新霉素

摘要： 建立新霉素氟轻松乳膏中新霉素的含量测定方法。采纳HPLC-ELSD法,色谱柱型号为Agilent ZORBAX SB-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相A为乙腈,流动相B为0.1 mol·L^(-1)三氟乙酸水溶液,梯度洗脱;流动相速度为0.8 mL·min^(-1),加热管温度为105°C,柱温为25°C。新霉素在浓度为0.0378~0.6050 mg·mL^(-1)范畴内线性呈现良好,线性方程为Y=0.0453X+5.7696(r=0.9999),平均回收率值为96.5%,RSD为0.45%(n=9)。HPLC-ELSD法具有高效、高速度、高灵敏度、高专属性的特点,为新霉素质量控制提供了有效手段。

摘要： 1临床症状患猫为3岁英国短毛猫,雄性(未绝育),体重5kg,其常流泪,曾口服赖氨酸、速诺(阿莫西林克拉维酸钾)等及点眼新霉素滴眼液、妥布霉素滴眼液等,但流泪情况未得到有效改善。病猫上下眼睑未见异常,睫毛正常,睑结膜、球结膜未见明显充血,角膜光滑未见异常;少量泪溢,内眼角下方被毛潮湿、黄染。

摘要： 目的分析抑制谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)对氨基糖苷类抗生素损伤HEI-OC1细胞凋亡的影响。方法首先将HEI-OC1细胞培养后采用免疫荧光法观察GPX1的表达;然后采用CCK8法计算不同浓度新霉素处理HEI-OC1细胞后细胞活力及其半抑制浓度(IC50);再设立对照组和新霉素组,对照组不进行任何处置,新霉素组给予新霉素处理,采用免疫荧光染色、qRT-PCR和Western blot法研究新霉素给药后GPX1的表达;第四步设立空白对照组、阴性对照组和实验组,空白对照组不进行任何处置,阴性对照组转染无意义的siRNA,实验组转染siRNA-GPX1,使用免疫荧光染色、qRT-PCR和Western blot法检测siRNA转染效率,CCK8法观察三组细胞活力变化;转染成功后后两组给予新霉素处理,采用免疫荧光法检测三组细胞活力,并采用免疫荧光染色、TUNEL染色和Western blot法检测三组细胞凋亡状况。结果在HEI-OC1细胞可见中GPX1表达,并且新霉素损伤后HEI-OC1细胞活力随着新霉素的浓度升高而降低,新霉素半抑制浓度为10 mM;新霉素组细胞的GPX1蛋白、mRNA表达水平(分别为0.21±0.07,0.35±0.08)均较对照组(分别为0.38±0.02,1.00±0.16)降低(均为P0.05);给予新霉素损伤后,与阴性对照组细胞计数(301.33±38.76个)比较,实验组的细胞计数(183.67±18.58个)明显减少(P<0.01);实验组TUNEL阳性细胞比例(22.76%±1.66%)高于阴性对照组(10.84%±3.38%)(P<0.01);实验组中Cleaved Caspase-3阳性细胞比例(47.20%±9.22%)高于阴性对照组(14.24%±1.45%)(P<0.001);相对于阴性对照组,实验组BCL-2的蛋白水平下降(P<0.05),BAX的相对蛋白水平升高(P<0.001)。结论抑制氨基糖苷类抗生素损伤毛细胞的GPX1表达可导致HEI-OCI细胞凋亡程度加重,表明GPX1可能具有抗凋亡的作用;GPX1可能成为预防氨基糖苷诱导耳毒性的新潜在靶标。

