冷冻保护剂

摘要： 目的探索不同冻存保护剂对2周龄未性成熟小鼠睾丸生精细胞冻存的影响。方法取2周龄雄性小鼠两步酶法制备睾丸细胞悬液(TCS),根据DMEM/F12培养基中不同浓度二甲基亚砜(DMSO)、蔗糖、海藻糖的组合将冻存保护剂分为5组:A组含10%DMSO和10%胎牛血清(FBS);B组含10%DMSO、0.1 mol/L蔗糖和10%FBS;C组含10%DMSO、0.1 mol/L海藻糖和10%FBS;D组含15%DMSO、0.1 mol/L蔗糖0.1 mol/L海藻糖和10%FBS;E组含10%DMSO、0.1 mol/L蔗糖、0.1 mol/L海藻糖和10%FBS。将5组睾丸细胞采用程序化冻存于液氮中,2月后进行复苏。台盼蓝检测细胞活性,计算各组细胞冻存后的细胞活率和复苏率,流式细胞仪检测睾丸生精细胞的凋亡和线粒体膜电位变化,以新鲜的2周龄小鼠睾丸生精细胞作为对照组。结果与冻存前比较,冻存复苏后各组的细胞活率均显著下降(P<0.05),且冻存组中E组细胞活率下降程度最低[(83.03±1.61)%]、细胞复苏率最高[(87.37±1.66)%](P<0.05)。细胞凋亡比较中,冻存复苏后各组细胞凋亡率均显著高于对照组[(18.77±0.95)%](P<0.05),其中A组细胞凋亡率最高[(57.08±2.40)%],E组细胞凋亡率最低[(29.62±1.95)%](P<0.05)。线粒体膜电位比较中,各组复苏后细胞线粒体膜电位均低于冻存前,除E组外,其余4组均显著低于对照组(P<0.05),在冻存的5组中E组下降程度最低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论不同冷冻保护剂对未性成熟小鼠睾丸生精细胞冻存效果有显著影响,其中含10%DMSO、0.1 mol/L蔗糖、0.1 mol/L海藻糖及10%HBS组合冷冻剂方案是冻存未性成熟小鼠睾丸生精细胞较适宜的冷冻保护剂方案。

摘要： 目的 探讨精液中冷冻保护剂加入比例对冷冻复苏后精子活动力的影响。方法 20例人类精子库精子捐献志愿者,以手淫法留取精液4 ml,按照1︰3分为甲组(1 ml)、乙组(3 ml)。制备蛋黄甘油复合型冷冻保护剂并依据1︰1、1︰3的保护剂/精浆配比向两组样本中各加入1 ml冷冻保护剂。对比两组冷冻前、冷冻复苏后前向运动精子百分比、精子活力。结果 冷冻前,两组前向运动精子百分比对比差异无统计学意义(P>0.05);冷冻复苏后,两组前向运动精子百分比均较冷冻前明显下降,但乙组前向运动精子百分比(42.36±4.63)%高于甲组的(33.48±4.56)%,差异具有统计学意义(P0.05);冷冻复苏后,两组精子活力均较本组冷冻前明显下降,但乙组精子活力(55.64±3.12)%高于甲组的(52.14±3.08)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 精液中冷冻保护剂加入比例影响冷冻复苏后精子活动力,相比于保护剂/精浆配比1︰1,配比1︰3复苏后精子活动力保护的更好,下降幅度更小,减少了冷冻带来的精子活动力损伤。

