融合基因

摘要： 高通量测序已逐渐成为医学与生命科学领域的一种重要技术方法,但全基因组序列分析的复杂性和测序的高成本仍是目前高通量测序的障碍。靶向测序是一种捕获基因组特定区域DNA并进行高深度测序的方法,它在遗传性疾病、癌症测序和精准医学等方面具有广泛应用。目前常见的靶向富集方法主要有杂交捕获法和多重PCR扩增法。杂交捕获法过程繁琐、成本昂贵,PCR扩增法容易受扩增效率影响导致靶序列文库丰度不均匀,且会丢失DNA序列的表观修饰信息。近年来,基于纳米孔测序平台开发了CRISPR/Cas9靶向富集高通量测序方法(nCATs),可在无需PCR扩增的条件直接对感兴趣的基因位置进行靶向测序。该方法具有直接识别碱基修饰、读长长、实时检测、速度快等优势,在基因结构性变异、突变检测和基因的甲基化修饰检测等方面展现了良好应用前景。尤其是在融合基因的检测方面,该技术通过结合生物信息学的分析工具可检测新的融合基因和断裂位点,在临床诊疗方面具有重要的指导意义。本文将对CRISPR/Cas9靶向富集纳米孔基因测序技术的基本原理和上述应用场景进行综述,并重点阐述该技术在融合基因检测方面的最新进展。

摘要： RET原癌基因是一种重要的癌症驱动基因,与人类多种肿瘤的发生、发展密切相关。RET相关肿瘤的发病机制包括RET基因激活性点突变与RET基因融合突变。近年来,针对致癌性RET基因融合突变开发的精准靶向药物取得了突破性进展。综述了RET原癌基因与肿瘤发生、发展相关性研究及近年来临床诊疗方面的研究进展,旨在为RET基因突变癌症患者的精准化诊疗提供参考,并通过精准高效地抑制RET基因突变,提高疾病缓解率和控制率。

摘要： 目的:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法定期检测费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)患者外周血中BCR/ABL融合基因表达的动态变化,为患者制订不同的治疗方案,以提高患者总生存(OS)率。方法:回顾性分析20例初治和难治复发Ph+ALL患者的临床资料,经过酪氨酸激酶抑制剂(TKI)+长春新碱+强的松(TKI+VP)或者酪氨酸激酶抑制剂+长春新碱+柔红霉素+强的松(TKI+VDP)等多种化疗方案诱导治疗,17例患者达到血液学完全缓解(HCR),3例未缓解(NR)。其中HCR患者中8例患者微小残留病(MRD)为阴性,3例患者选择自体造血干细胞移植(Auto-HSCT),在造血功能重建后均接受了TKI维持治疗至今;另5例MRD阴性患者、9例MRD阳性患者和3例NR患者均进行了异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)。所有患者分别在干细胞移植前和移植后1、2、3、6、9及12个月进行外周血BCR/ABL融合基因检测,评估患者的MRD。Allo-HSCT组患者造血重建后,均给予TKI口服干预治疗,其后基因检测持续阴性者,TKI口服干预治疗1年后停用。治疗期间如果监测MRD转阳则依据移植时间给予更换有效TKI药物或减停免疫抑制剂等治疗措施。结果:全组患者造血干细胞移植后均达到造血重建,粒细胞植活中位时间为14(11~24)d,血小板植活中位时间为17(13~52)d。随访至2020年12月,中位随访时间为52(3~111)个月。全组患者3年OS率为(61.1±11.7)%。Allo-HSCT组和Auto-HSCT组患者移植后3年OS率分别为(52.8±13.4)%和100.0%,组间比较差异无统计学意义(P=0.178)。移植前MRD阴性组和移植前HCR但MRD阳性组患者3年OS率分别为(87.5±11.7)%和(42.8±15.6)%,组间比较差异无统计学意义(P=0.065)。移植前NR的患者全部死亡。全组死于疾病复发5例,死于肺感染1例,死于Ⅳ度急性移植物抗宿主病(GVHD)1例。结论:对Ph+ALL患者依据BCR/ABL融合基因检测结果的动态变化选择Auto-HSCT或Allo-HSCT及术后分层干预治疗措施,可提高患者的OS率。

