为20μmol/L和10μmol/L。与对照组相比,ZEA组SCs细胞内外乳酸及丙酮酸含量呈极显著下降(P0.05),丙酮酸含量显著上升(P<0.05)。Western-blot结果显示,与对照组相比,ZEA组SCs细胞乳酸产生相关蛋白LDHA、MCT4表达量均显著下降(P<0.05),GLUT1呈现极显著下降趋势(P<0.01);与ZEA组相比,NAC+ZEA组中GLUT1蛋白表达量呈显著上升(P<0.05)。结果表明,NAC主要通过上调GLUT1蛋白表达量来缓解ZEA诱导的SCs乳酸代谢中丙酮酸含量下降的现象,从而恢复SCs对生殖细胞的能量供给。

摘要： 旨在建立牦牛与犏牛睾丸支持细胞分离培养及鉴定方案,比较两种牛睾丸支持细胞的生物学特性.本研究分别采集24月龄的3头健康公牦牛与3头F1代公犏牛睾丸组织作为2个样品组,其中每组3个生物学重复,分别通过混合酶消化、差速贴壁和饥饿处理分离得到两种牛的睾丸支持细胞,采用DMEM高糖及DMEM/F12培养基培养睾丸支持细胞,筛选更佳的培养体系.采用碱性磷酸酶染色、油红O染色和免疫荧光染色鉴定细胞表型特征,利用CCK8和RT-qPCR法分别检测细胞的增殖活性和标志功能基因的表达,进一步通过不同浓度丝裂霉素C处理两类支持细胞来评价两牛种支持细胞的耐受性及其作为饲养层细胞的潜能.结果 ,经形态、特殊染色及标志基因表达鉴定,成功分离到牦牛与犏牛睾丸支持细胞,建立了牦牛与犏牛睾丸支持细胞体外长期培养方案.发现DMEM高糖培养基更适用于睾丸支持细胞的增殖,两牛种支持细胞形态相似、轮廓清晰、呈现多边形或长梭形,牦牛睾丸支持细胞的体外增殖速率及活性远高于犏牛.调节精原细胞增殖分化相关基因(胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF)和转化生长因子β1基因(transforming growth factor-[β1,TGF-β1))的表达在犏牛支持细胞中分别下调了3.4与2.9倍(P＜0.05),基质细胞源性因子12基因(stromal cell-derived factor 12,CXCL12)的表达在犏牛上调了3.6倍(P＜0.05);调节睾丸发育的SRY-盒包含蛋白9基因(sex determining region Y-box9,SOX9)和睾丸支持细胞特异表达的Wilm肿瘤基因1(Wilms tumor gene1,WT1)在犏牛支持细胞中的表达分别下调了25.9(P＜0.01)与38.7倍(P＜0.01).与牦牛相比,犏牛睾丸支持细胞对于丝裂霉素C具有较差的耐受性,表现为细胞核质分界不清、胞质空泡化严重和悬浮死细胞增多.本研究成功建立了牦牛与犏牛睾丸支持细胞分离纯化与体外培养方案;与牦牛相比,犏牛睾丸支持细胞在增殖活性和睾丸生精细胞分化关键功能基因表达等方面均存在缺陷,这可能也是导致犏牛雄性不育的原因之一.

摘要： 目的 探究五子衍宗方对衰老大鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤的保护作用及其分子机制.方法 将30只16月龄SD雄性大鼠随机分为衰老模型组、五子衍宗方低剂量组(1g/kg)和五子衍宗方高剂量组(4 g/kg),另取2月龄SD雄性大鼠作为青年对照组,每组10只.给予含药饲料或普通维持饲料喂养4个月后,麻醉处死大鼠,取睾丸组织,HE染色观察其形态,统计各组大鼠生精上皮厚度和生精小管直径,电镜观察大鼠睾丸支持细胞紧密连接超微结构,Western blot检测大鼠睾丸紧密连接相关蛋白ZO-1和Occludin(闭锁蛋白)蛋白表达,双标免疫荧光法观察大鼠睾丸支持细胞ZO-1、Occludin、Claudin-11(细胞紧密连接蛋白)、p-p38MAPK(磷酸化p38丝裂原活化蛋白酶)、MMP-9(基质金属蛋白酶9)、Occludin表达和共定位.结果 HE结果显示,五子衍宗方可改善衰老大鼠睾丸组织形态结构,升高衰老大鼠生精上皮厚度和生精小管直径.电镜结果显示,五子衍宗方可改善衰老大鼠紧密连接的超微结构.Western blot结果显示,五子衍宗方可上调衰老大鼠ZO-1、Occludin、Claudin-11蛋白表达.免疫荧光结果显示,五子衍宗方可上调衰老大鼠睾丸支持细胞ZO-1、Occludin、Claudin-11表达,下调p-p38MAPK、MMP-9表达,减少MMP-9和Occludin共定位.结论 五子衍宗方可通过抑制p38MAPK/MMP-9通路来改善衰老大鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤.