摘要： 目的探讨深低温保存中不同浓度附子多糖(Fuzi polysaccharide,FPS)对腹主动脉线粒体结构和功能的影响。方法显微镜下取48只SD大鼠腹主动脉,随机分为新鲜组、保存对照组(灭菌注射用水)、多糖保存组(FPS 0.1,1,10,20 mg/ml)。新鲜组取材后立即采用透射电镜观察线粒体内部超微结构变化,紫外-可见光分光光度计检测线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性,酶标仪检测ATP酶(Na^(+)-K^(+)-ATP酶、Ca ^(2+)-ATP酶)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)活力和丙二醛(MDA)含量等指标对腹主动脉线粒体结构和功能进行综合评价;保存对照组和多糖保存组取腹主动脉后于-196°C液氮内保存1周后进行上述指标检测。结果与新鲜组比较,保存对照组线粒体结构完整性显著降低,复合体活性、ATP酶活力和抗氧化能力均大幅度下降(P<0.01),MDA含量明显升高(P<0.01)。与保存对照组比较,多糖保存组线粒体损伤减轻,复合体活性、ATP酶、抗氧化物酶活力增强和MDA含量降低,并从浓度1 mg/ml开始差异有统计学意义,当浓度达10 mg/ml时达峰值。结论深低温保存造成了线粒体结构和功能损害;附子多糖通过改善线粒体功能障碍减轻氧化应激损伤,具有保护腹主动脉线粒体结构和功能的作用。

摘要： 目的评估乙二醇、丙二醇、甘油、二甲基亚砜(DMSO)四种冷冻保护剂玻璃化保存屈指深肌腱的效果,为同种异体肌腱玻璃化保存提供依据。方法收集截肢术后放弃肢体的屈指深肌腱,分别放入30%乙二醇、丙二醇、甘油、DMSO组和对照组行透射电镜观察,羟脯氨酸含量及生物力学检测。结果透射电镜结果:对照组细胞核浓缩明显,核膜结构模糊,可见线粒体膜破裂,实验组胞膜完整,线粒体结构部分破坏,细胞核中染色质分布均匀。羟脯氨酸含量检测结果:实验组羟脯氨酸含量较对照组显著升高(P0.05),乙二醇组、DMSO组羟脯氨酸含量较甘油组显著升高(P0.05);与丙二醇组比较,乙二醇组伸长率显著升高(P0.05);与DMSO组比较,乙二醇组伸长率无明显差异(P>0.05)。结论乙二醇、丙二醇、DMSO对屈指深肌腱的玻璃化保存有保护作用,甘油的保护作用不明显;乙二醇作为冷冻保护剂可能更适合于屈指深肌腱的玻璃化保存。

摘要： 公猪精子对温度变化十分敏感,在冷冻保存过程中极易受到冷冻损伤,虽然Polge等[1]在1956年首次运用冻精技术进行人工授精(AI)并获得仔猪,但是到目前为止世界范围内猪冷冻精液应用比例仍没超过1%。冷冻保护液是影响冻精冷冻效果的主要因素之一,目前常用以卵黄为基础的稀释液添加冷冻保护剂来进行冻精研究。常用的冷冻保护剂有甘油、DMSO(二甲基亚砜)、乙二醇等,这些渗透性冷冻保护剂虽然具有优异的抗冻作用,但均具有细胞毒性,所以多数会在冷冻前进行添加,以降低不良影响.

摘要： 随着白菜游离小孢子培养技术的不断优化,通过诱导小孢子胚状体获得大量DH系在白菜育种等科研领域得到了广泛应用。但小孢子供体植株受生长季节、生长期等影响,无法长期持续获取高生活力白菜小孢子,成为目前阻碍白菜细胞工程相关研究顺利推进的重要问题之一。本试验利用超低温技术对10份白菜材料小孢子开展冻存复苏研究,结果表明:利用改良B5液体培养基作为冷冻保护剂,白菜小孢子生活力明显高于传统冷冻保护剂二甲基亚砜处理的白菜小孢子;小孢子-80°C(冰箱)和-196°C(液氮)冻存180 d后生活力仍保持在85%以上,且两个温度处理间差异不显著,实际应用中可选择-80°C冰箱冻存替代传统-196°C液氮冻存;利用0.5 mL冻存管保存的白菜小孢子最适复苏条件为37°C恒温水浴40 s,在-80°C冰箱冻存90 d后复苏的小孢子平均生活力达87.9%。复苏冻存30、60、90 d后易出胚材料的白菜小孢子诱导获得了胚状体及再生植株;复苏冻存180 d的白菜小孢子在高温热激诱导条件下仍可感应胁迫,表现为体积膨大,且具胚胎发生能力的小孢子能够进行细胞分裂。本试验为国内首次开展的白菜小孢子超低温冻存研究,建立了白菜小孢子超低温冻存复苏体系,对白菜小孢子培养以及细胞工程相关研究中试验样品的长期保存提供技术支持,并为芸薹属植物小孢子的长期冻存研究提供参考。