摘要： 【目的】本研究旨在利用已获得的PacBio单分子实时(single molecule real-time,SMRT)测序数据对蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis菌丝(AaM)和孢子(AaS)中的转录因子(TF)、融合基因和RNA编辑事件进行鉴定和分析,以期丰富蜜蜂球囊菌的相关信息,并为进一步探究它们的功能提供理论依据。【方法】利用BLASTx工具将AaM和AaS的全长转录本序列比对到Nr,Swiss-Prot和KEGG数据库以获得一致性最高的蛋白序列,再利用hmmscan软件将上述蛋白序列比对到Plant TFdb数据库以获得TF的分类及注释信息。采用TOFU软件中的fusion_finder.py程序进行融合基因的预测,进而分析融合基因的序列和位置信息。使用SAMtools预测AaM和AaS中的RNA编辑事件,再利用ANNOVAR软件对RNA编辑事件进行注释,进而采用相关生物信息学软件对RNA编辑位点基因进行GO功能和KEGG通路注释。【结果】在AaS中共鉴定到17个TF家族的213个TF,其中C2H2家族包含的TF成员最多。在AaM和AaS中分别鉴定到921和510个融合基因,二者共有的融合基因为510个,特有的融合基因分别为411和0个。在AaM和AaS中分别鉴定到547和191次RNA编辑事件,其中AaM中同义单核苷酸突变的数量最多,AaS中非同义单核苷酸突变的数量最多。此外,在AaM中鉴定到12种碱基替换类型,其中发生C->T的RNA编辑事件数量最多,达到158次;在AaS中鉴定到9种碱基替换类型,其中发生C->T和G->T的RNA编辑事件数量最多,均有42次。AaM和AaS中RNA编辑位点基因分别涉及19和24个GO功能条目;此外还能注释到11和20条KEGG通路。【结论】蜜蜂球囊菌的菌丝和孢子中含有丰富的TF、融合基因和RNA编辑位点;转录因子C2H2家族与蜜蜂球囊菌菌丝和孢子的生长发育和细胞活动具有潜在关联;RNA编辑事件的碱基替换类型在蜜蜂球囊菌和其他物种中具有物种特异性;RNA编辑可能在蜜蜂球囊菌菌丝和孢子的生长和代谢中发挥作用。

摘要： 目的:利用生物信息学方法构建融合基因在横纹肌肉瘤(RMS)发病机制中潜在的miRNA-mRNA调控网络,为研究RMS提供新方向。方法:采用GEO2R分析工具筛选融合基因阳性和阴性RMS组织差异表达基因(DEGs)和差异表达miRNA;预测差异表达miRNA的靶基因,重叠DEGs和靶基因筛选出目标基因;采用DAVID数据库对目标基因进行基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。采用STRING和Cytoscape软件构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络、筛选Top10核心基因(hub基因)并构建hub基因与miRNA的分子调控网络,通过Kaplan-Meier生存曲线,分析Top10 hub基因与肉瘤患者预后的关系。结果:筛选出891个DEGs(P<0.01,|logFC|≥1)和14个差异表达miRNA(P<0.05,|logFC|≥3),预测出差异表达miRNA的靶基因1654个,将靶基因与DEGs重叠共获得115个目标基因。GO功能富集分析,目标基因主要富集在细胞增殖的正向调节、细胞表面和蛋白结合等生物学过程;KEGG信号通路分析,目标基因主要富集在细胞外基质-受体相互作用和癌症中蛋白聚糖等通路。PPI网络中筛出的Top10 hub基因为表皮生长因子受体4(ERBB4)、受体型蛋白质酪氨酸磷酸酶D(PTPRD)、胰岛素受体底物1(IRS1)、整合素金属蛋白酶10(ADAM10)、Yes相关蛋白1(yes YAP1)、转录因子AP-2A(TFAP2A)、细胞黏附分子1(CADM1)、ELAV类似RNA结合蛋白2(ELAVL2)、锌指转录因子1(SNAI1)和ERBB受体反馈抑制剂1(ERRFI1)。生存分析,肉瘤组织中PTPRD(HR=1.79,P=0.005)、ADAM10(HR=1.94,P=0.010)、ELAVL2(HR=1.56,P=0.031)和ERRFI1(HR=2.05,P=0.005)表达水平升高与肉瘤患者的不良预后有关。结论:本研究筛选出参与RMS发病机制的hub基因和对应的miRNA,构成了miRNA-mRNA网络,为深入研究融合基因与RMS的关系提供了理论依据。

