牛瑟氏泰勒虫p23-IL-18融合基因的原核表达

摘要

为了制备牛瑟氏泰勒虫病基因工程亚单位疫苗,根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因序列及黄牛IL-18基因序列,设计两对特异性引物,通过重组PCR技术将两段基因拼接后克隆到pMD-18-T载体,经过PCR、酶切和测序鉴定后,再亚克隆到pET-28a原核表,达载体,构建pET-28a-p23-IL-18重组原核表达载体,将鉴定正确的质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,在37℃用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析.结果表明,成功构建牛瑟氏泰勒虫pET-28a-p23-IL-18原核表达载体,目的基因在大肠杆菌中成功获得表达,融合蛋白的分子量约为48ku,并被牛瑟氏泰勒虫阳性血清所识别.本研究结果为牛瑟氏泰勒虫病基因工程亚单位疫苗的制备奠定了基础.