报告基因

摘要： 目的构建人T细胞活化核因子C2(NFATc2)基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-NFATc2-promoter,检测其转录活性,探究二甲双胍和脂多糖对其转录活性的影响。方法利用UCSC网站查找人NFATc2基因的启动子序列并设计上下游引物PCR扩增人NFATc2基因启动子片段;用限制性内切酶KpnⅠ和HindⅢ双酶切质粒pGL3-basic,将人NFATc2基因启动子片段插入到pGL3-basic质粒,重组质粒命名为pGL3-NFATc2-promoter。将pGL3-NFATc2-promoter与内参质粒pRL-TK共转染293F细胞,检测其荧光素酶活性。同时构建人NFATc2基因启动子不同片段长度的报告基因载体并进行荧光素酶活性检测,分别给予不同浓度的二甲双胍和脂多糖处理24 h后检测二甲双胍和脂多糖对NFATc2转录活性的影响。进一步突变NFATC2基因启动子上转录因子RUNX2的结合位点探究二甲双胍和脂多糖对NFATc2的转录调控作用。结果研究成功构建了不同片段长度(2170、2077、1802、1651、1083、323 bp)的人NFATC2基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-NFATc2-promoter,经酶切及测序鉴定完全正确。将不同片段长度的pGL3-NFATc2-promoter转染到293F细胞,发现pGL3-1651 bp具有最高转录活性,荧光素酶活性约为pGL3-2170 bp的3.3倍(1.8433±0.1457 vs 0.5467±0.0850)。中浓度(5 mmol/L)和高浓度(10 mmol/L)的二甲双胍分别上调pGL3-1651 bp的转录活性多达2.5、3倍(1.3467±0.1601 vs 0.8867±0.0321,1.8124±0.2771 vs 0.8867±0.0321)。不同剂量的脂多糖均能上调pGL3-1651 bp的转录活性不低于1.6倍(1.4813±0.0616 vs 0.8867±0.0321)。突变pGL3-1651 bp上的RUNX2结合位点后,二甲双胍和脂多糖上调的pGL3-1651 bp转录活性均受到抑制,转录活性下降(2.1667±0.1527 vs 1.233±0.1155;2.3667±0.2887 vs 1.1333±0.3786)。结论pGL3-NFATc2-promoter在293F细胞中能被转录激活,并证实脂多糖和二甲双胍转录激活pGL3-NFATc2-promoter依赖于转录因RUNX2。

摘要： 目的:建立ActRⅡB-Fc融合蛋白的生物学活性检测方法。方法:利用A204-CAGA12-LUC细胞系,通过荧光素酶检测系统进行ActRⅡB-Fc融合蛋白的生物学活性检测,根据四参数拟合分析计算样品相对效价,并对该方法的专属性、精密性和准确性进行验证。结果:ActRⅡB-Fc融合蛋白在该方法中存在量效关系,且符合4-参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D。该方法具有良好的专属性;6批ActRⅡB-Fc融合蛋白样品经3次测定,相对效价平均值在(86.74±6.44)%~(108.81±15.07)%,RSD均小于15%;2批回收率样品经3次测定,回收率分别为(114.99±12.42)%和(81.19±7.35)%;8次独立测定重复性较好。结论:研究建立的ActRⅡB-Fc融合蛋白生物学活性检测方法专属性强,准确性高,精密度好,可作为ActRⅡB-Fc融合蛋白生物学活性的常规检测方法。

