内切酶

摘要： 巴洛沙韦玛波西酯(baloxavir marboxil)是近20年来首创的新作用机制的抗流行性感冒(流感)病毒新药,由日本盐野义(Shionogi)制药株式会社首先研制,作用于流感病毒基因组转录所必需的聚合酶酸性蛋白的内切酶,对甲型和乙型流感病毒均有很强的抑制活性.日本厚生省新药审批部门:日本医药品医疗器械综合机构(Pharmaceuticals and Medical Devices Agency,PMDA)于2015年1 1月给予该公司单剂治疗≥12岁、无并发症的急性流感优先评审待遇,2018年2月予以加速许可,用于治疗甲型和乙型流感,并于2018年2月23日批准上市,商品名为Xofluza(R).2016年2月盐野义制药公司与瑞士罗氏制药公司签署合作协议,授予罗氏公司除日本和中国台湾地区之外的全球开发与经营权,只保留在美国共同开发权.瑞士罗氏制药集团公司属下的基因泰克(Genentech)制药公司于2018年6月26日获得美国食品药品监督管理局(FDA)优先审评资格,并于2018年10月24日获准上市,商品名为Xofluza(R).该文对巴洛沙韦玛波西酯的非临床和临床药理毒理学、临床研究、不良反应、适应证、剂量与用法、用药注意事项及知识产权状态和国内外研究进展等进行介绍.

摘要： 生物计算具有存储海量信息和并行操作处理数据的功能.Haomiao Su等人利用DNA链置换和聚合酶实现了一个高效且复杂的DNA逻辑电路.本文在Haomiao Su等人的试验基础上进行了改进和创新.通过DNA聚合酶和DNA内切酶,形成输入信号的扩大,在低浓度输入的基础上,实现高信号输出.

摘要： 本研究收集了珙桐、喜树等19份植物材料,运用分子生物学和生物信息学手段比对分析了rpoB,rpoC,matK等8个基因碱基序列上的单核苷酸多态性（SNP）位点,在atpF-atpH基因上找到了合适的SNP位点并设计了dCAPS引物,经PCR扩增和酶切验证后,将SNP转化为衍生型酶切扩增多态性序列（d CAPS）标记,可促进SNP标记在珙桐的遗传图谱构建、基因定位、种质资源鉴定、遗传多样性研究等领域的应用。

摘要： RNA操作是目前研究的热点之一。要实现精确的RNA操作，需要特异地识别靶向目标RNA分子并对其进行剪切。但到目前为止，这类序列特异的RNA内切酶在自然界中还没有被发现。因此，寻找一类序列特异的RNA内切酶显得尤为重要。

摘要： Influenza is a globally serious contanious desease. The main problems faced with anti-influenza agents are the drug re-sistance and low efficacy to highly pathogenic virus. RNA poly-merase is acritical enzyme involved in replication and transcrip-tion of virus in the host cell, and the PA subunit, which provides primers for viral transcription via its endonuclease activity, is a promising anti-influenza target. This article mainly discusses the n PA subunit, including its structures, functions, and progress in the development of anti-influenza agents, providing information for research on the PA subunit and anti-influenza agents targeting PA subunit.%流感是世界范围内的严重传染性疾病，目前抗流感药物面临的主要问题是病毒耐药性和对高致病性流感病毒的效价低。流感病毒RNA聚合酶是病毒在宿主细胞内完成复制和转录过程的关键性酶，其中PA亚基通过内切酶活性为流感病毒的转录过程提供引物，成为潜在抗流感药物靶点。该文对PA亚基的结构、功能及内切酶抑制剂类抗流感药物研究进展进行概述，为PA亚基的深入研究及针对此靶点的抗流感药物发现提供信息指导。

摘要： CRISPRs-Cas系统是一种细菌获得性免疫系统,为一段规律成簇间隔短回文重复,保护细菌和古生菌免遭病毒、质粒等的入侵.这种免疫系统是由一种小RNA和多结构域蛋白质/蛋白复合物构成,其作用机理可能与真核生物的RNA干扰过程类似.这个系统已发展为一种高效、特异、操作简单易行的基因修饰工具,与TALEN 、ZFN相比,CRISPR-Cas系统的出现使得基因编辑变得更加有效和简易,具有更大的潜力.CRISPR/Cas系统已成功应用到细胞、干细胞、小鼠、斑马鱼及植物等多种生物,显示了其强大的基因编辑优点.综述了CRISPR-Cas系统的技术原理及其在生物学研究中的应用最新研究进展,并探讨了该技术的发展前景.