摘要： 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)是一种由镰刀菌产生的霉菌毒素,具有较强的生殖毒性.目前,驴用饲草料中超量存在的DON已成为导致集约化饲养的公驴繁殖性能下降的重要因素.睾丸支持细胞具有营养精子发生,形成血睾屏障,维持睾丸功能等重要作用.为研究DON诱导驴睾丸支持细胞凋亡的分子机制,为驴饲草料DON含量的国家标准提供理论借鉴,减少集约化养驴生产繁殖性能下降,采用10μmol·L-1和30μmol·L-1浓度的DON处理体外培养的驴睾丸支持细胞.连续处理72 h后,通过转录组测序技术(RNA-seq)分析DON对驴睾丸支持细胞的影响途径.结果表明,DON能够通过肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)信号通路诱导驴睾丸支持细胞的凋亡,且具有呈剂量依赖性增加的趋势.同时,DON影响了支持细胞激素分泌,诱导支持细胞的癌向变化.综上所述,DON导致驴睾丸支持细胞凋亡,干扰其激素的分泌,增加支持细胞的癌变风险.

摘要： 该研究通过雷公藤甲素(TP)损伤TM4细胞构建生殖细胞损伤模型,探究了香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)酶解超滤组分对TP诱导的TM4小鼠(Mus musculus)睾丸支持细胞氧化损伤的保护作用,并检测了牡蛎酶解超滤组分的分子量分布与微量金属元素含量,比较分析了各个超滤组分对TP诱导的TM4细胞存活率以及还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醇(MDA)和活性氧(ROS)水平的影响.结果 表明,牡蛎酶解超滤组分富含铜(Cu)、锌(Zn)、锰(Mn)和硒(Se)等微量金属元素;经超滤分级,小分子与大分子物质得到有效分离;与模型组相比,各个超滤组分均不同程度地提高了经TP诱导的TM4细胞存活率,其中＜3、3～5和5～10ku超滤组分的细胞存活率高于＞10 ku超滤组分;而＜3 ku超滤组分可有效抵抗TP诱导的TM4细胞氧化应激损伤,减少细胞内ROS产生和脂质过氧化,增强TM4细胞的抗氧化能力.

摘要： 目的:观察PM2.5对睾丸支持细胞氧化应激和内质网应激水平的影响,探讨α-硫辛酸(ALA)对PM2.5致睾丸支持细胞内质网应激的抑制作用.方法:将原代培养的大鼠睾丸支持细胞进行分组:对照组(0 mg/L PM 2.5),ALA组(200 mg/L ALA),PM2.5组(100 mg/L PM2.5)和ALA+PM2.5组(200 mg/L ALA+100 mg/L PM2.5).各组以相应药物孵育24 h后,分别进行细胞存活率、细胞内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力水平及内质网应激相关蛋白GRP78、IRE1和CHOP表达水平检测.结果:PM2.5可引起大鼠睾丸支持细胞存活率降低,氧化应激水平升高,GRP78、IRE1和CHOP蛋白表达升高(P<0.05).ALA可拮抗PM2.5诱导的睾丸支持细胞存活率下降,减轻睾丸支持细胞氧化应激水平,抑制PM2.5介导的GRP78、IRE1和CHOP蛋白表达的上调(P<0.05).结论:ALA可通过降低睾丸支持细胞氧化应激水平,拮抗PM2.5引起的睾丸支持细胞内质网应激.

