mtDNA

摘要： 基于mtDNA D-loop全序列分析广东3个地方鸡种的遗传多样性。利用PCR和测序技术获得清远麻鸡、阳山鸡和惠阳胡须鸡共98个个体mtDNA D-loop全序列,结合NCBI已收录的地方鸡种、红色原鸡和绿头鸭共33条序列综合分析。结果表明:广东3个地方鸡种mtDNA D-loop区全长1231~1232 bp,其A、C、G和T碱基含量分别为26.5%~26.7%、26.4%~26.6%、13.3%~13.4%和33.5%~33.6%,平均G+C含量39.8%,98个个体共检测到44个SNP位点,其中单一多态位点6个、简约信息位点38个,转换率81.82%大于颠换率22.22%;存在34种单倍型,单倍型多样度为0.659~0.953,核苷酸多样度为0.00128~0.00830;根据单倍型可分为A、B、C、D、E和H共6个世系,其中C(46.94%)和B(24.49%)为优势世系;29个鸡种进化分歧值分布在0.002~0.016之间,其中63.68%的鸡种分歧值小于0.01;131条序列综合分析获得51个单倍型,惠阳胡须鸡分布在Hap 24(57.5%)、Hap 27(10.0%)和Hap 3(7.5%);清远麻鸡与阳山鸡具有多个单倍型(大于10个)。系统发生树结果表明29个鸡种汇集在一个大类,惠阳胡须鸡集中分布在一个分支(C),清远麻鸡和阳山鸡分别分布在A~D分支和B~D分支。上述结果表明清远麻鸡和阳山鸡具有丰富的多样性并高于惠阳胡须鸡,除惠阳胡须鸡外可能有4个母系来源。

摘要： 本文利用2对引物分别对宁夏与内蒙古地区的密点麻蜥进行线粒体ND2与ND4基因序列扩增并对产物进行直接测序,探究密点麻蜥种群遗传现状与系统发生关系。结果显示,宁夏地区的3个采集点之间存在基因流,且所采集的全部密点麻蜥样本与荒漠麻蜥品种也存在着基因交流。在保护密点麻蜥种质资源及维持其遗传多样性过程中,应避免密点麻蜥种群间的过度基因交流以及适当控制与近缘物种的渗透杂交。

摘要： [目的]从分子水平上探究青海省格尔木牦牛的母系遗传多样性、群体遗传结构及其遗传背景。[方法]对49头格尔木牦牛mtDNA D-loop区部分序列进行了测定,后使用DnaSP 5.10.01、Arlequin 3.11和MEGA 5.05等生物信息学软件确定其多态位点和单倍型数目,计算核苷酸多样度和单倍型多样度大小,并进行系统发育分析。[结果]在截取的618 bp格尔木牦牛D-loop区分析序列中,排除1处插入(缺失)后共检测到45处多态位点,包括10处单一多态位点和35处简约信息位点;根据序列间核苷酸变异共确定了18种单倍型,其中单倍型H4为优势单倍型,核苷酸多样度为0.015±0.008,单倍型多样度为0.911±0.022。与野牦牛及大通、天祝、金川等其他家牦牛品种相比,格尔木牦牛群体单倍型多样度和核苷酸多样度值均较高,表明该群体具有丰富的母系遗传多样性。以美洲野牛为外群,邻接法(即NJ法)构建的系统发育树结果显示:格尔木牦牛群体18种单倍型分布在A、B、C、D和G 5种单倍型组中,且聚为3个大的分支,提示格尔木牦牛由3个母系支系组成,拥有3个母系起源。[结论]格尔木牦牛群体具有丰富的母系遗传多样性,由3个母系支系组成,推测其有3个母系起源。

摘要： 线粒体DNA(mt-DNA)是核外遗传信息的重要载体。近期研究结果显示,mt-DNA与多种恶性肿瘤的发生、转移密切相关,且可用于癌症的早期诊断和靶向治疗。因此进一步研究mt-DNA在消化系恶性肿瘤中的作用机制,对于筛选和鉴定肿瘤分子标志物用于抗肿瘤药物靶点、癌症诊断及预后分析均有重要的临床意义。本文对近年mt-DNA与消化系恶性肿瘤的潜在联系、临床应用及治疗靶点的研究进展进行综述。

