质粒载体

摘要： 目的 构建含有过氧化物氧化还原酶1(Prdx1)基因的pMSCV重组质粒,转染至人气道上皮细胞内,并进行鉴定,为进一步研究Prdx1在细胞内的功能奠定基础.方法 构建Prdx1-pMSCV质粒,将Prdx1mRNA编码区序列克隆至pMSCV载体上,测序验证后大量提取,转染至BEAS-2B细胞内,细胞内可高表达Prdx1蛋白,收集总mRNA和蛋白裂解液分别进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Prdx1-mRNA和蛋白质印迹(Western blot)检测Prdx1蛋白变化.观察质粒转染后细胞内Prdx1高表达.结果 重组质粒经限制性内切酶EcoR工和BglⅡ双酶切及测序鉴定均证实Prdx1基因已正确克隆到pMSCV质粒载体中.Westernblot结果进一步证实Prdx1-pMSCV重组质粒构建正确.结论 本研究正确构建了Prdx1-pMSCV质粒.

摘要： 衣原体(chlamydia)是人类重要的致病菌之一,不同衣原体感染会引起多种人类疾病.因此,衣原体研究正逐步受到广泛的关注.依据近年来国内外衣原体的研究进展,概述了荧光下等位基因交换突变(fluorescence-reported allelic exchange mutagenesis,FRAEM)技术、分离纯化衣原体的空斑技术、质粒载体的构建及转化技术、蛋白质谱技术在衣原体研究中的应用进展.

摘要： 第29题本题是一道考查生物化学知识的题目,主要考查考生对于ATP分子代谢的方式以及DNA分子半保留复制等知识点的掌握情况。本题分值为10分,考生平均得分为6.1分,考生丢分的主要原因是基础知识点掌握不牢固和表述生命现象的能力差。该题的分值分布比例如图1所示。

摘要： 质粒是基因工程的常见载体,质粒的结构和重组质粒的筛选和鉴定是高考的热点问题之一,本文通过分析质粒结构和插入失活法,结合2016年全国卷理综第40题,探讨重组质粒的筛选和鉴定问题。

摘要： 质粒是基因工程的常见载体,质粒的结构和重组质粒的筛选和鉴定是高考的热点问题之一,本文通过分析质粒结构和插入失活法,结合2016年全国卷理综第40题,探讨重组质粒的筛选和鉴定问题.

摘要： 2016年生物高考已落下帷幕,全国及各省、市一共命制了10套生物试卷,虽然各地高考试卷结构有所差异,题型也不尽相同,但是也有一些共性特征.比如,符合课改精神,合乎新课程理念,紧扣《2016年高考考试大纲及考试说明》,具有较高的信度、效度,有较高的区分度及适当的难度,守正出新、稳步求进.具体表现在：第一,创设必要的背景信息,重视获取新知识和处理信息能力的考查;第二,渗透科学探究的方法,重视思维能力的考查;

摘要： 目的:构建大鼠Ⅰ型大麻素受体(CB1)真核基因表达载体,并检测其在细胞中的表达情况.方法:从大鼠海马组织中提取总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出CB1基因片段,产物连接到pMD18-T载体上.阳性实验筛选出阳性克隆,经EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ双酶切及测序鉴定后,将其连接到载体pcDNA 3.1(+)中,构建质粒载体pcDNA3.1(+)-CB1,脂质体转染原代人胚肾293细胞(HEK293细胞).用Western blot实验鉴定细胞中CB1蛋白的表达,用免疫荧光细胞染色联合激光扫描共聚焦法检测其在细胞中表达的部位.结果:采用RT-PCR成功获得大鼠CB1基因,PCR扩增得到1 500 bp左右的CB1基因片段,双酶切鉴定及DNA测序证实质粒载体pcDNA3.1(+)-CB1构建成功.Western blot实验、免疫荧光细胞染色联合激光扫描共聚焦法证实载体pcDNA3.1 (+)-CB1能在HEK293细胞中表达,且表达产物主要分布在细胞膜表面和细胞质中.结论:构建的pcDNA3.1 (+)-CB1表达载体能成功转入真核HEK293细胞,并在细胞膜表面和细胞质中表达CB1蛋白.