摘要： 该研究通过雷公藤甲素(TP)损伤TM4细胞构建生殖细胞损伤模型,探究了香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)酶解超滤组分对TP诱导的TM4小鼠(Mus musculus)睾丸支持细胞氧化损伤的保护作用,并检测了牡蛎酶解超滤组分的分子量分布与微量金属元素含量,比较分析了各个超滤组分对TP诱导的TM4细胞存活率以及还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醇(MDA)和活性氧(ROS)水平的影响。结果表明,牡蛎酶解超滤组分富含铜(Cu)、锌(Zn)、锰(Mn)和硒(Se)等微量金属元素;经超滤分级,小分子与大分子物质得到有效分离;与模型组相比,各个超滤组分均不同程度地提高了经TP诱导的TM4细胞存活率,其中10 ku超滤组分;而<3 ku超滤组分可有效抵抗TP诱导的TM4细胞氧化应激损伤,减少细胞内ROS产生和脂质过氧化,增强TM4细胞的抗氧化能力。

摘要： 目的:探究乙酸铅、氯化镉单独或联合染毒对小鼠睾丸支持细胞乳酸(LD)水平的影响. 方法:将相同密度接种的小鼠睾丸支持细胞株(15P-1细胞)随机分为14组,分别为对照(空白培养基)组和乙酸铅(1、10、20、30、60μmol/L)、氯化镉(0.5、5、10、15、30μmol/L)单独染毒组及乙酸铅+氯化镉联合染毒(1+0.5、10+5、20+10μmol/L)组,染毒24h后,测定细胞内葡萄糖摄取量、乳酸脱氢酶(LDH)活力以及细胞内外LD含量和pH值. 结果:(1)与对照组相比,随着乙酸铅染毒浓度增高,细胞内LD水平呈先升后降趋势,细胞外各组LD浓度均低于对照组;细胞内外各组pH值均逐渐升高;细胞内葡萄糖摄取量随染铅浓度升高而逐渐升高;与此同时,LDH活力则均低于对照组(P＜0.05).(2)与对照组组比,氯化镉染毒组细胞内LD含量逐渐升高,而细胞外LD水平呈先升后降趋势;细胞内外pH值普遍高于对照组;葡萄糖摄取量和LDH活力均随染毒浓度增加呈现不同程度的升高(P＜0.05),(3)联合染毒后细胞内外LD浓度均呈现先升后降趋势;细胞内外pH值则不断升高;葡萄糖摄取量虽随染毒浓度增加而增高,但均值均低于对照组;LDH活力亦呈现明显升高趋势. 结论:乙酸铅、氯化镉对小鼠睾丸支持细胞乳酸水平均有一定影响,具体途径可能涉及LDH活力变化或/和细胞间乳酸转运.

摘要： 目的：探讨Cx43在DBP致雄性大鼠睾丸支持细胞血睾屏障损伤中的作用. 方法：18-21天龄雄性SD大鼠颈椎脱臼法处死,取双侧睾丸分离支持细胞培养.将支持细胞分为:DBP组(50μg·mL-1DBP)、缝隙连接(GJIC)阻断剂组(10μg/ml18-α-甘草次酸)、溶剂对照组(0.1％DMSO组).利用细胞免疫荧光检测Cx43/ZO-1蛋白的表达,并用Western blotting观察各组细胞中Cx43/ZO-1蛋白表达水平. 结果：细胞免疫荧光结果显示:细胞染毒培养24h后,DMSO组,睾丸支持细胞Cx43、ZO-1蛋白广泛表达;DBP组Cx43、ZO-1蛋白表达减少.加入GJIC阻断剂后,Cx43、ZO-1蛋白表达明显下降.Western blotting结果显示:当CX43蛋白被阻断后,支持细胞骨架结构主要蛋白ZO-1及Vimentin蛋白表达明显下降(P＜0.05). 结论：DBP对睾丸组织的损伤作用于支持细胞Cx43蛋白,由此影响血睾屏障的完整性及功能.