摘要： [目的]通过对蒙古牛线粒体DNA(mtDNA)的基因组进行测序,探究蒙古牛的mtDNA基因组遗传多样性与母系起源。[方法]采用DNA提取、三代测序及生物信息学方法。[结果]在36头蒙古牛mtDNA全基因组序列中,共检测到22种不同的单倍型,平均单倍型多样度(Hd)为0.970,平均核苷酸多样度(Pi)为0.00845,表明蒙古牛有丰富的母系遗传多样性。构建的IQ系统发育树发现,蒙古牛具有瘤牛和普通牛两个母系支系。[结论]蒙古牛有丰富的母系遗传多样性,拥有普通牛和瘤牛两个母系起源,以普通牛起源为主。

摘要： 小飞鼠(Pteromys volans)为树栖夜行滑行类啮齿动物,在森林种子传播和维持生态系统平衡等方面发挥着重要的生态学作用。本研究利用mtDNA Cyt b、控制区和nDNA微卫星3种分子标记,对黑龙江省张广才岭北部的小飞鼠种群进行遗传多样性与历史动态分析。检测出Cyt b全序列(1140 bp)的平均单倍型多样性为0.909,平均核苷酸多样性为0.616%;控制区全序列(1066 bp)的平均单倍型多样性为0.945,平均核苷酸多样性为1.698%;微卫星检测出种群平均等位基因数13.167个,观测杂合度0.727,期望杂合度0.864,近交系数0.159。结果表明,小飞鼠种群遗传多样性丰富,但存在一定程度的杂合度不足和近亲繁殖;未检测到种群近期遗传瓶颈效应,种群内无遗传分化。高比例的稀有单倍型(≥60%)、低频率等位基因与近亲繁殖,提示未来种群面临遗传多样性下降的风险,建议加大对该物种的关注和保护力度。基于Cyt b基因的系统进化关系结果表明,小飞鼠存在3个明显的遗传谱系:远东、欧亚大陆北部和日本北海道,本研究中张广才岭和大兴安岭的样本单倍型归属为远东谱系。

摘要： Walterinnesia aegyptia is one of the most venomous snakes belonging to the family Elapidae found in the Middle East and Africa. In addition to its ecological importance, it is accused of millions of deaths due to snakebites. Because molecular identification of snakes is crucial for the antivenom drug industry, mitochondrial genes are used to identify, characterize, and infer genetic diversity among different venomous snake species. Data of Walterinnesia collected from samples across Saudi Arabia were compared based on the mitochondrial 16S and 12S rRNA sequences with other Elapidae related taxa to assess the phylogenetic relationship. The phylogenetic analysis strongly supports the monophyly of the genus Walterinnesia based on two genes that represent different species of Elapidae. In addition, a close relationship between Walterinnesia aegyptia and W. morgani was found. Our molecular data showed that W. morgani from Riyadh, Saudi Arabia, is nearly genetically identical (D = 0) with W. aegyptia from Ha’il and Riyadh, Saudi Arabia, and Sinai, Egypt. Further study is required based on more material and detailed morphological and genetic analysis.

摘要： 为从分子水平上探究青海省门源白牦牛的母系遗传多样性及遗传背景,本研究对31头门源白牦牛线粒体DNA(mtDNA)D-loop区序列进行测定和比对分析,确定其多态位点和单倍型数目,计算核苷酸多样度、单倍型多样度及平均核苷酸差异数大小,并构建系统发育树.结果表明,门源白牦牛mtDNA D-loop区序列长度为892～896bp,排除5处插入/缺失后共发现38处多态位点,包括24处单一变异位点和14处简约信息位点;依据序列间核苷酸变异共确定了13种单倍型,单倍型多样度为0.901±0.030,核苷酸多样度为0.006±0.004,平均核苷酸差异数为5.17,提示门源白牦牛具有较丰富的母系遗传多样性.以普通牛为外群,邻接法(NJ法)构建的系统发育树结果显示,13种单倍型分为明显的2个分支,表明门源白牦牛有2个母系起源.综上所述,本研究结果表明门源白牦牛具有较丰富的母系遗传多样性,由2个母系遗传分支组成,具有2个母系起源.

