穿孔素

摘要： 细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在识别肿瘤细胞后,释放穿孔素(Perforin)和颗粒酶(Granzymes)损伤肿瘤细胞的细胞膜并诱导其凋亡。然而,肿瘤细胞可通过修复细胞膜的损伤等途径逃避CTL的杀伤,但其修复膜损伤的具体机制尚不明确。近日,来自基因泰克(Genentech)的研究人员发现内吞体分选转运复合体(ESCRT)参与的细胞膜修复机制介导了肿瘤细胞的免疫逃逸,抑制ESCRT能够促进CTL对肿瘤细胞的杀伤。

摘要： 目的分析HIV DNA水平与T细胞数量、活化及功能之间的相关性。方法选取2019年6月--2021年4月在汉中三二〇一医院就诊的70例HV感染者作为研究对象,采用流式细胞技术检测HIV感染者外周血中CD4^(+)、CD8^(+)T细胞的数量及T细胞的活化水平。采用体外培养及流式细胞技术分析CD8^(+)T细胞的分泌和杀伤功能。结果HIV DNA水平与CD4^(+)T细胞计数呈负相关(r=0.358,P<0.05),与CD8^(+)及CD4^(+)T细胞活化均呈正相关(r分别为0.471、0.469,P均<0.05),与CD107a及穿孔素均呈负相关(r分别为-0.267、-0.353,P均<0.05)。结论HIV DNA水平与T细胞的数量、活化及功能密切相关,为进一步阐明HIV潜伏的机制与研究千干预措施提供思路。

摘要： 沙门氏菌是常见的危害公共安全的食源性致病菌。内溶酶和穿孔素作为新型生物抑菌剂,是噬菌体编码的具有细菌裂解作用的功能蛋白。本文利用十聚寡核苷酸引物和PCR技术对噬菌体SM-p2的DNA进行随机扩增并确定穿孔素基因Hol 2和内溶酶基因Lys 2;使用生物学信息软件分析预测Lys 2和Hol 2的特性;利用大肠杆菌原核表达系统对Lys 2和Hol 2进行克隆表达。结果表明:噬菌体SM-p2是一种具有“穿孔素-内溶酶”裂解体系的双链DNA烈性噬菌体。经生物信息学分析发现,Hol 2是一种仅有一个跨膜结构的Ⅲ型穿孔素,Lys 2是一种没有跨膜结构肽聚糖水解酶。利用大肠杆菌表达系统成功表达了Lys 2和Hol 2,然而,穿孔素能直接裂解细菌细胞内膜,对感受态表达细胞产生毒害作用,导致Hol 2表达量较少。最终获得质量浓度为5.419 mg/mL的内溶酶Lys 2和2.191 mg/mL的穿孔素Hol 2。本研究成功表达了沙门氏菌噬菌体SM-p2的内溶酶和穿孔素,为SM-p2的抑菌研究奠定了分子基础。

摘要： 目的:从分子水平探究颗粒酶B(GRB)-穿孔素(PFP)对选择性诱导胰腺炎时巨噬细胞凋亡的影响。方法:采用肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激人单核巨噬细胞系(TPH-1)模拟急性胰腺炎时巨噬细胞炎症反应,通过CCK8法筛选TNF-α、PFP、GRB的最适浓度;流式细胞仪分别检测对照组、TNF-α组、PFP+GRB组、TNF-α+PFP+GRB组的细胞凋亡情况。将细胞样本分为3组:正常细胞组(NC组)、TNF-α处理组(Treat1组)和TNF-α+PFP+GRB处理组(Treat2组)。提取3组细胞RNA进行转录组学分析,分别通过主成分分析、差异基因分析、富集分析检测各组基因表达情况;选取“细胞因子-细胞因子受体相互作用通路”中的7个差异表达基因(RAB37、GPA33、USH1C、SYTL1、MSRB3、GPER1和CD1B)应用荧光定量PCR验证转录组学分析的准确性。结果:Treat2组与Treat1及NC组相比,细胞凋亡比例显著升高(P<0.05);NC组与Treat1组、Treat2组的差异比较大,显著差异基因较多,而Treat1组与Treat2组的显著差异基因较少,但Treat2组比Treat1组相对于NC组的变化更大;富集分析显示差异基因主要富集于“细胞因子-细胞因子受体相互作用通路”;荧光定量PCR结果显示,所选取的7个差异基因与NC组相比明显下调(P<0.05),和转录组学结果趋势一致。结论:GRB-PFP可选择性诱导胰腺炎时巨噬细胞的凋亡,并作用于“细胞因子-细胞因子受体相互作用通路”,从而下调细胞因子表达,减轻炎症反应。

