瞬时转染

摘要： 目的 构建Homer1基因真核表达重组质粒并在HT22细胞中转染和鉴定.方法 提取APP/PS1双转基因小鼠海马组织总RNA,经逆转录、PCR扩增,获取Homer1基因编码序列,1％琼脂糖凝胶电泳分离后,将Ho-mer1基因序列插入p3×FLAG-CMV-10载体的多克隆位点区域,获得p3×FLAG-CMV-10-Homer1基因真核表达重组质粒,双酶切后鉴定重组质粒并进行基因测序.取HT22细胞,随机分为p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组、p3×FLAG-CMV-10空载体组、空白对照组,p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组、p3×FLAG-CMV-10空载体组分别转染p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒、p3×FLAG-CMV-10空载体,空白对照组不予转染.采用Western blotting法检测各组转染后Homer1蛋白表达.结果 成功构建了p3×FLAG-CMV-10-Homer1基因真核表达重组质粒,经双酶切鉴定和基因测序,该重组质粒序列与目的基因序列一致.p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组Homer1蛋白相对表达量明显高于p3×FLAG-CMV-10空载体组、空白对照组(P均0.05.结论 本研究成功构建了p3×FLAG-CMV-10-Ho-mer1基因真核表达重组质粒,并成功转染HT22细胞,这为研究Homer1蛋白对脑内Aβ清除的影响及在阿尔茨海默病发病机制中的作用奠定了基础.

摘要： 目的:探讨羊耳菊活性部位(IC-MAC)对孕烷X受体(PXR)高表达HepG2细胞中细胞色素P4503A4酶(CYP3A4)蛋白表达的影响.方法:将质粒pcDNA3.1-PXR转化至DH5α感受态大肠杆菌中扩增并提取质粒,采用FuGENE?6转染试剂,将pcDNA3.1-PXR质粒转染至人肝癌HepG2细胞,以重组PXR为对照,采用Western blot技术测定PXR-HepG2和HepG2细胞中PXR的表达,并筛选得到高表达PXR的PXR-HepG2细胞模型;将PXR-HepG2细胞和HepG2细胞分别分为阴性对照组(DMSO组,0.1％)、药物处理组(25、50、100 mg/L IC-MAC)和阳性药物组[PXR激动剂利福平(RIF)组,10μmol/L],分别处理24、48及72 h后,采用Western blot技术测定细胞中CYP3A4蛋白的表达.结果:Western blot结果显示,与HepG2细胞相比,转染pcDNA3.1-PXR质粒的PXR-HepG2细胞中PXR表达明显上调(P<0.01),证明PXR-HepG2细胞模型构建成功;25、50及100 mg/L IC-MAC分别作用于PXR-HepG2和HepG2细胞24、48和72 h后,与DMSO组相比,25、50及100 mg/L IC-MAC均可上调PXR-HepG2和HepG2细胞中CYP3A4表达(P<0.05),且PXR-HepG2细胞上调幅度较HepG2细胞更大.结论:PXR高表达的PXR-HepG2细胞中IC-MAC上调CYP3A4蛋白表达的幅度大于HepG2细胞,提示IC-MAC可能通过PXR来调控CYP3A4蛋白的表达.

摘要： 旨在运用哺乳动物表达载体的瞬时转染技术,转染人类胚胎肾细胞(Human Embryonic Kidney 293E,HEK293E),分泌性表达和纯化带His标签的重组人骨桥蛋白(Recombinant Human Osteopontin,rhOPN),并研究其促结肠癌以及非小细胞肺癌细胞增殖功能.合成和构建OPN融合6×His标签重组蛋白的表达载体pcDNA3.1-OPN,利用聚醚酰亚胺(Polyetherimide,PEI)瞬时转染法将pcDNA3.1-OPN转染到HEK293E细胞中,并用镍亲和层析柱对rhOPN进行纯化.SDS-PAGE电泳和Western Blot被用来检测纯化后的rhOPN蛋白在凝胶上的迁移率和纯度.此外,ELISA方法被用于测定rhOPN与抗OPN抗体间的结合能力,并用CCK-8(Cell Counting Kit-8)方法初步研究rhOPN蛋白对结肠癌及非小细胞肺癌细胞增殖的影响.结果显示,通过将pcDNA3.1-OPN瞬时转染HEK293E细胞,成功表达和纯化出纯度达95％ 的rhOPN,且rhOPN可以被抗OPN抗体很好的识别.rhOPN被证实在36μg/ml浓度时即可显著促进体外培养的HT29细胞增殖,在20μg/mL时能够促进体外培养的非小细胞肺癌H1299及HCC827细胞增殖.运用哺乳动物细胞瞬时转染技术,在HEK293E细胞中成功表达并纯化出高纯度的rhOPN蛋白,并发现rhOPN可以显著促进结肠癌及非小细胞肺癌细胞增殖,具有良好的生物学活性.

