金属酶

摘要： 目的 研究东莞地区耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(CRPA)的产酶现状和抗菌药物的体外联合抗菌活性,为临床治疗提供合理用药依据.方法 收集CRPA菌株216株,采用eCIM实验筛查碳青霉烯酶,双纸片扩散法检测产酶表型,微量肉汤稀释法检测抗菌药物的单药和联合时的MIC值,判定联合抑菌效应.结果 在216株CRPA中,产碳青霉烯酶占38.4％,其中单一产丝氨酸酶占17.6％,单一产金属酶占13.9％,同时产丝氨酸酶和金属酶占6.9％,不产碳青霉烯酶占61.6％.药物联合前后的MIC50和MIC90值均有明显降低.在联合药敏组合中,以协同和相加作用为主,头孢他啶与左氧氟沙星协同率最高,达到67.1％,其次为哌拉西林/他唑巴坦+左氧氟沙星、美罗培南+左氧氟沙星协同率分别为50.9％和50.0％,相加作用最高构成比为头孢哌酮+阿米卡星46.8％,无关作用构成比为8.3％～39.8％,拮抗作用构成比相对较低为1.4％～5.6％,4个单药与左氧氟沙星联合中协同和相加作用比与阿米卡星相对较强.结论 产碳青霉烯酶不是东莞地区铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制,抗菌药物联合抑菌作用显著优于单一抗菌药物,以协同和相加作用为主,应用体外呈协同或相加效应的抗菌药物组合,可得到较高临床治愈率.

摘要： 目的 研究东莞地区耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(CRPA)的产碳青霉烯酶情况及耐药性,为临床治疗及合理用药提供科学依据.方法 收集东莞地区2018年1月至2021年6月共216株CRPA进行鉴定及药敏试验,eCIM实验筛查碳青霉烯酶,双纸片扩散法检测产酶表型.结果 216株CRPA中产碳青霉烯酶83株,占38.4％,不产酶有133株,占61.6％.亚胺培南和美罗培南耐药率分别为96.1％和72.6％,庆大霉素14.1％,妥布霉素12.6％,阿米卡星5.5％,哌拉西林/他唑巴坦28.1％,头孢吡肟19.2％,左旋氧氟沙星25.9％,头孢他啶33.3％,环丙沙星31.0％,哌拉西林34.4％,头孢哌酮/舒巴坦37.9％.结论 产碳青霉烯酶不是东莞地区铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制.CRPA中除碳青霉烯酶耐药率较高外,其他绝大部分药敏耐药率均在40％以下,在用药时首选耐药率在30％以下的药物.

摘要： 金属酶广泛存在于各种生物体,与人类疾病发生发展密切相关,是一大类重要的药物作用靶标.尽管已有若干靶向金属酶抑制剂批准用于临床,但大多数金属酶还缺乏特异性药物分子或尚未开发,靶向金属酶的创新药物研究仍然是目前重要研究领域之一.鉴于金属酶活性位点含金属离子的特殊性,金属酶抑制剂通常包含与活性位点金属离子形成配位的金属结合药效基团(MBP).通过对挖掘的MBP数据进行归类总结,列举部分经典与少见的MBP类型,并分析异羟肟酸类、巯基类、咪唑类、儿茶酚类和吡啶类MBP对金属酶的选择性和杂泛性,期望能为靶向金属酶的创新药物研究提供线索和借鉴.