摘要： 目的 探索PD-1/PD-L1抑制Vδ2T细胞杀伤结直肠癌细胞作用的相关机制.方法 将HR8348和SW480细胞分别分为3组,按照Vδ2T细胞和HR8348/SW480细胞效靶比为10:1、20:1和40:1的比例进行共培养,通过乳酸脱氢酶(LDH)杀伤实验,检测Vδ2T细胞对结直肠癌细胞的杀伤功能.流式细胞术检测Vδ2T细胞表面CD107a的表达情况及结直肠癌细胞表面配体分子ULBP-1-4、MICA、MICB、MSH2、CTLA-4、TIM-3和PD-L1的表达情况.通过抗体中和实验,封闭SW480细胞表面PD-L1表达,检测封闭PD-L1作用后Vδ2T细胞对SW480细胞的杀伤能力.Confocal实验检测封闭SW480细胞表面PD-L1作用后,Vδ2T细胞内裂解性颗粒极化情况.Western blot检测封闭SW480细胞表面PD-L1作用后,Vδ2T细胞内PLC-γ1和Erk1/2信号通路活化情况.结果 Vδ2T细胞对结直肠癌细胞HR8348和SW480的杀伤效率存在一定的差异,Vδ2T细胞对SW480细胞的杀伤作用结果显示,10:1,20:1和40:1效靶比的杀伤效率分别为(5.3±4.9)％,(8.7±3.8)％和(15.3±8.2)％,而对HR8348细胞的杀伤作用结果显示,10:1,20:1和40:1效靶比的杀伤效率分别为(21.1±2.7)％,(39.7±6.6)％和(59.1±19.4)％.流式细胞结果显示,HR8348和SW480细胞表面ULBP-1-4、MICA、MICB、MSH2、CTLA-4和TIM-3的表达并不存在显著差异(P>0.05);而二者的PD-L1表达水平存在显著差异(P<0.01),SW480细胞具有更高的PD-L1表达水平.封闭SW480细胞表面PD-L1后,Vδ2T细胞对SW480细胞的杀伤能力显著增强(P<0.01).同时,封闭SW480细胞表面PD-L1后,Vδ2T细胞裂解性颗粒的极化能力和与裂解性颗粒极化相关的PLC-γ1和Erk1/2磷酸化水平均显著增强(P<0.01).结论 PD-1/PD-L1对Vδ2T细胞杀伤结直肠癌细胞具有抑制作用,并首次报道了PD-1/PD-L1对Vδ2T细胞杀伤结直肠癌细胞的抑制作用是通过抑制裂解性颗粒极化而发挥的.