摘要： 目的:探讨羊耳菊活性部位(IC-MAC)对孕烷X受体(PXR)高表达HepG2细胞中细胞色素P4503A4酶(CYP3A4)蛋白表达的影响。方法:将质粒pcDNA3.1-PXR转化至DH5α感受态大肠杆菌中扩增并提取质粒,采用FuGENE 6转染试剂,将pcDNA3.1-PXR质粒转染至人肝癌HepG2细胞,以重组PXR为对照,采用Western blot技术测定PXR-HepG2和HepG2细胞中PXR的表达,并筛选得到高表达PXR的PXR-HepG2细胞模型;将PXR-HepG2细胞和HepG2细胞分别分为阴性对照组(DMSO组,0.1%)、药物处理组(25、50、100 mg/L IC-MAC)和阳性药物组[PXR激动剂利福平(RIF)组,10μmol/L],分别处理24、48及72 h后,采用Western blot技术测定细胞中CYP3A4蛋白的表达。结果:Western blot结果显示,与HepG2细胞相比,转染pcDNA3.1-PXR质粒的PXR-HepG2细胞中PXR表达明显上调(P<0.01),证明PXR-HepG2细胞模型构建成功;25、50及100 mg/L IC-MAC分别作用于PXR-HepG2和HepG2细胞24、48和72 h后,与DMSO组相比,25、50及100 mg/L IC-MAC均可上调PXR-HepG2和HepG2细胞中CYP3A4表达(P<0.05),且PXR-HepG2细胞上调幅度较HepG2细胞更大。结论:PXR高表达的PXR-HepG2细胞中IC-MAC上调CYP3A4蛋白表达的幅度大于HepG2细胞,提示IC-MAC可能通过PXR来调控CYP3A4蛋白的表达。

摘要： 为了解肌肉生长抑制素myostatin(MSTN)在华贵栉孔扇贝(Chalmys nobilis)闭壳肌肌肉生长和发育过程中所起的负调控作用,对华贵栉孔扇贝的MSTN启动子序列进行了生物信息学分析.结果显示,MSTN启动子序列长1358 bp,有4个转录起始位点.核心启动子区为–100～–51 bp.有1个TATA-box(–92～–86 bp)和2个E-box等顺式作用元件;潜在的转录因子结合位点有MEF2、MEF3、FoxO、MTBF和MyoD等;启动子区域无CpG岛.成功构建了6个MSTN启动子不同长度片段的荧光素酶表达载体,瞬时转染到293T细胞并进行双荧光素酶报告基因活性检测,表明6个启动子片段均有转录活性,PGL-534的活性最高,其次为PGL-274、PGL-22和PGL-102,最低的为PGL-995.–216～–364区域可能存在负调控基因表达的转录因子结合位点,–364～–825区域可能存在正调控基因表达的转录因子结合位点.

摘要： 为了解肌肉生长抑制素 myostatin(MSTN)在华贵栉孔扇贝(Chalmys nobilis)闭壳肌肌肉生长和发育过程中所起的负调控作用,对华贵栉孔扇贝的 MSTN启动子序列进行了生物信息学分析。结果显示,MSTN启动子序列长 1358bp,有 4个转录起始位点。核心启动子区为-100~-51bp。有 1个 TATA-box(-92~-86bp)和 2个 E-box等顺式作用元件;潜在的转录因子结合位点有 MEF2、MEF3、FoxO、MTBF和 MyoD等;启动子区域无CpG岛。成功构建了 6个 MSTN启动子不同长度片段的荧光素酶表达载体,瞬时转染到 293T细胞并进行双荧光素酶报告基因活性检测,表明 6个启动子片段均有转录活性,PGL-534的活性最高,其次为 PGL-274、PGL-22和 PGL-102,最低的为 PGL-995。-216~-364区域可能存在负调控基因表达的转录因子结合位点,-364~-825区域可能存在正调控基因表达的转录因子结合位点.