摘要： [目的]以β-半乳糖苷酶脂质体的直径、分散系数(PDI)和Zeta电位为检测指标,联合透射电子显微镜法,创建一种利用脂质体模拟细胞膜筛选冷冻干燥保护剂的模型,从而快速筛选出瑞士乳杆菌冷冻干燥保护剂,有效提高乳酸菌冻藏菌种的活性。[方法]拟采用800 W功率超声10 min的方法来获取优质β-半乳糖苷酶脂质体,添加不同的冻干保护剂后进行冻存。以冻干脂质体水解后β-半乳糖苷酶渗透率为评价指标,评价冷冻干燥保护剂的保护效果。[结果]海藻糖浓度为100 mg/L、透明质酸浓度为2 mg/L时,β-半乳糖苷酶渗透速率最慢。选取瑞士乳杆菌9(LH-9)对上述结果进行验证,发现冻干保护剂对LH-9有同样的保护作用。[结论]该研究为今后乳酸菌冻干保护剂的筛选研究提供新思路。

摘要： 目的 评估二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)、甘油、丙二醇、乙二醇玻璃化法保存人指固有神经中的保护效果,筛选合适的人指固有神经冷冻保护剂。方法 取截肢手术后患者放弃肢体的指固有神经,分为实验组(30%DMSO组、甘油组、乙二醇组、丙二醇组)和空白对照组进行玻璃化法于液氮(-196°C)中保存3周。复温后进行光学显微镜观察、共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)检测、指固有神经片段的神经生长因子(nerve growth factor,NGF)检测。结果 光镜观察:空白对照组神经鞘膜结构模糊,神经纤维排列疏松、紊乱;实验组神经鞘膜较为完整,神经纤维排列相对整齐、紧凑。LSCM结果:采用钙黄绿素-AM (calcein-AM)和碘化丙啶(propidium iodide,PI)双荧光染色后空白对照组神经纤维绿色荧光强度较弱,红色荧光强度较强。实验组绿色荧光较空白对照组均增强,红色荧光强度均减弱。ELISA检测结果:空白对照组12.95±3.03pg/ml、乙二醇112.64±3.54pg/ml、30%DMSO109.51±9.98pg/ml、甘油61.47±3.34pg/ml、丙二醇62.53±3.64pg/ml。结论4种冷冻保护剂对人指固有神经的玻璃化法保存均有保护作用,其中乙二醇效果最佳,更适合用于人指固有神经玻璃化保存。

摘要： 冷冻保护剂(CPA)具有减轻超低温保存损伤的作用,在血管超低温保存中被广泛应用。常见的CPA分为渗透性CPA(如二甲基亚砜、甘油)和非渗透性CPA(如糖类和高分子聚合物)。此外,在超低温保存液中添加间充质干细胞以及一些中药提取物可以促进血管再生,具有保护血管的作用。近年来采用玻璃化超低温保存技术可以有效保护组织及细胞的结构及功能,玻璃化超低温保存技术联合使用无毒性冷冻保护剂或低毒性冷冻保护剂组合可以较好地减少血管冷冻损伤。