摘要： 目的 探讨初诊重型再生障碍性贫血(SAA)患者外周血CD8+T细胞信号转导淋巴细胞激活分子家族6(SLAMF6)表达与穿孔素、颗粒酶B的相关性及其临床意义.方法 收集2016年1月至2019年6月河南省人民医院收治的32例初诊SAA患者的血常规及骨髓象等指标并采集外周血标本进行回顾性分析,采用流式细胞术检测患者初诊时及治疗结束后半年[移植11例,免疫抑制治疗(IST)21例]的标本中CD8+T细胞SLAMF6表达量、穿孔素及颗粒酶B分泌量.采用Pearson法分析临床指标与标本检测结果相关性,并以10名健康人的外周血标本(正常对照组)及13例初诊骨髓增生异常综合征/阵发性睡眠性血红蛋白尿症(MDS/PNH)患者(MDS/PNH组)为对照进行SLAMF6表达量、穿孔素及颗粒酶B分泌量的比较.结果 (1)初诊时:SAA组SLAMF6表达量为(56.40±6.37)％,明显低于正常组的(84.34±5.81)％和MDS/PNH组的(82.24±4.98)％(P均＜0.001);SAA组穿孔素的表达量为(32.73±8.46)％,高于正常组的(23.75±5.10)％和MDS/PNH组的(26.12±5.53)％(P均＜0.05);SAA组颗粒酶B的表达量为(36.23±7.94)％,高于正常对照组的(21.67±5.05)％和MDS/PNH组的(21.79±5.10)％(P均＜0.001).SAA患者SLAMF6表达量与血红蛋白(r=0.804)、网织红细胞绝对值(r=0.656)、骨髓粒系百分比(r=0.643)、骨髓红系百分比(r=0.622)均呈正相关(P均＜0.05),与CD8+T细胞穿孔素(r=-0.792)、颗粒酶B(r=-0.908)均呈负相关(P均＜0.001).(2)治疗后:30例SAA存活患者外周血CD8+T细胞SLAMF6表达量高于治疗前[(79.19±12.69)％比(56.40±6.37)％,P＜0.001],穿孔素、颗粒酶B表达量均低于治疗前(P均＜0.05).11例移植患者CD8+T细胞SLAMF6表达量高于移植前[(86.54±3.75)％比(56.40±7.35)％,P＜0.001],穿孔素、颗粒酶B表达量低于移植前(P均＜0.05).12例IST有效患者CD8+T细胞SLAMF6表达量高于初诊时,其穿孔素、颗粒酶B表达量均低于治疗前(P均＜0.05);7例IST无效患者CD8+T细胞SLAMF6表达量、穿孔素、颗粒酶B表达量与治疗前比较,差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 SLAMF6在初诊SAA患者中低表达,与CD8+T细胞效应因子呈负相关,或作为负性调控因子参与SAA患者CD8+T细胞免疫调控,SLAMF6在造血恢复后明显上调,而治疗无效患者无明显变化,或可作为诊断SAA或评价SAA临床疗效的指标.

摘要： 目的:研究PD-1阻断增强体外扩增的NK细胞对人非小细胞肺癌(NSCLC)杀伤作用的研究.方法:采用来自健康人群的外周静脉血的单个核细胞以及NSCLC细胞(HCC827细胞)进行体外扩增,随后PD-1进行阻断增强,使用培养10 d的PD-l(0.25、0.5、1 μmol/L)阻断增强NK细胞以及未进行PD-1阻断增强NK细胞,分别培养24h、48h、96h,分析PD-1阻断增强NK细胞的细胞毒性、PD-1阻断增强NK细胞颗粒酶B、穿孔素、CD107a表达水平以及不同浓度PD-1阻断增强NK细胞对HCC827细胞的抑制率之间的差异.结果:通过对离心管1～3中的PD-L1、PD-L2表达水平以及对NK细胞的PD-1阻断增强作用进行比较,其PD-L1及PD-L2表达水平显著下降;不同浓度PD-1阻断增强NK细胞颗粒酶B、穿孔素、CD107a表达水平之间的差异存在统计学意义(P＜0.05),在0.5 μmol/L PD-1阻断增强NK细胞的细胞颗粒酶B、穿孔素、CD107a表达水平达到高峰.0.5 μmol/L PD-1阻断增强NK细胞对HCC827细胞的抑制率显著高于其他两组.结论:0.5 μmol/L PD-1阻断增强NK细胞的阻断作用其中人NSCLC的细胞阻断作用显著,其对肿瘤细胞的杀灭作用的机制与活化型受体的升高有关.

摘要： 噬菌体的内溶酶(endolysin)和穿孔素(holin)是新型的抑菌剂,具有很大的潜力和发展空间.该文以大肠杆菌O157:H7噬菌体EC-p9和沙门氏菌噬菌体SM-p2的内溶酶和穿孔素(Lys 9、Lys 2、Hol 9、Hol 2)为对象,通过平板菌落计数法研究了Lys 9、Lys 2、Hol 9、Hol 2的裂解活性;评估Lys 9、Lys 2、Hol 9、Hol 2对温度和pH的稳定性;研究了细菌是否会对这4种重组蛋白产生抗性;还研究了内溶酶、穿孔素及其混合物对细菌的联合抑菌作用.结果表明,Lys 9、Lys 2、Hol 9和Hol 2的最高裂解活性分别为61.348％、81.120％、74.251％和83.356％,具有很强的杀菌能力;Lys 9、Lys 2、Hol 9和Hol 2对温度和pH有较高的稳定性;12代内细菌不会对Lys 9、Lys 2、Hol 9和Hol 2产生抗性.此外,内溶酶和穿孔素在抑制病原菌上表现出协同作用.该实验结果为噬菌体内溶酶和穿孔素联合抑菌作用提供了理论依据.

