NKG2D

摘要： 目的探究早期稽留流产患者(missed early miscarriage,MEM)蜕膜组织中,自然杀伤(NK)细胞表面受体NKG2A、NKG2D及其配体MICA的表达及意义。方法选取2019年6月—2021年6月广州市妇女儿童医疗中心50例在妊娠12周内诊断为稽留流产孕妇为MEM组,另外选取50例同孕周人工流产孕妇作为对照组。流产时留取蜕膜组织,检测两组蜕膜组织中NKG2A、NKG2D mRNA及蛋白的表达;另外采用免疫组化法检测蜕膜及绒毛组织中MICA表达部位。结果MEM组蜕膜组织中NKG2A mRNA及其蛋白表达水平均低于对照组,而NKG2D、MICA mRNA及其蛋白表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。NKG2A与NKG2D和MICA在mRNA及蛋白表达水平上存在负相关。MICA广泛存在于滋养细胞和蜕膜基质中。结论MEM患者蜕膜组织中,NK细胞表面受体NKG2A表达下降而NKG2D及其配体MICA表达上升,这可能导致MEM母胎界面免疫失衡;表达上调的NKG2D可能通过特异性信号蛋白MICA进行信号传递,介导免疫性MEM的发生。

摘要： CAR-T细胞疗法是一种新兴的肿瘤免疫疗法,目前已经在白血病、骨髓瘤等血液系统肿瘤的治疗中取得显著疗效。由于CAR-T细胞是在体外诱导产生的细胞群体,具有很高的异质性。这种异质性的存在,是影响CAR-T细胞治疗效果的重要因素。本研究通过单细胞转录组测序技术,对基于NKG2D分子识别和第3代CAR-T细胞技术构建的NKG2D/CAR-T细胞进行了转录组学特征的分析。结果表明,通过对比特征基因进行降维聚类,将NKG2D/CAR-T细胞分为12个细胞簇,其特征基因显示NKG2D/CAR-T细胞以幼稚样和中央记忆样细胞亚群为主。不同细胞簇表达基因存在差异,对差异基因进行富集分析发现,这些差异基因富集在病毒侵入细胞、插入宿主细胞DNA并复制、T细胞代谢、增殖、活化及分化等信号通路。

摘要： 目的研究NKG2D基因多态性与喀什地区宫颈癌易感性的关联。方法选取2020年6月至2021年3月在我院妇科经病理检查明确诊断且均未行任何治疗的各期宫颈癌患者100例作为病例组,选取同期来自本院体检中心及住院患者中排除全身恶性肿瘤的高危型HPV感染的健康妇女100例作为对照组。采集患者组织病理和宫颈分泌物标本。采用Nanodrop测其浓度后进行单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)分型,用聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测研究对象中NKG2D基因的引物,并测序不同基因型。分析NKG2D基因中的SNP位点rs2617160A>T和rs2255336T>C位点等位基因和基因频率在病例组和对照组患者的分布频率差异,比较NKG2D基因中的SNP位点rs2255336T>C及rs2617160A>T构建的单倍型在病例组和对照组中的分布差异。结果rs2617160A>T和rs2255336T>C位点的基因型在对照组和病例组中分布特征符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。多态性位点rs2255336T>C等位基因及基因型在病例组和对照组中分布频率差异不具有统计学意义(χ^(2)=0.287,P=0.592和χ^(2)=0.532,P=0.767)。多态性位点rs2617160A>T等位基因在病例组和对照组中分布频率差异具有统计学意义(χ^(2)=4.511,P=0.034),病例组中等位基因A分布频率较高。多态性位点rs2617160A>T在病例组中AA基因型的分布频率较高(χ^(2)=6.375,P=0.041,OR=0.57,95%CI 0.38~0.90)。病例组和对照组rs2255336T>C和rs2617160A>T之间存在强连锁,D′值分别为0.994和0.991。单倍型rs2255336C-rs2617160A在病例组和对照组中分布频率差异具有统计学意义(P0.05),且经Bonferroni校正后差异仍不具有统计学意义(P>0.05)。宫颈癌患者的淋巴结转移情况、病理分化程度及临床分期情况在AC、TC、AT单倍型组间比较差异具有统计学意义(PT等位基因A及基因型AA可能是宫颈癌发生的风险因素,单倍型CA可能与喀什地区宫颈癌易感性发生有关。

