冷冻保存

摘要： 蜜蜂精液保存技术推动了现代蜜蜂种业的快速发展,为保护蜜蜂遗传资源多样性、开展良种选育提供了技术支撑。围绕多年来蜜蜂精液保存的相关研究,介绍蜜蜂精液的质量检测方法以及非冷冻和冷冻保存技术,综述影响精液保存的因素,旨在为进一步优化蜜蜂精液保存技术,研发适宜不同蜜蜂的精液保存方法提供理论依据。

摘要： 警犬技术人员在现场提取的人体气味嗅源,大多直接用于警犬的现场搜索物证和追踪迹线;但在嗅源用于警犬气味鉴别,识别犯罪嫌疑人以及作为串并案件的存档物证时,则必须对人体气味嗅源进行转运和保存。在实际工作中,通常采用在-20°C的冷冻环境下,密封保存人体气味嗅源样本。然而,在该保存条件下,人体气味嗅源样本的保存时效性还没有被明晰。为此,我们采用警犬气味鉴别和仪器分析相结合的方法,检验分析了人体气味嗅源冷冻保存不同时间后的有效性。

摘要： 本实验旨在研究二甲双胍对犬冷冻-解冻后精液品质的改善效果,用含有不同浓度(0、25、50、100μmol/L)二甲双胍的Tris-卵黄稀释液冷冻保存犬精液,解冻后测定精子活力、质膜完整率、顶体完整率、活性氧(ROS)含量、丙二醛(MDA)含量、线粒体膜电位状态及腺苷三磷酸(ATP)含量等指标。结果显示:二甲双胍添加组的精子活力、质膜完整率、顶体完整率、ATP含量、处于高线粒体膜电位状态精子占比均高于对照组(P<0.05),而ROS、MDA含量低于对照组(P<0.05);50μmol/L二甲双胍组的精子活力、质膜完整率和顶体完整率分别为42.62%、52.99%和54.91%,均高于其他组(P<0.05);50μmol/L二甲双胍组精液中的ROS、MDA含量低于其他各组(P<0.05),同时该浓度下的精子处于高线粒体膜电位状态的占比多于其他各组(P<0.05),ATP含量也高于其他各组(P<0.05)。综上,在犬冷冻稀释液中添加二甲双胍可以改善犬冷冻-解冻后的精液品质,对提高精子的抗氧化能力及能量代谢都有显著效果,其中最佳添加浓度为50μmol/L。

摘要： 不论是在体精液,还是射出精液,或者冷冻保存的精液,其都面临一个重要的问题——氧化应激损伤,并且,冷冻保存的精液由于时间较长、自身抗氧化剂的消耗等问题,在实际应用中,人为地添加额外的抗氧化剂已成为常态。为此,本文综述了人精液冷冻保存过程中氧化应激的产生和危害、常见抗氧化剂的应用及其研究进展,为临床应用及实践提供参考。

摘要： 猪精子冷冻保存技术在培育优良品种、保存种质资源、控制疫病传播、性别控制技术应用、提高精液利用效率等方面具有重要的应用价值。随着猪精子冷冻保护剂组分、冷冻解冻方法和降温设备的不断优化,以及低剂量子宫内深部输精技术的有效配合,猪冻精的使用范围将逐渐扩大。文章主要对猪冻精研究发展过程、冻精生产关键环节及其优化、低剂量子宫内深部输精、猪性控冻精等方面的最新研究进展进行了综述,并对猪精子冷冻保存技术及其相关辅助技术的产业化前景进行了展望。

摘要： 为验证脱落酸(ABA)和冷适应能否提高紫菜丝状体种质的冷冻保存效率,研究以坛紫菜(Pyropia haitanensis)自由丝状体为材料,在20°C,光强40μmol·photons/(m^(2)·s),在光周期12L﹕12D条件下以ABA(100μmol/L)处理48h或4°C暗培养6d,随后进行-80°C冷冻保存实验。通过连续测定冻存复苏后藻体的存活率及最大光量子效率F_(v)/F_(m),并利用Realtime qPCR技术检测藻体与抗冷相关基因[P(H^(+))-ATPase、ald、Mn-sod A、Cu/Znsod 1、apx-2、hsp70-4、psy-2、gapdh、gpxha-1]等的表达情况来评估预处理及冻存效果。结果显示:(1)ABA和冷适应均可提高坛紫菜丝状体的冷冻存活率,ABA组存活率可达59%,冷适应组存活率可达89%;(2)丝状体经冷适应后F_(v)/F_(m)恢复速率较其他组显著提高(P<0.05),复苏35d即可恢复至最佳生长状态;(3)ABA和冷适应显著上调了藻体P(H^(+))-ATPase、ald、Mn-sod A、Cu/Zn-sod 1、gapdh(P<0.01)和psy-2(P<0.05)基因的表达,apx-2和hsp70-4只有在ABA刺激时才表现为上调(P<0.01)。综上,ABA处理和冷适应均可改善坛紫菜丝状体的抗冻能力,提高超低温冷冻保存效率。4°C冷适应法操作简单,效果显著,具较大应用潜力。