摘要： 目的建立巴马小型猪单侧药物性聋模型,为内耳疾病提供新的动物模型。方法选择6只健康巴马小型猪为实验动物,左耳为注射侧,右耳为对照侧,连续7天以硫酸新霉素100mg/kg行左侧乳突骨膜下注射,对照侧不做处理。观察实验前后小型猪一般情况、血肌酐、血尿素氮水平、听性脑干反应(Auditory brainstem response,ABR)以及耳蜗毛细胞形态。结果给药后,实验动物全部存活,血肌酐及尿素氮水平较给药前无统计学差异。给药后,双耳在24kHz、32kHz处ABR阈值均较给药前显著升高(P<0.01,t检验),在16kHz处注射侧ABR阈值较给药前有显著差异(P<0.01,t检验);注射侧耳ABR阈移均高于或等于对侧耳,且在16kHz、24kHz、32kHz处存在统计学差异(P<0.01,t检验)。给药后,小型猪注射侧ABR阈值在16kHz、24kHz、32kHz处显著高于对照侧(P<0.01,t检验)。耳蜗基底膜铺片可见注射侧耳蜗外毛细胞的纤毛结构受损重于对侧。结论单侧颞骨乳突骨膜下注射硫酸新霉素可造成小型猪双耳高频听力损伤,注射侧听阈显著高于对侧,是理想的单侧药物性聋动物模型。

摘要： 异泽兰黄素是一个已在临床应用的新型抗氧化剂,具有抗炎、抗氧化、抗凋亡等多种作用。本研究首次报道异泽兰黄素具有拮抗新霉素耳毒性,保护听觉毛细胞的作用。本研究的体外实验结果显示异泽兰黄素显著降低新霉素对HEI-OC1细胞的毒性作用,保护HEI-OC1细胞。通过活性氧探针检测本研究发现异泽兰黄素显著降低新霉素诱发的HEI-OC1细胞活性氧。此外,本研究通过线粒体荧光标记检测发现异泽兰黄素显著抑制新霉素对HEI-OC1细胞线粒体的损伤。最后,本研究利用斑马鱼耳毒性模型发现异泽兰黄素明显抑制新霉素对斑马鱼侧线神经丘毛细胞的损伤作用。结合体内和体外实验结果,本研究证实异泽兰黄素通过降低活性氧而拮抗新霉素对听觉毛细胞的损伤,发挥对听觉毛细胞的保护作用。因此,异泽兰黄素可能是一种有临床价值的防治药物性耳聋的听力保护药物。

摘要： 本试验旨在研究羔羊运输前后不同时间和处理对湖羊羔羊生长性能、血清应激指标、免疫球蛋白及炎症因子含量的影响。选用平均体重(20.71±0.70)kg的健康4月龄湖羊公羔50只,随机分为5组,每组10只,均进行8 h的长途运输,运输当天记为0 d。1组为对照组,运输前后饲喂基础饲粮;2组为电解多维组,运输前2 d至运输后7 d在基础饲粮中添加电解多维粉0.375 g/(d·只);3、4和5组分别为乳酸菌组、γ-氨基丁酸组和新霉素组,运输当天至运输后7 d分别在基础饲粮中添加乳酸菌液4 mL/(d·只)、γ-氨基丁酸粉200 mg/(d·只)和新霉素粉200 mg/(d·只),并在运输后0、7和14 d对比不同处理缓解运输应激的效果。试验羊在运输前1 d和运输后14 d称重,运输后0、7、14 d采血。结果表明:1)道路运输后羔羊体重的增长率由大到小为电解多维组(20.82%)>新霉素组(17.81%)>乳酸菌组(16.98%)>对照组(15.40%)。2)与对照相比,处理极显著影响了羔羊血清促肾上腺皮质激素(ACTH)含量、乳酸脱氢酶(LDH)活性(P0.05);处理显著或极显著影响了羔羊血清中干扰素-γ(IFN-γ)(P<0.05)和白细胞介素-6(IL-6)含量(P<0.01),时间极显著影响了血清IL-6含量(P<0.01),处理×时间极显著影响了血清IL-6含量(P<0.01)。综上所述,羔羊运输前2 d至运输后7 d在基础饲粮中添加电解多维粉0.375 g/(d·只)抗运输应激效果最佳。

摘要： 目的 建立并优化费氏链霉菌的遗传操作体系,并通过分子改造得到新霉素效价提高的重组菌株,为后续获得新霉素高产菌株奠定理论基础.方法 选择费氏链霉菌最适产孢培养基和抗性筛选标记,对接合转移体系的关键影响因素进行优化,获得过表达neoC基因的重组菌株,以进一步研究neoC基因对新霉素效价的影响.结果 费氏链霉菌接合转移最适培养基为A75培养基,孢子最适处理条件为50°C热激10min,37°C预培养4h,最适供受比为10:1,安普霉素最适添加时间为15h,优化后接合转移频率提高了7.69倍,并得到了一株新霉素效价提高了22.29％的neoC基因过表达菌株SF-neoC.结论 成功建立并优化了费氏链霉菌的遗传操作体系,为后续基于费氏链霉菌分子改造的其它应用提供依据.

