耻垢分枝杆菌

摘要： 目的评价3种常见培养基及抗酸染色6种初染方法在耻垢分枝杆菌培养与染色鉴定中的优缺点,筛选适于耻垢分枝杆菌生长的最佳培养条件,并对其染色鉴定方法进行优化。方法分别以液体营养肉汤(静置、晃动培养),固体血琼脂、普通营养琼脂培养基培养耻垢分枝杆菌24 h、48 h、72 h,对比生长情况;将抗酸染色法中石碳酸复红染色步骤分别以常规加热、70°C水浴、微波炉低火、卫生纸覆盖、室温冷染、及37°C温箱孵育等方法操作,对比染色效果与石炭酸复红用量。结果相同时间内,耻垢分枝杆菌生长速度为:固体培养基培养>液体培养基晃动培养>液体培养基静置培养,3种培养基培养48 h时均可获得理想菌量。与常规加热抗酸染色法相比,70°C水浴法、微波炉低火法着色清晰鲜艳,其他染色方法染色效果欠佳。石炭酸复红用量为:常规加热法>37°C温箱孵育法>卫生纸覆盖法>70°C水浴法=微波炉低火法。结论普通培养基即可满足耻垢分枝杆菌营养要求,充足氧气有助于其快速生长;70°C水浴法和微波炉低火法优于传统染色加热法染色效果,且石炭酸复红染液用量少,可作为鉴定耻垢分枝杆菌的优化实验方法。

摘要： 目的从海洋微生物中发现具有抗分枝杆菌活性的细菌,并对其进行鉴定。方法从印度洋热带地区的海底沉积物中分离海洋微生物。通过纸片法活性测定,发现了一株具有抗耻垢分枝杆菌活性的细菌。光学显微下观察细菌形态和菌落。测定细菌的理化特性,提取其基因组,荧光法测定基因组的T_(m)值,扩增其16S rDNA并进行测序。将序列提交NCBI和EzTaxon网站进行搜索比对,使用MEGA 7.0软件构建系统进化树。结果分离得到的菌株IMBGY10-46的发酵产物具有抗耻垢分枝杆菌活性;其与Pseudomonas sabulinigriJ64的16S rDNA相似性最高,但菌体形态和基因组的Tm值相差较大,并且过氧化氢酶试验呈阴性。将该菌株命名为假单胞菌属新菌株。该细菌的16S rDNA序列提交GenBank,收录号为JQ362457。结论从海底沉积物中获得了具有抗耻垢分枝杆菌作用的海洋微生物新菌株。

摘要： 目的探讨精氨酸代谢变化对耻垢分枝杆菌(M.smeg)毒力、致病性及宿主生理的影响。方法通过构建M.smeg argR敲除株,以野生型M.smeg为对照,测定细菌体外生长能力变化;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细菌脂类代谢相关基因fadD2、fadA5、kstR等的表达。用M.smeg侵染人非小细胞肺癌上皮细胞系A549,检测CCK8细胞活力,采用RT-qPCR检测细胞线粒体功能相关基因UCP1和DNM1L,观察细菌对宿主细胞生理的影响。结果敲除argR可提高细菌脂质储存能力,在以葡萄糖为单一碳源的培养基中更具生长优势(P<0.001);同时,M.smeg分枝菌酸合成上调;侵染A549细胞2 h后,入胞率显著增加(P<0.001),细菌毒力增强,对A549细胞的侵染能力提高,并通过影响线粒体功能影响宿主细胞的活力。结论M.smeg精氨酸代谢负转录调控因子argR的敲除提升了细菌毒力,并可抑制宿主细胞线粒体功能。

摘要： 目的:探讨微波低火加热在抗酸染色方法中的实验条件改进和优化,以替代存在多种弊端的传统明火加热抗酸染色法。方法:采用微波炉对石炭酸复红染色的耻垢分枝杆菌涂片分别低火加热15s、30s、45s、1min、2min染色,并与传统明火加热抗酸染色法比较二者之间的染液用量、染色用时及染色效果差异。结果:与传统明火加热法(加热时长5min)相比,微波加热染色1~2min即可使抗酸染色着色更为清晰鲜艳,对比度好,染色效果达到最佳,且可减少染液用量50%~75%。结论:微波低火法作为一种快速高效的抗酸染色方法的优化改进条件,可解决传统明火加热染色法控温差、易干涸、用量大、用时长、严重污染空气的弊端,故可替代传统抗酸染色方法中的明火加热实验条件,可广泛适用于检验、医学实验教学等,提高抗酸染色检验效率。

摘要： 目的筛选MSMEG_6171在耻垢分枝杆菌中的可能调控通路或基因,并进行验证。方法构建MSMEG_6171基因过表达的耻垢分枝杆菌株和空载质粒对照菌株;对其转录组和蛋白质组进行验证并深入挖掘MSMEG_6171过表达调控的下游信号网络;qRT-PCR验证差异表达基因。结果成功构建了MSMGE_6171过表达的耻垢分枝杆菌菌株(Msm::6171);转录组和蛋白质组数据的对比分析发现有38个基因在转录水平和蛋白表达水平显著上调,有31个基因表达水平显著下调;差异表达基因主要参与甘油酯代谢,核糖体和代谢通路;15个候选基因实时荧光定量PCR验证结果与转录组和蛋白质组测序分析趋势一致。结论MSMGE_6171调控了多个靶向基因,参与代谢和核糖体通路,为深入研究MSMGE_6171的调控网络提供了新的认识和重要参考。

摘要： 目的为研究MSMEG_0372基因的功能,构建该基因敲除、回补及过表达耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,M.smegmatis)并鉴定。方法聚合酶链反应(PCR)扩增MSMEG_0372基因的左、右臂(即等位基因互换底物,allele exchange substrates,AES)。AES与p0004s经过酶切并连接,构建p0004s-AES质粒。p0004s-AES与phAE159经过酶切并连接,构建phAE159-AES噬菌粒。噬菌粒转化至M.smegmatis,30°C培养,扩增重组噬菌体。用重组噬菌体侵染M.smegmatis,37°C培养,发生基因同源重组,形成MSMEG_0372基因敲除菌株。筛选阳性菌落,PCR鉴定。PCR扩增MSMEG_0372基因,构建pMV361-MSMEG_0372质粒。将pMV361-MSMEG_0372质粒分别导入MSMEG_0372基因敲除菌株和野生型M.smegmatis,构建MSMEG_0372基因回补菌株和MSMEG_0372基因过表达菌株。筛选阳性菌落,PCR鉴定。结果PCR扩增出MSMEG_0372的左、右臂(AES),构建了p0004s-AES质粒和phAE159-AES噬菌粒,制备了高滴度的重组噬菌体并侵染M.smegmatis,从而成功构建了MSMEG_0372基因敲除菌株。构建了pMV361-MSMEG_0372质粒,成功构建了MSMEG_0372基因回补和过表达菌株。结论成功构建并鉴定了MSMEG_0372基因敲除、回补及过表达M.smegmatis,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。

摘要： 目的 筛选RseA在耻垢分枝杆菌中可能调控药物敏感性的基因或通路,并进行初步验证.方法 利用分子克隆技术构建RseA基因过表达耻垢分枝杆菌组和空质粒对照组;利用转录组测序技术和生物信息学方法筛选2组细菌间的差异表达基因(DEGs),分析其基因本体论(GO)及京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集情况;并构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络.利用结核分枝杆菌复苏促进因子E(RpfE)促使非复制持留菌复苏,测定复苏指数(RI)对筛选出的关键靶向基因或通路进行初步验证.结果 RseA基因过表达后,筛选出2 403个DEGs,其中2 335个表达上调,68个表达下调.GO分析结果表明,DEGs主要参与氮化合物代谢过程的调控、RNA代谢过程的调控、转录因子活性和序列特异性DNA结合过程调控等.KEGG分析结果显示,DEGs主要参与萜类骨架的生物合成、果糖和甘露糖代谢和同源重组等通路.从PPI网络MCODE模块中筛选出前8个hub基因rpsG、rplM、rpsO、rpsT、rpmH、rplS、rpsJ、rplT,并从这些基因的分析结果得知,其主要参与了核糖体通路.使用RpfE促进复苏后,RseA组复苏指数明显低于对照组.结论 RseA调控了多个靶向基因,参与核糖体的结构组成和核糖体通路,增强耻垢分枝杆菌对抗结核药物的敏感性,为进一步的机制研究奠定了基础.

摘要： 目的 探讨利福平(RIF)对耻垢分枝杆菌(MS MC2155)转录组表达的影响.方法 以RIF的1/2最小抑菌浓度(MIC)处理的MS MC2155菌株为实验组,用相同稀释倍数的DMSO处理MS MC2155菌株作为对照组,于摇床内37°C培养72 h后,用Trizol试剂提取各组MS MC2155的总RNA,通过Illumina Hiseq 3000测序平台进行全转录组测序,采用Bowtie 2软件比对测序结果,用MS MC2155标准菌株的参考基因组对样本基因进行注释,通过倍数差异分析,筛选获得RIF作用前后的差异基因(different expression gene,DEG),最后用GO及KEGG数据库注释上述获得的DEGs.结果 DEG分析显示,在RIF处理后发现了832个DEGs(P≤0.05,|log2FC|≥1),其中457个基因上调(54.93％),375个基因下调(45.07％).GO富集分析结果显示,DEGs(nuoF、nuoB和sigM)主要涉及氧化还原酶活性、呼吸链复合物等细胞与分子方面的功能,以及外来生物刺激、共生体调节等生物学过程.KEGG富集分析显示,DEGs(cspA、sigM、nrdB、gmk、nuoF、nuoB和mysB)主要集中在万古霉素耐药、氧化磷酸化、核苷酸代谢和酪氨酸代谢等通路.STRING分析结果显示,共有371个基因编码的蛋白质存在相互作用,其中处于中心节点的蛋白的基因包括mysB、pheT和guaB.结论 经转录组测序发现,RIF既能影响MS MC2155中sigM、mysB等RNA合成基因的表达;又能抑制其nrdB、gmk和guaB DNA合成基因的表达,进而阻断其DNA和蛋白的合成.

摘要： 目的 比较研究低频低强度超声(LFLIU)联合载左氧氟沙星纳米粒(LEV-NPs)和载利福平纳米粒(RIF-NPs)对耻垢分枝杆菌(MS)的杀菌效果及机制.方法 采用双乳化法制备LEV-NPs和RIF-NPs,检测其物理特性等.用频率42 KHz、强度0,45 W/cm2的超声联合LEV-NPs和RIF-NPs辐照MS悬液15 min,检测辐照后MS的活性及观察辐照前后细菌形态、结构变化及研究相关机制.结果 ①制备的LEV-NPs和RIF-NPs粒径大小均匀、呈球形,Zeta电位均为负电荷.②与对照组相比,LFLIU联合两种载药纳米粒与MS悬液作用后24 h,平板计数细菌存活显著低于其他实验组(P＜0.001).透射电镜显示对照组和非超声组MS细菌壁未见明显损伤,在US+ LEV-NPs组中,可见MS细菌壁破裂、结构不完整.③LFLIU联合LEV-NPs辐照MS后,共聚焦显微镜结果表明US+LEV-NPs组产生的活性氧(ROS)显著增加.结论 LFLIU联合两种载药纳米粒对MS均有显著的协同抗菌作用,且具有声敏性的LEV-NPs联合LFLIU能促进ROS的产生,达到高效杀菌效果.

摘要： Pup-蛋白酶体系统(Pup-proteasome system)是存在于分枝杆菌中的与真核生物中的泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-proteasome system)类似的蛋白降解系统,该系统应该和结核分枝杆菌的生理功能和致病性等息息相关.为了验证耻垢中Pup-蛋白酶体系统对其生长活力的影响,通过分别敲除耻垢分枝杆菌中的类泛素分子(Pup)和蛋白酶体β亚基(prcB)后,测定野生型耻垢和敲除后的耻垢在正常培养条件和低氧培养条件下的生长活力变化,结果发现耻垢分枝杆菌中的Pup基因被敲除后将会对菌的生长发生影响,而蛋白酶体β亚基(prcB)基因的敲除却对菌的生长没有发生显著的影响.Pup和蛋白酶体β亚基基因对耻垢分枝杆菌的生长活力影响不同,正说明了Pup--蛋白酶体系统对耻垢分枝杆菌的作用和影响。

摘要： 本文利用TM4噬菌体作为筛选条件,对耻垢分枝杆菌转座子突变库进行筛选,发现M12突变株对TM4高度耐受,后面的工作主要是对M12突变株耐受TM4噬菌体的机制进行深入的研究.