摘要： Objective: To analyze the effect of chemotherapy on peripheral blood NK cell receptor NKG2D and related immune cytokines (IL-12, IL-15, IL-18) in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC). Methods: A total of 48 patients with NSCLC who visited the Oncology Department of the Affiliated Hospital of Chengde Medical College from September 2018 to September 2019 were selected as the study subjects. Changes in the expression levels of NKG2D, IL-12, IL-15 and IL-18 in peripheral blood of patients at different time points (before chemotherapy, after the first chemotherapy and after the second chemotherapy) were analyzed to investigate the correlation between NKG2D and IL-12, IL-15 and IL-18 in peripheral blood at each time point. Results: The expression levels of NKG2D, IL-15, and IL-18 in the peripheral blood of the patient before chemotherapy, after the first chemotherapy, and after the second chemotherapy gradually decreased. After the first chemotherapy and the second chemotherapy, the peripheral blood IL-12 was significantly lower than before chemotherapy, and IL-12 in peripheral blood after the second chemotherapy was slightly increased compared with that after the first chemotherapy. The comparison of each factor at different time points was statistically significant (all P0.05). Pearson correlation analysis showed that after the first chemotherapy, NKG2D in peripheral blood was positively correlated with IL-18 (r = 0.342, P = 0.031);after the second chemotherapy, NKG2D in peripheral blood was positively correlated with IL-18 (r = 0.411, P = 0.023), negatively correlated with IL-15 (r = -0.451, P = 0.001). Conclusion: There was no significant change in the number of NK cells in the peripheral blood of NSCLC patients after chemotherapy, while NKG2D and related immune cytokines decreased, which may be one of the mechanisms for the suppression of immune function in patients, and this provides a potential target for immunotherapy in patients.

摘要： 目的 观察黄芪甲苷对脑缺血小鼠外周免疫抑制作用的影响,探讨其保护脑缺血损伤的作用机制.方法 实验小鼠随机分为假手术组、模型组和给药组,采用大脑中动脉栓塞法制备脑缺血模型,给药组腹腔注射黄芪甲苷溶液.TTC法检测脑梗死体积,神经功能缺损评分评价小鼠神经功能,观察小鼠脾脏质量变化,流式细胞术检测脾脏和外周血中自然杀伤(NK)细胞比例及NKG2D的表达.结果 与假手术组比较,模型组小鼠脑梗死体积增加(P＜0.001),神经功能缺损评分明显升高(P＜0.001),脾脏质量明显减轻(P＜0.001),脾脏和外周血中NK细胞比例明显减少(P＜0.05,P＜0.001),NKG2D表达明显降低(P＜0.001);与模型组比较,给药组小鼠脑梗死体积明显减少(P＜0.001),神经功能缺损评分明显降低(P＜0.001),脾脏质量明显增加(P＜0.05),脾脏和外周血中NK细胞比例明显增加(P＜0.05),NKG2D表达明显升高(P＜0.001).结论 黄芪甲苷对脑缺血损伤小鼠有明显的保护作用,其机制可能与改善外周免疫抑制作用有关.

摘要： 目的:观察miR-16是否通过调节NKG2D表达而影响自然杀伤(natural killer,NK)细胞的生物学功能及其抗肿瘤活性.方法:miR-16/15a-/-小鼠和对照小鼠经皮下注射MC38细胞制备结肠癌移植瘤模型,观察两组小鼠皮下实体瘤生长情况;比较普通小鼠生理或荷瘤状态下NK1.1+NKG2D+细胞和NK1.1+NKG2D-细胞内miR-16的表达;分析生理及荷瘤状态下miR-16/15a-/-小鼠NK细胞NKG2D表达、γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)分泌及细胞毒性作用.结果:与同品系小鼠比较,miR-16/15a-/-小鼠中MC38结肠癌移植瘤的生长受到显著抑制,生理状态小鼠NK1.1+NKG2D+细胞miR-16的表达明显低于NK1.1+NKG2D-细胞,而在荷瘤小鼠来源的两组细胞中无明显差异;与野生型小鼠相比,生理及荷瘤状态下的miR-16/15a-/-小鼠NK1.1+NKG2D+细胞的比例及NK细胞活性无明显变化.结论:miR-16/15a敲除抑制MC38结肠癌移植瘤生长,而miR-16/15a敲除小鼠体内NK细胞的比例及功能及荷瘤状态下NK细胞活性并无明显变化,提示miR-16/15a缺失并非通过NK细胞抑制MC38结肠癌移植瘤生长.