摘要： 构建pcDNA5/FRT-SlSCP-2和阳性对照pcDNA5/FRT-GFP真核表达载体,将斜纹夜蛾固醇转运蛋白SlSCP-2和绿色荧光蛋白GFP分别整合进入Flp-In^(TM)CHO细胞基因组中的FRT位点上,利用western blotting方法和荧光倒置显微镜观察鉴定SlSCP-2和GFP蛋白在CHO细胞的表达情况.结果表明,重组质粒瞬时转染CHO细胞24h后,pcDNA5/FRT-SlSCP-2和pcDNA5/FRT-GFP均能正确表达目的蛋白,SlSCP-2能够增加细胞对胆固醇的吸收.同时确定了筛选稳定转染细胞株合适的潮霉素浓度.

摘要： 本文使用带绿色荧光蛋白报告基因的真核质粒pCI-neo-EGFP作为外源DNA,将脂质体介导转染犬肾上皮细胞(MDCK)的常规转染法改进为悬浮法,并比较了二者在转染36h后的转染效果,结果显示悬浮法的转染效率显著优于常规法。研究了悬浮转染法不同DNA用量、脂质体/DNA比例和悬浮孵育时间对转染效率和细胞活力的影响。流式细胞术检测结果显示,转染效率与DNA用量呈正相关依赖关系;在DNA用量相同时,转染效率随着脂质体/DNA比例升高呈先上升后下降的趋势;DNA用量为1μg、脂质体/DNA比例为4∶1、悬浮孵育时间为20 min时转染效率最高(21.07%±0.76%)。利用CCK-8细胞毒性试剂盒测定不同条件下的细胞活力,结果表明细胞活力随DNA用量和脂质体/DNA比例的升高及悬浮孵育时间的延长而降低,当DNA用量(0.25μg)和脂质体/DNA比例(2∶1)最低、悬浮孵育20min时,细胞活力最高(95.67%±3.72%),而转染效率最高时细胞活力为69.95%±3.01%。研究结果为进一步建立稳定转染细胞研究模型提供了基础资料。

摘要： Cathepsin Z gene (CTSZ) affect many traits of pigs, such as the growth and meat quality.It is an important candidate gene.The whole CDS sequence of CTSZ gene was cloing by RT-PCR applied to the longissimus dorsi of landrace.Analyzed bioinformatics of this sequence.The expression vector of pEGFP-N1-CTSZ was built and transfected into pig fibroblast cells with lipotectamine2000.The result was observation after 30 h.The result showed that the test successfully cloned the CDS sequence 912 bp of porcine CTSZ gene, and built pEGFP-N1-CTSZ fusion expression vector.The result of expression was green fluorescence in pig fibroblast cells by instantaneous transfection.This test laid a foundation for further study about the biology of this gene.%组织蛋白酶Z基因(Cathepsin Z gene, CTSZ)是影响猪生长、肉质等性状的一个重要候选基因.本研究以长白猪的背最长肌为试验材料,采用RT-PCR的方法克隆CTSZ基因CDS序列全长,对该序列进行了生物信息学分析,并构建pEGFP-N1-CTSZ融合表达载体,通过脂质体介导瞬时转染猪成纤维细胞,30 h后进行荧光表达检测.结果本试验克隆出猪CTSZ基因CDS全序列912 bp,并成功构建pEGFP-N1-CTSZ融合表达载体,瞬时转染后在猪成纤维细胞中表现为绿色荧光蛋白表达.本试验为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础.

