五子衍宗方对衰老大鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤的保护作用及机制

摘要

目的 探究五子衍宗方对衰老大鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤的保护作用及其分子机制.方法 将30只16月龄SD雄性大鼠随机分为衰老模型组、五子衍宗方低剂量组(1g/kg)和五子衍宗方高剂量组(4 g/kg),另取2月龄SD雄性大鼠作为青年对照组,每组10只.给予含药饲料或普通维持饲料喂养4个月后,麻醉处死大鼠,取睾丸组织,HE染色观察其形态,统计各组大鼠生精上皮厚度和生精小管直径,电镜观察大鼠睾丸支持细胞紧密连接超微结构,Western blot检测大鼠睾丸紧密连接相关蛋白ZO-1和Occludin(闭锁蛋白)蛋白表达,双标免疫荧光法观察大鼠睾丸支持细胞ZO-1、Occludin、Claudin-11(细胞紧密连接蛋白)、p-p38MAPK(磷酸化p38丝裂原活化蛋白酶)、MMP-9(基质金属蛋白酶9)、Occludin表达和共定位.结果 HE结果显示,五子衍宗方可改善衰老大鼠睾丸组织形态结构,升高衰老大鼠生精上皮厚度和生精小管直径.电镜结果显示,五子衍宗方可改善衰老大鼠紧密连接的超微结构.Western blot结果显示,五子衍宗方可上调衰老大鼠ZO-1、Occludin、Claudin-11蛋白表达.免疫荧光结果显示,五子衍宗方可上调衰老大鼠睾丸支持细胞ZO-1、Occludin、Claudin-11表达,下调p-p38MAPK、MMP-9表达,减少MMP-9和Occludin共定位.结论 五子衍宗方可通过抑制p38MAPK/MMP-9通路来改善衰老大鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤.