K-ras

摘要： 目的 探讨uc.339经miR-95/K-RAS促进肾癌细胞增殖、凋亡和迁移的机制。方法 收集76例肾透明细胞癌组织及癌旁正常组织,应用RNA原位杂交技术检测uc.339表达情况,并分析其与肾透明细胞癌患者病理参数的相关性。CCK-8法检测肾癌细胞增殖活性;Annexin V/PI法检测细胞凋亡;Transwell小室检测肾癌细胞的迁移能力;双荧光素酶报告实验验证miR-95对靶基因K-RAS的调控;Western blot方法分析uc.339下游基因蛋白的表达。结果 uc.339在肾透明细胞癌组织中呈阳性表达,占77.63%(59/76),其阳性表达与肿瘤大小、肿瘤TNM分期均密切相关(P<0.05)。uc.339对肾癌细胞迁移能力无影响。过表达uc.339促进肾癌增殖活性、抑制细胞凋亡,而降低uc.339表达则抑制肾癌增殖活性、促进细胞凋亡(P<0.05)。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)验证uc.339下游靶基因是微小RNA-95(miR-95);双荧光素酶报告基因实验表明miR-95与K-RAS的结合具有特异性,K-RAS是miR-95的直接靶基因。Western blot和Rescue实验表明无论uc.339和miR-95如何变化,K-RAS都能受到uc.339的调控。结论 在肾癌中,uc.339抑制了miR-95的表达,进而升高K-RAS蛋白水平,促进肾癌生长。本研究为今后诊断和治疗肾癌提供有力的理论依据。

摘要： 目的研究微小RNA-19a(miR-19a)在鼻咽癌细胞中的表达以及对体外鼻咽癌细胞上皮间质转化(EMT)的作用。方法利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-19a在鼻咽癌细胞株CNE2、SUNE-1、HNE1、58F及人正常鼻咽上皮细胞株NP69中的转录水平;使用miR-19a模拟物(miR-19a mimics)、miR-19a抑制剂(miR-19a inhibitor)及其阴性对照瞬时转染体外鼻咽癌细胞;光学显微镜下观察细胞形态;Transwell小室实验检测细胞侵袭;Western blot实验测定E-cadherin、N-cadherin、KRAS、p-FAK和p-SRC的表达;通过生物信息学工具TargetScan研究miR-19a可能靶向调控基因,荧光素酶报告实验测定荧光素酶活性在鼻咽癌细胞中的表达;通过挽救实验验证miR-19a是否直接作用于靶基因从而调控鼻咽癌细胞的EMT行为。结果miR-19a在NP69细胞中的表达水平分别为CNE2、SUNE-1、HNE1和58F细胞的5.88、3.57、11.11和6.67倍,差异均有统计学意义(P<0.01);SUNE-1细胞转染miR-19a mimics促进miR-19a表达后,细胞侵袭能力明显下降[(10.5±2.1)比(25.6±4.4),P<0.01],HNE1细胞转染miR-19a inhibitor抑制miR-19a表达后,细胞侵袭能力明显增强[(34.2±4.9)比(16.9±2.5),P<0.01];通过生物学信息预测相关的靶基因和荧光素酶报告实验验证KRAS是miR-19a的直接作用靶点;mimics NC组、miR-19a mimics组和miR-19a mimics+KRAS mimics组侵袭细胞数分别为(28.3±3.4)、(11.6±1.5)和(23.7±2.8),上调KRAS的表达可部分逆转miR-19a对鼻咽癌细胞侵袭能力的抑制作用(P<0.01);Western blot结果表明,上调miR-19a表达可抑制N-cadherin、p-FAK和p-SRC蛋白表达,上调E-cadherin表达,差异均有统计学意义(P<0.05);细胞经转染KRAS mimics后,miR-19a mimics对E-cadherin、N-cadherin、p-FAK和p-SRC蛋白表达的调控作用明显被削弱。结论miR-19a可抑制鼻咽癌细胞EMT,该抑癌作用可能是miR-19a通过靶基因KRAS负性调控FAK/SRC信号通路来实现的。