摘要： 采用ITS PCR-RFLP方法对供试116株木霉属菌株进行多样性分析,对其中22株抗病优良菌株进行抗病多样性差异分析,用NTSYS-PC生物软件对DNA条带进行聚类分析,结果显示,Hae Ⅲ酶切共获得11个条带,可将供试菌株分为12种基因型;Hinf I共获得13个条带,可将供试菌株分为15种基因型.由116株木霉菌株的聚类图表明,木霉属菌株遗传相似系数变异范围为0.72-1.00.由22株抗病优良菌株的聚类图表明,在遗传相似系数为0.66处可将22株菌分为2类,其中ACCC 30371由于其酶切图谱的特异性在遗传相似系数为0.66处同其他菌株完全分开;在遗传相似系数为0.73处可将剩余21株菌分为2类,第一类中对9种病原菌全部表现抗性的菌株有6株,第二类中对9种病原茵全部表现抗性的菌株有2株.结果证明,本研究方法基本可将木霉属真菌归类,但所获数据在分析本属的抗病差异性这一现象上不够充分,对于其中可能存在的原因予以分析探讨.

摘要： Totally 240 EcoR I /Use I AFLP selective primer pairs, 96 Pst I / Mse I AFLP selective primer pairs and 96 Pst I / Tag I AFLP selective primer pairs were used in the analysis of Shanyou162×Sunoliec95R peanut mapping parental lines, The results showed significant difference in total number of bands, polymorphic bands and polymorphic percentage. The study demonstrated that resorting to alternative enzyme combinations may be disclosed in genetic variations in the cultivated peanut. It is judicious options in developing AFLP markers so that to lay the foundation for molecular breeding of the peanut.%利用扩增片段长度多态性(Amplified fragment length polymorphism,AFLP)标记技术,3种不同的酶切组合,其中EcoR Ⅰ/Mse Ⅰ 240对引物、Pst Ⅰ/Mse Ⅰ 96对引物、PstⅠ/Taq Ⅰ96对引物,对汕油162×Sunoliec95R作图亲本进行分析,统计了不同酶切组合的扩增总带数、多态性位点及多态性率.多态性位点、多态性率及扩增总带数都有不同程度的差异,说明尝试不同的限制酶组合可以揭示出花生品系间更为丰富的遗传变异.有望开发AFLP分子标记,为花生分子育种打下基础.

摘要： Because of the metal ions can affect the activity of endo-l,4-13-D-glucanase （EG） and exo-1,4-β-D-glucanase （CBH） on cellulose and different metal ions have the different activity. Accordingly, we select three kinds of cellulase and do the single-factor experiment. The activity of EG and CBH on cellulase were results showed： The activity of EG can improve effectively when the concentration of K＋ is 0.9 mg/mL, Ca2＋ 0.3 mg/mL, Zn2＋ 1.2 mg/mL, Cu2＋ 1.2 mg/mL; Mg2＋, Ca2＋, Ba2＋, Cu2＋, Zn2＋ showed the inhibitory character. The Al3＋ had some inhibition on the cellulase activity of EG and CBH. Anions with different valences have no effect on the activity of EG and CBH.%金属离子可以影响纤维素内、外切酶的活性，且不同金属离子对其活性影响程度也不同。据此，本实验选取三种纤维素酶进行单因素实验，对其内、外切酶活性进行研究。实验结果表明，当金属离子的质量浓度为：K＋0．9mg／mL，Ca2＋0．3mg／mL，Zn2＋1．2mg／mL，Cu2＋1．2mg／mL，能较好地提高纤维素内切酶活；而Mg2＋、Ca2＋、Ba2＋、Cu2＋、Zn2对纤维素外切酶活都有抑制作用；Al3＋对纤维素内、外切酶活都有抑制作用：不同价杰阴离子对纤维素内、外切酶活影响不大。