摘要： 为从分子水平上探究青海省门源白牦牛与甘肃省天祝白牦牛间的母系遗传差异,本研究对31头门源白牦牛mtDNA D-loop区部分序列进行测定,结合GenBank中已报道的235条天祝白牦牛相应序列,对共计266条白牦牛D-loop序列进行了综合分析.结果表明,在截取的638 bp白牦牛D-loop区分析序列中,排除64处插入或缺失后共检测到80个多态位点,包括5个单一多态位点和75个简约信息位点.根据序列间核苷酸变异共确定了56种单倍型,其中门源白牦牛拥有特有单倍型7种,天祝白牦牛包含特有单倍型43种,二者共享的单倍型只有2种.门源白牦牛单倍型只分布在A、B和C单倍型组中,而天祝白牦牛单倍型分布在A、B、C、D、E和F单倍型组中,并含有4种普通牛单倍型序列,提示天祝白牦牛中存在普通牛遗传渗入.门源白牦牛单倍型多样度为0.862,核苷酸多样度为0.007,而天祝白牦牛单倍型多样度为0.946,核苷酸多样度为0.014,表明天祝白牦牛的遗传多样性水平高于门源白牦牛.门源白牦牛与天祝白牦牛间的遗传分化指数(Fst)为0.114,表明2个品种(群体)间呈中等分化水平.系统发育分析结果显示,56种单倍型可分为2个明显的分支(即Ⅰ和Ⅱ),表明白牦牛有2个母系起源.综上所述,天祝白牦牛的遗传多样性水平高于门源白牦牛,门源白牦牛母系遗传多样性较低;2个品种(群体)间呈中等遗传分化水平,天祝白牦牛存在一定程度的普通牛基因渗入;2个品种(群体)均由2个母系支系组成,提示白牦牛有2个母系起源.鉴于2个品种(群体)间呈中等遗传分化水平,且都拥有特有的单倍型遗传信息,故建议将其均作为独立的"遗传单元"进行遗传资源保护进而开展保种和选育实践.

摘要： Genetic manipulation of mitochondrial DNA(mtDNA)could be harnessed for deciphering the gene function of mitochondria;it also acts as a promising approach for the therapeutic correction of pathogenic mutation in mtDNA.However,there is still a lack of direct evidence showing the edited mutagenesis within human mtDNA by clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated protein 9(CRISPR/Cas9).Here,using engineered CRISPR/Cas9,we observed numerous insertion/deletion(InDel)events at several mtDNA microhomologous regions,which were triggered specifically by double-strand break(DSB)lesions within mtDNA.InDel mutagenesis was significantly improved by sgRNA multiplexing and a DSB repair inhibitor,iniparib,demonstrating the evidence of rewiring DSB repair status to manipulate mtDNA using CRISPR/Cas9.These findings would provide novel insights into mtDNA mutagenesis and mitochondrial gene therapy for diseases involving pathogenic mtDNA.

摘要： 本研究多对特异性引物，对人工选育后的F3代池蝶蚌的线粒体基因组全序列进行分段PCR扩增和双向测序。分析表明：序列全长15939bp，包括13个蛋白质基因、22个tRNA基因、2个rRNA基因和非编码区长1327bp。A、T、C、G碱基组成分别为37．1％、23．2％、26．8％、12．9％。大部分基因在L链编码，其中ND3~ND5、ND4L、COI~COⅢ、ATP6、ATP8、tRNAAsp和tRNAHis在H链编码。基因排列与同科的三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)一致，13个蛋白质基因具有I(AUU、AUC)、V(GUG)、M(AUG)、L(UUG)4种起始密码子，终止密码子均为典型的UAA或UAG。与其他淡水双壳贝类一样，池蝶蚌具有ATP8基因。

摘要： 本研究多对特异性引物，对人工选育后的F3代池蝶蚌的线粒体基因组全序列进行分段PCR扩增和双向测序。分析表明：序列全长15939bp，包括13个蛋白质基因、22个tRNA基因、2个rRNA基因和非编码区长1327bp。A、T、C、G碱基组成分别为37．1％、23．2％、26．8％、12．9％。大部分基因在L链编码，其中ND3~ND5、ND4L、COI~COⅢ、ATP6、ATP8、tRNAAsp和tRNAHis在H链编码。基因排列与同科的三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)一致，13个蛋白质基因具有I(AUU、AUC)、V(GUG)、M(AUG)、L(UUG)4种起始密码子，终止密码子均为典型的UAA或UAG。与其他淡水双壳贝类一样，池蝶蚌具有ATP8基因。

摘要： 本研究多对特异性引物，对人工选育后的F3代池蝶蚌的线粒体基因组全序列进行分段PCR扩增和双向测序。分析表明：序列全长15939bp，包括13个蛋白质基因、22个tRNA基因、2个rRNA基因和非编码区长1327bp。A、T、C、G碱基组成分别为37．1％、23．2％、26．8％、12．9％。大部分基因在L链编码，其中ND3~ND5、ND4L、COI~COⅢ、ATP6、ATP8、tRNAAsp和tRNAHis在H链编码。基因排列与同科的三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)一致，13个蛋白质基因具有I(AUU、AUC)、V(GUG)、M(AUG)、L(UUG)4种起始密码子，终止密码子均为典型的UAA或UAG。与其他淡水双壳贝类一样，池蝶蚌具有ATP8基因。