摘要： 为构建表达牛分枝杆菌(M.bovis)PE_PGRS62蛋白的重组耻垢分枝杆菌，本研究以M.bovis基因组DNA为模板PCR扩增M.bovis PE_PGRS62基因，获到大小约为1515bp的目的片段。将扩增的PE_PGRS62基因克隆到大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV261中，经电转化方法，将重组pMV-PE PGRS62穿梭表达载体转化到耻垢分枝杆菌(M.smegmatis ATCC607)中，42°C热诱导此重组M.smegmatia，通过SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物并鉴定其生物学活性。经SDS-PAGE分析，表达的PE_PGRS62蛋白分子量约为60 ku，免疫印迹结果表明，表达的PE_PGRS62蛋白与兔抗M.bovia阳性血清反应形成1条特异性蛋白条带。为进一步研究M.bovis致病机理提供依据。

摘要： 耻垢分枝杆菌是一种生长迅速的非致病性分枝杆菌，较BCG更安全可靠，且具有与BCG一致的免疫调节作用，是一种具有广阔前景的疫苗载体。本文从人睾丸mRNA中克隆出睾丸-肿瘤(CT)抗原NY-ESO-1，以耻垢分枝杆菌为载体，构建了表达NY-ESO-1的重组耻垢分枝杆菌(rM.smegtmatis)，通过对rM.smegmatis膜蛋白，细胞壁蛋白、胞质蛋白的分离检测，确定经β半乳糖苷酶信号肽引导表达的NY-ESO-1大部分定位表达于M.smegmatis的细胞壁上；并对经rM.smegmatis免疫的小鼠进行了血清抗体、T淋巴细胞群、脾细胞增殖、细胞因子分泌及体外CTL杀伤能力等免疫学研究。

摘要： 目的：构建能够分泌表达结核分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)与人IL-2融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌(recombinant Mycobacterium Smegmatis，rM.S)。rn 方法：用EcoR V和HindⅢ双酶切含HSP65-IL-2融合基因的pPRO—hsp65-IL-2载体，回收目的基因片断HSP65-IL-2，并将其亚克隆入同样双酶切的大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭分泌表达载体pDE22中。重组质粒pDE22-hsp65-IL-2酶切鉴定正确后，电穿孔转化M.S感受态，潮霉素抗性压力筛选阳性rM。S.Western—blot鉴定rM.S培养上清蛋白中目的蛋白的表达。rn 结果：重组pDE22-hsp65-IL-2质粒酶切后可获得约2000bp片段，与预期大小一致。Western—blot结果表明，rM.S培养上清蛋白中有特异性反应条带，大小为78kD，与Hsp65-IL-2融合蛋白大小相一致。rn 结论：成功构建了大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭分泌表达载体pDE22-hsp65-IL-2，rM.S可特异性表达Hsp65-IL-2融合蛋白，为该rM.S用于结核新型疫苗的研究提供了基础。

摘要： 目的：筛选经典抗结核中药方剂中的可能作用于莽草酸脱氢酶的单体成分,并评价这些单体成分的抗结核作用. 方法：自建经典抗结核中药方剂药材的单体成分的数据库,以莽草酸脱氢酶为靶标,通过Discovery Studio(DS)分子设计软件包对数据库进行筛选,再应用耻垢分枝杆菌评价筛选出的单体成分的抗结核作用. 结果：筛库[1290个配体(ligands)]后,综合考虑"CDOCKER interaction energy、CDOCKER energy和最高匹配权值聚合(top hits aggregation)数值",挑选出3个排名较高的单体成分.体外实验表明,挑选出的3个单体成分都具有抗耻垢分枝杆菌的作用. 结论：虚拟筛选方法可以帮助从中药中找寻抗结核的药物候选物的工作.

摘要： 本文通过耻垢分枝杆菌转座突变库筛选获得一株缺乏糖肤脂的突变株。该菌株细胞疏水性较野生株强，但其生物膜结构疏松，的生物膜长时间不降解。胞外基质较野生菌株明显减少。同时仍然能形成生物，该突变株形成通过对该突变株的深入研究，可能会从新的角度解释GPLs影响生物膜形成的机制，并为解决分枝杆菌生物膜的基质问题，以及分枝杆菌生物膜降解的物质基础问题提供证据。

摘要： 本文以耻垢分枝杆菌为模型,通过重组技术构建转录调控因子MESMEG-2386缺失菌株,成功获得突变菌株.比较不同生长时期野生株与缺失株异柠檬酸裂解酶的活性发现,在对数生长期,缺失株的异柠檬酸裂解酶活性明显高于野生型.