摘要： 精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是指睾丸内存在于曲细精管基底膜上,既可以自我更新维持,又可定向分化为精子的一类精原细胞.作为精子生成源泉的精原干细胞,在研究及治疗非梗阻性无精症患者中的有着广阔的临床前景,本文就睾丸支持细胞对精原干细胞的作用及主要相关因子进行综述.在睾丸成体细胞中，SCs对SSCs的影响最大，SCs为包括SSCs在内的各级生精细胞提供了发育的外部支架之外，还为其中的生精细胞提供了生长发育的微环境。作为“保姆细胞”的SCs通过分泌各类因子及物质对SSCs的自我更新和分化进行精确的调节，同时为SSCs提供了特殊的免疫豁免环境。SCs还能通过调控其他成体细胞，从而间接影响SSCs的功能，在精子发生中发挥着无可替代的作用。

摘要： 目的：探讨C-型利钠肽(C-type natriuretic peptide,CNP)及其特异性受体NPR-B(natriuretic peptide receptor B)在体外培养大鼠睾丸支持细胞的表达.rn 方法：取18-22天龄雄性SD大鼠睾丸,采用0.25％胰蛋白酶、0.1％透明质酸酶和0.1％胶原酶依次消化法分离睾丸支持细胞,并用20mmol/L Tds-HCl低渗处理纯化支持细胞,应用western blot检测NPR-B在支持细胞的表达情况,同时采用间接免疫荧光技术检测CNP及NPR-B在支持细胞的表达.rn 结果：CNP及其受体NPR-B在体外培养大鼠睾丸支持细胞中均有表达.rn 结论：CNP及其受体NPR-B在睾丸支持细胞呈阳性表达,可能在雄性生殖中发挥重要调控作用.

摘要： 目的:研究p,p'-DDE对离体培养大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell)细胞内ERK MAPK响应机制.rn 方法:从大鼠睾丸组织中分离支持细胞进行离体原代培养,以0,10,30,50μmol/L的p,p’-DDE染毒,用MTT比色法、SABC法和Western blotting法来检测细胞活性以及p-ERK的表达情况。rn 结果:在MTT试验中,支持细胞活性随着p,p’-DDE剂量的增高而逐渐降低；在免疫组化试验中细胞内p-ERK随p,p’-DDE剂量的增高而染色加深；同时,在western blotting实验中用50μmol/L的p,p’-DDE染毒,支持细胞内p-ERK在染毒后12h、24h较染毒前有统计学意义(P＜0.05).rn 结论:p,p’-DDE导致支持细胞细胞活性降低；同时激活细胞内ERK磷酸化,并且随着作用时间的增加,ERK的磷酸化表达12h,24h明显增加,这预示着ERK磷酸化可能参与信号通路的传导,可能会影响下游通路进而影响到基因的转录和表达.

摘要： 本研究目的是在寻求一种能够有效地分离、纯化以及培养小鼠睾丸支持细胞的基础上，采用非渗透性冷冻保护剂低密度脂蛋白、卵磷脂和海藻糖冷冻支持细胞，检测其冷冻保护效果。结果提示，本研究采用的海藻糖、LDL和卵磷脂作冷冻保护剂，其复苏率平均达到70%左右，其中卵磷脂效果最好，复苏率为72.86%。通过对比三者的冷冻保护效果，可探索最佳的冷冻保护液体系，为支持细胞的长期保存奠定基础。