摘要： 公猪精子对温度变化十分敏感,在冷冻保存过程中极易受到冷冻损伤,虽然Polge等[1]在1956年首次运用冻精技术进行人工授精(AI)并获得仔猪,但是到目前为止世界范围内猪冷冻精液应用比例仍没超过1%。冷冻保护液是影响冻精冷冻效果的主要因素之一,目前常用以卵黄为基础的稀释液添加冷冻保护剂来进行冻精研究。常用的冷冻保护剂有甘油、DMSO(二甲基亚砜)、乙二醇等,这些渗透性冷冻保护剂虽然具有优异的抗冻作用,但均具有细胞毒性,所以多数会在冷冻前进行添加,以降低不良影响.

摘要： 目的比较冷冻前和复苏后脐带血样本的造血功能,探讨冷冻袋附属小管是否可用于脐带血质量控制及移植供体发放前复核。方法选取2009年3月-2021年2月在广州脐血库冻存的53份脐带血为研究对象,常规复温后,从冷冻袋和附属小管抽取样本,分为冷冻前、小管复苏和大袋复苏组。评价各组的总有核细胞(total nucleated cells,TNCs)数、细胞活率、CD34阳性细胞数量、粒-巨噬细胞集落(colony-forming units-granulocyte/macrophages,CFU-GMs)数量、祖细胞集落(colony-forming units,CFUs)数量等质量参数。结果小管复苏后TNCs数量、细胞活率、CFU-GMs数量及CFUs数量较冷冻前均显著减少,差异有统计学意义(P0.05);大袋复苏后TNCs数量、细胞活率及CFUs数量较冷冻前各相应值比较,差异有统计学意义(P0.05);小管复苏后的TNCs数量、细胞活率、CD34阳性细胞活率、CFU-GMs数量及CFUs数量较大袋复苏后的相应值均减少,差异有统计学意义(P0.05)。小管复苏与大袋复苏后的各项参数存在高度相关性。结论附属小管在一定程度上可作为脐血库质量控制和产品发放前复核的取材。

摘要： 【目的】本研究旨在对云南半细毛羊精子冷冻前后差异表达的基因与精子冷冻损伤的关系进行研究。【方法】采用电刺激法采集3只云南半细毛羊精液,各分成2份,一份直接用于提取精子RNA,另一份经过冷冻保存7 d后再进行精子RNA提取。利用获得的精子RNA,采用单细胞转录组测序技术分别检测新鲜精子和冻融精子的mRNA转录组,构建mRNA转录组文库,用Hiseq2500测序仪进行测序,对测序结果做进一步过滤处理,然后对差异表达基因进行GO功能注释和KEGG通路分析。【结果】6份精液样本共产生623399754条原始测序序列,过滤处理后得到514313802条(82.50%)高质量的Clean reads。生物信息学分析结果表明,冷冻前后差异表达显著的基因共1213个。其中,解冻后表达量下调的有1208个,上调的有5个。通过GO功能注释和KEGG通路富集分析,差异表达基因分别归类于56个GO分类,参与40个信号通路。其中与精子功能密切相关的主要包括精子细胞过程、代谢过程、应激反应、生殖、质膜和氧化还原反应;精子冷冻前后差异表达基因参与的信号通路主要有炎症、细胞因子-细胞因子受体相互作用和细胞凋亡等通路。【结论】云南半细毛羊精子的冷冻损伤可能与获得的差异表达基因参与的生物过程有关。此外,获得的差异表达基因也可作为分子标记物应用于绵羊冻精品质的评价。

摘要： 近年来牛体外胚胎生产取得很大进展,可以稳定地在体外获得囊胚,但体外生产效率偏低,不能满足产业需要。在牛体外胚胎生产过程中很容易产生活性氧和活性氮,导致配子和胚胎受到氧化应激或硝化应激。褪黑素作为一种强有力的抗氧化剂和抗凋亡剂,可以直接清除有毒的氧衍生物,减少活性氧的形成,在牛体外胚胎生产过程中发挥积极作用。本文主要对褪黑素在牛卵母细胞体外成熟、体外受精、早期胚胎发育、配子和胚胎冷冻保存等方面的研究进行综述,为后续体外胚胎生产技术的优化研究和推广应用提供参考。