摘要： 随着基因工程和分子生物学的飞速发展，在转基因微生物领域里，枯草芽孢杆菌表达系统已经成为一种继大肠杆菌表达系统和酵母表达系统之后的新型表达系统，为外源基因提供了良好的宿主环境，使外源基因可以进行表达，目前已经取得了较显著的成绩。该文阐述了枯草芽孢杆菌转基因研究中质粒载体的构建、转化方法、菌株全基因序列及外源基因在枯草芽孢杆菌中的表达等方面的进展。

摘要： 背景：端粒酶反转录酶对端粒酶活化起重要作用。 目的：利用pLentilox3.7.U6载体构建靶向大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶基因的短发夹RNA干扰分子表达载体并鉴定其作用。 方法：选择端粒酶反转录酶基因上两段序列体外合成RNA干扰分子的正义链和反义链模板序列，经退火成互补双链，与线性化pLentilox3.7.U6载体连接、转化大肠杆菌和序列测定，应用蛋白质印迹和免疫荧光技术，在体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞模型上验证构建的干扰载体抑制端粒酶反转录酶基因表达的效果。 结果与结论：蛋白质印迹和免疫荧光检测结果表明，重组质粒干扰组中星形胶质细胞端粒酶反转录酶均呈低表达。结果证实，实验成功构建了针对大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶基因的短发夹RNA质粒表达载体，此载体能有效抑制体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶的表达。

摘要： RNA干扰技术已经成为基因功能研究等领域的有力工具.利用人U6启动子构建了RNA干扰载体pUC19NU,它具有新霉素抗性并且能够在真核细胞中复制.以EGFP和p53为靶基因的干扰实验证明,该质粒能够有效地干扰相应靶基因的表达.

摘要： α微球蛋白(α-Microglobulin,α-MG)又称蛋白HC(protein HC),最早由Berggard从人的尿中分离得到的一种分子量为26-33kD的棕黄色糖蛋白,肝细胞是合成 α-MG的主要部位.由于该蛋白的产生较恒定,较容易透过肾小球滤过膜,滤过的绝大部分被肾小管重吸收,且其测定不受尿pH等因素的影响,因此在肾脏病诊断方面被认为具有重要价值.尿中α-MG浓度升高已公认是各种疾病和药物引起的肾小管早期损伤的敏感而可靠的指标之一.目前,α-微球蛋白纯品的获得主要是从慢性肾衰竭或重金属中毒病人尿中提取的,所用的方法包括硫酸铵沉淀,超滤浓缩,亲和层析,离子交换层析和凝胶过滤层析等.步骤繁琐,回收率低,使得获得的纯品的成本较高,且每批标本(即每个病人)所含的蛋白会有不同,每换一批标本纯化方法就要稍作改动.通过基因工程将目的蛋白用原核或真核表达系统进行表达的方法,具有规模大,速度快,成本低,易于操作的优点,本实验的目的是通过基因工程的方法得到α-MG.

摘要： 以干酪乳杆菌L.casei34103染色体DNA为模板，利用PCR技术扩增出胸苷酸合成酶ThymidylatesynthasemthyA)基因，回收纯化。选择以红霉素抗性为选择压力的可以在大肠杆菌和乳酸菌中穿梭表达的质粒pW425e为基本质粒，以thyA基因取代红霉素基因，获得重组载体并鉴定。此重组载体可以对thyA基因缺陷的大肠杆菌X51和嗜酸乳杆菌DOMLaS107进行功能弥补，即可以在没有外源性胸嘧啶核苷的LB和MRS培养基上生长。进而构建了以thyA基因为选择压力的非抗生素抗性穿梭表达载体，其大小为3716bps，并命名为pW425t。