摘要： 目的拟探讨K-ras基因和不同分期HER-2阳性乳腺癌的相关性及蛇床子对其调控作用。方法应用TCGA数据库乳腺浸润癌(breast invasive cancer,BRCA)项目的RNAseq数据分析K-ras基因和不同分期HER-2阳性乳腺癌的相关性。体外培养乳腺癌4T1细胞系,分析蛇床子对HER-2/neu高表达4T-1细胞增殖、凋亡活性EMT的影响,以及K-ras基因和Ras/MAPK通路的影响。结果K-ras基因表达增高和不同TNM分期显著相关。蛇床子可抑制HER-2/neu高表达乳腺癌4T-1细胞增殖,促进凋亡,抑制EMT发生,抑制K-ras基因(P<0.05),蛇床子可下调Ras/MAPK信号通路。结论K-ras基因表达增高和HER-2阳性乳腺癌不同TNM分期显著相关,蛇床子可调控K-ras基因,进而下调Ras/MAPK信号通路,抑制乳腺癌进展。

摘要： 目的探讨藏族结直肠癌患者K-ras和PIK3CA基因突变及其与临床病理因素的相关性。方法收集70例藏族结直肠癌患者手术标本/内镜活检标本,提取组织DNA。采用实时荧光PCR法检测K-ras和PIK3CA基因突变情况,分析其与临床病理特征的相关性。结果K-ras基因突变率为40.0%,PIK3CA基因突变率为8.6%。右半结肠癌患者较左半结肠癌患者、TNMⅢ~Ⅳ期结直肠癌患者较Ⅰ~Ⅱ期患者,K-ras基因突变率更高;而低分化结直肠癌患者较中-高分化患者、TNMⅢ~Ⅳ期结直肠癌患者较Ⅰ~Ⅱ期患者,PIK3CA基因突变率更高(P均<0.05)。K-ras基因和PIK3CA基因共同突变率为7.1%,K-ras基因突变与PIK3CA基因突变之间呈正相关(r=0.271,P=0.023)。结论藏族结直肠癌患者K-ras和PIK3CA基因突变率较高,有必要对藏族结直肠癌患者进行K-ras和PIK3CA基因突变检测,利于精准治疗,改善患者预后。

摘要： 结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是我国常见的恶性肿瘤之一,其发病机制尚未完全明确。有学者认为,此病的发生与多条细胞信号传导通路有关。研究发现,丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)信号传导通路的异常激活在CRC发生发展的过程中起到重要作用。目前临床上对MAPK信号传导通路上KRAS、NRAS、BRAF及HER-2基因状态与CRC临床病理特征之间关系的认识并不充分。本研究通过分析CRC患者KRAS、NRAS、BRAF及HER-2基因常见位点的突变情况,探讨上述基因的突变与CRC患者临床病理特征(包括肿瘤位置、家族史、性别、年龄、体重、吸烟史、饮酒史、肿瘤大小、分型、是否有远处转移和临床分期等)之间的关系,以期为CRC患者的个体化治疗提供理论依据。

摘要： 利用互作蛋白质组化学技术发现G12D突变型KRAS相互作用化学分子。建立融合蛋白质表达量相同的BioID-G12D-KRAS与BioID-WTKRAS细胞,通过LC-MS/MS检测生物素化肽段,定量分析蛋白质组学数据,预测野生型KRAS和G12D突变型KRAS的潜在结合分子。最终成功培养BioID-G12D-KRAS和BioID-WT-KRAS表达含量相同的SW48细胞;定量质谱识别BioID-WT-KRAS组中有88个生物素化蛋白质,BioID-G12DKRAS组中有90个生物素化蛋白质;发现AHNAK2与野生型KRAS更稳定结合,SLC5A3与G12D突变型KRAS优势结合。

摘要： 目的分析结直肠癌肿瘤组织中错配修复蛋白(MMR)表达与临床病理因素及KRAS、BRAF基因突变的相关性。方法采用免疫组织化学法和扩增阻滞突变系统对212例结直肠癌根治标本石蜡组织的MMR蛋白表达及KRAS、BRAF基因突变状态进行回顾性分析。结果212例结直肠癌肿瘤组织中错配修复蛋白表达缺失率为11.3%(24/212)。212例结直肠癌组织中KRAS、BRAF基因的突变率分别为40.6%(86/212)、3.3%(7/212)。结论错配修复蛋白联合KRAS、BRAF突变检测可为结直肠癌患者预后评估及个体化治疗提供依据。

摘要： Activating mutations in the oncogenes KRAS,BRAF and PI3K define molecular colorectal cancer(CRC)subtypes because they play key roles in promoting CRC development and in determining the efficacy of chemotherapeutic agents such as 5-fluorouracil and anti-epidermal growth factor receptor monoclonal antibodies.Survival of patients with cancers displaying these molecular profiles is low.Given the limited efficacy of therapeutic strategies for CRC presenting mutational activations in mitogen-activated protein kinase and/or PI3K pathways,developing combination therapies with natural flavonoids or other phytochemicals with demonstrated effects on these pathways(and little or no toxic effects)may constitute a valuable path forward.Much has been published on the anticancer effects of dietary phytochemicals.However,even an exhaustive characterization of potential beneficial effects produced by in vitro studies cannot be extrapolated to effects in humans.So far,the available data constitute a good starting point.Published results show quercetin and curcumin as possibly the best candidates to be further explored in the context of adjuvant CRC therapy either as part of dietary prescriptions or as purified compounds in combination regimens with the drugs currently used in CRC treatment.Clinical trial data is still largely missing and is urgently needed to verify relevant effects and for the development of more personalized treatment approaches.