摘要： 大量的临床与实验研究资料表明，雄激素及其受体(Androgen receptor，AR)在精子发生过程中具有非常重要的作用。为了筛选睾丸支持细胞AR直接调控的靶基因，本实验室采用数字化表达谱测序技术(Digital gene expression sequencing)，比较成年SCARKO小鼠与WT小鼠睾丸组织基因表达谱的差异，发现5141个表达差异两倍以上的基因，其中在SCARKO小鼠表达升高的基因2865个，表达下降的基因2276个；比较雄激素处理前后的小鼠睾丸支持细胞系TM4基因表达谱的差异，发现2314个差异表达两倍以上的基因，其中表达升高的基因1354个，表达下降的基因960个；比较SCARKO小鼠和雄激素处理前后的小鼠睾丸支持细胞系TM4基因表达谱的结果，两组数据中共有的基因有603个，其中受雄激素上调的基因为164个，而受雄激素下调的基因有439个。在上述研究的基础上，结合生物信息学分析技术，初步筛选出一批AR靶调控基因。采用PCR、Western blot及免疫组织化学的方法，确定了泛素结合酶2b(Ubiquitin-conjugating enzyme E2B，Ube2b)和热休克转录因子1（Heat shock transcription factor l，Hsfl）在AR特异性敲除小鼠和野生型(WT)小鼠睾丸组织中的表达差异以及雄激素对TM4细胞系中UBE2B和HSF1表达的影响；采用凝胶电泳迁移实验(EMSA)、染色质免疫共沉淀实验(ChIP assay)和双荧光素酶报告基因检测系统(Luciferase assay)，确定了睾丸支持细胞Ube2b和Hsfl为AR直接调控的靶基因。

摘要： 本试验主要探讨牛DAZL基因真核表达载体pEGFP-N3-DAZL的构建，以期为DAZL基因真核表达载体转染睾丸支持细胞、以及超表达引起的细胞表型及基因表达变化的检测提供前期的基础和试验依据。

摘要： 本试验采用86头澳大利亚系种公牛作为研究样品，根据GenBank中牛的FSHβ基因序列，设计引物序列。研究发现有6头种公牛为杂合子、80头为野生型.未发现纯合突变型。根据测序及荧光定量结果定义的基因型进行分析，该种公牛群体中FSHβ基因AA基因型频率较高，没有检测到BB基因型，等位基因A在群体中占有绝对优势。FSH的合成、分泌和功能对哺乳动物的繁殖功能有重要的作用，FSH是一个垂体促性腺激素，对睾丸支持细胞的分化和维持精液质量有重要作用。

摘要： 随着科学技术的进步和工业化社会的发展，环境污染严重影响人类生殖系统功能已是不争的事实，而且男性生殖健康受此影响尤为突出。目前已知影响生物内分泌的环境内分泌干扰物大约有近百种，通过食物链在生物和人体脂肪组织中累积浓集，从而增强其生物药效性，包括致癌，致突变和对生殖的毒性。大多数环境干扰物对生殖系统的损害机制目前尚不明确，就目前所知，环境因素对男性生育力的影响，可能主要是通过两条途径:一是作用于“下丘脑-垂体-睾丸”性腺轴，抑制或增强类固醇激素的分泌或清除，从而影响精子的发生，导致男性不育和性功能障碍；二是直接作用于睾丸等周围环节，与靶器官发生化学反应，通过Fas/FasL系统导致生殖细胞凋亡增加，影响睾丸支持细胞和精子发生过程，造成可恢复性或永久性生育障碍。EDs类物质可以在睾丸、附睾及精囊腺等多个生殖系周围环节多方面影响男性生育力。国内外众多的基础与临床研究已经表明，环境污染物危及男性生育力，其主要表现为精子密度和精液质量等方面的下降与恶化。而且，环境污染物还可能会引起男性生殖系统畸形和肿瘤的发病率增高。人们发现许多EDs类物质可能影响雄性动物的生育力，并对它们的作用机制有所了解。但是，由于在评价人类男性生育力和杀虫剂接触史方面比较困难，因此，EDs类物质除了少数几种有足够的证据证明其对男性生育系统有影响之外，其他大多数缺乏足够的临床证据。此外，由于动物实验与人体试验之间有较大差别，因此，应有所保留地对待现有的研究结果。今后应加强环境内分泌干扰物(endocrine disruptors,EDs)对男性生育力影响方面的研究，以减少环境污染物可能对男性生育力的不利影响。