摘要： 目的 观察新霉素对小鼠听功能及耳蜗毛细胞形态学变化的影响.方法 选取C57BL/6小鼠16只在出生后第8天开始连续10 d皮下注射硫酸新霉素,对照组(10只)皮下注射等量生理盐水.停药后1、4、8、12w进行听性脑干反应(ABR)检测.每次ABR检测后,新霉素组随机取3只小鼠,对照组随机取2只小鼠,处死后,取耳蜗进行冰冻切片,用免疫荧光方法观察耳蜗Corti器及毛细形态学变化.结果 新霉素可造成小鼠耳蜗毛细胞严重损伤,且小鼠ARB阈值显著增高,不可恢复;新霉素对耳蜗Corti器毛细胞的损伤顶圈最轻,中圈次之,底圈最重,且随着时间推移Corti器形态结构破坏逐渐加重且不可自我修复.结论 硫酸新霉素造成小鼠Corit器毛细胞的损伤是不可逆的.

摘要： 为降低酸奶在运输及储藏期间的后酸化,采用常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)和新霉素诱变筛选,通过致死率曲线与阳性筛选率曲线确定最佳处理条件为ARTP处理30 s,新霉素筛选质量浓度为300 mg/mL,该条件下共获得7株生长特性良好,具有较低H+-ATP酶活性的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)突变株.通过全脂牛乳发酵,突变菌株BJT-7在20 d储藏期间酸度维持在70°T以下,遗传稳定性良好.结果表明,ARTP是一种高效诱变方法,结合新霉素筛选可得到抗后酸化能力强的乳酸菌株.

摘要： 通过硝酸回流法制备碳点,发现加入新霉素后碳点荧光猝灭.基于内滤效应构建碳点-新霉素荧光传感体系用于快速检测新霉素含量,检出限为1.0mg·L-1.该体系用于实际样品中新霉素含量的测定,回收率为98.3％～101.6％.

摘要： 新霉素(Neomycin)是由费氏链霉菌(Streptomyces fradiae)产生的水溶性碱性氨基糖苷类抗生素,是一种理想的干扰蛋白质合成的杀菌剂,临床上主要用于治疗胃肠道和呼吸道感染,同时新霉素能提高饲料的利用率,促进禽畜生长,因此广泛地应用于畜牧业,生产绿色食品,近年来市场对新霉素的需求急剧增长.而目前国内新霉素生产中普遍存在发酵过程复杂周期长，产率低质量不稳定等缺点，新霉素生产菌种的发酵技术革新已势在必行。课题组前期对新霉素生产菌种Streptomyces fradiae SF1109进行微波与紫外复合诱变筛选获得一株新霉素突变高产菌Streptomyces fradiae FIM-WU-18，为了研究该菌种的生物合成调控过程，采用单因素试验结合正交设计优化发酵培养基组成，考察碳源、氮源及无机盐对合成目标产物新霉素和菌体生长量的影响，筛选确定了发酵培养基的最佳配方组成，其发酵效价比对照培养基提高45%以上。优化得到的发酵培养基配方简单高效，为新霉素的工业化高效发酵生产奠定基础。

摘要： 目的：以牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)为载体蛋白，合成新霉素(Neomycin)的人工免疫抗原BSA-Neo和检测抗原OVA-Neo。6次免疫新西兰白兔，血清效价达到1:64,000以上。方法：将免疫的兔脾细胞和240E骨髓瘤细胞融合，获得6株高特异性的杂交瘤细胞，其中一株经基因重组，获得稳定表达的兔单克隆抗体。结果：获得的兔单克隆抗体线性范围为0.125-2ng/mL，半数抑制浓度IC50为0.5ng/mL，与其他抗生素类药物链霉素、金霉素、庆大霉素的交叉反应率小于0.05％。结论：本实验制备的新霉素兔单克隆抗体具有检测灵敏度高、特异性强等特点。