摘要： Colorectal cancer(CRC)remains one of the main causes of cancer death in developed countries.Yet,it is potentially preventable,by removing the precursor lesions-adenomas or serrated lesions.Several studies proved that this intervention reduces CRC mortality and that the first colonoscopy’s results can guide surveillance strategies.More recently,it became clear that several carcinogenesis pathways may lead to sporadic CRC.CRC is a heterogeneous disease,characterized by multiple molecular subtypes.Three main pathways have been implicated in the development of CRC:Chromosomal instability,microsatellite instability,and the“serrated”pathways,with overlapping features between them.This and other molecular and genetic based CRC classifications are known to have clinical implications,spanning from familial risk assessment to therapy choices.The authors review basic science data and provide insight on current implications for the management of patients with CRC.

摘要： 目的探讨分化型甲状腺癌(DTC)中鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)、鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌基因同源体B(BRAF)基因突变与^(131)I放射治疗耐受的相关性。方法回顾性收集2010年3月—2015年6月于我院接受甲状腺全切除术及术后行^(131)I放射治疗的219例DTC患者的临床资料和病理组织样本,根据患者对^(131)I放射治疗的耐受情况分为耐受组和敏感组,检测病理组织样本中KRAS和BRAF^(V600E)基因的突变情况。结果耐受组年龄≥45岁、甲状腺滤泡状癌(FTC)、远处转移及转移灶≥1 cm的患者比例显著高于敏感组,差异有统计学意义(P<0.05)。KRAS基因突变在FTC中发生率较高,BRAF^(V600E)基因突变在甲状腺乳头状癌(PTC)中发生率较高;此外,KRAS和BRAF^(V600E)基因突变均与原发肿瘤最大直径、AJCC TNM分期、淋巴结转移、腺外侵犯、远处转移及转移灶大小有关(P<0.05)。耐受组KRAS和BRAF^(V600E)基因突变的发生率均显著高于敏感组(P<0.05)。年龄≥45岁、转移灶≥1 cm、KRAS和BRAF^(V600E)基因突变是DTC患者^(131)I放射治疗耐受的独立预测因素(P<0.05)。耐受组5年生存率显著低于敏感组,KRAS突变型患者5年生存率显著低于野生型患者,BRAF^(V600E)突变型患者5年生存率显著低于野生型患者,耐受组KRAS、BRAF^(V600E)突变型患者5年生存率均显著低于野生型患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 KRAS基因和BRAF^(V600E)基因突变是导致DTC患者^(131)I放射治疗耐受的独立危险因素,且对患者的预后评估具有重要意义。

摘要： 本发明提供了一种KRAS突变多抗原组合、靶向KRAS突变肿瘤CTL及其应用，涉及KRAS突变技术领域，本发明所述KRAS突变多抗原组合具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。在本发明中所述KRAS突变多抗原组合的接头不能引起特异性反应，说明所述KRAS突变多抗原组合安全可用。本发明利用所述KRAS突变多抗原组合制备得到靶向KRAS突变肿瘤CTL，对7种KRAS突变肿瘤细胞，均有一定的杀伤作用，说明CTL可以用于治疗多发的KRAS突变肿瘤疾病。

摘要： 本发明提供了来自GTP酶KRas蛋白质(KRas)的具体的肽和这些肽的衍生电离特性，其特别有利于通过选择反应监测(SRM)质谱或也可称作多反应监测(MRM)质谱的方法直接定量已经在福尔马林中固定的生物样品中的KRas蛋白质。这类生物样品是经化学保藏和固定的，该生物样品选自使用含有试剂/固定剂的甲醛处理的组织和细胞，包括福尔马林固定的组织/细胞、福尔马林固定/石蜡包埋(FFPE)的组织/细胞、FFPE组织块和来自那些块的细胞，以及经福尔马林固定和或石蜡包埋的组织培养细胞。使用Liquid Tissue试剂和方案从该生物样品中制备蛋白质样品并通过在蛋白质样品中定量至少一种或多种所描述的肽来使用SRM/MRM质谱的方法在Liquid Tissue样品中定量KRas蛋白质。这些肽在其以修饰的或未修饰的形式存在时可被定量。KRas肽的修饰的形式的一个示例是肽序列内酪氨酸、苏氨酸、丝氨酸和/或其他氨基酸残基的磷酸化。