摘要： 目的 评估二甲基亚砜、甘油、丙二醇、乙二醇四种冷冻保护剂在深低温保存人小口径动脉时的保护效果,筛选合适的人小口径动脉冷冻保护剂及其配比浓度,为血管深低温保存提供一定的理论依据.方法 本研究收集2016年9月至2018年9月遵医五院行截肢术后的小口径动脉45个片段,每一片段0.5cm,将45个片段按冷冻保护剂的类型和浓度随机分为9组(8个实验组,1个对照组),每组5个片段,分别为:二甲基亚砜30％组、二甲基亚砜40％组、甘油30％组、甘油40％组、丙二醇30％组、丙二醇40％组、乙二醇30％组、乙二醇40％组和对照组.实验组分别使用不同浓度及类型的冷冻保护剂深低温保存30天,对照组不添加冷冻保护剂深低温保存30天.快速复温后石蜡包埋并制片,运用HE染色法观察人小口径动脉的组织结构变化,应用免疫组织化学染色法检测人小口径动脉血管内皮生长因子(vascular endothelia growth factor,VEGF)的表达水平.应用统计学方法对组织结构变化和VEGF的表达水平进行对比,分析各组间的差异有无统计学意义.结果 1.HE染色结果:对照组见内皮细胞大片脱失,内膜结构紊乱,内弹性膜大片断裂、缺失,平滑肌结构损伤;30％乙二醇组见内皮细胞大片脱失,内弹性膜部分断裂、缺失,平滑肌结构部分破坏;40％乙二醇组见内皮细胞大片脱落,部分内弹性膜出现断裂,侵及平滑肌细胞结构;30％丙二醇组见内皮细胞存在小片状脱失,内皮细胞与内弹性膜间有部分空隙,内弹性膜偶见断裂;40％丙二醇组见内皮细胞存在局部脱失,内皮细胞与内弹性膜间有少部分空隙,内弹性膜无断裂;30％甘油组见内皮细胞散在脱失,内皮下层与内弹性膜间见个别空隙,平滑肌细胞结构良好;40％甘油组见内皮细胞连续,内皮下层、内弹性膜及平滑肌细胞结构良好;30％二甲基亚砜组见内皮细胞点状脱落,内弹性膜、中层平滑肌细胞排列规则;40％二甲基亚砜组见内皮细胞连续,排列规则有序,内皮下层、内弹性膜及平滑肌细胞结构良好.2.VEGF免疫组化检测结果:在保护剂浓度分别为30％和40％时,与对照组比较,甘油组、二甲基亚砜组、丙二醇组三组小口径动脉VEGF平均光密度值显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,乙二醇组小口径动脉VEGF平均光密度值升高,差异无统计学意义(P＞0.05);与乙二醇组比较,二甲基亚砜组、甘油组、丙二醇组三组小口径动脉VEGF平均光密度值显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与丙二醇组比较,甘油组、二甲基亚砜组二组小口径动脉VEGF平均光密度值显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与甘油组相比较,二甲基亚砜组小口径动脉VEGF平均光密度值显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).随着保护剂浓度的增加,二甲基亚砜组、甘油组、丙二醇组小口径动脉VEGF平均光密度值显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05),乙二醇组小口径动脉VEGF平均光密度值显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 1.二甲基亚砜、甘油、丙二醇对人小口径动脉的深低温保存有保护作用,乙二醇的冷冻保护作用不明显.2.二甲基亚砜对人小口径动脉的冷冻保护效果较甘油、丙二醇和乙二醇好.3.浓度不同时,冷冻保护剂对人小口径动脉的保护效果不同.

摘要： 在卵母细胞的低温保存过程中,高浓度冷冻保护剂的添加和洗脱是一个必不可少的步骤.但冷冻保护剂的添加与洗脱过程会对细胞造成渗透损伤和毒性损伤.为了优化冷冻保护剂的添加过程与洗脱过程,减小细胞损伤,本研究对猪MⅡ期卵母细胞进行冷冻保护剂的添加和去除,考察了细胞冷冻/解冻液的渗透压对细胞存活率的影响,与此同时,讨论了卵母细胞在冷冻液、溶解液中的暴露时间和溶解液浓度对细胞存活率的影响.结果表明:在冷冻保护剂添加和洗脱过程中,冷冻/解冻液间的渗透压差是导致细胞损伤的重要因素,卵母细胞从玻璃化溶液VS2中转移至溶解液中,细胞的存活率会显著减小;当细胞在冷冻液VS2中平衡30s时,转移至1mol/L的溶解液中平衡120s,细胞的存活率显著高于其他组,可以达到80.6％;细胞在冷冻液VS2中暴露不同的时间,需要选择不同浓度的溶解液,也充分说明了卵母细胞的溶解过程与保护剂加载过程是相关的.