摘要： 为深入研究黄鳝Dmrt1基因5′端侧翼序列在性别决定与分化中细胞通路之间的转录调控作用。本研究以黄鳝基因组DNA为模板,PCR扩增出Dmrt1基因5′端侧翼序列,并对该序列进行了生物信息学分析,然后将克隆获得的Dmrt1基因5′端侧翼序列构建到PGL3-enhancer载体中,命名为pGL3-enhancer-Dmrt1,最后将pGL3-enhancer-Dmrt1和内参质粒pRL-TK共转染至HEK293细胞,采用双荧光素酶检测系统对Dmrt1基因5′端侧翼的启动活性进行了检测。实验结果显示:克隆获得的Dmrt1基因5′端侧翼序列为1519 bp;利用TESS-Transcription Element Search System转录因子结合位点在线预测数据库对黄鳝Dmrt1基因5′端侧翼序列进行预测分析结果表明,该序列存在AP-1、Oct-1、C/EBPa和GATAx等真核生物通用的转录因子结合位点以及与性别相关基因的蛋白结合位点,如SRY、Sox3和Sox5等;双荧光素酶检测结果显示,该5′端侧翼序列具有启动活性。

摘要： 在肿瘤研究中,以小鼠和斑马鱼为主的动物模型实验作为介于体外细胞实验和临床试验之间重要的中间环节,往往很受青睐。近年来,挑选一些在肿瘤细胞进程中有特殊活性的启动子,构建这类启动子调控的荧光素酶报告基因,或者将荧光素酶基因的cDNA插入到肿瘤特异性表达的基因调控序列中,建立转基因小鼠和斑马鱼动物模型,随后通过生物发光成像技术(BLI),可以在活体动物模型中实现肿瘤细胞进程的可视化研究,包括对肿瘤细胞增殖、凋亡、迁移和免疫反应的实时监控。现综述利用BLI技术和活体动物成像模型在实现肿瘤细胞进程的可视化和确定肿瘤早期发展阶段方面的研究进展,及其用于不同组织器官间活动和肿瘤治疗方面的发展和应用。

摘要： 目的:利用分子克隆的方法构建转录因子STAT5A启动子荧光素酶报告基因质粒并鉴定其效应。方法:以乳腺癌MCF7细胞基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增STAT5A基因的启动子序列,并将其克隆至荧光素酶报告基因质粒pGL3-Enhancer中,经过菌液扩增、酶切、测序等方法获得目的质粒,并通过双荧光报告基因实验进一步验证其功能。结果:构建的STAT5A启动子荧光素酶报告基因质粒pGL3-STAT5A-pro-luc-E序列正确,且具有转录活性。在双荧光报告基因实验中发现重组载体pGL3-STAT5A-pro-luc-E荧光素酶的相对活性约为阴性对照pGL3-Enhancer的8倍(P<0.01),而pGL3-STAT5A-pro-N-luc-E荧光素酶的相对活性约是阴性对照pGL3-Enhancer的6倍(P<0.01)。结论:本项目成功构建了转录因子STAT5A启动子荧光素酶报告基因质粒,为进一步研究STAT信号转导及转录激活蛋白信号通路提供了重要的研究工具。

摘要： 目的:本文概述了目前激活链霉菌沉默生物合成基因簇的研究进展,并对其应用进行了讨论和展望。方法:基因测序技术揭示链霉菌基因组中蕴含几十个次级代谢产物生物合成基因簇,而这些基因簇在常规培养条件下往往处于“沉默状态”,不表达或低表达,目前主要有沉默基因簇的异源表达、调控基因修饰、核糖体工程技术、基于报告基因指示等多种策略用于链霉菌中沉默基因簇的激活。结果:链霉菌中的沉默基因簇可被定向或非定向的“激活”,并实现众多新型天然化合物的合成。结论:链霉菌沉默基因簇的激活已成为新药开发的重要来源。

摘要： 复制缺陷型病毒不能在宿主体内复制,用其制备的疫苗不仅能够诱导宿主体液免疫和细胞免疫应答,还具有较好的安全性。本研究旨在构建一种利用琥珀正交系统制备复制缺陷型病毒的新平台。首先构建携带琥珀终止密码子(TAG)和EGFP报告基因的质粒(pTAG-EGFP),然后以质粒pAcBac1.tR4-MbPyl为模板,利用PCR方法扩增正交氨酰tRNA合成酶/tRNA片段(aaRS/tRNA)并克隆至不同载体中,成功构建了真核表达质粒paaRS/tRNA。将不同组合的质粒paaRS/tRNA和pTAG-EGFP共转染BHK-21细胞,荧光检测表明氨酰tRNA合成酶及tRNA在BHK-21细胞中具有正交性和高度特异性;经G418和嘌呤霉素筛选及Western-blot验证,本研究成功构建了一种稳定表达氨酰tRNA合成酶及tRNA的BHK-21细胞系,为后续拯救TAG突变复制缺陷型病毒提供了强有力的技术平台,也为重大动物疫病复制缺陷型病毒活疫苗研究奠定了基础。

摘要： 内皮细胞的特化是胚胎发育过程中的关键事件;然而,内皮细胞何时以及如何从其他谱系中分离出来却知之甚少。在斑马鱼中,Npas4l通过诱导转录因子基因etsrp、tal1和lmo2的表达,从而对内皮细胞的特化是必不可少的。研究人员在斑马鱼npas4l中生成了一个敲入报告基因,以观察野生型和突变型胚胎中内皮祖细胞及其衍生物。出乎意料的是,研究人员发现在npas4l突变体中,表达npas4l报告基因的细胞对前肾小管的形成有贡献。野生型胚胎早期侧板中胚层的单细胞转录组学和活体成像确实揭示了内皮和前肾标记物的共表达,这一发现被基于creERT2的谱系追踪所证实。

摘要： 先天性免疫是细胞抵御病毒感染的第一道防线,I型干扰素(IFN)在抗病毒先天性免疫中发挥关键作用。干扰素β(IFN-β)作为I型IFN成员,是IFN通路激活的效应蛋白和指征蛋白,IFN-β启动子活性则是通路是否激活的重要指标。Gaussia luciferase(Gluc)是近年来发现的荧光素酶家族中最小的成员,呈分泌性表达,与常规荧光素酶相比具有诸多优势。为了建立一种新型、简易、稳定的IFN-β启动子活性检测方法,本研究首先将人IFN-β基因启动子以及下游Gluc克隆至慢病毒载体中,将其包装成慢病毒后感染A549细胞;使用杀稻瘟菌素筛选及有限稀释法稀释培养得到单克隆细胞,经PCR初步筛选得到稳定表达IFN-β-Gluc的A549细胞株,新城疫病毒和poly(I:C)处理单克隆细胞,筛选得到能够高水平诱导Gluc的阳性细胞株。进一步通过正向诱导(转染IFN-β信号通路相关蛋白质粒)和反向抑制实验(转染新城疫病毒V蛋白质粒)证实,并从基因及酶活性水平验证其表达IFN-β-Gluc的稳定性。该细胞系提供了检测IFN通路激活的简易方法,为进一步研究病毒诱导IFN-β的转录、调控,动态监测IFN-β启动子活性,高通量筛选等研究奠定了基础。

摘要： 为构建一种具有广泛适用性的原核启动子报告系统,以质粒pFLX107为骨架,通过多克隆位点替换和序列改造,构建出基于lacZ基因和pUC复制子的pFGH系列报告载体,然后以lacZ基因缺失株MC4100为宿主菌筛选背景活性最低的质粒作为最终的报告系统,并利用诱导型启动子araBAD和组成型启动子rpsM分别对其进行测试.结果显示,在所构建的pFGH系列质粒中,pFGH06的背景活性显著低于同系列其他质粒,在28°C培养条件下甚至显著低于低拷贝参考质粒pRCL的活性(P＜0.01).进一步的评估测试显示,质粒pFGH06可用于诱导型启动子或组成型启动子的克隆及活性测定,且在模拟应用于启动子筛选时,通过蓝白斑筛选即可实现对目标启动子的完全识别.与已报道的原核启动子报告系统相比,pFGH06具有体积小、克隆位点多、背景活性可调、对启动子筛选识别效率高等优点,具有广泛的应用前景.

摘要： 目的:建立检测胰岛素受体酪氨酸激酶(IRTK)活性的转基因细胞系,为筛选胰岛素受体(IR)的非肽小分子激动剂提供新的模型。rn 方法:用克隆有胰岛素受体基因、STAT5b基因和STAT5应元件靶控的荧光素酶报告基因的质粒共转染CHO细胞,G418筛选阳性克隆,然后检测胰岛素和AG1024作用下阳性克隆细胞荧光素酶的表达。rn 结果:转染的CHO细胞经G418筛选得到一株具有较高诱导表达率的细胞株,胰岛素对该细胞株的荧光素酶的诱导表达率具有很好的剂量依赖性和时间依赖性,AG1024能有效抑制胰岛素的诱导表达作用。rn 结论:该细胞模型具有良好的灵敏性、特异性和稳定性,可应用于胰岛素受体激动剂的高通量筛选。

摘要： 热休克蛋白是细胞受应激原(高温、重金属和化学毒物等)刺激后诱导产生的一种应激蛋白,在进化上高度保守并具有多种与应激相关的生物学功能.报告基因是一种编码某种易于检测的蛋白质或酶的基因,通过它的表达产物来标定目的基因的表达调控.由于报告基因技术和应激基因调控的报告基因细胞系统的构建日趋成熟,热休克蛋白基因启动子调控的报告基因检测技术在医疗卫生领域的应用也越来越广泛。由于应激反应是非特异性的细胞反应，能够综合反映环境污染物对机体的早期损伤，因此报告基因的表达水平可反映环境复合污染物对细胞的综合毒性效应，而且应激报告基因系统相比传统的毒理实验操作简单、耗时短、灵敏度高、重复性好，故用应激报告基因系统评估环境污染物的毒性不仅可以增加污染物毒性效应早期检测和环境相关性疾病早期预防的可行性，而且可以为人类生活或工作环境质量的监测与评估提供一定的依据。

摘要： 目的:建立基于Nrf2-ARE通路的报告基因筛选模型,筛选抗辐射复方四物汤加味方中的活性成分.rn 方法:将抗氧化反应元件插入萤火虫荧光素酶载体pGL4.26,构建重组质粒pGL4-ARE,与海肾荧光素酶载体pRL-TK共同转染HEK-293细胞,检测四物汤加味方中刺五加皂苷E、金丝桃苷、五味子乙素等12个主要的化学成分对Nrf2-ARE通路的激活作用。rn 结果:在四物汤加味方中,白藜芦醇(50μmol.L-1以上)和金丝桃苷(100μmol·L-1以上)的抗氧化活性最强,与空白对照组比较有显著差异(P＜0.01)；红景天苷也有较好的效果,500μmol·L-1以上可显著提高诱导表达倍数(P＜0.01).rn 结论:白藜芦醇、金丝桃苷、红景天苷是四物汤加味方中的主要抗氧化活性成分.

摘要： 本文介绍了核医学分子影像的主要发展方向，分析了核医学M1的分子靶点的选择，讨论了报告基因表达蛋白的定位，以及报告基因与治疗基因表达的一致性问题。

摘要： 目的:观测冬虫夏草提取液对体外培养的人结肠癌细胞株HT-9、SW480的抑制效应,并利用报告基因技术初步探明其发挥抑制作用的机制。方法:体外培养两种结肠癌细胞株,加入冬虫夏草提取液干扰,使用MTT法检测对肿瘤细胞增殖的抑制作用。利用报告基因技术,检测转染荧光素酶报告基因后的SW480细胞内NF-kB相对活性,观察冬虫夏草提取液对细胞NF-kB活性的影响。分离细胞胞质蛋白,使用免疫蛋白印迹技术检测各组细胞内NF-kB抑制蛋白(IkBα)的含量,观察虫草提取液对IkBα的影响。结果:冬虫夏草提取液可以有效的抑制两种种结肠癌细胞的增殖,并具有良好的剂量-效应关系。报告基因检测结果表明TNF-α可明显增强NF-kB活性(p<0.05),而冬虫夏草提取液可抑制这种激活作用(p<0.05);免疫蛋白印迹实验表明,虫草提取液可有效抑制细胞内IkBα的降解。结论:冬虫夏草提取液可以抑制IkBα的降解,从而抑制NF-kB活性并通过这种作用抑制结肠癌细胞增殖。

摘要： 目的：对几种中药进行了植物雌激素的活性筛选。rn 方法：采用动物实验结合报告基因技术,对五种中药进行了植物雌激素活性的研究。在体动物实验：采用出生21天刚断乳昆明种雌性小鼠(9-12g)，按体重随机分组，分别给予卷柏、松针、石胆草、贯众、益母草水提取物，阳性药为尼尔雌醇，持续给药7天后处死小鼠，子宫称重，计算子宫系数;报告基因技术:以ERE调控的报告基因瞬时表达检测，用荧光素酶检测试剂盒检测细胞上清液荧光素酶的活性，筛选出对ERα或/和ERβ有作用的中药。rn 结果：卷柏提取物可使小鼠子宫重量增加(P<0.01)；且ERE调控的报告基因瞬时表达检测中，不论由ERα或ERβ介导均具有雌激素活性(P<0.01)。卷柏与ERβ的亲和力比与ERα的亲和力大,说明卷柏激活基因转录主要是通过ERβ介导的。进一步子宫增重实验，对卷柏的有效部位进行了筛选，确定卷柏的有效部位为水部位和正丁醇部位。

摘要： 马立克氏病病毒(MDV)基因组DNA复制原点区的上游和下游均含有启动子TATA-box、CAAT-box等特征性的保守基元,推测是一个天然的双向启动子.为了在体外验证其双向启动活性,试验以MDVpp38为报告基因插入到pUC18中,构建了pUC-pp38质粒,并将包含该启动子完整区域的789bp序列分别以正反两个方向克隆进pUC-pp38质粒中pp38报告基因的上游,获得的重组质粒pProfpp38和pProrpp38.将所获得的重组质粒分别转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过间接免疫荧光试验检测pp38基因的表达以验证该启动子的双向启动活性.实验结果表明:马立克氏病病毒复制原点区的启动子无论以何种方向插入pUC-pp38质粒中,在转染转染细胞24小时内能检测到pp38基因的表达,48小时后能获得高效和持续的表达.同时,我们通过通过PCR技术,逐渐缩小该启动子的范围,最终在320bp时,仍能检测到两个方向的启动活性.

摘要： 绿色荧光蛋白(green florescence protein:GFP)作为标记蛋白或报告基因,不需外加任何反应底物或辅阻因子,对活细胞没有毒害作用,可以很方便地进行活细胞无损检测,在微生物学代谢工程、微生物生态学、微生物细胞生物学和环境微生物技术及新型生物传感器研制等领域均显示良好的应用效果.

摘要： 目的:分析DX16基因的启动子序列. 方法:用PCR方法扩增得到含有DX16基因ATG上游不同长度的侧翼序列,经酶切亚克隆至pGL3-Basic的真核表达载体中,转染果蝇S2细胞,通过测定的荧光素酶和β-半乳糖苷酶的活性计算荧光素酶的相对活性. 结果:DX16基因ATG上游1000bp荧光素酶相对活性最高. 结论:pGL3-1000可能含有与DX16转录相关的增强子序列.

摘要： 目的:分析DX16基因的启动子序列. 方法:用PCR方法扩增得到含有DX16基因ATG上游不同长度的侧翼序列,经酶切亚克隆至pGL3-Basic的真核表达载体中,转染果蝇S2细胞,通过测定的荧光素酶和β-半乳糖苷酶的活性计算荧光素酶的相对活性. 结果:DX16基因ATG上游1000bp荧光素酶相对活性最高. 结论:pGL3-1000可能含有与DX16转录相关的增强子序列.