摘要： 对SOS反应在结核耐药产生中的作用进行研究。通过紫外线、利福平和氧氟沙星等基因毒性物质作用于耻垢分枝杆菌(MSm),利用real-time PCR比较SOS相关基因在诱导突变株中的表达差异。实验发明,45s的UV暴露下MSm的存活率为50％,利福平和氧氟沙星的最小抑菌浓度分别是32μg/ml和1g/ml。在基因损伤后,dnaE2、recA和recX等SOS相关基因表达水平上升。SOS反应存在于耻垢分枝杆菌中,可能跟分枝杆菌的存活和耐药产生有关。

摘要： 分别以生理盐水、pcDNA3.1(-)空质粒、重组真核质粒pcDNA3.1(-)-C-preS1(简称基因免疫组)、耻垢分枝杆菌和重组耻垢分枝杆菌(简称重组耻垢免疫组)注射BALB/c小鼠,各组均免疫 2 次,每次间隔 3 周.末次注射后进行连续抗体测定,最后处死小鼠分离脾细胞,进行淋巴细胞增殖实验和细胞毒性T细胞杀伤实验.重组耻垢免疫组抗体滴度升高幅度前期低于基因免疫组(P＜0.05),后者 45 d达到峰值1:5 100.前者抗体滴度第 60 d达到峰值1:6 900,45 d后重组耻垢免疫组抗体滴度高于基因免疫组(P＜0.05),且维持时间较基因免疫组更长(P＜0.05).基因免疫组诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖刺激指数低于重组耻垢免疫组(P＜0.05).后者诱导的特异性CTL杀伤率最高可达到50.2％,而前者最高为31.6％,二者有显著区别(P＜0.05).

摘要： 本发明涉及一种可表达结核分枝杆菌Ag85B和ESAT-6融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌株及其应用。将包含Ag85B和ESAT-6融合蛋白基因的重组质粒电转化入耻垢分枝杆菌，简称为AE-MS，其保藏编号为：CCTCCM2010097。筛选获得的重组耻垢分枝杆菌株AE-MS免疫小鼠，可诱导比耻垢分枝杆菌更强的免疫应答水平。本发明还涉及所构建菌株在制备结核病预防和治疗方面的制剂或药物中的应用。表达Ag85B和ESAT-6融合基因的重组分枝杆菌集中了靶抗原和活载体的优势，免疫接种后可刺激机体更强的免疫应答，提高机体的免疫保护力，因而具有良好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种调节耻垢分枝杆菌对抗生素敏感性的方法，其特征在于：通过调节MSMEG_6171表达量实现。抑制MSMEG_6171表达增强耻垢分枝杆菌对抗生素敏感性，促进MSMEG_6171过表达减弱耻垢分枝杆菌对抗生素敏感性。为调节耻垢分枝杆菌对抗生素敏感性提供了新的方法。

摘要： 本发明提供了一种分泌烟酸的突变耻垢分枝杆菌的构建方法，包括步骤：1).构建质粒pMHS‑NrtRms；2).构建质粒pHAGE‑NrtRms；3).制备重组TM4噬菌体；4).构建nrtRms基因缺失菌株耻垢分枝杆菌mc2100。本发明的有益效果是：通过构建nrtRms基因缺失菌株耻垢分枝杆菌，使该菌株能够直接制备烟酸而不依赖于添加3‑氰基吡啶和酶催化，不仅避免了现有烟酸化学合成过程中的各种缺点，而且生产条件简单，无污染，简便易行，易放大，成本低，适合于大规模工业化生产应用，有很大的推广应用的价值。

摘要： 本发明公开了一种利用SILAC标记耻垢分枝杆菌蛋白质的专用培养基。本发明提供的用于SILAC标记的培养基，由无机盐、组氨酸盐酸盐、异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、丝氨酸、重稳定性同位素标记赖氨酸、重稳定性同位素标记精氨酸、苏氨酸、酪氨酸、蛋氨酸、腺嘌呤硫酸盐、尿嘧啶和葡萄糖组成；所述无机盐为硫酸铵、柠檬酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、柠檬酸铁铵、硫酸镁、氯化钙、硫酸锌和硫酸铜。经过实验证明，本发明开发的一种用于耻垢分枝杆菌SILAC标记的培养基，可以在10代内高效标记耻垢分枝杆菌蛋白，为定量内标的制备和高效精确地定量蛋白质组比较研究创造了条件。