摘要： Objective To investigate the synergistic effect of hepatitis E virus (HEV)-encoded microRNA-A6 (miRA6) on viral replication in full-length HEV transiently transfected-human hepatocellular carcinoma cell line (HepG2).Methods miR-A6 was synthesized according to the reported sequence.Technologies of recombinant polymerase chain reaction (PCR),gene cloning and in vitro transcription were used to obtain a high concentration of HEV RNA.Proportional mixed HEV RNA and miR-A6 were transiently transfected into HepG2 using pulse current.Immunoglobulin G (IgG) secretion and HEV RNA load in supernatants of cultured HepG2 were measured at hour 24,48 and 96 after transfection,respectively.Replication of HEV was compared between HepG2 cells with and without miR A6 transfection.Moreover,anti-A6 was further used to confirm the effect of miR-A6 on the replication of HEV.Results Compared with that in HepG2 transfected with HEV RNA alone,lg HEV RNA increased by 1.57 and 2.44 at hour 48 after co transfection of miR-A6 and HEV RNA with mass ratio of 0.5 ∶ 1 and 1 ∶ 1,respectively.Detection of IgG in supernatants was prior to HEV RNA.There was no obvious difference of replication in vitro between HEV type Ⅰ and type Ⅳ,in which HEV RNA replication both peaked up at hour 48 after transfection.The expression of HEV-IgG and HEV RNA were inhibited by 47.12％ and 43.3％ after addition of anti-A6.Conclusion miR-A6 could significantly increase the replication ability of HEV RNA in full-length HEV transiently transfected HepG2 in vitro,which may lay a foundation for further research on HEV molecular virology and phenotype resistance.%目的 验证HEV编码的MicroRNA-A6对全长HEV瞬转HepG2细胞系中病毒复制的增效作用.方法 按照已报道序列合成miR-A6,利用重组PCR、基因克隆以及体外转录技术获得单一高浓度的HEV RNA.HEV RNA与miR-A6按比例采用脉冲电流转染HepG2细胞,转染后24、48和96h后观察细胞上清IgG分泌和HEV RNA表达载量,与不加miR-A6的HepG2细胞进行比较,分析miR-A6对HEV复制的作用,然后加入anti A6抑制miR-A6表达,分析其对HEV表达和复制的影响.结果 MiR A6∶HEV RNA质量比为0.5∶1和1∶1,共转染HepG2细胞后48 h,与单转染HEV RNA相比,lg值升高了1.57和2.44.HEV-IgG先于HEVRNA表达.体外实验显示,Ⅰ型和Ⅳ型HEV复制力没有明显差别,都在转染后48 h达到峰值,加入anti A6抑制miR-A6后HEV-IgG抑制47.12％,HEV RNA抑制43.3％.结论 MiR-A6可以在体外显著增加HEV RNA瞬转HepG2细胞系中HEV病毒的复制力,为后续HEV分子病毒学和表型耐药研究奠定基础.

摘要： 绵羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenomatosis,OPA)是由绵羊肺腺瘤病毒(exogenous Jaagsiektesheep retrovious,exJSRV)引起的一种慢性进行性传染性绵羊肺脏肿瘤疾病.JSVR具有相互重叠的gag、pro、pol、env的反转录病毒典型的基因结构,其中env基因编码病毒的囊膜蛋白(ENV),ENV主要负责病毒粒子与病毒的靶细胞的特异性结合,同时发生膜融合使病毒粒子侵入靶细胞内.为了进一步探索exJSRV囊膜蛋白的结构与功能,从而揭示绵羊肺腺瘤病的发病机理.本研究以绵羊腺瘤病的病肺组织为原料,提取总RNA并反转录为cDNA,以此cDNA为模板,F-env、R-env1、R-env2为引物,利用半巢式PCR扩增目的基因,胶回收纯化PCR产物并与真核表达载体pcDNA4.0(+)均用kpnⅠ和XbaⅠ限制性内切酶进行双酶切。T4DNA连接酶连接,转化DH5a感受态细胞,挑取15个单克隆,通过菌液PCR、质粒PCR、XbaⅠ单酶切、kpnⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定后,选取酶切验证正确的菌液送Inviotrgen公司进行测序。同时将阳性克隆按Promega公司去内毒素中量质粒提取试剂盒PureYieldTM plasmid Maxiprep System说明书提取质粒(pcDNA4.0(+)/exJSRV-env),紫外分光光度计测其浓度为700μg/L,纯度为A260/A280=1.85,贮存于-20°C备用。用含有10%的胎牛血清和含1%双抗的DMEM高糖培养基培养Hela细胞,在转染前24h,用胰酶消化对数期生长的Hela细胞并计数,将细胞接种于24孔细胞培养板里培养,待细胞密度为80%-90%时,按LipoefcatamineTM LTX Reagent说明书要求进行转染实验,同时设阴性对照组。置于37°C、5%CO2培养箱中继续培养36h。最后裂解细胞,利用微量RNA提取试剂盒提取Hela细胞总RNA,利用RT-PCR检测目的基因的表达。结果表明质粒单、双酶切和测序结果证明本试验构建的pcDNA4.0(+)/exJSRV-env重组质粒的DNA序列完全正确,将其瞬时转染Hela细胞后,裂解细胞并提取总RNA,利用RT-PCR技术,琼脂糖凝胶电泳检测到目的基因env片段约2000bp,与预期大小一致。而阴性对照与空白对照组均无条带。说明pcDNA4.0(+)/exJSRV-env真核表达质粒构建成功,并能在Hela细胞内表达。