摘要： 本发明提供了一种含有肉牛DKK3基因3’UTR序列和双荧光素酶报告基因的质粒及其应用，所述质粒包含bta‑miR‑25与牛DKK3结合的靶点，其构建包括设计DKK3基因3’UTR区扩增引物并加入酶切位点Pme I和Xho I，以牛肾细胞(MDBK)cDNA为模板进行扩增，将PCR产物及pmirGLO Vector分别用限制性内切酶Pme I和Xho I进行双酶切，将酶切后纯化的载体pmirGLO Vector和DKK3基因3’UTR片段连接，转化，培养，PCR检测，测序，将测序正确的菌液重新扩大培养，质粒提取等步骤，本发明为筛选调控DKK3表达的miRNAs、评估miRNAs对DKK3表达的调控作用提供了简单易行的工具，具有灵敏度高、速度快和费用低等优点；本发明还为DKK3的表达调控带来了更深层次的认知，能运用于家畜肉质遗传改良分子调控机制的研究，具有较好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种基于基因编辑技术的监测miRNA表达的报告基因探针及构建方法。所述的探针包括pcDNA3.1载体、基因片段A和B，载体pcDNA‑CRE，载体pcDNA‑FLP。所述的基因片段A、B按照A‑B顺序与线性化的pcDNA3.1载体重组，所述的片段A由Loxp/FRT、Fluc、和5xmiR targets序列组成，所述的片段B为Loxp/FRT。本发明的报告基因分子影像探针基于Loxp/FRT‑CRE/FLP基因编辑技术结合报告基因分子显像技术，可以实时监测活体miRNA的表达变化，为活体miRNA表达的动态变化提供了一种实时、无创的监测工具。

摘要： 本发明提供了一种含WSB1基因启动子和报告基因的重组质粒及其构建方法和应用。具体地，克隆WSB1基因启动子特异性序列，重组到含萤火虫荧光素酶报告基因载体序列中，构建含WSB1基因启动子和报告基因的重组质粒，再将构建的重组质粒与海肾荧光素酶报告基因质粒pRL‑TK共转染肿瘤细胞，使其稳定表达，最后通过检测双荧光素酶的活性来反映WSB1基因启动子启动转录的活性，从而应用于靶向筛选抗肿瘤药物。本发明构建的重组质粒采用的是WSB1基因启动子，并选取了特定的启动子序列，所构建的药物筛选模型具有高特异性、高灵敏度和高准确度，实现了以WSB1为靶点的抗肿瘤药物的高通量筛选。

摘要： 一种Glb1重组报告基因，其包括在Glb1基因的终止密码子位点从5’至3’端方向顺序地插入的2A序列以及报告基因，所述Glb1重组报告基因能够将Glb1转录水平与报告基因的转录水平显著性关联。一种制备转基因报告小鼠的方法，所述方法包括：将构建体引入小鼠胚胎干细胞或者小鼠生殖细胞，获得包括Glb1重组报告基因的小鼠胚胎干细胞或者小鼠生殖细胞；并且利用所述包括Glb1重组报告基因的小鼠胚胎干细胞或者小鼠生殖细胞生成杂合子转基因报告小鼠。其中，所述Glb1重组报告基因具有由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

摘要： 本发明提供了一种人DNMT1基因3’‑UTR的荧光素酶报告基因载体及其构建方法和应用，该荧光素酶报告基因载体包括荧光素酶报告基因载体和DNMT1基因的3’‑UTR区核苷酸片段，荧光素酶报告基因载体为pMIR‑REPORT™，DNMT1基因的3’‑UTR区核苷酸片段的核苷酸序列如下所示：该荧光素酶报告基因载体的构建方法，其包括如下步骤：将经限制性核酸内切酶酶切的DNMT1基因的3’‑UTR区核苷酸片段，通过连接酶，连接到经相同的限制性核酸内切酶酶切的荧光素酶报告基因载体中，通过筛选获得人DNMT1基因的3’‑UTR荧光素酶报告基因载体。