摘要： 本发明公开了一种新生牛睾丸支持细胞永生化细胞系及其建立方法和应用。所述的新生牛睾丸支持细胞永生化细胞系，命名为新生牛睾丸支持细胞永生化细胞系hTERT‑NBSC，其保藏编号CCTCC NO：C2018201。试验发现，hTERT‑NBSC可以连续传代65代以上，且生长增殖特性保持不变。该细胞系对接种ORFV较为敏感，可以高效增殖ORFV病毒，且可以保证病毒的均一、稳定。用该细胞系所增殖的ORFV病毒滴度与新生牛睾丸支持细胞相当，且细胞分种率高于NBSC，分种率可达1:3。同时利用该传代细胞系来制备疫苗，简化了生产工艺、缩短了生产周期，降低了生产成本，同时还保证了制备得到的羊传染性脓疱病疫苗的质量稳定。因此，本发明的提出对羊传染性脓疱病疫苗的规模化生产提供了新的技术手段。

摘要： 本发明公开了一种羔羊睾丸支持细胞永生化细胞系及其建立方法和应用。所述的羔羊睾丸支持细胞永生化细胞系，命名为羔羊睾丸支持细胞永生化细胞系hTERT‑LSC，其保藏编号为CCTCC NO：C2018202。试验发现，hTERT–LSC细胞系可以连续传代60代以上，且生长增殖特性保持不变，该细胞系对接种羊痘病毒较为敏感，可以高效增殖羊痘病毒，且可以保证病毒的均一、稳定。用该细胞系所增殖的羊痘病毒滴度与羔羊睾丸支持细胞LSC相当，且细胞分种率高于LSC，分种率可达1:3。同时利用该永生化细胞系来制备疫苗，简化了生产工艺、缩短了生产周期，降低了生产成本，同时还保证了制备得到的羊痘病毒疫苗的质量稳定。因此，本发明的提出对羊痘病毒疫苗的规模化生产提供了新的技术手段。

摘要： 本发明公开了一种心肌细胞与睾丸支持细胞的联合培养方法。所述的联合培养方法包括以下步骤：(1)睾丸支持细胞的培养；(2)心肌组织收集、处理及消化，以获得心肌细胞；(3)采用双层培养法，用睾丸支持细胞联合培养心肌细胞，其中上层为睾丸支持细胞层，下层为心肌细胞；(4)分离、纯化培养的心肌细胞。本发明通过试验发现，用睾丸支持细胞联合培养心肌细胞，相比常规培养组，联合培养组细胞生长速度加快，细胞生长更加旺盛。联合培养组细胞铺满单层需要3‑4d，而常规培养组需要4‑5d。由此证明，睾丸支持细胞可有效促进心肌细胞生长。这种简单且低成本的心肌细胞培养方法，对心脏的生长、发育、生理、代谢、病理研究有重要的现实意义。

摘要： 本发明公开了一种羔羊睾丸支持细胞自然传代细胞系及其在羊痘病毒分离培养和增殖中的用途。本发明的细胞系是通过对羔羊睾丸原代细胞进行分离和纯化得到羔羊睾丸支持细胞后，经过自然传代得到的一种羔羊睾丸支持自然传代细胞系。研究发现，该细胞系对于接种羊痘病毒较为敏感，用该细胞系所增殖的病毒滴度较新生羊睾丸原代细胞、Vero细胞以及BHK

摘要： 本发明公开了一种羔绵羊睾丸支持细胞、睾丸支持细胞亚克隆及其分离方法和应用，其中，所述支持细胞SCST的保藏编号为CCTCC No.C2019203，将其转染SV40大T抗原基因使其永生化，然后进行压力粗筛、压力分种以及持续传代，得到细胞亚克隆SCST‑T F13，其保藏编号为CCTCC No.C202130，可用于牛结节性皮肤病、羊痘及羊口疮等病毒的分离及规模化繁殖。所述细胞亚克隆可以用含国产血清的培养基培养，降低了生产成本，适合规模化生产应用。本发明的细胞亚克隆与常规原代细胞相比，而且能够明显提高牛结节性皮肤病毒的分离率，且牛结节性皮肤病毒的致病变时间明显缩短、分离病毒的拷贝数比传统细胞提高100倍以上，可以为牛结节性皮肤病毒的规模化繁殖及病毒感染致病机制研究提供工具。