摘要： 本发明涉及一种可表达结核分枝杆菌Ag85B和ESAT-6融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌株及其应用。将包含Ag85B和ESAT-6融合蛋白基因的重组质粒电转化入耻垢分枝杆菌，简称为AE-MS，其保藏编号为：CCTCC M2010097。筛选获得的重组耻垢分枝杆菌株AE-MS免疫小鼠，可诱导比耻垢分枝杆菌更强的免疫应答水平。本发明还涉及所构建菌株在制备结核病预防和治疗方面的制剂或药物中的应用。表达Ag85B和ESAT-6融合基因的重组分枝杆菌集中了靶抗原和活载体的优势，免疫接种后可刺激机体更强的免疫应答，提高机体的免疫保护力，因而具有良好的应用前景。

摘要： 本发明涉及一种重组的耻垢分枝杆菌、疫苗及其应用，所述耻垢分枝杆菌包括能够稳定表达的SARS‑CoV‑2的刺突蛋白基因和SARS‑CoV‑2的核衣壳基因中的至少一种。该耻垢分枝杆菌可高效表达SARS‑CoV‑2的S和N蛋白，并且该其用作疫苗可有效激发SARS‑CoV‑2特异性T细胞免疫应答，用于预防和控制COVID‑19。

摘要： 本发明涉及甾体类药物中间体制备技术领域。本发明提供了一种耻垢分枝杆菌菌液及其制备方法和在制备甾体类药物中间体中的应用，所述耻垢分枝杆菌菌液的制备方法包括如下步骤：(1)将耻垢分枝杆菌接种到预培养基中培育，得到预培养的耻垢分枝杆菌；(2)将预培养的耻垢分枝杆菌接种到液体培养基中培育，得到耻垢分枝杆菌菌液。本发明制备的耻垢分枝杆菌菌液能够用于甾体类药物中间体的生产，高效催化甾体类药物中间体原料的转化，有效降低生产过程中的污染。

摘要： 本发明涉及一种表达甲基化HBHA蛋白的重组耻垢分枝杆菌菌株、制备方法及应用，将PCR法扩增获得的HBHA基因克隆于表达载体pMyCA中，之后将重组载体pMyCA‑HBHA采用电穿孔法转化于耻垢分支杆菌Mc2‑155菌株；以潮霉素筛选获得Mc2‑155‑mHBHA重组耻垢分枝杆菌，其表达产物经提取、纯化，鉴定为甲基化HBHA蛋白，可刺激致敏T细胞释放IFN‑γ。本发明提供的重组耻垢分枝杆菌菌株用于制备甲基化HBHA蛋白，有效提高获得甲基化HBHA蛋白的效率，从而满足HBHA功能研究和体外诊断试验，特别是鉴别结核分枝杆菌潜伏感染与活动感染的需求。

摘要： 本发明涉及一种敲除毒力相关基因Ms esat‑6的重组耻垢分枝杆菌菌株，简称rMs‑ΔE6，其保藏编号为：CCTCC M 2021462。本发明还涉及上述重组耻垢分枝杆菌rMs‑ΔE6用于预防和/或治疗结核病的疫苗及制剂中的应用。rMs‑ΔE6菌株在巨噬细胞中存活率降低，且rMs‑ΔE6诱导的免疫应答对Mtb感染的保护作用高于Ms。因此，rMs‑ΔE6不仅可作为更安全的疫苗载体，用于预防或治疗性疫苗的载体；还具有诱导抗Mtb保护性免疫应答的特性，可用于免疫治疗剂的研制，因而具有良好的应用前景。

摘要： 本发明公开了提供快速检测耐氟喹诺酮类药物的耻垢分枝杆菌gyrA突变体的方法及试剂盒。本发明提供了一种核酸分子组合物，由6种DNA分子组成；6种DNA分子均为单链DNA分子，分别如序列表的序列2至序列表的序列7所示。本发明还保护所述核酸分子组合物在鉴定或辅助鉴定耐氟喹诺酮类药物的耻垢分枝杆菌中的应用。本发明检测耐氟喹诺酮药物耻垢分枝杆菌gyrA突变体基因点突变的方法，快速、灵敏度高、特异性强、可用于大批量样品筛选。