摘要： 本文对核酸疫苗及基因治疗用质粒的回收纯化进行了研究。文章围绕质粒DNA、产物质量控制和检测方法、质粒制备、综合分离纯化系统等进行了论述。

摘要： 本文对核酸疫苗及基因治疗用质粒的回收纯化进行了研究。文章围绕质粒DNA、产物质量控制和检测方法、质粒制备、综合分离纯化系统等进行了论述。

摘要： 本文对核酸疫苗及基因治疗用质粒的回收纯化进行了研究。文章围绕质粒DNA、产物质量控制和检测方法、质粒制备、综合分离纯化系统等进行了论述。

摘要： 本发明的目的是开发新型载体，优选开发下述新型载体：所述新型载体即使没有抗生素的选择压力也能够在雷尔氏菌属、贪铜菌属和沃特氏菌属中稳定保持，并且没有接合转移性。本发明还提供使用该载体的聚羟基链烷酸酯稳定生产菌株和使用该菌株生产聚羟基链烷酸酯的方法。本发明是下述新型重组载体，所述重组载体含有在雷尔氏菌属、贪铜菌属和沃特氏菌属中发挥作用的DNA复制起始区域；本发明特别是使用下述重组载体得到的转化体，所述重组载体含有在雷尔氏菌属、贪铜菌属和沃特氏菌属中发挥作用的DNA复制起始区域和稳定化重组载体的区域(par区域)，所述载体能够在细菌中稳定保持，并能高效生产聚羟基链烷酸酯。

摘要： 本发明公开了一种极端嗜盐古菌质粒及其衍生质粒。本发明所提供的极端嗜盐古菌质粒，名称为pSCM201，来源于极端嗜盐古菌AS7094，它具有序列表中序列3的核苷酸序列。pSCM201的衍生质粒包括pSCM204，pSCM206。本发明的极端嗜盐古菌质粒及其衍生质粒将在极端嗜盐古菌的研究和开发中发挥重要作用。

摘要： 本发明的目的是开发新型载体，优选开发下述新型载体：所述新型载体即使没有抗生素的选择压力也能够在雷尔氏菌属、贪铜菌属和沃特氏菌属中稳定保持，并且没有接合转移性。本发明还提供使用该载体的聚羟基链烷酸酯稳定生产菌株和使用该菌株生产聚羟基链烷酸酯的方法。本发明是下述新型重组载体，所述重组载体含有在雷尔氏菌属、贪铜菌属和沃特氏菌属中发挥作用的DNA复制起始区域；本发明特别是使用下述重组载体得到的转化体，所述重组载体含有在雷尔氏菌属、贪铜菌属和沃特氏菌属中发挥作用的DNA复制起始区域和稳定化重组载体的区域(par区域)，所述载体能够在细菌中稳定保持，并能高效生产聚羟基链烷酸酯。

摘要： 本发明公开了一种极端嗜盐古菌质粒及其衍生质粒。本发明所提供的极端嗜盐古菌质粒，名称为pSCM201，来源于极端嗜盐古菌AS7094，它具有序列表中序列3的核苷酸序列。pSCM201的衍生质粒包括pSCM204，pSCM206。本发明的极端嗜盐古菌质粒及其衍生质粒将在极端嗜盐古菌的研究和开发中发挥重要作用。

摘要： 一类通过质粒载体介导的基因治疗重组载体本发明涉及生物制药领域，具体地说是涉及一种可高效表达人肝细胞生长因子的重组载体及其应用。本发明还涉及含有构建的增强信号肽提高蛋白表达量的药物及其组合物用于制备治疗下肢动脉缺血性疾病的用途。