摘要： 目的探讨联合检测肾母细胞瘤基因1(WT1)和融合基因在急性髓细胞性白血病(AML)微小残留病(MRD)中的应用价值。方法收集2018年1月至2020年12月于该院确诊并完成RUNX1-RUNX1T1、早幼粒细胞白血病蛋白(PML)/视黄酸受体(RAR)α和WT1基因检测的伴重现性遗传学异常的AML患者。检测RUNX1-RUNX1T1、PML/RARα和WT1转录本水平,将RUNX1-RUNX1T1、PML/RARα融合基因转录本水平为0%看作融合基因阴性组,将RUNX1-RUNX1T1或PML/RARα融合基因转录本水平均不为0%看作融合基因阳性组。结果融合基因阴性组患者WT1转录本水平为0.096%(0.007%,1.990%),融合基因阳性组患者WT1转录本水平为1.420%(0.100%,60.340%),融合基因阴性组患者WT1转录本水平低于融合基因阳性组患者(P<0.05)。融合基因高表达组(融合基因转录本水平≥1%)患者融合基因转录本水平高于WT1转录本水平(P<0.05),融合基因低表达组(融合基因转录本水平<1%)患者WT1转录本水平高于融合基因转录本水平(P<0.05)。结论可联合检测融合基因和WT1,以此提高MRD的检测灵敏度。

摘要： 目的 分析1 058例急性白血病(acute leukemia, AL)初诊患者样本46种融合基因的检测结果,以明确AL患者融合基因的分布情况,并探讨其在临床诊治中的应用价值。方法 回顾2017年4月年至2021年6月送检至本实验室且诊断为AL[包括急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)、急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia, ALL)和急性系列未明白血病(acute leukemia of ambiguous lineage, ALAL)]的患者全血样本1 058例,采用多重荧光PCR法检测46种融合基因。分析AML、ALL及ALAL患者样本中各类融合基因的检出情况以及不同年龄段的分布差异,并用卡方检验进行差异性分析。结果 AML、ALL及ALAL患者样本中融合基因的阳性率分别为50.30%、47.25%和16.32%。包含核孔蛋白98(nucleoporin 98,NUP98)融合在内的10种融合基因在AML和ALL患者中的分布差异均有统计学意义(P均<0.01)。AML中在不同年龄段患者的融合基因阳性率差异亦有统计学意义(P<0.01)。结论 融合基因在AL患者中的阳性率较高,其分布特征可为疾病的临床诊断和治疗提供有利证据。

摘要： 目的 回顾性分析109例B淋巴系统恶性肿瘤患儿检测结果,探讨其融合基因和免疫表型的关系。方法 应用实时荧光定量PCR进行融合基因检测,采用多参数流式细胞术进行免疫表型分析。结果 109例B淋巴系统恶性肿瘤患儿集中在1~10岁;融合基因阳性者42例,检出率为38.5%,其中TEL/AML1比例最高,占64.3%;免疫表型以表达CD34和CD10的Ⅱ型(common-B-ALL)为主,共81例,占74.3%,TEL/AML1和BCR/ABL阳性患者均属Ⅱ型;伴髓系抗原表达与疾病的预后无关,但不同类型融合基因的表达与疗效相关。结论 儿童急性B-ALL的发病年龄、融合基因以及免疫表型之间具有一定的相关性;特定免疫标志物的改变可用于发病初期融合基因表达的预测,特征性融合基因的鉴定也有利于更精准的诊疗。

摘要： 肺癌具有高发病率和高死亡率两个特征,是当今世界范围内危害性最大的疾病之一。致病融合基因是一类特殊的驱动基因,是肺癌发生的一种常见机制。大多数融合基因编码受体酪氨酸激酶,一般由染色体重排所致,是肺癌治疗的潜在靶标。继2007年肺癌中ALK融合基因被发现以来,随着荧光原位杂交技术(FISH)、免疫组化(IHC)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和下一代测序(NGS)等方法的广泛应用,在随后的15年中其他的一些致病融合基因也陆续被鉴定,包括ROS1、RET、FGFR、NTRK1、NRG1、DNAH5和LTK。这些发现进一步完善了肺癌的致病基因突变谱,为临床患者的个体化治疗提供了重要的理论依据。目前,针对部分融合基因已开发出相应的激酶抑制剂并且表现出良好的治疗效果,但仍然存在耐药性等问题,因此相应患者的治疗仍旧面临着重重挑战。本文结合近年来相关的文献报道,对肺癌中致病融合基因的研究进展作一综述。