摘要： 本发明提供了一种用于与KRAS基因杂交的DNA探针库，所述DNA探针库包括一个或多个能够与KRAS基因杂交的DNA探针，所述DNA探针包含以下序列：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、或SEQ ID NO.10。本发明还提供了采用该DNA探针库富集KRAS基因片段的方法。基于此，本发明还提供了一种检测KRAS基因的基因结构突变的方法。采用本发明的方法可以成数千倍地富集得到KRAS基因片段，并可以将其用于下一代测序技术以进行基因结构突变的检测，包括单碱基突变、mRNA缺失或增多、mRNA结构颠换、mRNA剪接变化。

摘要： 本文提供KRAS G12C抑制剂、其组合物及其使用方法。这些抑制剂可用于治疗多种病症，包括胰腺癌、结肠直肠癌及肺癌。

摘要： 本发明提供了一种KRAS突变多抗原组合、靶向KRAS突变肿瘤CTL及其应用，涉及KRAS突变技术领域，本发明所述KRAS突变多抗原组合具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。在本发明中所述KRAS突变多抗原组合的接头不能引起特异性反应，说明所述KRAS突变多抗原组合安全可用。本发明利用所述KRAS突变多抗原组合制备得到靶向KRAS突变肿瘤CTL，对7种KRAS突变肿瘤细胞，均有一定的杀伤作用，说明CTL可以用于治疗多发的KRAS突变肿瘤疾病。

摘要： 本发明提供了来自GTP酶KRas蛋白质(KRas)的具体的肽和这些肽的衍生电离特性，其特别有利于通过选择反应监测(SRM)质谱或也可称作多反应监测(MRM)质谱的方法直接定量已经在福尔马林中固定的生物样品中的KRas蛋白质。这类生物样品是经化学保藏和固定的，该生物样品选自使用含有试剂/固定剂的甲醛处理的组织和细胞，包括福尔马林固定的组织/细胞、福尔马林固定/石蜡包埋(FFPE)的组织/细胞、FFPE组织块和来自那些块的细胞，以及经福尔马林固定和或石蜡包埋的组织培养细胞。使用Liquid Tissue试剂和方案从该生物样品中制备蛋白质样品并通过在蛋白质样品中定量至少一种或多种所描述的肽来使用SRM/MRM质谱的方法在Liquid Tissue样品中定量KRas蛋白质。这些肽在其以修饰的或未修饰的形式存在时可被定量。KRas肽的修饰的形式的一个示例是肽序列内酪氨酸、苏氨酸、丝氨酸和/或其他氨基酸残基的磷酸化。

摘要： 本发明提供了一种用于与KRAS基因杂交的DNA探针库，所述DNA探针库包括一个或多个能够与KRAS基因杂交的DNA探针，所述DNA探针包含以下序列：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、或SEQ ID NO.10。本发明还提供了采用该DNA探针库富集KRAS基因片段的方法。基于此，本发明还提供了一种检测KRAS基因的基因结构突变的方法。采用本发明的方法可以成数千倍地富集得到KRAS基因片段，并可以将其用于下一代测序技术以进行基因结构突变的检测，包括单碱基突变、mRNA缺失或增多、mRNA结构颠换、mRNA剪接变化。

摘要： 本发明公开了一种新型的KRAS G12D抑制剂。本发明的如式I所示化合物、其异构体或药学上可接受的盐具有如下结构。本发明公开的如式I所示化合物及其组合物可以有效治疗与KRAS G12D相关的疾病，例如：癌症。

摘要： 本发明提供了一种基于KRAS蛋白的核苷酸交换方法。本发明中的核苷酸交换方法是在碱性磷酸酶的作用下，严格控制反应时间，按照一定的比例加入GTP类似物，将KRAS蛋白中的核苷酸GDP替换为GTP类似物。最终得到KRAS蛋白与GTP类似物复合物。本发明使用的核苷酸交换方法，可以方便快速的得到交换后的复合物样品。

摘要： 公开了使用以下式I化合物或其药学上可接受的盐或其前药治疗以至少一种KRAS突变的表达为特征的癌症的方法：还公开了用式I化合物改变以至少KRAS突变的表达为特征的细胞中KRAS或cMet水平的方法。