摘要： 本文测定了冷冻保护剂对直投式木葡萄酸醋杆菌发酵剂菌体细菌细胞特性的影响,包括菌体细胞DNA泄露、细胞液总抗氧化能力、细胞SOD活性、纤维素合成酶和ATP酶活性变化等.结果表明:添加冷冻保护剂能够明显抑制冷冻干燥过程中细胞DNA泄露和提高细胞液总抗氧化能力、SOD活性、纤维素合成酶和ATP酶活性,电子显微镜扫描也发现冷冻保护剂能降低菌体细胞在冷冻干燥过程中损害程度,从而使菌体细胞保持良好的活力和生理特性.

摘要： 目的：探索嗅球来源嗅鞘细胞的低温冷冻保存方法,寻找最佳的冷冻保护剂种类和浓度,降温方法及速率,提高冻存复苏后细胞的存活率和贴壁率,为临床上人胚胎嗅鞘细胞保存提供指导.材料与方法：取出生24h内SD大乳鼠嗅球,用改良Nash差速贴壁法+Ara-c对细胞进行培养纯化,以P75、GFAP染色鉴定.收集处于对数生长期OECs,调整细胞密度5×106/ml备用.A组采用传统慢冻方法:5％DMSO+6％HES作为冰冻保护剂,4°C30～60min,-20°C1～2h,-80°C过夜,然后置于液氮内;B组采用玻璃化法:20％(v/v)DMSO,20％(v/v)EG,10％(w/v)乙酞胺,0.5M海藻糖为冰冻保护剂,程控降温仪降温则以1°C/min的降温速率降至-40°C,再以10°C/min的降温速率降至-80°C,然后投入液氮内保存.两周后快速复温至37°C,经台盼蓝拒染法、MTT比色法检测细胞复苏率,绘制生长曲线比较细胞增殖能力.结果：在复苏率方面,A组74.3 ％;B组86.9％,两组具有统计学显著性差异(P＜0.05)贴壁率:A组9.72％;B组10.22％,两组无统计学差异.在增殖能力方面B组也明显优于A组.结论：采用玻璃化法对嗅鞘细胞进行冻存,是一种高效可行的方法,冻存细胞经快速符文,可达到较高的复苏率,对于复苏细胞的增殖能力也没有很大的影响.然而玻璃化需要较高的保护剂浓度,DMSO对细胞有毒性,其毒性作用随浓度的增大,低温可以减轻其毒性作用.因此使用之前需在4°C下进行预冷,复苏后也应及时洗脱保护剂.较高的溶质浓度同样也会造成细胞内外渗透压梯度过大,造成细胞脱水过快、皱缩,不利于细胞活性的维持.因此可以采用多次导入的方法,是的冰冻保护剂浓度逐渐上升.冻存细胞是,细胞密度较一般培养为高,可以提高抗冻性.在复苏后,换液时应加大培养液血清浓度,避免细胞密度过大营养不足造成凋亡.

摘要： 通过比较使用冷冻保护剂,以冻存管为冷冻载体,研究超快速精子冷冻保存方法,液氮蒸汽熏蒸法(简称气相法)和直接投入液氮法(液氮法)对人类精子冷冻复苏后运动能力、形态学及精子超微结构的影响.结果表明，冷冻保存易导致精子运动能力和形态正常率下降，改良(CYCCCH)保护剂对精子超微结构具有保护作用，气相法与液氮法冷冻人类精子均是可行的，但气相法复苏结果优于液氮法，值得临床推广应用。