摘要： 绵羊肺腺瘤病毒(exogenous Jaagsiekte sheep retrovirus exJSRV)是引起绵羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenomatosis,OPA)的病原.JSRV具有相互重叠的gag、pro、pol、env的反转录病毒典型的基因结构,其中env基因编码病毒的囊膜蛋白(ENV),ENV主要负责病毒粒子与病毒的靶细胞的特异性结合,同时发生膜融合使病毒粒子侵入靶细胞内.为了进一步探索exJSRV囊膜蛋白的结构与功能,从而揭示绵羊肺腺瘤病的发病机理.本研究以绵羊腺瘤病的病肺组织为原料，提取总RNA并反转录为cDNA，以此cDNA为模板，F-env，R-env1，R-env2为引物，利用半巢式PCR扩增目的基因，胶回收纯化PCR产物并与真核表达载体pcDNA3.1(+)均用kpnl和XbaⅠ限制性内切酶进行双酶切。结果表明质粒单、双酶切和测序结果证明本试验构建的pcDNA3.1(+)/exjSRV-env重组质粒的DNA序列完全正确，将其瞬时转染293T细胞后，裂解细胞并提取总RNA，利用RT-PCR技术，琼脂糖凝胶电泳检测到目的基因env片段约2000bp，与预期大小一致。而阴性对照与空白对照组均无条带。说明pcDNA3.1(+)/exjSRV-env真核表达质粒构建成功，并能在293T细胞内表达。

摘要： 在弓形虫外源基因转染研究中，基于弓形虫不同启动子，对叩甲虫荧光素酶和荧光蛋白双报告基因可否在弓形虫转染中实现同时定性和定量检测至今未见尚报道。方法针对弓形虫3个不同启动子GRA1、DHFR和SAG1，构建了一系列荧光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因载体。对弓形虫瞬时转染中影响启动子检测活性的相关条件作了优化。运用荧光倒置显微镜和流式细胞术检测荧光蛋白的表达，用双荧光素酶检测试剂盒检测荧光素酶的活性，并定量监测载体转染效率。结果倒置荧光显微镜观察和流式细胞术检测的结果均显示，不同启动子趋动荧光蛋白表达的强弱不同。流式细胞术检测结果表明，串连YFP荧光蛋白和GFP荧光蛋白在相同启动子趋动下，前者荧光强度大约是后者的3.9倍。用倒置荧光显微镜监测弓形虫瞬时转染，串联YFP报告基因比GFP报告基因敏感性高。但是，串联DHFR－DHFR启动子构建的载体，与GRA1-DHFR串联及SAG1-DHFR串联启动子所构建的载体相比，前者的荧光素酶活性和荧光蛋白表达强度均比后者要低。定量监测同一载体转染效率，结果表明，不论使用哪种启动子，电转105到107弓形虫可检测到荧光蛋白表达，而104没有检测到荧光蛋白表达;而104到107弓形虫可检测到荧光素酶的活性。结论本研究成功构建了以串连YFP和荧光素酶为双报告基因的基于弓形虫3个不同启动子(GRA1、DHFR和SAG1)的瞬时转染载体。荧光素酶报告基因的敏感性高于荧光蛋白报告基因。以GRA1和DHFR为启动子建立的双报告基因系统要比以SAG1启动子建立的双报告基因系统，更适宜于基因转染的监测。

摘要： 本文以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因构建了4个启动子不同的表达载体.以这些表达载体瞬时转染MCF-7细胞,报告基因的基础表达与启动子的强度相关.以17β-雌二醇(E)诱导表达载体瞬时转染的MCF-7细胞,发现在表达载体pERE-TA-EGFP、pERE-TK-EGFP、pERE-SV-EGFP转染的MCF-7细胞,E能诱导2倍以上的报告基因的表达.这表明在这些瞬时表达系统中报告基因的表达是雌激素依赖性的,因此这些表达载体可用于稳定转染,以建立稳定表达分析系统.