摘要： 为了研究Streptomyces fradiae FIM-S38胞外产次级代谢产物新霉素的发酵条件，采用单因素试验优化发酵培养基，探讨摇瓶条件下液体发酵的主要影响因子初始pH值、装液量、转速等发酵参数的影响，同时进行自动发酵罐放大试验。结果确定了适宜发酵培养基和发酵参数。优化后的发酵水平较原生产工艺提高了50%以上，并在50-100L自动发酵罐上得到验证，为新霉素的工业化生产奠定了基础。

摘要： 新霉素(NEO)是由新霉素链霉菌产生的一种氨基糖苷类抗生素，具有抗菌谱广的特点，被广泛用于治疗畜禽细菌性感染。但是，新霉素对人和动物有潜在的耳毒性和肾毒性，在相关动物源性食品中的残留威胁着人类健康。本研究应用EDC法将NEO分别与KLH、BSA、OVA偶联，紫外吸收法测得其蛋白浓度分别为2.39mg/mL、2.12mg/mL，和3.13mg/mL。以偶联产物二次免疫小鼠后，小鼠血清效价达1：3200，并在竞争试验中表现出良好的阻断作用。以NEO-KLH和NEO-BSA作为免疫原，NEO-OVA作为检测原，应用杂交瘤技术获得3株ELISA效价高的单克隆细胞株，分别命名为11B5、3B1和10H7。以辛酸饱和硫酸铵法和Protein G Resin对单克隆抗体进行纯化，3株单克隆抗体间接竞争ELISA的IC50分别为2ng/mL、6ng/mL和18ng/mL，均属IgG1亚类，与其他氨基糖苷类抗生素交叉反应均小于0.01％。以11B5单克隆抗体包被酶标板，配合NEO-HRP建立直接竞争ELISA法，方阵试验确定抗体工作浓度为1：800，NEO-HRP工作浓度为1：16000。标准曲线显示该方法线性检测范围是0.5～7.5ng/mL，R2达0.9949，IC50=1.645ng/mL在牛奶样品中分别添加终浓度为10ng/mL、50ng/mL和100ng/mLNEO标准品，通过直接竞争ELISA检测并结合标准曲线得出其回收率分别为80.5l±12.38％、87.00±7.73％、68.73±2.25％，变异系数分别为10.41％、8.88％、3.27％。通过检测大量人工样品的检测，确立检测限(LOD)和和定量限(LDM)分别为7.12ng/mL和29.2μg/Kg。在对300份用新霉素治疗奶牛临床乳房炎的奶样检测中，直接竞争ELISA检出的超过国家规定的最高残留量(500μg/Kg)的样品为232份，而气质联用(GC/MS)法检出238份，两种方法的符合率高达97.5％。

摘要： 开展了农用抗生素新霉素的创制研究。离体活性表明新霉素对白菜软腐病菌、柑橘溃疡病菌、生姜姜瘟病菌和水稻白叶枯病菌有明显抑制作用，MIC分别为0.5，2.0，2.0和O.25μg/ml，浓度为200μg/ml时，体外防效分别达到77.55％、80.52％、77.55％和69.11%。新霉素在酸、碱、高温及紫外辐射条件下有较好稳定性。动物安全性实验表明，新霉素为微毒级。同时，研究了新霉素产生菌费氏链霉菌发酵动力学，研究表明新霉素产生菌对数生长期最大比生长速率μm为0.0866 h-1，产物合成期最大合成速率去q0为1.1867 x 10-4g/(ml·h)，拟合检验适用性较好。

摘要： 本研究模拟实际鸡养殖过程,口服法喂食新霉素,监测停药后鸡血和鸡肉中的新霉素残留变化,并考查它们之间的相关性。建立了鸡血清新霉素残留分析的阴离子交换色谱-脉冲妄培检测法,并成功应用于监测停药后鸡血清中新霉素的残留变化。基本建立了鸡肉样品中新霉素残留的分析方法,应用于监测停药后鸡肉中新霉素的残留变化。