摘要： 噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(hemophagocytic lymphohistiocytosis,HLH)是一组淋巴细胞和巨噬细胞免疫失调、过度活化所致的高炎症反应综合征[1]。根据发病机制的不同,HLH可分为原发性和继发性两大类。原发性HLH以穿孔素依赖的细胞毒功能缺陷为主要发生机制,包括家族性HLH及遗传性免疫缺陷相关HLH。继发性HLH主要继发于感染、风湿免疫性疾病及恶性肿瘤性疾病,其中感染所致HLH发病率最高,而EB病毒感染则是亚洲国家感染相关性HLH的首要病因[1]。HLH病情凶险,进展迅速,若未及时治疗,家族性HLH患者多于发病2个月内死亡[2]。1994年国际组织细胞协会提出以依托泊苷为基础的HLH-94方案,HLH患者5年生存率可提升至54%[3]。近年来,随着对HLH病理机制认识的深入,进一步改善HLH治疗方案、提高生存率,成为研究重点。

摘要： 通过生物信息学分析噬菌体GH15穿孔素(holin)蛋白序列,构建携带H01-GH15基因的重组质粒pET-HoI-GH15,并在大肠杆菌背景下证实Hol-GH15是穿孔素基因,并将表达产物定位于细胞膜;能量毒素二硝基苯酚可以提前触发Hol-GH15基因表达产物形成跨膜通道抑制细菌生长;纯化的Hol-GH15蛋白能够裂解金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、绿脓杆菌,能够抑制大肠杆菌的生长;Hol-GH15能增强裂解酶LysGH]5的裂解活性,表明噬菌体GH15存在“穿孔素一裂解酶”二元裂解系统,二者能够协同增强抗菌效果,并且Hol-GH15蛋白的裂解谱比LysGH15更为广泛,能够裂解革兰氏阴性菌和阳性菌,为应用噬菌体裂解系统防治金黄色葡萄球菌的感染奠定理论基础.

摘要： 目的：探讨外周血淋巴细胞穿孔素／颗粒酶的表达在乙型重型肝炎肝细胞损伤中的作用，及其与HBV DNA载量的关系。方法：研究对象为38例重型肝炎患者，其中男32例，女6例，年龄32—53岁。同时设立成年健康对照组20例。采用流式细胞仪测定外周血淋巴细胞穿孔素／颗粒酶的表达，采用荧光定量PCR测定血清HBV DNA。结果：重型肝炎组外周血淋巴细胞穿孔素／颗粒酶的表达水平较健康对照组显著升高(P<0．01)，且与血清HBV DNA载量呈明显负相关(P<0．01)。结论：外周血淋巴细胞穿孔素／颗粒酶的过度表达是造成重型肝炎肝细胞损伤的重要因素，这种表达作用与乙肝患者的HBV DNA清除有关。

摘要： 人穿孔素(perforin,PFN)是一种具有很强的溶细胞活性的蛋白质.为了观察人穿孔素羧基端肽段在肺癌细胞SPC-A1中的放射诱导表达及其对细胞的杀伤活性,构建了含放射诱导启动子的真核表达载体pcDNA3.1(+)/Egr-1/hPFN-C,转染SPC-A1细胞,并经X射线照射诱导.用RT-PCR、免疫细胞化学方法检测该基因片段在SPC-A1中的表达,MTT法检测该基因片段的表达产物对SPC-A1细胞的杀伤活性。RT-PCR结果显示,X射线照射后在转染细胞中有hPFN-C的mRNA表达,免疫细胞化学法证实目的蛋白出现在细胞质中,而未照射的细胞则没有hPFN-C基因表达。MTT法检测显示,与对照组相比,有hPFN-C表达的SPC-A1细胞存活率降低了34.3％。本项研究结果表明,hPFN-C基因片段可在SPC-A1细胞中可控性表达,且该表达产物对细胞具有明显的杀伤活性。

