肝癌细胞

摘要： 目的探讨分心木乙醇提取物(Diaphragma juglandis fructus ethanol extract,DJFEE)通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的机制。方法以Huh7细胞为研究对象,采用不同浓度(50、100、200μg/mL)的分心木乙醇提取物处理Huh7细胞,分别为:空白对照组(Control)、分心木乙醇提取物低剂量组(L-DJFEE)、分心木乙醇提取物中剂量组(M-DJFEE)和分心木乙醇提取物高剂量组(HDJFEE)。然后采用200μg/mL的分心木乙醇提取物和10 mmol/L的Wnt/β-catenin激动剂氯化锂(LiCl)处理细胞,记为DJFEE组和DJFEE+LiCl组。噻唑蓝(MTT)、克隆形成实验检测Huh7细胞的增殖情况;Transwell小室检测Huh7细胞的迁移和侵袭能力;流式细胞术检测Huh7细胞的凋亡率;蛋白免疫印迹(Western blot)检测Huh7细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-14(MMP-14)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B型白细胞/2型淋巴细胞样蛋白(Bcl-2)、Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达。结果与空白对照组相比,分心木乙醇提取物低、中、高剂量组处理Huh7细胞后,降低细胞增殖、迁移和侵袭能力,增加细胞凋亡率,下调PCNA、MMP-9、MMP-14、Bcl-2、Wnt1和β-catenin蛋白表达,上调Cleaved caspase3、Bax蛋白。DJFEE+LiCl组的迁移细胞数目、侵袭细胞数目、PCNA、MMP-9、MMP-14、Bcl-2蛋白表达明显高于DJFEE组,细胞抑制率、细胞凋亡率、Cleaved caspase3、Bax蛋白表达明显低于DJFEE组。结论分心木乙醇提取物可以抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,其作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。

摘要： 为了研究黑果枸杞花青素(Anthocyanins from Lycium ruthenicum Murr,ALR)对人肝癌HepG2细胞凋亡与自噬相互作用的影响。将ALR与3-MA(自噬抑制剂)结合,采用Hoechst染色、流式细胞术、qRT-PCR和Western Blot法,测定人肝癌HepG2细胞核形态、凋亡率和凋亡因子(包括JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3)的mRNA表达及蛋白表达情况。将ALR与AG490(凋亡通路抑制剂)结合,使用qRT-PCR及Western Blot法检测人肝癌HepG2细胞自噬因子(LC3、LC3-Ⅱ)的mRNA表达及蛋白表达情况。结果表明:ALR结合3-MA后可诱导人肝癌HepG2细胞核出现明显的凋亡形态变化,提高人肝癌HepG2细胞凋亡率,显著抑制JAK2、STAT3的mRNA表达(P<0.05),显著抑制p-JAK2、p-STAT3的蛋白表达(P<0.05);ALR结合AG490后可显著提高LC3的mRNA表达及LC3-Ⅱ的蛋白表达(P<0.05)。综上所述,抑制细胞自噬可促进ALR诱导的人肝癌HepG2细胞凋亡,促进人肝癌HepG2细胞凋亡可增强细胞自噬。

摘要： 目的 探索α-常春藤皂苷协同雷公藤红素对SMMC7721肝癌细胞增殖和周期的影响。方法 MTT法检测细胞存活率,CompuSyn软件获取相互作用指数(CI)并筛选出最佳协同组合。流式细胞仪检测细胞凋亡和周期分布,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2、周期蛋白依赖性激酶(CDKs)和细胞周期蛋白(Cyclins)的表达。结果 单用α-常春藤皂苷或雷公藤红素均能抑制细胞增殖,且呈剂量依赖性;作用48 h后,当α-常春藤皂苷质量浓度为10.0μg/mL,雷公藤红素质量浓度为0.30μg/mL时,CI值为0.24,协同效应最佳。在以上质量浓度条件下,协同组早期凋亡率高于其余3组(P0.05);协同组CDK2和CDK4蛋白表达降低(P<0.05);雷公藤红素组和协同组Cyclin D1表达均升高(P<0.05);各给药组Cyclin E1表达均升高(P<0.05)。结论 α-常春藤皂苷协同雷公藤红素抑制SMMC7721细胞增殖效应确切,该效应可能与诱导G_(0)/G_(1)期周期阻滞、G_(1)+S期总比例增加有关,而Cyclin D1可能是参与其中的关键分子。