摘要： 胰腺癌恶性程度高,预后差,治疗手段有限,精准治疗是提高胰腺癌患者疗效的大势所趋。超过1/4的胰腺癌患者存在可治疗的靶点,主要包括KRAS突变、同源重组修复缺陷、融合基因改变、免疫微环境等四大类分子靶标,其中有恶性肿瘤家族史或个人史、年轻患者及腺泡细胞癌等胰腺癌患者更可能从精准治疗中获益。然而目前胰腺癌患者最终接受精准治疗的不足4%,肿瘤分子谱检测每有KRAS突变状态、肿瘤细胞含量、融合基因、胚系突变等关键信息缺失,精准治疗仍是一种小众治疗手段。因而有必要建立精准检测技术规范,打造专业化的精准分析团队,强调多中心协作从而积累循证医学证据,推动胰腺癌精准治疗从小众走向主流,造福于广大胰腺癌患者。最新的研究结果表明,胰腺癌精准治疗可改善患者预后,延长生存期。2019年,《新英格兰医学杂志》(New England Journal of Medicine)报道了针对具有BRCA1或BRCA2胚系突变的晚期胰腺癌进行多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]抑制剂奥拉帕利维持治疗的POLO研究,从而拉开了胰腺癌精准治疗的序幕。2020年,得克萨斯大学MD安德森癌症中心(The University of Texas MD Anderson Cancer Center)Pishvaian等报道了“知道您的肿瘤(Know Your Tumor,KYT)”计划。结果表明,在1856例胰腺癌患者中,具有可治疗靶点且匹配对应治疗的患者(46例,中位生存期为2.58年)其预后明显优于具有可治疗靶点但未匹配对应治疗的患者[143例,中位生存期为1.51年,风险比(hazard ratio,HR)=0.42,P=0.004]以及无可治疗靶点的患者(488例,中位生存期为1.32年,HR=0.34,P<0.0001)。然而,具有可治疗靶点但未匹配对应治疗的患者的预后却与无可治疗靶点的患者差异无统计学意义(P=0.10)。这项真实世界研究表明,对有可治疗靶点的胰腺癌实施精准治疗可将胰腺癌患者的生存期延长1年以上。目前胰腺癌精准治疗的靶标包括KRAS突变状态(KRAS野生型,KRAS G12C突变)、同源重组修复缺陷(BRCA1/2、PALB2、ATM/ATR/ATRX、CHEK2、CDK12、RAD51、NBN、BLM、FANC、RAD51/51C、RAD50、BAP1、BARD1、BRIP1和MRE11)、融合基因改变(NTRK、NRG1、ALK、RAF、RET、MET、FGFR2/3和ROS)、免疫微环境[MSI-H、TMB和MMR-D(MLH1、MLH3、MSH2、MSH3、MSH6、PMS1、PMS2、POLE和EPCAM)]、其他[BRAF、人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)]等。由于胰腺癌精准治疗靶点相对有限且分布不集中,患者存在生存期短以及标本难获得等劣势,因而有必要建立专业化的精准分析团队,进而推动胰腺癌精准治疗的发展。相信随着业内对精准治疗的重视,胰腺癌的精准治疗必将迎来春天。

摘要： 为探索鸭α干扰素(DuIFN-α)与γ干扰素(DuIFN-γ)融合基因的抗病毒效果,本研究将已构建好的重组表达质粒pET32a/IFNα-IFNγ进行原核表达,用SDS-PAGE和Western blot分析表达的蛋白,纯化后分别检测其体内和体外抗病毒活性.结果表明:本实验成功成功表达了rDuIFNα-DuIFNγ蛋白;经纯化后获得了纯度在90％以上的重组蛋白;体外抗病毒实验结果可知,重组融合蛋白DuIFNα-DuIFNγ在DEF上的抗VSV活性为1.6×107U/mg,明显高于单一重组蛋白的抗病毒活性;体内抗病毒实验结果可知,融合蛋白DuIFNα-DuIFNγ治疗组在AIV感染后动物的存活率可达到100％,单一蛋白rDuIFN-α和DuIFNγ治疗组在AIV感染后动物的存活率分别为90％和70％,而攻毒对照组动物的存活率只有40％,表明融合蛋白rDuIFNα-DuIFNγ具有良好的抗AIV效果,且其抗病毒作用优于单个重组蛋白.

摘要： 融合基因是指因染色体异常导致的两个独立基因拼接融合所形成的嵌合基因,其与癌症的发生有着重要的联系,检测融合基因为癌症的诊断治疗提供了新方向.而二代测序的发展,使得人们可以通过基因组水平来检测融合基因.然而,已经发表的融合基因检测算法的敏感性和控制假阳性率的能力仍待提高,检测结果存在大量误差.开发了新的基于RNA-Seq数据的融合基因检测方法:GFusion算法考虑了读段比对坐标,比对方向,双末端位置关系等条件,采用严格过滤步骤,降低算法假阳性率.在MCF-7乳腺癌细胞系中,GFusion探测到了3个已经证明存在的融合基因和5个待证实的融合基因.在正常的乳腺细胞中,GFusion只发现了1个融合基因.分析显示,GFusion不仅具有高敏感性,还能更有效控制假阳性率.