摘要： 目的 基于miR-18a/NKG2D探究结肠癌来源外泌体(CDEs)对自然杀伤(NK)细胞杀伤作用的影响.方法 取人结肠癌SW480细胞培养后收集CDEs并进行鉴定;从健康志愿者外周血中分离NK细胞并采用IL-2刺激其增殖,流式细胞仪进行鉴定;将CDEs与NK细胞共培养后采用CCK-8法检测NK细胞活力;流式细胞术分析CD107a表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素γ(IFN-γ)的表达,评估NK细胞对SW480细胞的杀伤功能;流式细胞术测定NK细胞表面NKG2D受体表达水平;实时荧光定量PCR(qPCR)检测NK细胞中miR-18a的表达.结果 电子透射显微镜下CDEs呈圆盘状、双层膜囊泡状结构,Western blotting可检测到外泌体阳性标志蛋白CD63、CD81的表达;IL-2刺激后CD3-、CD56+的NK细胞比例显著增加(P<0.05);CDEs并未明显影响NK细胞生长活力(P=0.999),与阴性对照组相比,经CDEs干预的NK细胞CD107a表达、TNF-α、IFN-γ、NKG2D受体表达水平明显降低(P<0.05),miR-18a表达明显增加(P<0.05),且呈一定的浓度依赖性.结论 CDEs可能通过上调miR-18a的表达、下调NKG2D表达,抑制NK细胞的杀伤作用来介导结肠癌细胞的免疫逃逸.

摘要： 目的 探讨IL-2联合IL-27对自然杀伤(NK)细胞杀伤结直肠癌细胞的作用及机制.方法 运用流式细胞术检测外周血中CD3-、CD16+、CD56+NK细胞、NK细胞分化的比率及NK细胞表面NKG2D受体的表达;CCK-8法检测IL-2联合IL-27对结直肠癌细胞的效靶比;Western印迹检测细胞中TNF-α、TNF-β的蛋白表达.结果 与IL-2或IL-27相比,IL-2联合IL-27处理的外周血中CD3-、CD16+、CD56+NK细胞、CD3-CD56+NK细胞的分化率均显著升高,NK细胞表面NKG2D受体的表达明显升高,NK细胞分泌TNF-α和TNF-β的能力明显增强,杀伤结直肠癌细胞的能力明显增强.结论 IL-2联合IL-27可增强NK细胞杀伤结直肠癌细胞的能力,其机制与上调NKG2D,促进肿瘤坏死因子分泌相关.

摘要： 目的 探讨流感病毒感染患者外周血中NKG2D及细胞因子水平的变化,为疾病诊治提供新思路和理论依据.方法 选取2019年3—4月该院收治的44例流感病毒感染患者作为疾病组,选取同期55名体检健康者作为对照组,对两组外周血白细胞进行五分类计数,使用流式细胞术检测CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD16+CD56+、NKG2D及细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12P70、IL-17、IFN-γ、IFN-α、TNF-α的表达水平,并对差异进行比较.结果 对照组与疾病组相比,WBC水平差异无统计学意义(P>0.05),但对WBC进行了分类计数,疾病组单核细胞计数0.565(0.413,0.698)较对照组0.390(0.320,0.470)增高,差异有统计学意义(Z=-4.562,P0.05),而IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12P70、IFN-α和IFN-γ差异有统计学意义(P<0.05).结论 检测流感病毒感染患者的NKG2D及细胞因子的表达水平,对于了解其机体免疫功能状态、诊断病情具有一定临床价值,值得推广使用.

摘要： 目的:构建靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3,GPC3)和NKG2D的双特异性融合蛋白,并初步评价其在体外对肝癌细胞的杀伤功能.方法:通过基因工程技术,将NKG2 D的配体人主要组织相容性复合物Ⅰ类相关蛋白A(MHC classⅠchain-related A,MICA)胞外区融合到Fab形式的抗人GPC3抗体GC33的重链末端,构建双特异性融合蛋白(Fab GC33-MICA,FabGM)表达载体;转染FreeStyleTM 293-F细胞,收集细胞培养上清,经亲和纯化获得FabGM蛋白;利用分子相互作用技术(Fortebio)和流式细胞术检测FabGM的靶向亲和力;细胞实时动态成像分析系统测定FabGM介导的外周血单个核细胞(PBMCs)对高表达GPC3的人肝癌细胞HepG2的杀伤效应,ELISA法检测杀伤过程中PBMCs分泌人干扰素-γ(hIFN-γ)情况.结果:本研究成功地表达并纯化了FabGM,明确FabGM可特异性结合GPC3和NKG2D.经检测FabGM能有效介导PBMCs靶向杀伤HepG2肝癌细胞,诱导PBMCs分泌IFN-γ.结论:双特异性融合蛋白FabGM能够在体外有效介导效应细胞PBMCs杀伤肝癌细胞HepG2,为FabGM成为肝细胞肝癌的潜在靶向治疗药物提供了实验依据.