摘要： 目的:探讨橙皮素对体外培养的人肝癌细胞MHCC97H增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响,以及其作用机制。方法:用不同浓度的橙皮素处理MHCC97H细胞,采用细胞计数(CCK-8)实验检测橙皮素对细胞存活的影响,筛选合适的药物浓度,实验分为Con组(对照组)、HPT组(2.50μmol/L HPT)和HPT+LiCl组(2.50μmol/L HPT和10 mmol/L Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl),CCK-8和集落形成实验检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验分析细胞侵袭和迁移能力,采用Western blot分析相关蛋白表达情况。结果:在一定范围内随着橙皮素浓度的升高,对MHCC97H细胞存活率的抑制作用随之增加,计算得出橙皮素对MHCC97H细胞的半数抑制浓度(IC50)为4.77μmol/L,选择接近1/2 IC50浓度2.50μmol/L为后续实验加药浓度。橙皮素能够明显抑制MHCC97H细胞集落形成能力,促进细胞凋亡,阻碍细胞侵袭和迁移能力,上调剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3和-9的表达,下调基质金属蛋白酶(MMP)-2和-9的表达,抑制β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达,差异具有统计学意义(均P<0.05);加入LiCl能够部分逆转橙皮素对MHCC97H细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用,部分消除对细胞凋亡促进作用。结论:橙皮素能够抑制肝癌细胞增殖、侵袭和迁移,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。

摘要： 目的探究雷公藤红素(celastrol)诱导细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生在介导细胞DNA损伤中的作用及对肝癌细胞凋亡的影响。方法人肝癌细胞经雷公藤红素处理后,镜下观察细胞形态变化;MTT法测定肝癌细胞的存活率;Hoechst 33258染色观察肝癌细胞核变化;流式细胞术检测细胞死亡;CM-H2DCFDA探针检测细胞内ROS水平;免疫荧光方法检测细胞内DNA损伤标志蛋白γ-H2AX的荧光强度;Western blot检测γ-H2AX、caspase-3、PARP等蛋白表达水平。结果雷公藤红素可显著抑制肝癌细胞的存活,并可升高细胞内ROS水平,呈浓度依赖性关结论雷公藤红素可诱导肝癌细胞内ROS聚集,高水平的ROS引起细胞DNA损伤,最终诱导细胞凋亡。

摘要： 目的观察益气活血复方干预肝癌耐药细胞株HepG2/ADM多药耐药作用,研究其对微环境中P-pg蛋白的影响。方法MTT法检测益气活血复方对HepG2/ADM细胞增长抑制情况及对加入ADM、OXA、5-Fu、索拉菲尼后药敏性的影响,Western blotting法研究其对P-pg蛋白的影响。结果经益气活血方处理24~72 h,HepG2及HepG2/ADM抑瘤率均升高,与时间及浓度正相关,二者差异无统计学意义(P>0.05),分别加入ADM、OXA、5-Fu、索拉菲尼,抑制增殖效果仍明显,中、高剂量组较对照组差异有统计学意义(P<0.05)。随药物浓度增加,P-gp蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论益气活血复方可抑制HepG2/ADM的增殖,且能抑制ADM、OXA、5-FU、索拉菲尼的耐药性,其机制可能与降低肿瘤微环境中耐药相关基因P-gp蛋白有关。

摘要： 目的:探究微小RNA-7(miR-7)靶向缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对肝癌细胞迁移、凋亡及干细胞特性的影响。方法:采用慢病毒转染肝癌细胞MGCC97H,分为对照组、miR-7模拟物组、miR-7干扰组(转染miR-7模拟物组+干扰物)、HIF-1α过表达组(转染pc-HIF1α)和共转染组(转染miR-7模拟物+pc-HIF1α),RT-PCR检测各组细胞miR-7、HIF-1αmRNA表达量,免疫印迹检测各组HIF-1α蛋白的表达量,Transwell实验检测细胞迁移能力,流式细胞法检测细胞凋亡情况,软琼脂克隆形成实验分析其干细胞特性,荧光素酶实验验证miR-7与HIF-1α靶向关系。结果:miR-7模拟物组细胞HIF-1α蛋白表达、迁移率、克隆形成率低于对照组,凋亡率高于对照组;HIF-1α过表达组细胞迁移率、克隆形成率高于对照组,凋亡率低于对照组;共转染组HIF-1α蛋白表达、细胞迁移率、克隆形成率低于HIF-1α过表达组,凋亡率高于HIF-1α过表达组。结论:miR-7靶向HIF-1α可降低肝癌细胞迁移能力及干细胞特性,促进细胞凋亡,miR-7及HIF-1α可能是肝癌的潜在治疗靶点。