摘要： 目的：构建人穿孔素N端(hPFN-N)的真核放射诱导表达载体,并在放射诱导条件的刺激下研究hPFN-N的表达产物(rhPFN-N)在肺癌细胞SPC-A1中的分布及其对该细胞的细胞毒性作用。 方法：以克隆有hPFN全长cDNA序列的载体pcDNA3.1(+)/hPFN为模板,用PCR扩增hPFN-N,将该基因片断克隆到含放射诱导启动子的真核表达载体pcDNA3.1(+)/Egr-1中,以重组体稳定转染SPC-A1细胞,经过X射线的放射诱导后,应用RT-PCR、细胞免疫化学法检测hPFN-N蛋白的表达,用MTT法测定该蛋白对靶细胞的杀伤活性。 结果：成功构建了真核放射诱导表达载体pcDNA3.1(+)/Egr-hPFN-N.以重组体转染SPC-A1细胞后,用RT-PCR检测到hPFN-N mRNA的表达。细胞免疫化学法检测结果呈阳性反应,MTT法检测结果为rhPFN-N对靶细胞的杀伤活力为29.2％。 结论：构建了pcDNA3.1(+)/Egr-hPFN-N真核放射诱导表达载体,在经过X射线的放射诱导后,hPFN-N能够在SPC-A1细胞的细胞膜上大量表达,表达产物rhPFN-N对靶细胞有明显杀伤活力。

摘要： 本文通过动态检测肾移植术后AR过程中外周血穿孔素(P)和颗粒酶B(GB)mRNA的表达,了解二者的临床意义.

摘要： 急性排斥反应主要是T细胞介导的免疫应答,CD8+活性CTL细胞分泌的穿孔素和颗粒酶杀伤靶细胞以及颗粒酶和Fas-Fasl途径诱导靶细胞凋亡是造成移植器官免疫病理损害的主要原因.CTL细胞毒性效应分子穿孔素和颗粒酶B在发生急性排斥反应的早期即可在外周血和移植胰腺局部表达,其可以作为早期诊断急性排斥反应的敏感、无创及特异性指标.本研究探讨穿孔素和颗粒酶B在外周血的Mrna表达对胰腺移植急性排斥反应诊断价值.

摘要： 目的:研究寻常型银屑病患者的穿孔素、颗粒酶B的表达水平.方法:用逆转录聚合酶链法(RT-PCR)检测皮肤和外周血淋巴细胞中的穿孔素、颗粒酶B的表达水平.结果:1.银屑病患者的皮损区,无论进行期还是稳定期均表达穿孔素和颗粒酶B,而非皮损区和健康者皮肤不表达穿孔素和颗粒酶B;进行期患者皮损区的穿孔素和颗粒酶B表达水平明显高于稳定期患者(P＜0.05).2.无论健康者还是银屑病患者,其外周淋巴细胞均表达穿孔素和颗粒酶B;稳定期患者的穿孔素和颗粒酶B的表达显著高于健康者(P＜0.05);进行期患者穿孔素和颗粒酶B的表达也显著高于稳定期(P＜0.05).结论:1.穿孔素/颗粒酶途径可能是细胞毒性T淋巴细胞参与银屑病发病机制的重要方式之一.2.穿孔素、颗粒酶B在银屑病的皮损和外周血淋巴细胞中表达增高,可能促进病情由稳定期向进行期发展.

摘要： 本研究通过建立稳定的大鼠心脏移植动物模型,应用FQ-PCR的方法,动态监测外周血淋巴细胞的穿孔素和颗粒酶BmRNA的表达,判断其与病理改变的相关性,希望能找到一种移植物无创的、可靠的急性排斥反应诊断方法.比p＞0.053讨论