摘要： 为了充分发挥和提高优良萨福克种公羊的利用率,本试验对进口萨福克肉羊精液冷冻保存技术进行了研究,试验设计了4个萨福克羊冷冻精液稀释液配方,pH在6.0～7.0之间,挑选了14只健康成年种公羊,调教采精、制冻.结果显示:稀释液C的冷冻后精子活力显著高于稀释液A的冻后精子活力(P＜0.05),极显著高于稀释液B和释液D的冻后精子活力(P＜0.01);冻精在40～42°C解冻的精子活力效果最好.故使用稀释液C制作进口萨福克肉羊冷冻精液并在42°C解冻效果较好,可在生产实践中推广使用.

摘要： 鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)生长快体型大,是石斑鱼属中体型最大的鱼类,但由于工人繁殖技术还未成熟,目前的养殖规模和数量较小.为了开发这一优良的鱼类种质资源,解决石斑鱼人工繁殖中雄鱼数量少、精液量不足,以及鞍带石斑与其它石鱼杂交育种中繁殖时间、地理分布的隔离问题,本文对鞍带石斑鱼的精子冷冻保存技术进行了研究.利用5％、10％和15％的二甲亚砜(DMSO)冷冻保存鞍带石斑鱼精子,结果显示10％DMSO冷冻精子成活率达到56.67±5.77％,显著高于其它两种浓度冷冻精子成活率(P＜0.05).在MPRS和ELS两种稀释液中分别加入10％、20％和30％胎牛血清(FBS),冷冻保存精子,结果显示,MPRS中加入20％FBS冷冻精子成活率为50.00±10.00％.在ELS中加入10％FBS冷冻保存精子的成活率达83.75±7.44％,显著高于其它配方冷冻精子的成活率(P＜0.05).利用多重比较法对MPRS+15％DMSO、MPRS+20％FBS+10％DMSO、ELS+10％FBS+10％DMSO三-种配方冷冻保存精子的成活率进行比较,结果显示,ELS+10％FBS+10％DMSO冷冻保存精子成活率达到83.76±7.45％,显著高于其它两配方(P＜0.05).利用筛选到的最优配方大量冷冻保存了鞍带石斑鱼精子,并利用冷冻精子与赤点石斑鱼卵进行杂交育苗,受精率达94.56％,孵化率达到62.5％.利用本文研制方法可大量保存鞍带石斑鱼精子,并且可与繁殖时间不同、地理分布不同的赤点石斑鱼进行杂交育种.

摘要： 由于猪冻精在经济生产中具有重要意义,其关键技术—猪精液冷冻保存技术已成为研究的热点.本文对猪精液冷冻原理及冷冻损伤进行了说明,并从精液稀释前处理、稀释液及添加剂、冷冻保护剂、冷冻程序与解冻、冷冻剂型等方面的研究进展进行了综述.

摘要： 目的：评价用乙二醇玻璃化冷冻液二步法对长爪沙鼠2-细胞胚胎冷冻保存的效果.方法：通过超排卵处理后与雄鼠交配获得长爪沙鼠2-细胞胚胎,胚胎在冷冻液EFS20中平衡3min,然后移入冷冻液EFS40中平衡1min,之后将细胞冻存管直接浸入液氮中保存.采用二步法复苏胚胎,复苏后移入改良的胚胎培养液(mKSOM)中体外培养.结果：采用该方法冷冻的胚胎复苏后胚胎回收率为86.73％,存活率为82.94％,复苏后存活的胚胎中约1/3胚胎可以在体外发育到囊胚.结论：乙二醇玻璃化冷冻液适于冷冻保存长爪沙鼠2-细胞胚胎.

摘要： 保存好各个世代家禽血样和基因组DNA对于研究家禽各世代变化规律,更好的监测家禽保种效果具有重要意义.本研究分别抽取江苏省家禽遗传育种重点实验室-20°C保存半年、一年、三年、五年、七年、八年和十年的狼山鸡DNA样品,采用核酸电泳和PCR检测,比较各年份DNA保存的效果.研究结果表明:DNA样品随着-20°C保存时间的延长,DNA越容易降解.-20°C保存十年狼山鸡DNA降解率很高,条带模糊;-20°C保存八年和七年的DNA,降解也较严重;-20°C保存五年的狼山鸡DNA总体完好,条带相对清晰;-20°C保存三年、一年和半年的狼山鸡DNA条带清晰鲜明.降解的DNA浓度普遍比不降解的DNA浓度低一些.DNA纯度均在1.8～1.9之间.降解和不降解的DNA用PCR检测,均出现条带,说明DNA的部分降解不影响一般的PCR检测实验.