摘要： 本发明提供了一种基于猪NLRP6基因启动子区的双荧光素酶报告基因载体，属于基因工程技术领域，将NLRP6基因启动子连接到pGL3‑Basic质粒中，得到双荧光素酶报告基因载体；所述NLRP6基因启动子的核苷酸序列如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示。本发明明确了NLRP6基因启动子在NLRP6基因中的具体位置，将NLRP6基因启动子连接到pGL3‑Basic质粒中，得到双荧光素酶报告基因载体具有转录活性。

摘要： 本发明提供了一种用于监测gtfD和ftf基因水平表达上调的荧光素酶报告基因菌株、制备方法及其应用，涉及生物学技术领域。本发明所构建的用于监测gtfD和ftf基因水平表达上调的荧光素酶报告基因菌株能够通过检测荧光素的强弱来判断gtfD和ftf的表达情况，进而通过动态检测这两个基因表达可监测VicK磷酸酶的活性状态，以此来筛查阻断VicK磷酸酶活性的潜在小分子化合物或药物。本发明的荧光素酶报告基因菌株检测流程简单，技术敏感性低，同时能够大大节省检测时间和试剂成本。

摘要： 本发明公开用于体外筛选引起基因沉默药物的报告基因组、试剂盒及其应用，属于采用生物技术进行药物筛选技术领域。基于NGD过程，以及现有基因药物研发现状，将药物引起的NGD现象，构建一种报告基因组，其中，报告基因组包括：报告基因1：依次连接的泛素和报告基因A；报告基因2：依次连接的泛素、报告基因B、IRES和待降解蛋白编码区；报告基因A为荧光素酶基因、荧光蛋白基因或有色蛋白基因，报告基因B为荧光素酶基因、荧光蛋白基因或有色蛋白基因，报告基因A≠报告基因B。可实现体外筛选引起基因沉默的药物，最终达到治疗疾病的目的。

摘要： 本发明公开了一种含rfp报告基因的细菌基因敲除质粒及其应用，属于分子生物学领域。具体地，本发明提供一种质粒pBRR50，其含有庆大霉素抗性基因、mob接合转移元件、R6K复制起始位点、多克隆位点区和由点突变lac启动子控制的红色荧光蛋白编码基因rfp；所述lac启动子的碱基序列优选如SEQ ID NO.2所示。本发明还提供了上述质粒pBRR50的构建方法及应用，该质粒能高效表达红色荧光蛋白，使细菌在日光下呈现明显的红色。在基因敲除过程中，发生第一次同源重组的细菌具有庆大霉素抗性和红色菌落表型，发生第二次同源重组的细菌从红色恢复为原来的颜色，可根据菌落颜色对发生第二次同源重组的菌株实现直接的筛选。

摘要： 本发明公开了一种荧光报告基因元件、基因编辑监测系统及用途。所述基因元件包括依次连接的第一编码区、第二编码区和第三编码区；所述第一编码区包括第一荧光蛋白报告基因，所述第二编码区包括第二荧光蛋白报告基因，所述第三编码区包括第三荧光蛋白报告基因；所述第一荧光蛋白报告基因、第二荧光蛋白报告基因和第三荧光蛋白报告基因分别位于不同的阅读框中，以使仅一种荧光蛋白能正确表达。本发明的基因元件通过对目标DNA编辑结果进行实时监控，能确定最佳的编辑时间窗；通过对不同荧光发光细胞数量统计完成对目标DNA编辑结果的预测。此外，还能通过建立人源化细胞模型，进行疾病的基因治疗新技术的评估。