摘要： 本发明提供一种将哺乳动物成纤维细胞重编程为类睾丸支持细胞(CiSCs)的方法，通过该方法获得的类睾丸支持细胞(CiSCs)及其应用。本发明的方法易于操作，且未引入外源性基因，有望开发为一种广泛应用的获取非睾丸来源支持细胞的方法，不仅为生殖系统疾病的基础研究和药物开发提供细胞模型和理论基础，还为睾丸支持细胞在再生医学领域的应用带来广泛前景。

摘要： 本发明公开了一种牛睾丸支持细胞癌细胞及其在痘病毒分离、培养中的应用。所述的牛睾丸支持细胞癌细胞，命名为牛睾丸支持细胞癌细胞BTSCC，其保藏编号为CCTCC NO：C201931。进一步的，本发明还提出了所述的牛睾丸支持细胞癌细胞在分离、培养ORFV和GTPV等痘病毒中的应用。该细胞对ORFV和GTPV细胞毒较为敏感，可以高效增殖ORFV和GTPV病毒，且可以保证病毒的均一、稳定。用该细胞所增殖的病毒滴度与新生牛睾丸支持细胞(NBSC)相当，且生长速度很快，分种率很高，可以用低血清培养条件下生长。利用该细胞分离、培养ORFV和GTPV病毒可提高试验效率，降低试验成本，同时保证了用其制备的疫苗质量的稳定。本发明的提出对痘病毒的培养及其疫苗的规模化生产提供了新的技术手段。

摘要： 本发明公开了一种牛睾丸支持细胞诱导多能干细胞的方法，属于干细胞领域，包括如下步骤：步骤1、分离牛睾丸支持细胞；步骤2、培养牛睾丸支持细胞；步骤3、将编码Oct4、Sox2、c‑Myc和Klf4四种转录因子转入牛睾丸支持细胞中，产生多能性干细胞。与现有技术相比，本发明充分利用了牛睾丸支持细胞差异贴壁的特点，培养出了形态均一的牛睾丸支持细胞。由于牛睾丸支持细胞来自于肉用犊牛具有较高的重编程能力。以牛睾丸支持细胞代替牛成体成纤维细胞、间充质干细胞等作为来源细胞制备诱导多能干细胞，不仅细胞获取简便而且重编程率高。

摘要： 本发明公开了一种新生牛睾丸支持细胞永生化细胞系及其建立方法和应用。所述的新生牛睾丸支持细胞永生化细胞系，命名为新生牛睾丸支持细胞永生化细胞系hTERT‑NBSC，其保藏编号CCTCC NO：C2018201。试验发现，hTERT‑NBSC可以连续传代65代以上，且生长增殖特性保持不变。该细胞系对接种ORFV较为敏感，可以高效增殖ORFV病毒，且可以保证病毒的均一、稳定。用该细胞系所增殖的ORFV病毒滴度与新生牛睾丸支持细胞相当，且细胞分种率高于NBSC，分种率可达1:3。同时利用该传代细胞系来制备疫苗，简化了生产工艺、缩短了生产周期，降低了生产成本，同时还保证了制备得到的羊传染性脓疱病疫苗的质量稳定。因此，本发明的提出对羊传染性脓疱病疫苗的规模化生产提供了新的技术手段。

摘要： 本发明公开了一种羔羊睾丸支持细胞永生化细胞系及其建立方法和应用。所述的羔羊睾丸支持细胞永生化细胞系，命名为羔羊睾丸支持细胞永生化细胞系hTERT‑LSC，其保藏编号为CCTCC NO：C2018202。试验发现，hTERT–LSC细胞系可以连续传代60代以上，且生长增殖特性保持不变，该细胞系对接种羊痘病毒较为敏感，可以高效增殖羊痘病毒，且可以保证病毒的均一、稳定。用该细胞系所增殖的羊痘病毒滴度与羔羊睾丸支持细胞LSC相当，且细胞分种率高于LSC，分种率可达1:3。同时利用该永生化细胞系来制备疫苗，简化了生产工艺、缩短了生产周期，降低了生产成本，同时还保证了制备得到的羊痘病毒疫苗的质量稳定。因此，本发明的提出对羊痘病毒疫苗的规模化生产提供了新的技术手段。