摘要： 目的探究黄芩素和汉黄芩素抑制肝癌细胞能量代谢的作用机制差异。方法将人肝癌HepG2细胞分为空白对照组(不给药)、黄芩素和汉黄芩素不同剂量组(均为1.25、2.5、5、10、20μmol/L),采用MTT法检测黄芩素和汉黄芩素对细胞活力的影响。将HepG2细胞分为空白对照组(不给药)、黄芩素组、汉黄芩素组,给药培养后,采用增强型ATP试剂盒检测细胞ATP浓度,采用糖酵解和线粒体压力测试试剂盒评价糖酵解及线粒体能量代谢水平;采用分子对接预测黄芩素和汉黄芩素与能量代谢关键酶的亲和力大小,筛选亲和力较高的能量代谢关键酶;采用Western blot法检测能量代谢关键酶的表达情况。结果在2.5~20μmol/L剂量范围内,黄芩素和汉黄芩素的半数抑制浓度分别为12.84、24.09μmol/L,且黄芩素1.25μmol/L、汉黄芩素2.5μmol/L对细胞活力基本无影响,筛选其为后续实验的给药剂量。与空白对照组比较,黄芩素组、汉黄芩素组HepG2细胞ATP浓度显著降低(P0.05);黄芩素与丙酮酸激酶M2、线粒体酶复合物Ⅰ(CⅠ)、CⅡ、CⅣ结合力较强,而汉黄芩素只与丙酮酸激酶M2的结合力较强;汉黄芩素能显著下调己糖激酶、磷酸果糖激酶、丙酮酸激酶M2、CⅠ、CⅡ、CⅣ蛋白的表达水平(P0.05)。结论黄芩素和汉黄芩素均能抑制肝癌HepG2细胞能量代谢,但作用机制不同:黄芩素的作用与影响关键酶活性有关,而汉黄芩素的作用与抑制能量代谢关键酶表达有关。

摘要： 目的研究红树林植物大红树内生真菌Phomopsis asparagi DHS-48发酵提取物中的化学成分及其对肝癌HepG2细胞的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法通过反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱等方法进行分离纯化,根据理化性质、波谱数据并结合参考文献鉴定化合物DD-38的结构;用不同浓度DD-38处理HepG2细胞,采用MTT比色法检测其对HepG2细胞增殖的抑制作用;平板克隆形成实验检测HepG2细胞克隆形成能力;细胞划痕实验观察HepG2细胞细胞的体外迁移能力;Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测β-catenin的表达水平。结果通过1H NMR、^(13)C NMR及MS等波谱学方法,结合相关文献数据,鉴定化合物结构为:dicerandrol A(DD-38);MTT实验显示,DD-38对HepG2细胞的增殖具有明显抑制作用,存在时间和剂量依赖性(P<0.05,P<0.01);根据细胞增殖率得出24 h时HepG2细胞的IC_(50)为(4.8273±0.2216)μmol/L;平板克隆形成实验显示,DD-38明显降低了HepG2细胞的克隆形成能力,具有剂量依赖性(P<0.01);细胞划痕实验表明DD-38可以显著降低HepG2细胞的迁移能力(P<0.01),加药24 h后,细胞迁移率从77.09%±2.16%降低到12.14%±5.32%;流式细胞术检测实验显示,DD-38可促进HepG2细胞凋亡,凋亡率存在剂量依赖性;Western blot实验显示,DD-38可抑制β-catenin蛋白在细胞质和细胞核中的表达(P<0.05和P<0.01)。结论DD-38可抑制HepG2细胞的增殖、迁移和克隆形成,促进细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。