摘要： 目的：比较RT-PCR和实时荧光定量PCR(RQ-PCR)监测AML1/ETO融合基因的结果,以明确在儿童AML1/ETO+急性髓系白血病中,AML1/ETO融合基因作为微小残留病(MRD)监测的意义.rn 方法：2006年1月至2013年2月,70例儿童AML1/ETO+急性髓系白血病患者(≤16岁)纳入的研究.对检测的骨髓样本同时应用RT-PCR和RQ-PCR方法：对AML1/ETO融合基因进行监测.RQ-PCR的结果：以标准拷贝数(normalized copy number,NCN)表示.NCN低于INCN时定义为阴性.采用SPSS10.0软件进行统计学分析.rn 结果：共70例患儿进入本研究，其中男性35例，女性35例。8例放弃治疗，62例的患者被纳入MRD研究。rn 结论：RT-PCR和RQ-PCR均可用于在儿童AML1/ETO+急性髓系白血病中监测MRD。RQ-PCR方法较RT-PCR可以更早的区分出复发的高危人群。

摘要： 目的：研究ALL患儿染色体畸变所致融合基因与临床危险度分层及治疗的关系.rn 方法：采用多重RT-PCR方法检测儿童ALL的融合基因联合染色体核型分析、免疫表型、临床资料对152例ALL进行临床研究.rn 结果：152例儿童ALL中有43例(29.5％)具有9种融合基因表达,包括TEL/AML1、BCR/ABL(P190)、BCR/ABL(P210)、E2A/PBX1、MLL/ENL、MLL/AF9、TLS/ERG、CBF/MYH11、Hox11.其中TEL/AML1融合基因阳性23例,其中1例放弃治疗,1例因早期治疗反应不良,评估为高危,其他21例均早期治疗反应良好,目前停药10例(最长者停药30个月,最短者停药4个月),CR11例,另有1例停药18月后骨髓复发.rn 结论：MIC分型是白血病分型的常规，而基因分型弥补了MIC分型的不足，指导危险度分层和临床治疗，本研究提示TEL/AML1表达者化疗效果良好;BCR/ABL,MLL基因重排等化疗效果差，需骨髓移植或强烈化疗。采用多重RT-PCR方法可快速同时检测儿童急性白血病29种染色体畸变所形成的融合基因，完善白血病的MICM分型、指导临床个体化治疗。

摘要： 目的：观察蝎毒多肽(PESV)干预HEK293T转染细胞株的BCR/ABL融合基因、P210蛋白及Hedgehog表达水平变化,探讨PESV治疗慢性粒细胞白血病的作用靶点.rn 方法：从重组克隆载体pGEM bcr/abl中酶切出BCR/ABL融合基因片段,并利用逆转录病毒载体pLXSN转染包装细胞人胚肾细胞HEK293T细胞,使构建的HEK293T细胞稳定表达BCR/ABL融合基因.RT-PCR检测BCR/ABL基因水平,Westernblot检测P210蛋白表达,RT-PCR检测Hedgehog表达水平.分组培养HEK293T细胞,并给予不同浓度梯度PESV,观察BCR/ABL融合基因和P210蛋白表达水平.rn 结果：PESV能够抑制转染细胞HEK293T表达BCR/ABL融合基因水平，还可以抑制P210蛋白表达，干预Hedgehog分子调控，且抑制效果与PESV浓度呈正相关。rn 结论：PESV通过干预转染表达BCR/ABL融合基因HEK293T细胞内BCRIABL基因和P210蛋白水平，干预Hedgehog分子调控，抑制白血病发展，揭示PESV干预慢性粒细胞白血病的生物学活性效应，为PESV靶向治疗慢性粒细胞白血病研究提供实验依据。

摘要： 利用重叠延伸(SOEing)PCR技术,将罗非鱼病源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)ZQ0910株SIP基因与GAPDH基因通过Linker序列融合,构建成为SIP-GAPDH融合基因.经BamH I/SalI双酶切后,定向克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达.结果显示,在37°C,IPTG浓度为0.1mmol/L,诱导5h时蛋白表达量最大.Western Blot验证了pET-32a-SIP-GAPDH融合基因的蛋白分子量为102.01ku.SIP-GAPDH融合基因的成功构建与原核表达将为研制罗非鱼源无乳链球菌亚单位疫苗提供理论依据.