摘要： 本申请一般涉及产生NKG2D配体的修饰的非天然α1‑α2结构域，其具有附着的具有特异性靶标结合特性的多肽，例如抗体或抗体的可变片段，所述多肽选择性递送至包含工程化哺乳动物细胞上的修饰的非天然NKG2D受体的嵌合抗原受体(CAR)。表面表达分子的靶向包括病毒感染细胞的靶向，所述病毒感染细胞然后可被表达与具有附着多肽的NKG2D配体的修饰的非天然α1‑α2结构域同源的CAR的免疫系统的工程化细胞攻击和消除。

摘要： 本公开总体涉及与非天然NKG2D受体的非天然胞外域特异性结合的，NKG2D配体的修饰的α1‑α2结构域所组成的多肽的制备，并且其中异源分子连接到NKG2D配体的修饰的1‑2个结构域。本公开还涉及与包括多肽，和在一些实施例中抗体或抗体片段，的异源分子连接的NKG2D配体的修饰的α1‑α2结构域。本公开还涉及NKG2D受体的修饰形式，其被工程化以分别提供与非天然和天然形式的NKG2D配体的增强和减弱结合的组合。

摘要： CD94/NKG2A和/或CD94/NKG2B抗体、疫苗组合。本公开尤其提供用于在治疗有需要的受试者中使用的疫苗与CD94/NKG2A和/或CD94/NKG2B结合抗体的组合，其中所述疫苗包括用于引发针对抗原的免疫应答的免疫原或编码所述免疫原的核酸分子。

摘要： 本发明涉及一种新颖的靶向异二聚体Fc融合蛋白，所述新颖的靶向异二聚体Fc融合蛋白包含IL‑15/IL‑15RαFc融合蛋白和NKG2D抗原结合结构域Fc融合蛋白。

摘要： 本发明公开了一种结合癌细胞表面上的肿瘤相关抗原(TAA)以及NKG2D受体的多肽。所述NKG2D受体在杀伤细胞诸如自然杀伤细胞、T细胞、自然杀伤T细胞和γδT细胞的表面上表达。在一些情况下，所述TAA是CS‑1或EGFRvIII。本发明还公开了编码所公开的多肽的多核苷酸、包含所公开的多核苷酸的载体以及包含所公开的载体的宿主细胞。本发明还公开了包含所公开的多肽的二价抗体。本发明还公开了包含所公开的抗体的药物组合物。本发明还公开了使用所公开的双特异性抗体治疗受试者中的癌症的方法。

摘要： 本发明提供了NKG2A在检测小鼠人源肿瘤模型中人NK细胞中的应用，属于生物技术领域。NKG2A在检测小鼠人源肿瘤模型中人NK细胞中的应用。采用NKG2A片段作为检测靶点，可在小鼠荷瘤肿瘤模型中区分人NK细胞)和人肿瘤细胞，具有检测时间短、检测效率和检测灵敏度高的特点，有利于非临床药代动力学的研究，特别是动物实验，在细胞治疗研发的过程中探究其体内的动态，预测治疗方案，对降低细胞治疗的不确定性、增加疗效和减少毒副作用，有很大的帮助，具有重要的临床指导意义。

摘要： 本发明属于嵌合抗原受体细胞领域，一种靶向人Claudin18.2和NKG2DL的嵌合抗原受体细胞及其制备方法和应用,该嵌合抗原受体细胞含有靶向结合人Claudin18.2和靶向结合人NKG2DL的氨基酸序列。本发明的靶向Claudin18.2和NKG2DL的双特异性嵌合抗原受体修饰的免疫应答细胞能增强与肿瘤细胞的结合，明显提高抗肿瘤活性。

摘要： 本发明总体上涉及与NKG2D结合的抗体，包括多特异性抗原结合分子，例如用于活化T细胞和/或NK细胞。此外，本发明涉及编码此类抗体的多核苷酸，以及包含此类多核苷酸的载体和宿主细胞。本发明进一步涉及用于生产所述抗体的方法，以及涉及将所述抗体用于治疗疾病的方法。

摘要： 本发明涉及一种靶向CCR1和NKG2D配体的嵌合抗原受体及其应用，包括从氨基端到羧基端依次连接的抗原结合结构域、铰链区、跨膜结构域、共刺激结构域和信号转导结构域；所述抗原结合结构域包括抗CCR1单链抗体和NKG2D。利用本发明上述同时靶向CCR1及NKG2D配体的嵌合抗原受体构建的CAR‑T细胞，对CCR1及NKG2D配体阳性肿瘤细胞具有特异性靶向作用，体外杀伤作用显著，能够有效清除CCR1及NKG2D配体单/双阳性肿瘤细胞，减少抗原逃逸，在肿瘤治疗领域具有重要意义。

摘要： 提供了NKG2D融合蛋白及其在各种疾病的治疗中的用途。