摘要： 目的探讨苦参碱抑制肝癌细胞增殖并诱导其凋亡的分子机制,为研发以苦参碱为有效成分的抗肝细胞癌(HCC)药物建立理论依据。方法以HepG2和BEL-7404为实验细胞,不同质量浓度的苦参碱分别作用于两株细胞,CCK8法和Annexin V-PI双染法检测两株肝癌细胞增殖及凋亡能力,筛选出苦参碱作用HepG2和BEL-7404细胞的最佳质量浓度及时间。用Western blotting法检测各组细胞中P38MAPK/p-P38MAPK、JNK/p-JNK及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达。结果随着苦参碱质量浓度的增加,可明显抑制HepG2和BEL-7404肝癌细胞的生长,且苦参碱抑制两株细胞增殖和凋亡最显著的药物质量浓度为3 mg/mL,时间为24 h。质量浓度为3 mg/mL的苦参碱组分别与空白对照组、阳性对照组比较,P38MAPK和JNK蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05),而磷酸化的P38MAPK、JNK及Bax、Caspase-3的表达却显著增加(P<0.05),Bcl-2的表达明显减少(P<0.05)。结论苦参碱具有显著抑制肝癌细胞增殖及促进其凋亡的作用,可能机制是通过上调P38MAPK和JNK信号通路实现。

摘要： 目的：探讨内质网应激对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响及其机制. 方法：衣霉素(tunicamycin,TM）处理人肝癌细胞系SMMC-7721及HepG2,用Westren blot技术检测内质网应激指标Bip的表达;通过划痕实验及transwell侵袭小室实验检测衣霉素对肝癌细胞转移及侵袭能力的影响,Western blot技术检测衣霉素处理不同时间后,肝癌细胞转移相关指标VEGF-A、MMP-2及MMP-9的表达,以及Akt的表达及其磷酸化情况;内质网应激状态下,用wortmannin阻断Akt的活化,通过Western blot技术检测wortmannin对PI3K/Akt通路的抑制效果,划痕实验及transwell侵袭小室实验检测PI3K/Akt通路受阻对内质网应激诱导肝癌细胞转移及侵袭能力的影响. 结果：Western blot结果显示与相应0h相比，衣霉素处理肝癌细胞SMMC-7721及Hep G2不同时间后，Bip表达量均明显增强。与相应的对照组相比，衣霉素处理SMMC-7721及Hep G2细胞后，划痕实验结果显示其划痕修复率明显增强（P<0.05），transwell侵袭小室实验其穿膜细胞数均明显增多（P<0.05），Western blot证实衣霉素处理SMMC-7721及Hep G2细胞后，VEGF-A及MMP-9表达量均明显增强，Akt磷酸化水平均明显提高，但MMP2及Akt表达量不变。Western blot结果显示wortmannin及衣霉素联合应用后，肝癌细胞Akt的磷酸化水平基本恢复至未加药对照组水平；划痕实验结果显示与衣霉素组比较，wortmannin及衣霉素联合应用后肝癌细胞划痕修复率明显降低（P<0.05），transwell侵袭小室实验结果显示与衣霉素组比较，wortmannin及衣霉素联合应用后肝癌细胞穿膜细胞数明显减少（P<0.05）。 结论：PI3K/Akt信号通路参与内质网应激诱导肝癌细胞的迁移及侵袭。

摘要： 目的：观察姜黄素对人肝癌细胞HCC-LM3增殖和凋亡的影响并探究相关分子机制。 方法：分别用0、10、20、40μM浓度的姜黄素处理HCC-LM3细胞48h，以不加药组为对照组。通过CCK-8法检测细胞增殖，细胞克隆形成实验检测细胞的克隆能力，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot检测Mcl-1，Bax蛋白的表达水平。 结果：CCk-8检测结果显示姜黄素能够明显抑制HCC-LM3细胞的增殖，各加药组的增殖抑制率分别为(12.0±4.1)%、(61.2±5.3)%、(83.2±7.6)%，均高于对照组（P10μM时，HCC-LM3细胞克隆形成受到显著的抑制。流式结果显示姜黄素可诱导HCC-LM3细胞凋亡，且随着姜黄素作用浓度的增加，HCC-LM3细胞凋亡逐渐增加，各实验组凋亡率均高于对照组（P<0.05）。Western blot结果发现，经姜黄素作用后人肝癌细胞HCC-LM3中的Mcl-1蛋白表达降低（P<0.05），Bax蛋白表达增加（P<0.05），并呈浓度依赖性。 结论：姜黄素可抑制人肝癌细胞HCC-LM3的克隆、增殖，诱导HCC-LM3细胞凋亡。

摘要： 冷冻干燥是长期、有效保存细胞的手段之一.本文以肝癌细胞Hep-G2为研究对象,选取了不同体积分数的Me2SO、丙三醇及不同质量浓度的PVP、复方保护剂进行冷冻干燥保存,通过检测细胞回收率、存活率和24h贴壁率筛选出最佳保护剂配方.结果表明:添加40％PVP(w/v)+10％甘油(v/v)+15％FBS(v/v)+20％海藻糖(w/v)保护剂的细胞,在复水后回收率、存活率和24h贴壁率分别为29.58％、42.18％和18.71％,与对照组相比三项指标均得到有效提高,该种保护剂的效果最佳.