摘要： 利用差分脉冲伏安（DPV）法，结合内切酶循环放大的技术，结合PbS 纳 米粒子标记的DNA 探针与固定在磁珠上的捕获DNA，构建了DNA 电化学生物 传感器， 并将其运用于DNA的检测，有较高的灵敏度和选择性。

摘要： 本文对葡萄糖在米曲霉聚半乳糖醛酸内切酶(PG)的生物合成中的作用进行了研究,在试验范围内(浓度范围1~10g/L)葡萄糖未对米曲霉C491PG的合成产生抑制,但葡萄糖可使米曲霉C491的产酸量增加,导致发酵液中的pH下降.葡萄糖即使在不同时间加入培养体系中,对米曲霉PG的生物合成总量均不表现出抑制作用,且PG产量还有少量提高.外加了葡萄糖的培养基中,在菌体生长初期残余还原糖出现增加,当培养基中葡萄糖基本消耗之后,发酵液中PG活力开始出现明显增加.生长初期加入葡萄糖的处理在生长一段时间后残余还原糖变化曲一和对照组基本吻合.葡萄糖对米曲霉C491的PG生物合成总量无影响,但对PG的生物合成产生一定的迟滞作用.不同研究者对葡萄糖在聚半乳糖醛酸内切酶(PG)的微生物合成中的作用有不同的结论.对大多数微生物来说,葡萄糖对它们产生PG的过程均有抑制.下面将采用简单的合成培养基对葡萄糖在PG合成中的作用进行初步的研究采用营养成份简单的培养基进行研究是为了尽可能地排除复杂因子对PG合成的影响.

摘要： 丙型肝炎病毒（HCV）是一种单链RNA病毒，主要在器官移植、血液传输、肾析以及静脉吸毒等过程中传染，感染HCV后能引起一些列慢性肝炎，最终导致肝硬化甚至肝癌

摘要： 1988年deBold从猪脑中发现了一种具有利钠利尿作用的多肽，命名为脑钠肽，又称B型钠尿肽(BNP)。人心肌细胞首先合成的是含108个氨基酸的B型钠尿肽原(proBNP)，之后在内切酶的作用下被切割为含76个氨基酸的N末端B型钠尿肽原(MW 8.5 kD)和含32个氨基酸的C端多肽BNP(MW 3.5 kD)。钠尿肽家族的分子结构中包括由二硫键连接构成的环状结构，可与钠尿肽受体结合发挥利钠、利尿、扩血管、拮抗肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)和交感神经系统(SNS)的作用。我国对于BNP/NT-proBNP的临床研究才刚刚起步，检测BNP/NT-proBNP的免疫试剂进入中国不到一年，他们的生物学特性、临床应用等诸多方面还有许多内容未被大家所认识。本文简要评述了BNP/NT-proBNP在心衰管理中的作用及其实验室检测的注意事项。

摘要： 本文应用PCR-RFLP技术,对我国口岸截获频率较高的9种检疫性实蝇开展了快速鉴定方法研究,结果表明,设计出的2组引物对9种供试实蝇线粒体DNA(mtDNA)的PCR扩增片断大小分别约为350bp和450bp.用限制性内切酶MSE1和DRAI对PCR扩增产物进行酶切,得到的酶切位点可将供试的9种实蝇区分开来.该方法不受供试实蝇地理来源及食物源的影响,对各种虫态(卵、幼虫、蛹)和不同性别的成虫均适用,可用于口岸截获实蝇的快速检疫鉴定.