摘要： 本研究多对特异性引物，对人工选育后的F3代池蝶蚌的线粒体基因组全序列进行分段PCR扩增和双向测序。分析表明：序列全长15939bp，包括13个蛋白质基因、22个tRNA基因、2个rRNA基因和非编码区长1327bp。A、T、C、G碱基组成分别为37．1％、23．2％、26．8％、12．9％。大部分基因在L链编码，其中ND3~ND5、ND4L、COI~COⅢ、ATP6、ATP8、tRNAAsp和tRNAHis在H链编码。基因排列与同科的三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)一致，13个蛋白质基因具有I(AUU、AUC)、V(GUG)、M(AUG)、L(UUG)4种起始密码子，终止密码子均为典型的UAA或UAG。与其他淡水双壳贝类一样，池蝶蚌具有ATP8基因。

摘要： 目的：分析中国人Leber遗传性视神经病变3个常见的原发致病基因突变的特征。rn 方法：对122例LHON患者分别用异源双链一单链构像多态性(HA-SSCP)、限制性片段长度多态性(RFLP)、突变特异性引物聚合酶链反应(MSP-PCR)及DNA测序等方法检测其mtDNA11778、14484、3460位点的基因突变情况。rn 结果：122例患者中男93例，女29例，11778位点突变1 05例，占86.06％，14484位点突变14例，占11.48％，3460位点突变3例，占2.46％。rn 结论：中国大陆华北中部地区的Leber遗传性视神经病变患者以11778位点基因突变为主，其次为14484位点，3460位点突变较为少见。这一结果与其他研究的结果相似。

摘要： 目的：分析中国人Leber遗传性视神经病变3个常见的原发致病基因突变的特征。rn 方法：对122例LHON患者分别用异源双链一单链构像多态性(HA-SSCP)、限制性片段长度多态性(RFLP)、突变特异性引物聚合酶链反应(MSP-PCR)及DNA测序等方法检测其mtDNA11778、14484、3460位点的基因突变情况。rn 结果：122例患者中男93例，女29例，11778位点突变1 05例，占86.06％，14484位点突变14例，占11.48％，3460位点突变3例，占2.46％。rn 结论：中国大陆华北中部地区的Leber遗传性视神经病变患者以11778位点基因突变为主，其次为14484位点，3460位点突变较为少见。这一结果与其他研究的结果相似。

摘要： 目的：分析中国人Leber遗传性视神经病变3个常见的原发致病基因突变的特征。rn 方法：对122例LHON患者分别用异源双链一单链构像多态性(HA-SSCP)、限制性片段长度多态性(RFLP)、突变特异性引物聚合酶链反应(MSP-PCR)及DNA测序等方法检测其mtDNA11778、14484、3460位点的基因突变情况。rn 结果：122例患者中男93例，女29例，11778位点突变1 05例，占86.06％，14484位点突变14例，占11.48％，3460位点突变3例，占2.46％。rn 结论：中国大陆华北中部地区的Leber遗传性视神经病变患者以11778位点基因突变为主，其次为14484位点，3460位点突变较为少见。这一结果与其他研究的结果相似。

摘要： 目的：分析中国人Leber遗传性视神经病变3个常见的原发致病基因突变的特征。rn 方法：对122例LHON患者分别用异源双链一单链构像多态性(HA-SSCP)、限制性片段长度多态性(RFLP)、突变特异性引物聚合酶链反应(MSP-PCR)及DNA测序等方法检测其mtDNA11778、14484、3460位点的基因突变情况。rn 结果：122例患者中男93例，女29例，11778位点突变1 05例，占86.06％，14484位点突变14例，占11.48％，3460位点突变3例，占2.46％。rn 结论：中国大陆华北中部地区的Leber遗传性视神经病变患者以11778位点基因突变为主，其次为14484位点，3460位点突变较为少见。这一结果与其他研究的结果相似。