摘要： 目的:为了探讨鸡球虫融合基因真核表达质粒对鸡抗球虫的免疫保护作用及鸡IL-18在鸡球虫病核酸疫苗中的免疫佐剂作用.rn 方法:本研究应用重叠扩增PCR(SOE PCR)技术成功地将堆型艾美耳球虫(Ea)3-1E基因和α-tubulin基因片段利用引入的柔性连接肽(G4S)3进行连接,获得融合基因3-1E-linker-α-tubulin,以PVAX1为载体成功构建融合基因的真核表达质粒PVAX1-3-1E-α-tubulin.经重组质粒体外转染BHK-21细胞并观察到阳性结果后,将重组质粒PVAX1-3-1E-α-tubulin、PVAX1-IL-18、PVAX1-3-1E-α-tubulin+PVAX1-IL-18、PVAX1-3-1E和PVAX1-α-tubulin在21和28日龄分别免疫SPF雏鸡,35日龄攻击性感染Ea5×104个孢子化卵囊.rn 结果:结果表明融合基因免疫组雏鸡的平均增重和相对增重极显著高于单基因免疫组,而且当有细胞因子IL-18协同免疫时,能显著减少克粪便卵囊排出数量,十二指肠病变计分减少率为71.19％,抗球虫指数为194.32.rn 结论:融合基因真核表达质粒的免疫保护效果明显高于单基因免疫组,免疫保护效果良好,鸡IL-18可作为核酸疫苗的一种理想的免疫佐剂.

摘要： 目的：分离慢性粒细胞白血病(Chronic Myelogenous Leukemia,CML)患者外周血中的循环内皮细胞(circulating endothelial cells,CEC),研究其生物学特性及增殖潜能,并测定其CD133及bcr/abl融合基因的表达水平,探讨CEC在CML自然病程中的重要作用.rn 方法：淋巴细胞分离液分离CML患者外周血中的单个核细胞,免疫磁珠分选CD45-及CD146+的细胞,相差显微镜下观察其形态,体外培养绘制其生长曲线,免疫荧光染色测定CEC表面CD31、CD34、VWF及CD133的表达情况,利用fish技术检测bcr/abl融合基因的阳性率.rn 结果：CML患者外周血中分离的CEC具有典型血管内皮细胞形态，表达血管内皮细胞表面抗原CD31,CD34,VWF，增殖能力明显强于健康对照组，12名CML患者CEC中CD133表达的阳性率为31.29%，与健康对照组有显著性差异(P<0.05)，bcr/abl融合基因阳性率为10.77%，与疾病进程呈现正性相关的趋势。rn 结论：CML患者的CEC是肿瘤侵袭发展的重要组成部分，与疾病的传播和扩散有关。

摘要： 目的:分析中国NSCLC患者中EML4-ALK融合基因的阳性率、亚型分布情况及其相关的临床病理生理特征，并进一步探讨EML4-ALK融合基因在肺癌中的生物学功能;在前期工作基础上进一步深入探讨BTG2基因在肺癌发生发展中的作用机制，为寻找新的肺癌生物治疗提供理论依据。方法:以H2228和PC-9以及其衍生的人肺腺癌细胞株为研究对象，应用分子克隆技术、质粒转染、MTT、流式细胞仪等技术和方法，初步探讨EML4-ALK融合基因在人肺癌细胞中的生物学功能;应用高通量信息分析技术，进一步探讨与EML4-ALK融合基因密切相关的重要基因和信号通路;应用巢式RT-PCR检测271例NSCLC患者肿瘤标本中EML4-ALK融合基因表达情况，结合基因测序对中国NSCLC患者中EML4-ALK融合基因的阳性率及亚型分布情次做分析，并进一步分析其与肺癌患者的临床病理生理特征的相关性;构建pcDNA3.1-BTG2表达质粒，转染A549细胞。结果:经吉非替尼处理后，与PC-9-PCDNA3.1-NC对照细胞株比较，1-EML4-ALK-V3细胞株细胞活力明显降低，细胞凋亡明显增高;经TAE684处理后，与H2228-siRNA-NC细胞株比较，细胞株细胞活力明显降低;细胞凋亡率明显增高;与转染空载体和模拟转染的A549细胞比较，转染pcDNA3.1-BTG2的A549细胞生长速率明显减缓;A549细胞BTG2过表达可以抑制cvclin D1, MMP-1和MMP-2蛋白的表达。结论: EML4-ALK可能在肿瘤增殖和抵抗凋亡刺激因素中起至关重要的作用，可能直接或间接参与调控下游基因，从而调控肿瘤增殖和抗凋亡;EML4-ALK融合基因阳性的中国NSCLC患者群体具有特殊的临床病理特征，有助于临床选择ALK抑制剂靶向治疗优势人群;抗增殖基因BTG2在A549细胞系中的过表达可以抑制其生长、增殖和侵袭。有可能成为细胞治疗的新靶点。