摘要： 本文对来自中国不同大豆产区的10个大豆胞囊线虫(Heteroderaglycines)群体及1个美国的群体rDNA中的ITS区进行了PCR扩增,相关的产物通过五种限制性内切酶进行了酶切和序列比对分析.结果表明,各群体经PCR扩增均得到一条大约1000bp大小的片段;各群体的rDNA中的ITS区用AluⅠ、CfoⅠ、MvaⅠ、RsaⅠ酶切后具有相同的酶切表型,只有AvaⅠ在来自山西太谷的群体中产生两种表型;序列分析表明,在大豆胞囊线虫种内群体之间ITS区中,ITS1和编码5.8SRNA基因区的序列完全相同,而在ITS2区有3个碱基的差异,显示了大豆胞囊线虫rDNA中的ITS区在种内群体的稳定性。

摘要： 大豆胞囊线虫Heteroderaglycines(SCN)广泛分布于亚洲和美洲,在中国和美洲被认为大豆主要病害.SCN从遗传上讲不是纯的,并且可以在短时间内克服大豆的抗性,在此研究中,应用了被认为具有较大变异的遗传区域-内转录间隔区(包括5.8S、ITS1和ITS2),来分析中国和美洲的美国、加拿大、阿根廷SCN群体的种内变化.本试验在大豆田中采集16个SCN样品用于测定,所有样品收集后在温室大豆感病品种Essex上进行繁殖,获取卵和二龄幼虫,进行DNA提取,用PCR扩增ITS片段之后,用17种限制性内切酶来酶切PCR产物,共产生25条酶切片段.研究 中国和美洲大豆胞囊线虫rDNA-ITS-RFLP。

摘要： 本文首先介绍了细胞程序性死亡和细胞凋亡两大概念的区别,接着分析了细胞凋亡的分子机理及在医学临床的意义,同时分析了细胞凋亡的形态学和生化方面的变化特点.

摘要： 本文首先介绍了细胞程序性死亡和细胞凋亡两大概念的区别,接着分析了细胞凋亡的分子机理及在医学临床的意义,同时分析了细胞凋亡的形态学和生化方面的变化特点.

摘要： 公开了一种生物化学和分子生物学领域的方法。该方法涉及改善被标记寡核苷酸探针的切割动力学，因此提高了检测核酸过程中的信噪比。

摘要： 本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及表达重组菊粉内切酶的基因工程菌株及重组菊粉内切酶的制备方法。本发明提供了编码菊粉内切酶的DNA分子、质粒载体、表达重组菊粉内切酶的基因工程菌株及重组菊粉内切酶的制备方法，本发明表达获得的重组菊粉内切酶的活性高达1500U/mL～1800U/mL，表达量可达9g/L；存放10天后仍有80％的酶活力得以保存。

摘要： 本发明公开了一种表达纤维素外切酶和内切酶双活性蛋白构建纤维素酶高产菌株的方法，属于酶工程领域。该方法为通过同源重组和基因工程技术将具有纤维素外切酶和内切酶双活性蛋白的编码基因整合到黑曲霉热激蛋白基因的位置。首先合成合成核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的同源重组片段，用SalI酶切该重组片段和pWM1质粒再连接转化DH5α得到同源重组质粒；用该同源重组质粒转化农杆菌，通过农杆菌介导转化得到纤维素酶高产黑曲霉菌株。本发明利用热激表达实现了通过提高温度大幅度增加目的蛋白的表达，从而更显著的提高纤维素外切酶和内切酶的活性，增加纤维素酶的酶活。

摘要： 本发明公开一种基于限制性内切酶HpaⅡ和核酸外切酶Ⅲ的DNA甲基化及甲基化转移酶活性的检测方法。制备了无标记的DNA探针，该探针序列包含了限制性内切酶的切割位点和甲基化的CpG位点,通过该无标记的DNA探针与目标DNA杂交，用甲基化转移酶进行甲基化处理，再用限制性内切酶HpaⅡ的特异性切割以及作用于双链DNA的3ˊ→5ˊ外切酶活性的核酸外切酶Ⅲ作用，然后利用荧光信号分子噻唑橙对单双链DNA不同信号实现检测甲基化及甲基转移酶活性的目的。本发明无需制备复杂材料和标记DNA探针，可避免材料制备及标记DNA探针而导致检测成本高、操作烦琐，重现性差的缺陷。本发明具有成本低、快速、简便、灵敏度高的优点。