摘要： 目的:研究瞬时干扰RMP(RPB5-mediating protein)对60Coγ射线诱导的肝癌细胞形态和凋亡的影响，探讨RMP的抗辐射抗凋亡效应及机制。方法:设计并合成RMPsiRNA及相应的对照序列，脂质体介导转染肝癌细胞，以6Gy剂量的射线照射细胞，RT-PCR检浏RMP siRNA对RMP mRNA的抑制效果，筛选最佳干扰序列；光镜下观察RMP干扰对细胞形态的影响，流式细胞术检测RMP干扰对细胞凋亡的影响，RT-PCR检测凋亡相关基因bax,bcl-2,p21,survivin的表达。结果:2#RMP siRNA为最佳干扰序列，其RMP mRNA表达抑制率为(43.58±2.46)%;RMP干扰后肝癌细胞对60Coγ射线抵杭能力减弱，凋亡增多，促凋亡基因bax表达上调，凋亡抑制基因bcl-2,p21,survivin表达下调。结论:RMP在60Coγ射线诱导的肝癌细胞损伤和凋亡过程中具有抗辐射和抗凋亡的作用;RMP干扰后细胞凋亡增多，可能通过bax上调和bcl-2,p21,survivin下调实现。

摘要： 目的:研究瞬时干扰RMP(RPB5-mediating protein)对60Coγ射线诱导的肝癌细胞形态和凋亡的影响，探讨RMP的抗辐射抗凋亡效应及机制。方法:设计并合成RMPsiRNA及相应的对照序列，脂质体介导转染肝癌细胞，以6Gy剂量的射线照射细胞，RT-PCR检浏RMP siRNA对RMP mRNA的抑制效果，筛选最佳干扰序列；光镜下观察RMP干扰对细胞形态的影响，流式细胞术检测RMP干扰对细胞凋亡的影响，RT-PCR检测凋亡相关基因bax,bcl-2,p21,survivin的表达。结果:2#RMP siRNA为最佳干扰序列，其RMP mRNA表达抑制率为(43.58±2.46)%;RMP干扰后肝癌细胞对60Coγ射线抵杭能力减弱，凋亡增多，促凋亡基因bax表达上调，凋亡抑制基因bcl-2,p21,survivin表达下调。结论:RMP在60Coγ射线诱导的肝癌细胞损伤和凋亡过程中具有抗辐射和抗凋亡的作用;RMP干扰后细胞凋亡增多，可能通过bax上调和bcl-2,p21,survivin下调实现。

摘要： 目的:研究瞬时干扰RMP(RPB5-mediating protein)对60Coγ射线诱导的肝癌细胞形态和凋亡的影响，探讨RMP的抗辐射抗凋亡效应及机制。方法:设计并合成RMPsiRNA及相应的对照序列，脂质体介导转染肝癌细胞，以6Gy剂量的射线照射细胞，RT-PCR检浏RMP siRNA对RMP mRNA的抑制效果，筛选最佳干扰序列；光镜下观察RMP干扰对细胞形态的影响，流式细胞术检测RMP干扰对细胞凋亡的影响，RT-PCR检测凋亡相关基因bax,bcl-2,p21,survivin的表达。结果:2#RMP siRNA为最佳干扰序列，其RMP mRNA表达抑制率为(43.58±2.46)%;RMP干扰后肝癌细胞对60Coγ射线抵杭能力减弱，凋亡增多，促凋亡基因bax表达上调，凋亡抑制基因bcl-2,p21,survivin表达下调。结论:RMP在60Coγ射线诱导的肝癌细胞损伤和凋亡过程中具有抗辐射和抗凋亡的作用;RMP干扰后细胞凋亡增多，可能通过bax上调和bcl-2,p21,survivin下调实现。