摘要： 通过对母乳脂肪酸、pH值和酸度在超低温冷冻条件下的稳定性研究,最终制定伊利母乳研究实物库的母乳质量标准,以确保伊利母乳研究实物库中的母乳样本在-80度保存过程中营养成分的损失率最小.试验结果表明,母乳在-80°C冷冻保存12个月的过程中,脂肪酸含量、pH值和酸度没有发生显著性变化.因此,从现有检测指标来看,母乳库的质量标准应根据分析研究的母乳成分而定,若分析比较稳定的营养成分如脂肪酸可以使用保存12个月的母乳.

摘要： 本实验在以往研究的基础上进一步研究了冷冻起始温度、解冻温度对犬精子活率的影响.实验结果表明:起始冻温度为-70°C时冻后精液质量最好,冻后精子活率达0.6284±0.0408,优于-65°C和-75°C时的冻后精子活率;解冻温度为70°C时对解冻后精液质量最好,达0.6810±0.0324,优于60°C和65°C的精子活率.

摘要： 为探索钙离子抑制剂能否提高冷冻解冻精子活力,本实验在马精液基础冻存液INRA82中分别添加5,25,50,100,200 mM的钙离子抑制剂,分别对7岁阿拉伯公马,8岁纯血以及10岁蒙古马的精液进行液氮冷冻保存.结果显示添加一定浓度的钙离子抑制剂能明显提高马精液冷冻解冻效果，其机理有待进一步探索。

摘要： 由于猪精液冷冻保存过程引起氧化应激损伤,而水蛭素具有抗氧化作用,为了研究水蛭素如何影响猪精液冷冻前后过氧化氢酶合成及表达,从而提高冻后猪精液质量,本研究用含不同浓度(0、0.04％、0.08％、0.12％)水蛭素的稀释液稀释美系长白公猪精液,0.5mL细管分装冷冻,分别检测平衡后及冻融后精液中过氧化氢酶的活性和mRNA表达量的变化.结果表明:(1)不含水蛭素的冷冻稀释液显著降低新鲜猪精液过氧化氢酶活性(P＜0.05),而含有0.08％水蛭素的冷冻稀释液显著提高冷冻保存猪精液过氧化氢酶活性(P＜0.05);(2)不含水蛭素的冷冻稀释液降低新鲜猪精液过氧化氢酶mRNA的表达,含有0.08％水蛭素的猪精液平衡及冻融后的过氧化氢酶mRNA表达量最高,但差异不显著(P＞0.05).总之,添加0.08％水蛭素显著提高冷冻前后猪精液过氧化氢酶活性(P＜0.05),但对过氧化氢酶mRNA表达的影响并不显著.

摘要： 实验检验了主要二糖(海藻糖和蔗糖)对绵羊精液的冷冻保护效果.将电刺激采集的云南半细毛羊精液与冷冻稀释液混合、5°C平衡、液氮气相预冻后直接投入液氮冷冻保存.解冻后,检测了了精子活率、活力、顶体状态、质膜完整性和磷脂酰丝氨酸(PS)分布等指标.结果表明:二糖可以提高云南半细毛羊冷冻精子的质量.和蔗糖相比,海藻糖可以显著提高冷冻精子的活力(P＜0.05).另外,二糖可以有效保护冷冻精子顶体的完整性,其对绵羊冷冻精子的质膜和Ps分布的保护作用明显优于无二糖冷冻组(P＜0.05).此外,海藻糖对冷冻精子活率、运动速度、顶体、质膜完整性和PS分布的保护效果与蔗糖类似(P＞0.05).综上所述,二糖可以降低绵羊的冷冻损伤,而且海藻糖对精子的冷冻保护效果要优于蔗糖.