摘要： 目的：探讨IL-21对人外周血γδT细胞抗肿瘤活性的影响.rn 方法：分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),分别在有或无IL-21参与的条件下,加入到含异戊烯焦磷酸(IPP)、IL-2或IL-15的RPMI1640完全培养基中诱导培养γδT细胞.在培养的第10 d用台盼蓝染色计数细胞;采用流式细胞术检测各组γδT细胞的纯度及γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达;用CCK-8试剂盒检测γδT细胞对K562细胞的体外杀伤效应.rn 结果：不同细胞因子组诱导10 d后γδT细胞纯度均达到70％以上,IL-2+IL-21、IL-15+IL-21和IL-2+IL-15+IL-21组与IL-2、IL-15组相比,细胞纯度和扩增倍数没有显著性变化;IL-2+IL-21、IL-15+IL-21和IL-2+IL-15+IL-21组γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达及对K562细胞的杀伤活性均显著高于IL-2、IL-15单独组.rn 结论：IL-21可通过上调γδT细胞穿孔素和颗粒酶B的表达增强其抗肿瘤活性.

摘要： 目的：观察补肾方治疗肝肾阴虚兼湿热未尽型慢性乙型肝炎的免疫调控作用机制。方法：在曙光医院肝病门诊，收集HBV DNA阳性、ALT异常的肝肾阴虚型慢性乙型肝炎患者35例，随机分为治疗组和对照组，治疗组给予补肾方治疗，对照组给予α-2b干扰素治疗，疗程均为6个月，分别于用药前、后用流式细胞法检测外周血T细胞的免疫效应分子穿孔素(PF)、颗粒酶B(GrB)、颗粒溶素(GNLY)、TNF-α，IFN-γ的表达情况。结果：治疗组CD4+T细胞表达GNLY、IFN-γ及CD8+T细胞表达的GrB、IFN-γ、TNF-α均明显降低。结论：补肾方通过减少T细胞免疫效应分子的表达，防止肝脏进一步受损，发挥治疗肝肾阴虚兼湿热未尽型慢性乙型肝炎的作用。

摘要： 本发明涉及一种金黄色葡萄球菌噬菌体穿孔素及其制备方法和应用，具体公开了一种分离的金黄色葡萄球菌穿孔素蛋白，其特征在于其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。还公开了述的金黄色葡萄球菌穿孔素蛋白在制备治疗支原体感染疾病的药物中的用途。本发明首次发现噬菌体的穿孔素对支原体具有较强抑制作用，为治疗和抑制支原体疾病打下基础。

摘要： 本发明提供了一种抗大肠杆菌噬菌体表达的内溶酶和穿孔素组合物及其制备方法和应用，属于生物工程技术领域。所述内溶酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述穿孔素的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明的噬菌体表达的内溶酶Lys 9和穿孔素Hol 9，具有广谱的杀菌活性，对多种革兰氏阳性和革兰氏阴性菌都具有较好的抑菌效果，对大肠杆菌具有明显的杀伤作用，且内溶酶Lys 9具有一个N端酶活结构域，能裂解β‑1,4‑糖苷键，穿孔素Hol 9具有一个保守的结构域，能破坏细胞，并传递信息来控制细胞的裂解时间，可用于制备预防、抑制或治疗细胞感染的药物中，在医疗和食品安全领域具有推广应用价值。

摘要： 本发明公开了一种新型重组穿孔素蛋白及其制备方法和应用。所述重组穿孔素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明采用现代基因工程技术，设计并合成出穿孔素蛋白序列，并将其连接到表达载体上再转化宿主菌，载体带有GST标签，能采用亲和层析的方法对蛋白进行洗脱纯化，制备出大量经纯化的重组穿孔素蛋白。该蛋白能够在革兰氏阴性细菌和真核细胞上形成穿孔环，产生溶膜效应，在生物实验领域和医药制备领域具有很好的应用前景。而且本发明方法收获得到的重组蛋白稳定性好、纯度高、活性高，工艺简单、耗时短、成本低、设备要求不高、便于大规模生产。

摘要： 本发明公开了特异性结合穿孔素的核酸适配体及其应用，穿孔素适配体的核苷酸序列如SEQ ID NO.3～SEQ ID NO.8所示，该适配体能够与穿孔素蛋白发生特异结合，因此可以用于穿孔素蛋白纯化和浓缩，也可以与治疗药物结合后作为靶向穿孔素蛋白的药物，还可以作为穿孔素蛋白定量或定性检测试剂，应用前景广泛。