摘要： 目的：长链非编码RNA(Long non coding RNA,LncRNA)是一类长度大于200bp,不编码或极少编码蛋白的RNA,也在很多信号通路中,包括与糖尿病相关的胰岛素抵抗,起到关键的调控作用.URHC(up-regulated in hepatocellular carcinoma)是LncRNA家族中的一员,在肝癌的组织和癌旁组织中明显表达异常,显示参与细胞的凋亡,而在脂代谢中的作用尚未报道,本研究旨在阐明其在肝脏脂质代谢中的作用及其机制. 方法：1．利用Real time PCR的方法检测了人脂肪肝中URHC的表达水平；2．以肝癌细胞系HepG2为研究对象，转染URHC-siRNA48h后，使用Real time PCR检测URHC表达水平，以Western Blot检测胰岛素信号通路活性、糖原合成和糖异生水平。 结果：1．在人脂肪肝中URHC表达水平降低；2．在HepG2细胞中转染URHC-siRNA 48h后，URHC水平显著降低，AKT和GSK磷酸化水平降低。 结论：URHC能够调节肝细胞中胰岛素信号通路活性。

摘要： 目的：利用全基因组DNA甲基化芯片,检测蜈蚣提取物(Centipede Scolopendra extraction,CSE)处理后人肝癌细胞全基因组水平DNA甲基化谱情况,并对全基因表达谱芯片的差异基因进行注释系统(gene ontology,GO)分析.rn 方法：MTS法检测CSE对人肝癌细胞HCCLM3增殖的影响,并计算细胞增殖半数抑制率(IC50).以1/2IC50浓度的CSE连续处理72h,设置空白对照组.收集细胞提取基因组DNA,采用全基因组甲基化芯片进行基因组DNA甲基化检测,分析筛选甲基化差异性位点.rn 结果：(1)MTS检测结果显示,CSE以剂量依赖方式抑制人肝癌细胞的生长,IC50值为0.613mg/mL.(2)全基因组甲基化芯片检测结果显示:①经CSE处理72h时,CSE处理组与空白组甲基化谱发生了明显变化;初筛差异明显有意义的甲基化位点有:EPHB4、UTRN、DHX15、H19基因;②经5-Azacytudine处理72h时,5-Azacytudine组与CSE处理组比较甲基化谱差异,经过初筛,变化较为明显的位点有,FHL1、EIF4G1、DLX2、H19、EBF3基因.(3)对全基因表达谱芯片的差异基因进行注释系统(gene ontology,G0)分析,蜈蚣组与空白组比较总共有3847个基因表达水平发生了变化,其中上调1837个基因,下调2010个基因,GO分析结果发现这些改变发生在细胞线粒体、细胞膜以及胞浆中,参与代谢和转运等生物学过程.在Pathway分析结果中显示共有3个信号通路发生了显著性变化,具有显著性意义.

摘要： Monitoring the sensitivity of hepatoma carcinoma cell(HCC) to the inducers of ferroptosis.Method:The HCC cells Hep3B and LM3 are cultivated in DMEM(10 ％FBS,5 ％CO2,37°C),inducers of ferroptosis,RSL3,the inhibitor of GPX4,and Erastin,the inhibitor of systemX-c are used for 24hs.The count of cells used cell Tilter as manuscript,the invasion and the migration of cells used fluorescence microscope and HE stains.