摘要： 本研究将六家精子库冷冻精液复苏后的精液参数与AID妊娠率相结合,通过回顾性分析,了解不同精子库冷冻精液标本复苏后的质量,并分析各精子库冻精标本质量对AID妊娠率的影响.结果表明，不同精子库间冷冻精液标本复苏后的精液参数和用于AID治疗后的临床妊娠率存在着一定的差异，这可能与各精子库筛选供精对象、冷冻保护剂的选择以及精液冷冻操作不同等因素导致的冻精质量不同有关。另外，某些精子库的冻精标本复苏后的参数略低，且与其较低的临床妊娠率存在一定关联;但部分具有较高参数的精液标本并未获得相对高的临床妊娠率。据此我们认为，复苏后的精液参数可能不是影响AID临床妊娠率的决定性因素，对于供精者冻精标本生育力的预测，还需进一步探寻更具临床意义的分子筛选标志，以期提高AID临床妊娠率，获得理想妊娠结局。

摘要： 本研究目的是在寻求一种能够有效地分离、纯化以及培养小鼠睾丸支持细胞的基础上，采用非渗透性冷冻保护剂低密度脂蛋白、卵磷脂和海藻糖冷冻支持细胞，检测其冷冻保护效果。结果提示，本研究采用的海藻糖、LDL和卵磷脂作冷冻保护剂，其复苏率平均达到70%左右，其中卵磷脂效果最好，复苏率为72.86%。通过对比三者的冷冻保护效果，可探索最佳的冷冻保护液体系，为支持细胞的长期保存奠定基础。

摘要： 目的：比较使用冷冻保护剂，程序冷冻法、液氮熏蒸法和直接液氮冷冻三种冷冻方法对人类精子冷冻复苏前后的运动能力、形态学及超微结构的影响，来评价采用冷冻保护剂冷冻保存的可行性和临床实用性。方法：选择25例合格捐献者精液标本，每份精液分成两份，按照1：1的比例添加冷冻保护剂，分别以程序冷冻法、液氮熏蒸法和直接液氮冷冻三种冷冻方法进行冷冻，复苏后比较精子运动能力和形态学，采用透射电镜观察冷冻精子超微结构的改变。结论：改良冷冻保护剂可以更好的保护精子的运动能力，添加冷冻保护剂对精子的超微结构有保护作用。

摘要： 为了完善小鼠卵母细胞的冷冻方法和探明冷冻保护剂和冷冻解冻对卵母细胞的影响，本研究利用FSEA对小鼠成熟卵母细胞进行冷冻保存。与此同时，采用免疫组化、DAPI、FDA和PI法对卵母细胞进行染色，分别观察了FSEA处理和经冷冻解冻处理对卵母细胞纺锤体、染色体、细胞膜等的影响。结果显示：1.与未经处理的卵母细胞相比，经玻璃化冷冻解冻的卵母细胞的体外受精率显著降低(P<0.01)，但是在卵母细胞透明带上作一切口后，其体外受精率显著提高(P<0.05)，且其胚胎发育至4细胞期的能力与对照组相比差异不显著;2.与未经处理的卵母细胞相比，经FSEA处理和经冷冻解冻后的卵母细胞正常纺锤体和正常染色体的比率显著降低(P<0.01)，但是两者间差异不显著;3.当用FDA染色后，未经处理、FSEA处理和经冷冻解冻的卵母细胞间发出均匀荧光(有活性)和无荧光或不均匀荧光(无活性)比率间差异不显著。与其相比，冷冻解冻组由PI诱发的橘红色荧光(细胞膜损伤)的卵母细胞的比率显著高于未经处理(P<0.01)和FSEA处理组(P<0.05).上述结果表明，FSEA玻璃化冷冻保护剂结合透明带切割法，可用于小鼠卵母细胞的冷冻保存;冷冻保护剂处理是造成卵母细胞纺锤体和染色体异常的主要原因，而冷冻解冻过程对其影响有限;冷冻保护剂处理和冷冻解冻过程并不影响卵母细胞的活力，但是，冷冻解冻过程可诱发卵母细胞膜的损伤。