摘要： Objective To investigate the gene distribution of imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa (IRPA) β-lactamase, deletion of porin protein OprD2and expression of efflux pump MexAB-OprM in this hospital.Methods IRPA in this hospital from April 2015to July 2016screened out by the automatic bacteriological analyzer were collected and conducted the drug resistance phenotype confirmation by adopting the K-B method.Metalloenzyme gene IMP, VIM, SIM, GIM, SPM, extended-spectrumβ-lactamase gene TEM, VEB, SHV, PER, OXA-2and OXA-10in IRPA were detected by adopting PCR;the products of amplification positive conducted the gene sequencing.Pseudomonas membrane porin OprD2deletion and expression level of mexA were detected by adopting real time fluorescence quantitative PCR.Results Metalloenzyme genes of IRPA were not detected in this hospital, and 20 (83.3％) strains were positive for extended-spectrumβ-lactamase TEM.Other types were not detected.The positive products gene sequencing by comparison was confirmed as the type TEM-1, there were 6strains (25％) of membrane pore proteins OprD2deletion and 6strains (25％) of efflux pump MexAB-OprM overexpression positive.Conclusion The drug resistance mechanism of IRPA toβ-lactams in this hospital is mainly mediated by extended-spectrumβ-lactamase gene TEM-1type, membrane pore protein OprD2deletion and is supplemented by active efflux pump MexAB-OprM.%目的 研究该院耐亚胺培南的铜绿假单胞菌β-内酰胺酶的基因分布、膜孔蛋白OprD2的缺失情况及外排泵MexAB-OprM的表达情况.方法 收集该院2015年4月至2016年7月由全自动细菌鉴定仪筛选出来的耐亚胺培南的铜绿假单胞菌,采用K-B法进行耐药表型确认,采用聚合酶链反应(PCR)检测耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属酶基因IMP、VIM、SIM、GIM、SPM,超广谱β-内酰胺酶基因TEM、VEB、SHV、PER、OXA-2、OXA-10;对扩增阳性产物进行基因测序,采用实时荧光定量PCR检测铜绿假单胞菌膜孔蛋白OprD2的缺失情况及mexA的表达水平.结果 该院耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属酶基因均未检出;超广谱β-内酰胺酶基因TEM阳性20株(83.3％),其他型未有检出;阳性产物基因测序经比对确认为TEM-1型;膜孔蛋白OprD2缺失6株(25％),外排泵MexAB-OprM过度表达6株(25％).结论 该院耐亚胺培南铜绿假单胞菌对β-内酰胺酶类的耐药机制主要以由超广谱β-内酰胺酶基因TEM-1型介导为主,膜孔蛋白OprD2缺失以及主动外排泵MexAB-OprM过度表达为辅.

摘要： 金属酶催化了生命活动及工业催化中的很多重要反应.天然金属酶的研究往往受限于蛋白质本身结构复杂、表达纯化困难等问题.通过理性设计,可以在分子量小、结构简单、易于表达的骨架蛋白中模拟天然金属酶的结构、光谱和功能,构建人工金属酶.人工酶可以为天然酶的机制研究提供新的平台.本文中,笔者探讨以肌红蛋白为骨架蛋白,通过结构特征的模拟、非天然氨基酸的引入等手段,模拟氧激活蛋白,尤其是氧化酶.综述以对理性设计得到的人工氧化酶的反应中间体进行研究的进展,发现金属酶活性中心的酪氨酸作为催化反应的关键残基,对于氧化反应的调控非常重要;而在小分子量骨架蛋白中模拟天然金属酶是一种人工金属酶分子设计的方法,可以用于研究血红素酶外的其他金属酶.