摘要： 本发明涉及包括冷冻保护剂的冷冻保护试剂，所述冷冻保护剂是以下的一种或几种：糊精、葡聚糖、异麦芽糖寡糖及其衍生物，冷冻保护和冷冻保存的组合物，其用途，和冷冻保存方法。

摘要： 本发明涉及包括冷冻保护剂的冷冻保护试剂，所述冷冻保护剂是以下的一种或几种：糊精、葡聚糖、异麦芽糖寡糖及其衍生物，冷冻保护和冷冻保存的组合物，其用途，和冷冻保存方法。

摘要： 本发明关于一种用于冷冻保存免疫细胞的细胞冷冻保存液及其冷冻保存方法，其中经细胞因子诱导的杀伤细胞尤佳。该细胞冷冻保存液的成分不含血清且由下列成分组成：(1)混合式基础培养基、(2)二甲基亚砜(DMSO)、(3)血清取代物、(4)右旋糖酐(Dextran)。其特征在于该保存液为混合式培养基及血清取代物以达成无血清冷冻保存功能。其用于免疫细胞尤其自然杀手细胞经解冻后可保持80％以上的细胞毒杀功能及功能性细胞标志，并具备高浓度细胞乘载量。

摘要： 本发明涉及包括冷冻保护剂的冷冻保护试剂，所述冷冻保护剂是以下的一种或几种：糊精、葡聚糖、异麦芽糖寡糖及其衍生物，冷冻保护和冷冻保存的组合物，其用途，和冷冻保存方法。

摘要： 本发明涉及包括冷冻保护剂的冷冻保护试剂，所述冷冻保护剂是以下的一种或几种：糊精、葡聚糖、异麦芽糖寡糖及其衍生物，冷冻保护和冷冻保存的组合物，其用途，和冷冻保存方法。

摘要： 本发明公开一种黄鳍鲷精子的冷冻保存溶液，包括精子基础稀释液、营养物质、抗氧化剂和抗冻保护剂；所述精子基础稀释液由cortland溶液和Hank’s溶液混合而成；所述营养物质包括蔗糖和海藻糖；所述抗氧化剂包括牛血清白蛋白、褪黑素和维生素E；所述抗冻保护剂为二甲亚砜。上述冷冻保存溶液应用于黄鳍鲷精子冷冻保存具有显著的优势，使冷冻保存后的黄鳍鲷精子的存活率和活力高。本发明还公开了一种黄鳍鲷精子的冷冻保存方法。

摘要： 本申请属于精子保存技术领域，尤其涉及花色苷在冷冻保存精子中的应用、精子冷冻保存液。本申请第一方面提供了花色苷在体外冷冻保存精子中的应用，所述花色苷选自矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷、飞燕草素‑3‑O‑葡萄糖苷、天竺葵素‑3‑O‑葡萄糖苷、锦葵素‑3‑O‑葡萄糖苷、芍药素‑3‑O‑葡萄糖苷和牵牛色素‑3‑O‑葡萄糖苷中的一种或多种。本申请第二方面提供了一种精子冷冻培养基，包括花色苷和精子冷冻培养可接受物质。本申请提供了花色苷在冷冻保存精子中的应用、精子冷冻保存液，有效解决现有的冷冻精子在解冻过程中容易发生氧化应激而引起DNA碎裂以及活力降低的技术问题。

摘要： 本发明提供了一种兔精液冷冻保存稀释液和制备方法、兔精液冷冻保存方法和应用，属于家畜人工授精技术领域。本发明提供了一种兔精液冷冻保存稀释液，所述兔精液冷冻保存稀释液以水作为溶剂，所述兔精液冷冻保存稀释液中，每100mL水添加：三羟甲基氨基甲烷3～4g、柠檬酸1～2g、葡萄糖0.5～1g、海藻糖2～3g、L‑谷氨酸0.5～1g、二甲基亚砜10～20mL和甘油2～4mL；所述兔精液冷冻保存稀释液的pH值为6.5～7.5。本发明提供的兔精液冷冻保存稀释液明显提高了冷冻后精子的活率，质膜完整率和顶体完整率，有利于提高兔的繁殖效率和育种速度。

摘要： 本发明公开了一种含有该多肽的冷冻保存液及其在干细胞冷冻保存中的应用。其中，所述多肽是LEA蛋白的功能区，在水溶液中具有良好的生物相容性好，是理想的控冰材料。含有上述多肽的冷冻保存液用于冷冻保存干细胞具有较高的存活率，仅能达到常规冷冻液冷冻干细胞的有效性，且与目前普遍使用的含有10％的DMSO的商品化冷冻保存液的冷冻保存复苏率相当。

摘要： 本发明公开了含有多肽的冷冻保存液及其在工程细胞和细胞系冷冻保存中的应用，其中，所述多肽是LEA蛋白的功能区，在水溶液中具有良好的生物相容性好，是理想的控冰材料。含有上述多肽的冷冻保存液用于冷冻保存工程细胞和细胞系具有较高的存活率，仅能达到常规冷冻液冷冻工程细胞和细胞系的有效性，且与目前普遍使用的含有10％的DMSO的商品化冷冻保存液的冷冻保存复苏率相当。