摘要： 本文从猪精液的冷冻-解冻程序、冷冻保护剂、冷冻精液的受精效果等方面阐述了目前的研究进展。探讨了猪精液冷冻保存的局限性，展望了猪精液冷冻保存的应用前景，为猪精液的冷冻保存研究提供参考。

摘要： 本文介绍了精子气相快速冻融技术的改良过程，包括：气相冷冻仪的研发与应用、气相冷冻速率的研究、抗氧化酶在气相冻融精子中的作用、气相冻融精子复活剂研发、清洁液氮气相冻融精子运转系统等。通过改良气相冻融相比传统程序化冻融快捷、安全、复苏率高。

摘要： 本发明公开了一种双歧杆菌深层冷冻发酵剂及其冷冻保护剂。通过高密度培养得到双歧杆菌菌体，离心收集菌泥，并利用优选复配保护剂重悬菌体，于-80°C深层冷冻保藏，有效的保持了双歧杆菌的菌数和功能特性。本发明的双歧杆菌深层冷冻发酵剂作为一种辅助发酵剂，对于益生菌有效应用于乳品发酵有显著效果。

摘要： 本发明公开了一种用于桡足类卵粒超低温储存的冷冻保护剂及冷冻方法。该冷冻保护剂包含含有L‑(‑)‑海藻糖的海藻糖和含卵粒的海水，主要包括如下成分及其重量份：含卵粒的海水80‑110份、乙二醇1.2‑3.8份、甘油2.1‑4.3份、二甲基亚砜0.6‑1.2份、海藻糖1.2‑2.5份。本发明冷冻方法为利用上述冷冻保护剂进行多级冷冻。有益效果为：本发明冷冻保护剂能够发挥增益作用，能有效抑制卵粒细胞内冰晶的形成，减弱冰晶对卵粒的损伤程度，提高桡足类卵粒的孵化率，改善冻融后卵粒的发育潜能；本发明冷冻方法能配合冷冻保护剂的施用，有效控制卵粒的渗透压变化，避免胞内冰冰的形成，降低了桡足类卵粒的冰晶损伤。

摘要： 本公开涉及冷冻保护剂和/或冷冻保护剂组合物及其方法和用途。该组合物可以用于细胞、生物和/或组织的保存和/或保护。

摘要： 本发明公开了一种双歧杆菌深层冷冻发酵剂及其冷冻保护剂。通过高密度培养得到双歧杆菌菌体，离心收集菌泥，并利用优选复配保护剂重悬菌体，于－80°C深层冷冻保藏，有效的保持了双歧杆菌的菌数和功能特性。本发明的双歧杆菌深层冷冻发酵剂作为一种辅助发酵剂，对于益生菌有效应用于乳品发酵有显著效果。

摘要： 本发明提供一种提高保加利亚乳杆菌活性的冷冻保护剂及冷冻方法和应用，所述冷冻保护剂按质量份计包括4‑20份甘油、0.2‑5份L‑亚油酸、0.2‑5份α‑亚麻酸。本发明创造性地将甘油、L‑亚油酸和α‑亚麻酸三者的组合应用于保加利亚乳杆菌的冷冻保存中，三者相辅相成，在提高和维持短期和长期的存活率和菌体活性方面具有协同增效的作用。本发明使用含有甘油、L‑亚油酸和α‑亚麻酸的冷冻保护剂，实现了保加利亚乳杆菌活菌数和菌活稳定性的大幅提升，可以为大规模生产提供借鉴思路。

摘要： 本申请公开了一种鲜虾冷冻保护剂及冷冻贮藏方法，属于水产品贮藏技术领域。所述冷冻保护剂包括以下重量份的原料：海藻糖3‑6份；低聚木糖2‑3份；乳梨醇1‑2份；魔芋葡甘聚糖0.8‑1.5份；D‑氨基葡萄糖盐酸盐0.5‑1份；对羟基肉桂酸2‑5份。本申请将鲜虾预处理后放入冷冻保护剂溶液中浸润，再进行冷冻贮藏，冷冻保护剂可以有效降低鲜虾内肌肉组织在冷冻过程中受到的机械损伤，减少脂质氧化和蛋白质变性，提高保水性，较好的保持了细胞的完整性，提高了冷冻鲜虾的品质，满足了消费者的需求。