摘要： 本发明公开了一种粪肠球菌噬菌体PEf771的裂解酶pEf51和穿孔素蛋白pEf191、其基因克隆纯化方法及其应用，所述粪肠球菌噬菌体裂解酶pEf51和穿孔素蛋白pEf191克隆自粪肠球菌噬菌体PEf771，裂解酶pEf51氨基酸总数202个，分子大小21.9kDa，蛋白分子式为C972H1492N260O313S1，等电点4.42；包含12个正电荷残基，25个负电荷残基；不稳定指数为26.84，脂肪系数85.99，总的平均亲水性为(GRAVY)‑0.347，为可溶性蛋白；所述穿孔素pEf191基酸总数107个，相对分子质量12.1kDa，蛋白分子式为C550H858N142O155S6，等电点为8.96；不稳定指数35.1所以该蛋白稳定；脂肪系数为82.90，平均亲水性(GRAVY)‑0.115，为可溶性蛋白；并展开抑菌活性、裂解谱及粪肠球菌生物膜去除研究；通过SD大鼠腹腔感染模型，为进一步研究抗菌的应用范围奠定基础。

摘要： 本发明提供了一种抗沙门氏菌噬菌体表达的内溶酶和穿孔素组合物及其制备方法和应用，属于生物工程技术领域。所述内溶酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述穿孔素的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明的噬菌体表达的内溶酶Lys 2和穿孔素Hol 2，具有广谱的杀菌活性，对多种革兰氏阳性和革兰氏阴性菌都具有较好的抑菌效果，对沙门氏菌具有明显的杀伤作用，且内溶酶Lys 2具有一个N端酶活结构域，能裂解β‑1,4‑糖苷键，穿孔素Hol 2具有一个保守的结构域，能破坏细胞，并传递信息来控制细胞的裂解时间，可用于制备预防、抑制或治疗细胞感染的药物中，在医疗和食品安全领域具有推广应用价值。

摘要： 本发明提供了一种抗大肠杆菌噬菌体表达的内溶酶和穿孔素组合物及其制备方法和应用，属于生物工程技术领域。所述内溶酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述穿孔素的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明的噬菌体表达的内溶酶Lys 9和穿孔素Hol 9，具有广谱的杀菌活性，对多种革兰氏阳性和革兰氏阴性菌都具有较好的抑菌效果，对大肠杆菌具有明显的杀伤作用，且内溶酶Lys 9具有一个N端酶活结构域，能裂解β‑1,4‑糖苷键，穿孔素Hol 9具有一个保守的结构域，能破坏细胞，并传递信息来控制细胞的裂解时间，可用于制备预防、抑制或治疗细胞感染的药物中，在医疗和食品安全领域具有推广应用价值。

摘要： 本发明涉及一种金黄色葡萄球菌噬菌体穿孔素及其制备方法和应用，具体公开了一种分离的金黄色葡萄球菌穿孔素蛋白，其特征在于其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。还公开了述的金黄色葡萄球菌穿孔素蛋白在制备治疗支原体感染疾病的药物中的用途。本发明首次发现噬菌体的穿孔素对支原体具有较强抑制作用，为治疗和抑制支原体疾病打下基础。

摘要： 本发明公开了噬菌体Vp670穿孔素基因holA的应用。本发明的holA基因序列如SEQ ID No.1所示，其编码氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；cwlQ基因序列如SEQ ID No.3所示，其编码氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。本发明首次在噬菌体Vp670中鉴定出holA为穿孔素基因，cwlQ为内溶素基因。本发明中HolA单独在细菌中表达，足以杀死细菌细胞，且宿主菌不易产生耐受性，可应用于克隆载体或自杀质粒，可大大提高阳性重组子的筛选效率，减少实验室工作量。HolA和CwlQ蛋白在菌体内共同表达，表达产物可完全裂解细菌，迫使菌体内容物大量流失，为温和裂解细菌等微生物，提取细胞内容物提供了一种有效的技术手段。

摘要： 本发明涉及药物领域，具体涉及具有促进促进穿孔素的活性，治疗恶性肿瘤的多肽。其序列为全新的序列，它们可以在体外同时抑制肝癌细胞和肝癌干细胞增殖活力，并可以促进肝癌干细胞的凋亡。体内试验中提高肝癌荷瘤裸鼠生存率，具有潜在的新药开发价值。