摘要： 药物、成像剂及靶向基团是现代诊断治疗领域不可缺少的要素.已有部分研究利用高分子、无机纳米载体实现多要素一体化的纳米诊断治疗体系.但是,现有的一体化纳米诊断治疗体系是将上述三要素分别引入至纳米载体中,虽然能发挥它们间的协同作用,但是最终体系的组成和配方比例缺乏精确性,批次差别大,不利于进一步的临床转化研究.近来,两亲性药物单分子纳米自组装为上述问题提供了解决思路.四价铂化合物作为二价铂化合物的前药,其本身毒性很小,却可被激活成有抗癌活性的二价铂药,并且疏水性很强.基于此,将四价铂前药作为疏水基团连接上亲水性的乳糖靶向分子,合成得到结构明确、各组分比例确定的两亲性铂药单分子,其可进一步自组装成类脂质体的纳米自组装体.通过调节此两亲性铂药单分子连接乳糖靶向分子的个数,可获得不同的形貌的纳米自组装体,如胶束和囊泡.该多要素一体化的两亲性铂药单分子自组装体通过乳糖靶向肝癌细胞后,内吞进入细胞,在细胞内还原条件或外部光照条件下被激活成有抗癌活性的二价铂药,杀死癌细胞.同时,由于铂是重金属元素,可以通过药物介导的CT成像对该纳米自组装体进行活体成像示踪,实现精准癌症诊断治疗(Figure1).

摘要： 目的:观察消癌解毒方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721细胞中蛋白表达变化的影响.rn 方法:选择人肝癌SMMC-7721细胞作为实验对象,消癌解毒方含药血清作用人肝癌SMMC-7721细胞24h后,采用TMT肽段标记,质谱鉴定分析,运用IPA软件对结果进行生物信息学分析,观察用药前后各组蛋白质表达的差异,应用Western blot法检测Cytochrome C、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3蛋白的表达.rn 结果:共鉴定出3 025个蛋白点,消癌解毒方各剂量组与模型组相比差异表达明显的蛋白423个,其中消癌解毒方高剂量组负调控蛋白55个,正调控蛋白85个;消癌解毒方中剂量组负调控蛋白33个,正调控蛋白50个;消癌解毒方低剂量组负调控蛋白36个,正调控蛋白49个;顺铂组负调控蛋白38个,正调控蛋白77个.这些差异表达蛋白涉及脂质代谢、凋亡、氧化应激等方面.信号通路分析涉及Granzyme A Signaling、TR/RXR Activation等通路.Western blot结果显示消癌解毒方处理人肝癌SMMC-7721细胞24h后可引起Cytochrome C蛋白被释放,Cleaved-Caspase-3蛋白表达量上调,Caspase-3蛋白表达量下调.rn 结论:消癌解毒方作用于人肝癌SMMC-7721细胞有多靶点,多中心的调控作用,其中激活线粒体凋亡相关蛋白可能是其抑制肿瘤生长,诱导肿瘤凋亡的途径之一.

摘要： 目的:探讨线粒体损伤及氧化应激在Cr(Ⅵ)诱导Hep3B细胞凋亡的作用,及氧化剂NAC的干预效应. 方法:用MTT法检测细胞生存率;用流式细胞仪检测细胞凋亡;用彗星实验检测细胞DNA损伤;用qPCR和Western blot分别检测Cyt-c,Caspase-3和AIF mRNA和蛋白表达水平;用试剂盒检测Caspase-3、ROS和细胞膜电位. 结果:Cr(Ⅵ)处理Hep3B细胞可诱导ROS产生增加,导致细胞氧化应激反应,引起线粒体结构和功能改变,造成膜电位崩溃、释放Cyt-c等促凋亡因子,引发caspase级联反应或直接引起DNA断裂,导致细胞凋亡或坏死.caspase抑制剂Z-VAD未能阻抑Cr(Ⅵ)诱导Hep3B细胞凋亡;抗氧化剂NAC预处理对Cr(Ⅵ)诱导的细胞凋亡具有一定的干预作用. 结论:Cr(Ⅵ)能诱导caspase依赖/非依赖的线粒体损伤性细胞凋亡,而其中氧化应激反应是重要的作用机制.

摘要： 目的:探讨线粒体损伤及氧化应激在Cr(Ⅵ)诱导Hep3B细胞凋亡的作用,及氧化剂NAC的干预效应. 方法:用MTT法检测细胞生存率;用流式细胞仪检测细胞凋亡;用彗星实验检测细胞DNA损伤;用qPCR和Western blot分别检测Cyt-c,Caspase-3和AIF mRNA和蛋白表达水平;用试剂盒检测Caspase-3、ROS和细胞膜电位. 结果:Cr(Ⅵ)处理Hep3B细胞可诱导ROS产生增加,导致细胞氧化应激反应,引起线粒体结构和功能改变,造成膜电位崩溃、释放Cyt-c等促凋亡因子,引发caspase级联反应或直接引起DNA断裂,导致细胞凋亡或坏死.caspase抑制剂Z-VAD未能阻抑Cr(Ⅵ)诱导Hep3B细胞凋亡;抗氧化剂NAC预处理对Cr(Ⅵ)诱导的细胞凋亡具有一定的干预作用. 结论:Cr(Ⅵ)能诱导caspase依赖/非依赖的线粒体损伤性细胞凋亡,而其中氧化应激反应是重要的作用机制.