摘要： Objective To investigate the distribution and susceptibility of carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae (CRKP) isolated from the First People's Hospital of Shangqiu.Methods CRKP was collected from January 2014 to July 2017 and the results were analyzed,producing of carbapenemase and metallo-beta-lactamases were confirmed using Kirby-Bauer method.Results A total of 156 CRKP were collected and mainly from ICU (73.7％,115/156) and respiratory specimens (76.3％,119/156).The results of antimicrobial susceptibility testing showed that the sensitivity of polymyxin,tigecyline,minocycline and tetracycline were 100.0％,9Z8％,88.5％ and 64.1％ respectively.The sensitive rates of methoxy benzidine-sulfamethoxazole,chloramphenicol amikacin,and levofloxacin were 39.7％,30.1％,29.5％ and 23.1％ respectively.It was serious resistant to beta-lactam,cephalosporin and its compound preparations.78.2％ CRKP produced carbapenemase (122/156) and 4 strains of metalloenzyme were isolated.Condusion The patients from the ICU,neurology and geriatrics ward with respiratory tract infection should be importance of strengthen infection control in our hospital.To produce carbapenemase is the main method of local CRKP resistances.The situation of antibiotic resistance of CRKP is very serious except polymyxin and tetracycline species,so polymyxin,tigecyline and minocycline can be used in clinical practice of CRKP infection.%目的 了解河南省商丘市第一人民医院(以下简称“我院”)碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)临床分布特点及其对临床常用抗菌药物的敏感性.方法 收集我院2014年1月～2017年7月临床分离的CRKP,分析其对常用抗菌药物的敏感性,纸片扩散法检测其碳青霉烯酶和金属酶.结果 共收集CRKP 156株,科室分布和标本种类分别以重症监护病房(73.7％,115/156)和呼吸道标本(76.3％,119/156)为主.药敏试验结果显示,对多黏菌素、替加环素、米诺环素、四环素敏感率分别为100.0％、92.8％、88.5％,64.1％;对甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、氯霉素、阿米卡星和左氧氟沙星的敏感率分别为39.7％、30.1％、29.5％和23.1％;对β内酰胺类、头孢菌素类及其复合制剂均高度耐药.78.2％ CRKP产生碳青霉烯酶(122/156),分离4株金属酶阳性菌株.结论 重症监护病房、神经科、老年医学科患者呼吸道感染是CRKP防控重点.碳青霉烯酶是本地CRKP耐碳青霉烯类抗菌药物的主要方式;CRKP对多粘菌素与四环素类之外的抗菌药物严重耐药;在我院多黏菌素、替加环素、米诺环素可作为CRKP临床感染救治的备选药物.

摘要： 金属酶在生物体中发挥着多种至关重要的作用,而人工金属酶的分子设计能够调控和拓展天然金属酶的功能,甚至创造出功能更为优越的新型酶分子.肌红蛋白(Mb)是作为血红素蛋白或其他金属蛋白分子设计的理想蛋白模型.近些年,基于Mb蛋白骨架的人工金属酶的分子设计逐渐发展了多种研究策略,包括设计氢键网络、金属结合位点、分子内二硫键、利用蛋白翻译后修饰、引入非天然氨基酸和非天然辅基等.本文着重综述这些方面的最新研究进展,可以帮助我们深刻认识金属酶的结构与功能关系,同时掌握人工金属酶分子设计的思路与方法,从而有助于推动这一领域的快速发展.

摘要： 生物体系中,金属酶活化氧气进而参与新陈代谢相关的各种氧化反应,可高效实现有机化合物氧化反应.因此,揭示金属酶的循环机理,对发展清洁高效的催化氧化反应具有重要的指导意义.金属酶的循环过程通常会形成一系列的金属-氧加合物,如金属超氧、过氧、过氧化氢、氧及羟基等物种.由于生物体的酶循环过程十分复杂,所形成的高活性的金属-氧加合物极难捕捉和表征.为此,化学家开展了生物酶的仿生模拟研究,即用化学的方法仿照酶的活性位点构建具有类似配位环境的金属中心,获得人工合成的各种金属-氧加合物,进而了解其结构与活性.本文以近年来单核铁-氧和锰-氧加合物取得重要进展为背景,举例说明金属酶活化氧气所涉及的金属-氧加合物,并重点从结构及活性等方面总结了模拟酶的金属-氧加合物的研究进展.

摘要： @@了解目前目前儿科临床分离对碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外膜孔蛋白oprD2缺失和金属β-内酰胺酶产生的情况，及具有不同耐药机制菌株的耐药特点，并对其中产金属酶铜绿假单胞菌耐药性及分子流行病学。

摘要： 目的:调查广州地区部分医院2007年10月-2008年11月的铜绿假单胞菌泛耐株，筛检出其中产IMP-9金属酶的菌株并分析其同源性，对比2005-2007年初广州地区多家医院曾出现的产IMP-9金属酶铜绿假单胞菌的克隆株，分析近期广州地区是否还有该流行株的存在。方法:PCR筛选产IMP-9金属酶的铜绿假单胞菌，ERIC-PCR对产酶株进行同源性分析。结果:从2007年10月-2008年11月收集广州7所大型医院的269株铜绿假单胞菌泛耐株，共检测出携带IMP-9金属酶的铜绿假单胞菌10株。均来自同一医院。ERIC-PCR检测，10株均为同一基因型的克隆株，但与前期曾出现的产IMP-9金属酶克隆株无同源性。结论：产IMP-9金属酶铜绿假单胞菌的医院克隆传播仍然存在，而医院间的传播在本次调查中没有发现。因此，仍需继续加强对铜绿假单胞菌定植患者的监控和加强医院感染的管理控制。