摘要： 目的:研究瞬时干扰RMP(RPB5-mediating protein)对60Coγ射线诱导的肝癌细胞形态和凋亡的影响，探讨RMP的抗辐射抗凋亡效应及机制。方法:设计并合成RMPsiRNA及相应的对照序列，脂质体介导转染肝癌细胞，以6Gy剂量的射线照射细胞，RT-PCR检浏RMP siRNA对RMP mRNA的抑制效果，筛选最佳干扰序列；光镜下观察RMP干扰对细胞形态的影响，流式细胞术检测RMP干扰对细胞凋亡的影响，RT-PCR检测凋亡相关基因bax,bcl-2,p21,survivin的表达。结果:2#RMP siRNA为最佳干扰序列，其RMP mRNA表达抑制率为(43.58±2.46)%;RMP干扰后肝癌细胞对60Coγ射线抵杭能力减弱，凋亡增多，促凋亡基因bax表达上调，凋亡抑制基因bcl-2,p21,survivin表达下调。结论:RMP在60Coγ射线诱导的肝癌细胞损伤和凋亡过程中具有抗辐射和抗凋亡的作用;RMP干扰后细胞凋亡增多，可能通过bax上调和bcl-2,p21,survivin下调实现。

摘要： 本发明提供了一种HEK293细胞瞬时表达转染用试剂和瞬时表达系统转染方法，涉及基因工程技术领域，所述试剂包括穿膜肽DLR8与脂质体混合物，试剂中穿膜肽DLR8：脂质体的质量比为4～8.8:1。所述HEK293细胞瞬时表达转染用试剂和瞬时表达系统转染方法中，选择穿膜肽DLR8与脂质体混合物作为HEK293细胞瞬时表达的转染试剂，高糖DMEM培养基作为转染孵育Buffer，并在细胞转染处理后48h进行细胞悬浮，添加小分子添加剂丁酸钠，提高了HEK293细胞外源蛋白的表达水平，使得目的基因可高效表达。

摘要： 本发明公开了用于鲤EPC细胞转染的乳白蛋白载体，乳白蛋白载体为表面修饰有马来酰亚胺的α‑乳白蛋白球型颗粒。本发明还公开了乳白蛋白载体的制备方法，包括：将α‑乳白蛋白通过酶解后以超声重聚的方法使其成为球型颗粒；连接马来酰亚胺至α‑乳白蛋白颗粒表面使其形成乳白蛋白载体。本发明还公开了在鲤EPC细胞中高效瞬时转染质粒的方法，包括：将乳白蛋白载体和待转染质粒混合，并加入到EPC细胞培养基，形成转染培养基；利用转染培养基培养鲤鱼EPC细胞一段时间后，移除转染培养基，并更换回EPC细胞培养基继续培养。本发明对细胞毒性低、操作简便、转染效率高，可做为鱼类细胞的通用基因导入方法，具有良好的应用前景。

摘要： 本申请涉及基因转染的技术领域，具体公开了一种提高瞬时转染效率的转染试剂及转染方法。转染试剂包括PEI转染试剂和DMSO；其转染方法包括以下步骤：S1、准备转染质粒、细胞培养液（用1~5%(v/v)的DMSO处理5~10 h）；将转染试剂和培养基混合得到PEI混合液，其中转染试剂中添加有0.5%~1%(v/v)的DMSO，将转染质粒和培养基混合得到质粒DNA混合液；S2、将所述PEI混合液加入至质粒DNA混合液，室温孵育，得到DNA‑PEI复合物混合液；S3、将DNA‑PEI复合物混合液加入至所述细胞培养液中，并培养数天。本申请的转染试剂和转染方法用于细胞转染，其具有转染效率高的优点。