摘要： 本实验旨在研究新霉素对植物细菌病害的防治,考察作为农用抗生素在生物防治领域运用的可能性。平板抑菌圈测定结果表明:新霉素对白菜软腐病菌、柑橘溃疡病菌、生姜姜瘟病菌和水稻白叶枯病菌有明显抑制作用,进一步试管二倍稀释法测定最低MIC值分别为0.5μg/ml、2.0μg/ml、2.0μg/ms和0.25μg/ml。新霉素体外活性试验结果显示新霉素对白菜软腐病、柑橘溃疡病、生姜姜瘟病和水稻白叶枯病有较好的防治作用,浓度为200μg/ml时,防效分别达到77.55％、80.52％、77.55％和69.11％。此外,稳定性试验表明新霉素在酸性和碱性环境中稳定且对温度、紫外线辐射也具有较好稳定性。新霉素小鼠经口急性毒性试验结果显示LD大于5000mg/kg。

摘要： 对新霉素产生菌弗氏链霉菌的微生物代谢特性及其胞外淀粉酶特性进行了研究.研究结果表明新霉素发酵过程中菌体生长和产物合成符合Gaden Ⅲ类过程.新霉素发酵过程对数生长期最大比生长速率为0.0829 h-1;产物合成期最大比生长速率0.0014 h-1,产物最大比合成速率为4.3×10-4 g·g-1·h-1.对数生长期还原糖生成速率为0.54 g·L-1·h-1,在发酵中后期迅速下降为0.08～0.10 g·L-1·h-1.过程分析表明:发酵过程中新霉素产生菌的胞外淀粉水解酶活力下降是影响新霉素合成和残糖浓度过高的主要原因.发酵过程动力学的研究结果为提高新霉素产量和降低糖耗提供了依据.

摘要： RNA干扰技术已经成为基因功能研究等领域的有力工具.利用人U6启动子构建了RNA干扰载体pUC19NU,它具有新霉素抗性并且能够在真核细胞中复制.以EGFP和p53为靶基因的干扰实验证明,该质粒能够有效地干扰相应靶基因的表达.

摘要： 许多化合物如糖、抗生素等,分子中通常含有较多羟基基团,没有强的光吸收官能团和荧光特性,在低紫外区虽然可以直接分析,但灵敏度不高,分析时往往需要衍生后进行检测或采用间接检测方法.多羟基化合物尽管在碳质材料电极上,超电势过高而无法检测,但在强碱性条件下,羟基可以在金属电极上发生催化氧化,利用这一特点,可以用电化学检测方法,无需衍生处理.

摘要： 本发明涉及一种创新霉素和/或开环创新霉素的生物合成的基因簇及相关所需基因，其特征在于，所述的基因簇序列核苷酸如SEQ ID No.1所示，其中依次包含cxnA、cxnB、cxnC、cxnD、cxnE、cxnF、cxnT、cxnR、trpRS九个关键功能基因，以及在创新霉素分子中引入S元素所必需的thiG、moeZ基因，其核苷酸序列分别为如SEQ ID No.2～12所示。

摘要： 一种从新霉素发酵液中提取新霉素的方法，该方法包括以下步骤：1）加温：将新霉素发酵液加温至65‑75°C；2）向加温后的新霉素发酵液中投入新霉素发酵液质量1–2﹪的硅藻土助滤剂；3）将步骤2）制得的新霉素发酵液通过过滤机过滤，得到含有新霉素的清液；4）将步骤3）制得的含有新霉素的清液直接进行上柱吸附；5）再进行解吸和浓缩，即制得新霉素成品。本发明所提供的一种从新霉素发酵液中提取新霉素的方法，可以解决新霉素生产中的环保问题，使硫酸新霉素的提取新工艺更节能，实现清洁生产。