摘要： 本研究运用超分子化学方法开展了铜锌金属酶的模拟研究,主要内容包括:(1)通过环糊精或其修饰物作为主体分子与具有疏水腔识别基团的金属配合物为客体分子进行组装,从而获得环糊精与金属配合物形成的超分子包合物作为金属酶模型。（2）直接开展了能与底物发生静电、疏水、氢键等弱相互作用的功能基团为侧臂的金属配合物作为金属酶模型的研究。

摘要： 金属酶催化了生命活动及工业催化中的很多重要反应.天然金属酶的研究往往受限于蛋白质本身结构复杂、表达纯化困难等问题.通过理性设计,可以在分子量小、结构简单、易于表达的骨架蛋白中模拟天然金属酶的结构、光谱和功能,构建人工金属酶.人工酶可以为天然酶的机制研究提供新的平台.本文中,笔者探讨以肌红蛋白为骨架蛋白,通过结构特征的模拟、非天然氨基酸的引入等手段,模拟氧激活蛋白,尤其是氧化酶.综述以对理性设计得到的人工氧化酶的反应中间体进行研究的进展,发现金属酶活性中心的酪氨酸作为催化反应的关键残基,对于氧化反应的调控非常重要;而在小分子量骨架蛋白中模拟天然金属酶是一种人工金属酶分子设计的方法,可以用于研究血红素酶外的其他金属酶.

摘要： 自工业革命以来的两百多年,大量人工合成的化学品被释放到环境中,并通过氧化、还原、结合等生物转化过程被代谢降解,而产生的部分代谢产物,其毒性效应相较于母体化合物可成百上千倍增加.因此,解析有机污染物的生物转化反应机理,并发展高通量的方法预测有机污染物的代谢位点及产物结构,可为筛选和评价化学品的环境暴露和风险提供重要的决策支持工具.

摘要： 目的:研究中国16个城市28所医院碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌分子流行病学及耐药机制。方法:收集中国16个城市28所医院2006年7月-2007年7月临床分离的铜绿假单胞菌菌株645株。采用琼脂稀释法及或KB纸片扩散法测定其对亚胺培南等11种常用抗菌药物的敏感性；脉冲场凝胶电泳(PFGE)及多位点序列分型(MLST)分析碳青霉烯类抗生素耐药菌株同源性；E试验法进行金属酶表型筛选；PCR扩增及克隆测序分析碳青霉烯类抗生素耐药菌株主要β内酰胺酶型；采用实时荧光定量反转录PCR(real time RT-PCR)检测耐药菌株外膜孔蛋白OprD2、外排泵MexAB-OprM和AmpC酶的转录水平；PCR扩增并测序分析OprD2基因序列全长。结果:中国28所医院645株铜绿假单胞菌中258株对碳青霉烯类抗生素耐药，占40%；其中亚胺培南及美罗培南不敏感率分别为38.4%和35.2%。多重耐药铜绿假单胞菌227株，占碳青霉烯类抗生素耐药菌株的88.0%；对所测抗菌药物全耐菌株(泛耐药菌株)为28株，占4.3%。碳青霉烯类抗生素不敏感菌株对其他各种抗菌药物的耐药率显著高于碳青霉烯类抗生素敏感菌株。其中246株耐药菌PFGE分成89型。其余12株不能通过PFGE分型；分为64种MLST型。22株菌株金属酶基因型阳性(VIM-2，IMP-9，IMP-1)。所有碳青霉烯类抗生素耐药菌株OXA-50基因均阳性，GES-5基因阳性1株，未检测到质粒介导的AmpC酶及其他碳青霉烯酶基因型。首次在铜绿假单胞菌中发现了CTX-M-13、14、15、3基因型的ESBLs基因。高产AmpC酶菌株仅占碳青霉烯类抗生素耐药菌株的5.4%；外排泵MexAB-OprM显著高表达菌株达50%以上OprD2相对表达量下降菌株占79.8%。结论:我国铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药率高；以多克隆散发为主，部分存在院内克隆播散。金属酶及高产AmpC酶并不是我国铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制。外膜蛋白OprD2表达减少及外排泵MexAB-OprM高表达是我国临床分离铜绿假单胞菌菌株对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制之一。