摘要： 为了制备牛瑟氏泰勒虫病基因工程亚单位疫苗,根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因序列及黄牛IL-18基因序列,设计两对特异性引物,通过重组PCR技术将两段基因拼接后克隆到pMD-18-T载体,经过PCR、酶切和测序鉴定后,再亚克隆到pET-28a原核表,达载体,构建pET-28a-p23-IL-18重组原核表达载体,将鉴定正确的质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,在37°C用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析.结果表明,成功构建牛瑟氏泰勒虫pET-28a-p23-IL-18原核表达载体,目的基因在大肠杆菌中成功获得表达,融合蛋白的分子量约为48ku,并被牛瑟氏泰勒虫阳性血清所识别.本研究结果为牛瑟氏泰勒虫病基因工程亚单位疫苗的制备奠定了基础.

摘要： 本发明的目的在于，提供一种在癌症中鉴定能够成为预测药剂的治疗有效性的指标的基因、以该基因为目标预测药剂的治疗有效性的新型的方法，并进行了肺腺癌的全转录组测序。其结果，鉴定了KIF5B基因和RET基因的框内融合转录产物。另外，该KIF5B-RET基因融合在日本人肺腺癌的6/319（2%）、美国人肺腺癌的1/80（1%）中被检测出。而且发现，该7例均不显示EGFR、KRAS、ALK癌基因这样的公知的活化突变，因此，判明该基因融合为癌化中的责任突变（驱动突变）。该基因融合被认为是导致RET酪氨酸激酶蛋白的稳定活化的因素，因此，对于检测出该基因融合的患者，以RET酪氨酸激酶抑制剂进行的治疗是有效的。

摘要： 本发明公开了一种融合基因及其制备方法、融合基因表达载体及其构建方法、融合基因工程菌及其应用，属于基因工程技术领域。该融合基因，将蛋白转导域TAT连接入利尿多肽HKI序列，借助TAT的高效跨膜转运作用，使HKI快速地穿过食道系统内膜进入体内位点，确保HKI在体内运送过程中稳定发挥作用，使棉铃虫过度排泄死亡。本发明融合基因表达载体，将融合基因构建于植物表达载体pB Ⅰ 121中，由35S启动子驱动表达，在植株内高效表达，棉铃虫取食本发明融合基因表达载体遗传转化的转基因植株后3龄棉铃虫幼虫体重增幅明显减少，死亡率高。本发明融合基因工程菌，浸染待发芽植株，实现融合基因遗传转化植株，培育出转基因抗虫植株。

摘要： 本发明公开了一种融合基因及其制备方法、融合基因表达载体及其构建方法、融合基因工程菌及其应用，属于基因工程技术领域。该融合基因，将蛋白转导域TAT连接入利尿多肽HKI序列，借助TAT的高效跨膜转运作用，使HKI快速地穿过食道系统内膜进入体内位点，确保HKI在体内运送过程中稳定发挥作用，使棉铃虫过度排泄死亡。本发明融合基因表达载体，将融合基因构建于植物表达载体pB Ⅰ 121中，由35S启动子驱动表达，在植株内高效表达，棉铃虫取食本发明融合基因表达载体遗传转化的转基因植株后3龄棉铃虫幼虫体重增幅明显减少，死亡率高。本发明融合基因工程菌，浸染待发芽植株，实现融合基因遗传转化植株，培育出转基因抗虫植株。

摘要： 本发明提出一种BCR‑ABL融合基因检测试剂盒和BCR‑ABL融合基因检测方法。所述BCR‑ABL融合基因检测试剂盒包括多种引物和多种探针；所述BCR‑ABL融合基因检测方法包括：以所得样本的RNA为模板，利用多种所述引物和多种所述探针对所述RNA进行微滴式数字PCR扩增；计算BCR‑ABL融合基因与ABL基因拷贝数比值，得到BCR‑ABL融合基因的突变比例。本发明可有效检测3种类型的BCR‑ABL融合基因0.001％的低频突变，特异性强，灵敏度高，检测周期短，结果严谨可靠，实用性强，为慢粒白血病患者诊断以及临床监测提供科学依据。