摘要： 本发明涉及辅助生殖技术领域，公开了一种冷冻保护剂及其应用和一种精子冷冻液及其制备方法，所述精子冷冻液包括冷冻保护剂、组合物和基础培养液；其中，所述冷冻保护剂包括紫杉醇0.3～1.1mg/L、海藻糖16～22g/L、蔗糖7～13g/L和甘油80～250mL/L；所述组合物包括白藜芦醇12～26mg/L、还原型谷胱甘肽0.2～1.9mg/L、卵磷脂436～775mg/L、胆固醇0.5～1.6mg/L、ATP钠盐9～17mg/L、肝素11～28mg/L、磷脂酰丝氨酸93～299mg/L和辅酶Q10 5～25mg/L；本发明的精子冷冻液能够降低精子在低温冷冻和冷冻复苏过程中的损伤、提高精子冷冻复苏后活力、延长精子冷冻复苏后存活时间、促进精子获能以及增强精子对卵细胞的穿透受精能力，进而提高卵子的受精成功率和囊胚形成率，最终达到提高体外受精辅助生殖技术的妊娠成功率的效果。

摘要： 本实用新型公开了一种基于细胞冷冻保护剂存储干细胞的冷冻储存装置，属于干细胞技术领域，包括装置本体、位于装置本体上方的盖板、位于装置本体内侧的受力板和位于受力板上方的试剂瓶，所述装置本体内底壁安装有固定块，所述固定块的顶部开设有固定槽，所述固定块通过固定槽固定连接有第一弹簧。该基于细胞冷冻保护剂存储干细胞的冷冻储存装置，通过按压支撑板，使其将支撑柱下移，从而使得插杆脱离插槽，进而使得第一弹簧不再受第二弹簧弹力的限制，支撑柱借助第一弹簧的弹力向上移动，从而将放置试剂瓶的支撑板顶起，进而方便将放置试剂瓶的受力板取出的效果，有助于方便将试剂瓶取出。

摘要： 本实用新型公开了一种基于细胞冷冻保护剂存储干细胞的冷冻储存装置，包括储存装置本体、储存桶、放置机构、放置盒、转动杆、放置板、第一弹簧、储存盒、分隔板、存储槽、放置腔、限位机构、按动块、第二弹簧、挤压杆、凸块、第五弹簧、卡扣、限位槽和密封机构。本实用新型的有益效果是：通过在储存装置本体的内部设有储存桶，储存桶的内部设有放置盒，分隔板之间设有存储槽，存储槽的内部有利于放置有储存盒，储存盒放置在放置板的顶部，将放置板向第一弹簧的方向移动，这样卡扣在第五弹簧张力的作用下卡入限位槽的内部，可以固定放置板，按压按动块的使凸块抵触挤压杆，这样在第一弹簧张力的作用下，将储存盒弹出存储槽的内部，方便取出储存盒。

摘要： 本实用新型公开了一种基于细胞冷冻保护剂存储干细胞的冷冻储存装置，包括试管、塑料套、密封机构、拿取机构、防护机构、防护杆、底座及固定机构。本实用新型的有益效果是：抠动位于密封机构内部的拿取机构，进一步的背离密封机构方向拉动拿取机构实现了四个防护杆及底座向密封机构的方向移动，进一步的四个防护杆超过密封机构的顶部，四个防护杆此时可以作为手柄进行使用，当底座的顶部与塑料套的底部抵触时实现固定机构将塑料套与防护杆的固定，避免防护杆在塑料套的内部发生滑动，握住拿取机构或者防护杆将试管放置到冰块中，将防护杆露出冰块，方便试管的冷冻和拿取，避免工作人员手部冻伤，实验时将拿取机构推动实现防护杆对试管进行保护。