摘要： 以10%的甲苯为筛选压力,从油污和污水等样品中筛选到一株产脂肪酶的有机溶剂耐受菌LX1,经 BIOLOG全自动细菌鉴定仪鉴定和16S rDNA序列分析,该菌株被鉴定为Pseudomonas aeruginosa LX1。研究发现该菌所产脂肪酶最适反应pH为7.0,在较宽的pH范围内(6.0-10.5)具有高活力；最适反应温度为40°C，在40°C以下具有良好的稳定性。金属离子鏊合剂EDTA和Ba2+,Ca2+对LX1脂肪酶活力有明显的激活作用，推测该脂肪酶为金属酶。LX1脂肪酶在25%(v/v)的疏水和亲水有机溶剂中均具有良好的耐受性。该研究表明LX1脂肪酶在亲水性有机溶剂-水的均相体系及疏水性有机溶剂-水的双相体系的生物催化中具有很好的应用前景。

摘要： CO气体与生命活动密切相关,在生物体中涉及CO的吸收和转换的大多为金属酶类,如碳酸酐酶、脲酶等。近年来对该类酶的研究取得了很大进展,尤其是利用含CO配合物作为金属酶模型的研究越来越受到人们的重视。相对于过渡金属离子来说,有关稀土配合物捕获CO反应的报道更为少见。本文以柔性开链席夫碱配体与稀土离子在碱金属离子M+(M= Na，K，Rb)存在的条件下，合成出4f-ns金属多核配合物1，2，3。

摘要： 目的：建立一种简便细菌金属β-内酰胺酶的筛选方法。 方法：根据协同试验原理,进行双纸片协同试验,采用亚胺培南(IPM)和头孢他定(CAZ)与乙二胺四乙酸二钾(EDTAK2)和巯基乙酸钠(SMANa)协同作用的方法检测金属酶.用M-H药敏平板和终浓度为70μg/mlZn2+M-H药敏平板进行比较试验. 结果用终浓度为70μg/mlZn2+M-H药敏平板进行试验,可以减少假阴性的发生.对于同一种细菌用不同的抗生素,选择的螯合剂也是不一样的,两种螯合剂和两种抗生素联合使用,可以提高检测MBL阳性率.一些产MBL的革兰氏阴性菌是较难检测的,是因为用低浓度的IPM能抑制其生长. 结论：用含Zn2+M-H药敏平板进行检测MBL是可靠的.用耐CAZ的菌比耐IPM的菌进行检测MBL可以提高检测阳性率.EDTAK2(0.5M)和ES混合液一起运用,也可以提高检测阳性率.本方法与与VIM-2和IPM-1的PCR扩增结果有较好的一致性,而且试剂成本低,易得,操作简便,不需要特殊的仪器设备,适合用于临床微生物实验室筛查产金属酶的菌株.

摘要： 本发明涉及一种VIM型和SPM型金属酶铜绿假单胞菌的识别模型、构建方法及应用，通过MALDI‑TOF MS对VIM型和SPM型金属酶铜绿假单胞菌的质谱蛋白特征峰进行分析，建立区分两种亚型的识别模型；通过该识别模型可快速准确地鉴别VIM型和SPM型金属酶铜绿假单胞菌，具有操作简便，耗时短等优点，因此，这为MALDI‑TOF MS鉴定细菌亚型的研究提供了全新的思路，具备非常广的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种核苷三磷酸人工金属酶及其制备和应用。该金属酶的结构式为