摘要： 本发明公开了一种从硫酸新霉素发酵液中提取硫酸新霉素的方法，涉及一种药品原料的制备方法。该提取方法包括过滤、树脂吸附、预洗、解析、脱色、脱盐、转盐、喷干即得到成品。本发明达到的有益效果为：解决了现有技术存在的静态吸附量低，成本高，水资源浪费，环境污染,硫酸新霉素成品收率低，硫酸新霉素C含量高的问题，具有生产效率高，成本低，环境污染少，成品质量好的优点。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种从新霉素发酵液中提取硫酸新霉素的方法。一种从新霉素发酵液中提取硫酸新霉素的方法，包括以下步骤：(1)将新霉素发酵液经过滤、第一次树脂吸附、洗涤、脱色解析后，得洗脱液；然后将洗脱液进行浓缩，得浓缩液；(2)将浓缩液稀释，并调节pH至6‑7后，流进阳离子树脂柱进行第二次吸附；然后用第一氨水、第二氨水分别进行预洗和洗涤；最后用第三氨水进行解析，收集解析液；(3)将解析液进行浓缩、成盐、活性炭脱色、干燥，即得。该方法解决了现有工艺制得硫酸新霉素中硫酸新霉素C含量高，毒性大的问题，极大提高现有硫酸新霉素的质量。

摘要： 本发明涉及一种降低新霉素发酵过程中新霉素C含量的方法，包括发酵培养，以及在发酵培养过程中通过分阶段控制溶氧降低新霉素C含量的方法，得到效价高、新霉素C含量低的发酵液。本发明方法操作简单，在原有的发酵工艺基础上，不额外增加生产成本，减少后期提取工艺处理难度，提高产品收率，简化工艺。

摘要： 本发明涉及一种创新霉素和/或开环创新霉素的生物合成的基因簇及相关所需基因，其特征在于，所述的基因簇序列核苷酸如SEQ ID No.1所示，其中依次包含cxnA、cxnB、cxnC、cxnD、cxnE、cxnF、cxnT、cxnR、trpRS九个关键功能基因，以及在创新霉素分子中引入S元素所必需的thiG、moeZ基因，其核苷酸序列分别为如SEQ ID No.2～12所示。

摘要： 本发明公开了一种新霉素发酵废液渣液分离及回收残留新霉素的方法。其特征是调节新霉素生产中产生的发酵废液pH值至偏中性，加入助凝剂和絮凝剂，并通过板框压滤机使渣液分离，分离出来的清液通过专用离子交换柱，利用树脂吸附清液内残留的新霉素。不仅提高了生产收率，增加了经济效益，而且减轻污水处理难度及新霉素残留带来的环境危害，使生产废水中新霉素残留降低了94％左右。

摘要： 本发明公开一种用于检测新霉素的新霉素分子印迹‑量子点聚合物的制备方法，包括以下步骤，首先在量子点表面修饰二氧化硅壳层得到二氧化硅壳层量子点，然后在二氧化硅壳层量子点的表面修饰硅烷化苯硼酸和新霉素得到量子点复合物，最后将量子点复合物中新霉素洗脱下来得到具有新霉素空间识别位点和苯硼酸‑糖基亲和结合位点的新霉素分子印迹‑量子点聚合物。该新霉素分子印迹‑量子点聚合物能可特异、快速、灵敏、高通量地检测新霉素含量。

摘要： 一种从新霉素发酵液中提取新霉素的方法，该方法包括以下步骤：1）加温：将新霉素发酵液加温至65-75°C；2）向加温后的新霉素发酵液中投入新霉素发酵液质量1–2﹪的硅藻土助滤剂；3）将步骤2）制得的新霉素发酵液通过过滤机过滤，得到含有新霉素的清液；4）将步骤3）制得的含有新霉素的清液直接进行上柱吸附；5）再进行解吸和浓缩，即制得新霉素成品。本发明所提供的一种从新霉素发酵液中提取新霉素的方法，可以解决新霉素生产中的环保问题，使硫酸新霉素的提取新工艺更节能，实现清洁生产。

摘要： 本发明公开了一种从硫酸新霉素发酵液中提取硫酸新霉素的方法，涉及一种药品原料的制备方法。该提取方法包括过滤、树脂吸附、预洗、解析、脱色、脱盐、转盐、喷干即得到成品。本发明达到的有益效果为：解决了现有技术存在的静态吸附量低，成本高，水资源浪费，环境污染,硫酸新霉素成品收率低，硫酸新霉素C含量高的问题，具有生产效率高，成本低，环境污染少，成品质量好的优点。