摘要： 目的：分析中国人Leber遗传性视神经病变3个常见的原发致病基因突变的特征。rn 方法：对122例LHON患者分别用异源双链一单链构像多态性(HA-SSCP)、限制性片段长度多态性(RFLP)、突变特异性引物聚合酶链反应(MSP-PCR)及DNA测序等方法检测其mtDNA11778、14484、3460位点的基因突变情况。rn 结果：122例患者中男93例，女29例，11778位点突变1 05例，占86.06％，14484位点突变14例，占11.48％，3460位点突变3例，占2.46％。rn 结论：中国大陆华北中部地区的Leber遗传性视神经病变患者以11778位点基因突变为主，其次为14484位点，3460位点突变较为少见。这一结果与其他研究的结果相似。

摘要： 目的: 将提取缢蛏线粒体DNA的碱变性法、蛋白酶K法、高盐沉淀法加以比较，以得到最方便快速提取线粒体DNA的方法。方法: 分离缢蜂肌肉组织，液氮磨碎后，用3种方法提取线粒体DNA，紫外分光光度法定量。用琼脂糖凝胶电泳和线粒体COI基因PCR扩增产物鉴定所提取的线粒体DNA。结果:OD260／OD280均在1．69～1．85之间。高盐沉淀法提取的线粒体DNA量最多。结论：高盐沉淀法提取线粒体DNA具有操作简单，产量多等优点，适合缢蛏线粒体DNA的提取。

摘要： 本发明涉及检测mtDNA突变的方法和系统，具体地，本发明提出了检测微量细胞中mtDNA突变的方法，包括：(1)提取微量细胞中的mtDNA，所述微量细胞的个数为1～4；(2)对所述mtDNA不同预定区域进行PCR扩增，以便获得不同预定区域扩增产物，所述mtDNA不同预定区域叠加后构成mtDNA全长；(3)将不同预定区域扩增产物进行混合，以便获得mtDNA全长核酸测序文库；(4)对所述核酸测序文库进行测序，以便获得测序结果；以及(5)基于所述测序结果，确定待测微量细胞中的mtDNA突变。该方法可以有效分析微量细胞(如单个细胞)中的mtDNA突变，且准确度高，灵敏度好。

摘要： 本发明提供的是一种利用mtDNA COI基因鉴定云斑白条天牛危害寄主的方法。所述方法分别提取危害白蜡树和杨树云斑白条天牛雌雄成虫的mtDNA COI基因，PCR扩增测序，分析比对，确定危害白蜡树和杨树雌雄成虫的4个COI基因标准序列。提取待检天牛的DNA，获得其COI基因序列，将其与以上4个标准序列比对。通过观察系统发育树和遗传距离表，根据待检基因序列与标准序列的亲缘关系，确定待检天牛的危害寄主和性别。所述PCR扩增方法，适合的退火温度是47°C、52°C、49°C、47°C。所述鉴定方法中，确定了适于比对的4个COI标准序列。该方法适于检疫部门鉴定云斑白条天牛的危害寄主，对控制其传播具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种基于集成学习的全球人类mtDNA发育树分类查询方法，采用人工测得的mtDNA数据训练神经网络分类器，采用mtDNA发育树数据计算朴素贝叶斯分类器的参数，将待分类查询的mtDNA的变异位点序列输入神经网络分类器，得到前Q个可能分类，将待分类查询的mtDNA的变异位点序列和前Q个可能分类的所对应的变异位点序列合并得到朴素贝叶斯分类器的输入变异位点序列，并计算得到该输入变异位点序列中各个变异位点的权重，通过朴素贝叶斯分类器得到前Q个可能分类，然后将两组Q个可能分类的概率进行加权，得到前Q个可能分类作为最终分类结果。本发明综合利用神经网络分类器和朴素贝叶斯分类器的优势，提高了全球人类mtDNA发育树分类查询的正确率。

摘要： 本发明公开了一种基于DNA凝胶电泳图和mtDNA:nDNA值鉴别新鲜牛奶和复原牛奶的方法，该方法首先从待测牛奶样品中提取牛基因组DNA，然后对提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳分析，根据所提取的DNA条带对待测样品进行初步定性。然后再利用实时荧光定量PCR技术，同时扩增提取的牛基因组DNA的线粒体DNA(mtDNA)和核DNA(nDNA)，进而计算出mtDNA:nDNA值，根据该值的大小可以进一步确定待测样品为新鲜牛奶还是复原牛奶。本发明为牛奶品质的检测与评价提供了一种新方法，也为企业生产高品质奶产品提供参考，应用前景广阔，对于牛奶的营养品质检测具有重要的意义。