摘要： 本发明公开了一种环二核苷酸人工金属酶及其制备和在催化不对称Friedel‑Crafts反应中的应用。该金属酶的结构式为

摘要： 本发明公开了一种人工G四链体DNA金属酶及其应用，所述金属酶由铁卟啉和人工G四链体DNA组成。在K+存在条件下，将人工G四链体DNA和铁卟啉混合在缓冲溶液中，搅拌即可原位合成得到人工G四链体DNA金属酶。人工G四链体金属酶应用于烯烃不对称环丙烷化反应时，表现出较高的催化活性和较高的选择性。本发明中，不包含贵金属组分，显著降低了反应的成本，并且本发明的人工G四链体DNA金属酶使用条件温和，是一种绿色环保，活性高，选择性高且稳定性优异的新型人工酶。

摘要： 本申请属于蛋白质与生物技术领域，公开了一种人工金属酶及其制备方法与应用。本发明以肌红蛋白为蛋白质分子设计骨架，在活性中心血红素周围引入谷氨酸，加入MgII离子，形成金属离子‑蛋白质复合物MgII‑L29E Mb，构建了一种新型的人工金属酶。本发明所述MgII‑L29E Mb复合物能连续水解DNA分子中的磷酸二酯键，最终降解DNA分子，从而类似于天然核酸外切酶性质，具有DNA外切酶活性，能快速降解DNA分子，最终实现DNA完全降解。降解的DNA底物分子具有广谱性，包括线性DNA或环状DNA分子。而且，这一催化活性是野生型Mb或单独L29E Mb蛋白以及MnII(或CoII)‑L29E Mb复合物所不具有的。

摘要： 本发明提供了具有金属酶调节活性的化合物以及治疗由此类金属酶介导的疾病、障碍或其症状的方法。

摘要： 本发明提供了一种仿金属酶生物催化材料及其制备方法和用途，属于材料领域。该仿金属酶生物催化材料是以氮化碳材料和钌盐或其溶剂合物为原料，在溶剂中反应制备得到的Ru‑CN材料。本发明提供的Ru‑CN材料可以有效清除ROS，并能持续产生氧气缓解组织乏氧，它比许多天然抗氧化剂以及最近报道的先进的生物催化剂具有更强的ROS清除能力。本发明提供的Ru‑CN材料可以有效保护干细胞，可以在高ROS水平条件下为干细胞的生存、粘附和分化功能(成骨和脂肪生成)提供有效的拯救能力。本发明提供的Ru‑CN材料在制备治疗与ROS相关疾病的生物材料和用于干细胞治疗的生物材料中具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种人工G四链体DNA金属酶及其应用，所述金属酶由铁卟啉和人工G四链体DNA组成。在K+存在条件下，将人工G四链体DNA和铁卟啉混合在缓冲溶液中，搅拌即可原位合成得到人工G四链体DNA金属酶。人工G四链体金属酶应用于烯烃不对称环丙烷化反应时，表现出较高的催化活性和较高的选择性。本发明中，不包含贵金属组分，显著降低了反应的成本，并且本发明的人工G四链体DNA金属酶使用条件温和，是一种绿色环保，活性高，选择性高且稳定性优异的新型人工酶。

摘要： 本发明公开了一种具有三磷酸腺苷隧道金属酶活性的ZjAC2编码基因序列，编码三磷酸腺苷隧道金属酶的基因为ZjAC2，ZjAC2具有如序列表中SEQ ID NO.1的DNA序列。本发明采用上述的一种具有三磷酸腺苷隧道金属酶活性的ZjAC2编码基因序列，编码的蛋白除腺苷酸环化酶活性外，还具备NTP水解酶活性、三聚磷酸酶活性以及较弱的焦磷酸酶活性。

摘要： 本发明公开了一种具有三磷酸腺苷隧道金属酶活性的编码基因序列，编码三磷酸腺苷隧道金属酶的基因为ZjAC1，ZjAC1具有如序列表中SEQ ID NO.1的DNA序列。本发明采用上述的一种具有三磷酸腺苷隧道金属酶活性的编码基因序列，编码的蛋白除腺苷酸环化酶活性外，还具备NTP水解酶活性、三聚磷酸酶活性以及较弱的焦磷酸酶活性。