摘要： 本发明公开了生产葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶的方法。属生物技术领域。首先克隆木霉的葡聚糖内切酶基因、葡聚糖外切酶基因和β-葡萄糖苷酶基因；构建含这三种酶基因表达框架的枯草芽孢杆菌表达载体和毕赤酵母表达载体；将表达载体转化相应的宿主菌；分别筛选高表达葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶的枯草芽孢杆菌重组子和毕赤酵母重组子作为工程菌。发酵枯草芽孢杆菌工程菌和毕赤酵母工程菌生产的重组混合葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶。本发明解决了用天然菌株生产混合葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶中遗留的酶产量低的关键问题，有利于降低其酶产品的价格。

摘要： 本发明公开了一种共表达菊粉外切酶和内切酶的重组毕赤酵母菌株，该菌株命名为巴斯德毕赤酵母(Pichia？pastoris)GS115-INU1-INU2，已于2014年04月16日保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏编号为CGMCC？No.9050。本发明提供工程菌株是通过表达质粒pPIC9和pPIC9K，将菊粉外切酶基因和菊粉内切酶基因整合入毕赤酵母GS115基因组上，并从中筛选获得。通过甲醇诱导发酵该菌，可同时表达两种菊粉酶，经发酵制备的菊粉酶酶活性可达4211.8U/ml，并且用于水解菊粉产生单糖的反应时间短，转化效率高，使得用酶法生产高果糖浆具有充分的可行性，足以取代传统的高果糖浆的生产方法，具有巨大的应用价值。

摘要： 本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及表达重组菊粉内切酶的基因工程菌株及重组菊粉内切酶的制备方法。本发明提供了编码菊粉内切酶的DNA分子、质粒载体、表达重组菊粉内切酶的基因工程菌株及重组菊粉内切酶的制备方法，本发明表达获得的重组菊粉内切酶的活性高达1500U/mL～1800U/mL，表达量可达9g/L；存放10天后仍有80％的酶活力得以保存。

摘要： 本发明公开了一种表达纤维素外切酶和内切酶双活性蛋白构建纤维素酶高产菌株的方法，属于酶工程领域。该方法为通过同源重组和基因工程技术将具有纤维素外切酶和内切酶双活性蛋白的编码基因整合到黑曲霉热激蛋白基因的位置。首先合成核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的同源重组片段，用 Sal I酶切该重组片段和pWM1质粒再连接转化DH5α得到同源重组质粒；用该同源重组质粒转化农杆菌，通过农杆菌介导转化得到纤维素酶高产黑曲霉菌株。本发明利用热激表达实现了通过提高温度大幅度增加目的蛋白的表达，从而更显著的提高纤维素外切酶和内切酶的活性，增加纤维素酶的酶活。

摘要： 本发明公开一种基于限制性内切酶HpaⅡ和核酸外切酶Ⅲ的DNA甲基化及甲基化转移酶活性的检测方法。制备了无标记的DNA探针，该探针序列包含了限制性内切酶的切割位点和甲基化的CpG位点,通过该无标记的DNA探针与目标DNA杂交，用甲基化转移酶进行甲基化处理，再用限制性内切酶HpaⅡ的特异性切割以及作用于双链DNA的3'→5'外切酶活性的核酸外切酶Ⅲ作用，然后利用荧光信号分子噻唑橙对单双链DNA不同信号实现检测甲基化及甲基转移酶活性的目的。本发明无需制备复杂材料和标记DNA探针，可避免材料制备及标记DNA探针而导致检测成本高、操作烦琐，重现性差的缺陷。本发明具有成本低、快速、简便、灵敏度高的优点。

摘要： 本发明公开了生产葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶的方法。属生物技术领域。首先克隆木霉的葡聚糖内切酶基因、葡聚糖外切酶基因和β-葡萄糖苷酶基因；构建含这三种酶基因表达框架的枯草芽孢杆菌表达载体和毕赤酵母表达载体；将表达载体转化相应的宿主菌；分别筛选高表达葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶的枯草芽孢杆菌重组子和毕赤酵母重组子作为工程菌。发酵枯草芽孢杆菌工程菌和毕赤酵母工程菌生产的重组混合葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶。本发明解决了用天然菌株生产混合葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶中遗留的酶产量低的关键问题，有利于降低其酶产品的价格。