摘要： 本发明公开了融合基因检测参考品的制备方法及融合基因检测参考品的应用。该方法采用阴性DNA对融合基因阳性片段库进行稀释，得到包括至少1个稀释梯度的融合基因检测参考品；所述融合基因阳性片段库包括至少11个融合基因阳性片段。本发明采用多个融合基因阳性片段，检测覆盖范围广，为将来克服DNA层面融合检测难、漏检多提供了一个新思路，为融合基因检测产品的性能评价标准提供了一个检测的样板，为融合检测技术的进步提出了一个新指标，具有广泛的应用前景和巨大的产业价值。

摘要： 本发明公开了修饰间充质干细胞的融合基因、具有该融合基因的质粒、慢病毒颗粒、干细胞及应用，该融合基因包含编码分泌信号蛋白的核酸人工序列，编码肺表面活性物质蛋白D的核酸人工序列，编码人源化肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的核酸人工序列，编码自剪切多肽的核酸人工序列，编码Tat蛋白的核酸人工序列，编码单纯疱疹病毒胸苷激酶的核酸人工序列；且以上核酸人工序列顺序依次串联。本发明构建了共同表达TRAIL和HSV‑TK的载体，产生双重的杀伤肿瘤效果。

摘要： 本发明公开了一种基于Ion Torrent测序平台融合基因检测文库的构建方法及融合基因检测的方法。其中，该构建方法包括以下步骤：S1，对样品DNA进行片段化，得到DNA片段；S2，对DNA片段进行末端修复及加碱基A；S3，连接序列已知的接头；S4，进行PCR扩增，得到样本核酸文库；S5，将样本核酸文库基于目标区域捕获平台的探针杂交捕获融合基因及伴侣基因的DNA片段；以及S6，将S5的产物通过PCR引入测序接头序列，得到融合基因检测文库。应用本发明的技术方案，解决了现有技术中Ion Torrent测序平台因RNA样本不合格导致无法检测基因融合及无法检测未知融合断点的融合类型问题。

摘要： 本发明提供了一种Nisin-rbLF-N融合基因、含有该基因序列的表达载体，以及能够高效表达Nisin-rbLF-N融合基因的重组毕赤酵母菌；另外，本发明还提供了所述重组毕赤酵母菌的诱导培养方法。本发明通过PCR方法，将融合基因Nisin-rbLF-N克隆到真核表达载体pPIC9K中，转化毕赤酵母GS115后进行诱导表达，能够表达出可观的融合蛋白。去糖基化后的融合蛋白经过复合蛋白酶酶解，具有抑干酪乳杆菌(G+菌)和大肠杆菌(G-菌)的作用。

摘要： 本发明公开了一种藻蓝蛋白/嵌合降钙素融合基因、融合蛋白、重组质粒、转基因酿酒酵母及应用。本发明将构建得到的线性rDNA2‑leu2‑Ppgk‑cpcB/5hsCT‑rDNA1片段以rDNA为同源重组位点介导整合到亮氨酸缺陷型酿酒酵母中获得转基因酵母BY4742‑LPB5，实现了外源基因在酿酒酵母细胞内的高效稳定表达，大大提高了降钙素的表达稳定性，且消除了抗生素等选择标记给后期工业化生产带来的环境污染不良影响或食品安全性问题。酿酒酵母生产周期短，发酵技术成熟，安全性好，且转基因酿酒酵母不需要蛋白提取、切割加工和纯化等繁琐工艺就可以直接口服，极大地降低了工业化生产成本。

摘要： 本发明公开了一种基于基因修饰得到的人重组干扰素融合基因、融合蛋白及其制备方法，属于生物制品技术领域。基于基因修饰得到人重组干扰素IFN‑β的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。由基因编码的融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明对人重组干扰素IFN‑β基因序列进行扩增，与质粒pET‑28a(+)相连接得到融合基因，再将融合基因转染至大肠杆菌BL21(DE3)中进行扩增和表达得到了可溶性的融合蛋白，解决了大肠杆菌中无法获得可溶性干扰素的问题。本发明还提供了从稳定细胞系获得高纯度的IFN‑KE50蛋白的纯化方法，由于其具有组氨酸标签，用固定金属镍进行亲和层析可以对目标蛋白进行有效的纯化，纯化后蛋白纯度可达到94.8％。简化了后续的纯化步骤，并可以获得更高的纯度。