摘要： 本发明公开的一种含有HA蛋白融合标签的植物表达质粒载体，为该载体在植物表达质粒载体的C端含有HA蛋白融合标签。构建所述质粒载体方法，包括如下步骤：(1)以pCAMBIA1302为出发质粒，采用Eco065I酶切该质粒，然后用Klenow Fragment酶将Eco065I酶切后的粘性末端补平成平末端，再用SpeI酶切，通过凝胶电泳切胶回收大片段；(2)全序列合成包含编码3个HA蛋白的核苷酸序列；(3)设计扩增引物；(4)在N端加上SpeI酶切位点，在C端加上一个核苷酸G；用SpeI酶切该合成片段；最后连接产物，热激转化DH5α,通过PCR鉴定得到阳性克隆。本发明的优点在于，得到HA蛋白融合标签的植物表达质粒载体，进而帮助使用者快速的研究蛋白功能，并且不会对目标蛋白自身的功能发生干扰，保证能够准确地研究蛋白的功能。

摘要： 本发明公开的一种含有FLAG蛋白融合标签的植物表达质粒载体，为在植物表达质粒载体的C端含有FLAG蛋白融合标签的植物表达质粒载体。构建所述质粒载体方法，包括如下步骤：(1)以pCAMBIA1302为出发质粒，采用SpeI和Eco065I酶切该质粒，通过凝胶电泳切胶回收大片段；(2)全序列合成包含编码3个FLAG蛋白的核苷酸序列；(3)设计扩增引物；(4)在N端加上SpeI酶切位点，在C端加上Eco065I酶切位点；用SpeI和Eco065I酶切该合成片段；最后连接产物，热激转化DH5α,通过PCR鉴定得到阳性克隆。本发明的优点在于，得到小蛋白的融合标签的植物表达质粒载体，进而帮助使用者快速的研究蛋白功能，并且不会对目标蛋白自身的功能发生干扰，保证能够准确地研究蛋白的功能。

摘要： 本发明公开的一种含有C‑Myc蛋白融合标签的植物表达质粒载体，为在植物表达质粒载体的C端含有C‑Myc蛋白融合标签的植物表达质粒载体。构建所述质粒载体方法，包括如下步骤：(1)以pCAMBIA1302为出发质粒，采用SpeI和Eco065I酶切该质粒，通过凝胶电泳切胶回收大片段；(2)全序列合成包含编码3个C‑Myc蛋白的核苷酸序列；(3)设计扩增引物；(4)在N端加上SpeI酶切位点，在C端加上Eco065I酶切位点；用SpeI和Eco065I酶切该合成片段；最后连接产物，热激转化DH5α，通过PCR鉴定得到阳性克隆。本发明的优点在于，得到小蛋白的融合标签的植物表达质粒载体，进而帮助使用者快速的研究蛋白功能，并且不会对目标蛋白自身的功能发生干扰，保证能够准确地研究蛋白的功能。

摘要： 一类通过质粒载体介导的基因治疗重组载体。本发明涉及生物制药领域，具体地说是涉及一种可高效表达人肝细胞生长因子的重组载体及其应用。本发明还涉及含有构建的增强信号肽提高蛋白表达量的药物及其组合物用于制备治疗下肢动脉缺血性疾病的用途。

摘要： 本发明公开了一种用于植物基因表达载体构建的质粒载体及其应用。利用经大肠杆菌质粒pUC18改造的pKAFCR1和经双核农杆菌Ti质粒pBI121改造的pKAFCR100两种质粒，在pKAFCR1的35S启动子和NOS终止子之间引入多个克隆酶切位点MCS，然后将包含35S‑MCS‑NOS片段切下连接到pKAFCR100，从而构建成质粒载体pNULPGE200。经PCR等方法克隆得到的目的基因可以多种方式很方便地连接到该质粒载体的35S启动子与NOS终止子之间的多个克隆酶切位点MCS，使目的基因能够在植物体内稳定表达；该质粒载体还具有独立表达的卡那霉素NPT II耐性基因和sGFP绿色荧光蛋白报告基因，能够显著提高转基因植物细胞的选拔效果。