摘要： 本发明涉及基因组DNA富集技术领域，尤其涉及mtDNA的提取和建库试剂。本发明提供的mtDNA提取的试剂中裂解液的组成更合理，以该裂解液处理后的人血样品能够富集得到更多的mtDNA。且该mtDNA能够提高测序文库的建库效率，经检测测序效果良好。

摘要： 本发明涉及检测mtDNA突变的方法和系统，具体地，本发明提出了检测微量细胞中mtDNA突变的方法，包括：(1)提取微量细胞中的mtDNA，所述微量细胞的个数为1～4；(2)对所述mtDNA不同预定区域进行PCR扩增，以便获得不同预定区域扩增产物，所述mtDNA不同预定区域叠加后构成mtDNA全长；(3)将不同预定区域扩增产物进行混合，以便获得mtDNA全长核酸测序文库；(4)对所述核酸测序文库进行测序，以便获得测序结果；以及(5)基于所述测序结果，确定待测微量细胞中的mtDNA突变。该方法可以有效分析微量细胞(如单个细胞)中的mtDNA突变，且准确度高，灵敏度好。

摘要： 本发明提供的是一种利用mtDNA COI基因鉴定云斑白条天牛危害寄主的方法。所述方法分别提取危害白蜡树和杨树云斑白条天牛雌雄成虫的mtDNA COI基因，PCR扩增测序，分析比对，确定危害白蜡树和杨树雌雄成虫的4个COI基因标准序列。提取待检天牛的DNA，获得其COI基因序列，将其与以上4个标准序列比对。通过观察系统发育树和遗传距离表，根据待检基因序列与标准序列的亲缘关系，确定待检天牛的危害寄主和性别。所述PCR扩增方法，适合的退火温度是47°C、52°C、49°C、47°C。所述鉴定方法中，确定了适于比对的4个COI标准序列。该方法适于检疫部门鉴定云斑白条天牛的危害寄主，对控制其传播具有重要意义。

摘要： 本发明提供曼氏无针乌贼衰老过程中肝脏mtDNA拷贝数的变化特征分析，包括样本基因组DNA提取，单拷贝基因引物设计，核基因组、线粒体基因组单拷贝基因的实时定量PCR反应标准品制备及标准曲线构建，样本中线粒体基因组拷贝数的检测及含量计算；其中，样本DNA提取方法为：将曼氏无针乌贼组织加入聚丁二酸丁二酯粉末和脂肪醇醚硫酸铵一同研磨，然后经提取、有机溶剂分离、沉淀得样本DNA。本发明运用荧光定量PCR技术，能够实现对线粒体精确检测及定量，而通过分析曼氏无针乌贼衰老过程肝脏mtDNA拷贝数的变化，有利于为提高产卵率提供解决途径，同时为研究人类衰老提供新的借鉴。

摘要： 本发明公开了一种基于NGS同时检测mtDNA拷贝数和突变的方法，制备线粒体DNA和6个内参DNA片段的捕获探针，同时捕获全基因组测序文库中的线粒体DNA和内参，利用生物信息学技术分析测序数据，实现线粒体基因组突变与拷贝数的同时精准检测，具体步骤如下：1)PCR扩增；2)探针制备；3)捕获测序；4)生物信息学分析。本发明与现有技术相比的优点在于：实现在捕获测序中同时精准检测线粒体DNA低频突变和拷贝数，降低了DNA需求量，节省珍贵DNA样本，简化了实验操作，极大地降低了检测成本。在探针制备过程中随机选取6个核DNA片段作为内参，克服了以往报道的利用捕获测序数据计算拷贝数准确性差等问题，提高了相关研究结果的准确性。

摘要： 本实用新型公开了一种基于心肌缺血再灌注研究用mtDNA抑制剂的配置仪，包括溶液注入孔、密封盖、外凸支架、密闭罐、混合注液管、注液管、支撑块、固定侧板、移动滚轮、支撑底座、出液管、连接软管、内部配置罐、输液通道、反应层和联通底管。本实用新型的有益效果是：混合注液管管身上设置有多个注液孔，其内部联通，并通过输液通道联通内部配置罐，溶液注入孔分为三个不同规格的注入孔，其均穿过密封盖的盖身，出液管一端连接着内部配置罐底端的联通底管，另一端穿过支撑底座的座身并连接着外界，外凸支架环绕着密封盖的边缘设置，支撑块环绕着支撑底座的边缘设置，移动滚轮中心设置有穿孔，且通过一滑柱固定在两固定侧板之间，使得移动滚轮在固定侧板之间可旋转。