摘要： 本发明公开了用于鲤EPC细胞转染的乳白蛋白载体，乳白蛋白载体为表面修饰有马来酰亚胺的α‑乳白蛋白球型颗粒。本发明还公开了乳白蛋白载体的制备方法，包括：将α‑乳白蛋白通过酶解后以超声重聚的方法使其成为球型颗粒；连接马来酰亚胺至α‑乳白蛋白颗粒表面使其形成乳白蛋白载体。本发明还公开了在鲤EPC细胞中高效瞬时转染质粒的方法，包括：将乳白蛋白载体和待转染质粒混合，并加入到EPC细胞培养基，形成转染培养基；利用转染培养基培养鲤鱼EPC细胞一段时间后，移除转染培养基，并更换回EPC细胞培养基继续培养。本发明对细胞毒性低、操作简便、转染效率高，可做为鱼类细胞的通用基因导入方法，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明涉及一种瞬时转染试剂及其应用，属于细胞生物学和生物技术领域。本发明的瞬时转染试剂，包括聚乙烯亚胺盐酸盐溶液、氯化钠溶液和氯化镁溶液；聚乙烯亚胺盐酸盐溶液的浓度为0.8～1.2mg/mL，pH为6.9～7.1，聚乙烯亚胺盐酸盐为PEI MAX 40K；氯化钠溶液的浓度为4.8～5.3mol/L；氯化镁溶液的浓度为0.8～1.2mol/L。本发明的瞬时转染试剂用于细胞转染时，具有较高的转染效率。由于聚乙烯亚胺盐酸盐的浓度较低，本发明的瞬时转染试剂具有较低的毒性。本发明的瞬时转染试剂是一种价廉、毒性小、转染效率高的瞬时转染试剂，可用于重组蛋白生产和基因治疗等方面。

摘要： 本发明提供了一种在头状花序中实现基因瞬时转染的方法，涉及基因工程技术领域，本发明提供的在头状花序中实现基因瞬时表达的方法，采用真空渗透作用瞬时转化带蕾插穗生根、开花的植物头状花序，瞬时转化5‑7天即可实现可检测量的目的基因的转染，此方法具有操作简单、转化周期短、转化效率高等优点，并且可以实现高效率的头状花序中外源基因瞬时表达，克服了头状花序难以转化成功的难题，为植物开花基因功能研究奠定了方法学基础，为分子育种和品种改良提供方法，具有较高的实用性和科研应用价值。

摘要： 本发明公开了一种细胞瞬时转染的方法。具体地公开了细胞瞬时转染进口试剂国产化替代方法，所述方法包括如下步骤：A1)细胞培养：采用表达培养基培养细胞，得到细胞培养物；A2)转染：将质粒与转染试剂、转染培养基混合，得到质粒与转染试剂复合物，将所述复合物加入所述细胞培养物中进行转染，转染过程中添加转染增强剂；其中：所述转染试剂为TRLIP高效DNA转染试剂，所述转染培养基为转染专用减血清培养基，所述转染补料为OPM‑293ProFeed。本发明方法具有成本低、转染效率高、订购周期短的优点，实现了进口试剂国产化，可降低科研和医疗成本，具有重要经济效益。

摘要： 本发明公开了一种增强ExpiCHO细胞瞬时转染抗体表达的方法，通过ExpiCHO细胞的瞬时转染方法获得的混合ExpiCHO细胞悬液然后通过促进ExpiCHO细胞的瞬时转染后抗体表达的方法进行抗体表达。相对于传统的转染方法，通过采用上述方法可以获得更高Expicho细胞目的蛋白表达量。

摘要： 本实用新型公开了一种全封闭、半自动化控制、模块化的质粒瞬时转染系统，包括封闭管路和多层支架；封闭管路包括通过管道依次连接的转染复合物配置瓶、培养基袋、蠕动泵、废液袋和培养瓶；管道上设置有阀门；管道上还设置有无菌接口，用于连接；多层支架包括活动面板、卡槽和控制件；活动面板的第一条边设置在卡槽内；控制件与活动面板连接，使得活动面板能够随控制件的长度变化而以第一条边为轴转动；活动面板上设置有固定件，用于固定培养瓶。本实用新型的系统实现了全封闭、半自动化控制、模块化的质粒瞬时转染，起到保持工艺一致性性、节约劳动力、降低工序操作步骤、省时省力、降低污染风险等多个目的。

摘要： 本实用新型公开了一种用于基因瞬时转染的离心装置，包括壳体，所述壳体内固定设置有支撑座，所述支撑座上固定设置有电机，所述壳体内固定设置有支撑板，所述壳体上开设有第一通孔，所述第一通孔内设置有离心腔，所述离心腔的底部与支撑板固定连接，所述离心腔和支撑板上均开设有第二通孔，所述第二通孔内穿设有传动轴，所述传动轴通过联轴器与电机的输出轴固定连接，所述传动轴上固定设置有转子机构。本实用新型解决了现有离心装置离心管只能按固定倾斜角度放置的问题。