摘要： 本发明提供了一种诱导成体肝干细胞转化为高转移肝癌细胞的方法及以此方法筛选出的稳定肝癌细胞，方法包括如下步骤：S1：对大鼠成体肝干细胞进行扩增、培养并保存；S2：采用基因转染技术将含有Notch1基因的慢病毒载体转入大鼠成体肝干细胞，获得稳定过表达Notch1的大鼠成体肝干细胞；S3：利用稳定过表达Notch1的大鼠成体肝干细胞，采用选择性条件培养法进行培养，使其在体外进一步分化，筛选出致瘤能力强及稳定的肝癌细胞；S4：采用筛选出的肝癌细胞，通过同种属的原位肝脏移植瘤模型，可在肝脏形成肝癌，并伴自发形成双肺转移瘤，从而获得高转移肝癌细胞。采用本发明的方法筛选出的稳定肝癌细胞成瘤时间短、致瘤性好、具有肺转移能力。

摘要： 本发明公开了一种Luc‑GFP标记的高转移性人肝癌细胞株，是以肝癌细胞为母细胞，通过慢病毒转染包装有pCDH‑CMV‑Luc‑EF1‑GFP‑Puro的病毒液，再经嘌呤霉素筛选，获得稳定表达GFP并具有荧光素酶活性的高转移性人肝癌细胞株。利用本发明Luc‑GFP标记的高转移性人肝癌细胞，通过细胞悬液法和肿瘤组织块转接法分别建立裸鼠原位肝癌模型，其肝癌模型成瘤率均为100%，肺转移率分别100%和80%，为活体动物水平监控肿瘤的生长、评价抗肝癌转移药物的疗效奠定基础，具有较大的应用前景。

摘要： 本发明提供一种用于快速、稳定地培养原代肝癌细胞的原代肝癌细胞培养基和原代肝癌细胞培养方法。上述原代肝癌细胞培养基含有谷氨酰胺、非必需氨基酸、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子、IL‑6、表皮生长因子、胰岛素、Y27632、N2添加剂、B27添加剂、Primocin、青霉素和链霉素、胎牛血清、以及任选的氢化可的松、任选的R‑spondin1。由本发明的原代肝癌细胞培养基以及本发明的原代肝癌细胞培养方法得到的细胞模型，能够用于药物的疗效评估和筛选。

摘要： 本发明属于细胞治疗技术领域肝癌细胞技术领域，具体为一种促进肝癌细胞凋亡和抑制肝癌细胞增殖的方法。将肝癌细胞培养至80％融合，再进行传代培养，选用生长良好的传代细胞，用含有载虾青素海藻酸钙微球的细胞培养液培养细胞，最后进行实验组和对照组的细胞增殖、细胞凋亡及Real‑time PCR实验对比检测。在虾青素的干预下，肝癌细胞有明显的凋亡现象，且肝癌细胞增殖明显受到抑制，并且使肝癌细胞代谢过程中的糖酵解过程及三羧酸循环过程发生改变，总体表现出更强的抑制肝癌细胞增殖的功能。

摘要： 本发明涉及新藤黄酸在制备抑制肝癌细胞增殖、迁移和诱导肝癌细胞凋亡药物中的应用。新黄藤酸在制备抑制肝癌细胞增殖药物中应用的有效浓度为0.75～4.5μmol/L，在制备抑制肝癌细胞迁移药物中应用的有效浓度为0.0625～0.5μmol/L，在制备诱导肝癌细胞凋亡药物中应用的有效浓度为0.03125～8μmol/L。本发明对肝癌细胞系SK‑hep‑1进行常规培养，利用CCK8法，倒置显微镜分别检测不同浓度新藤黄酸对SK‑hep‑1细胞活力、细胞迁移能力及细胞凋亡的影响。实验结果充分证明了新藤黄酸在制备抑制肝癌细胞增殖、迁移和诱导肝癌细胞凋亡药物中的应用。

摘要： 本发明涉及紫檀芪在制备抑制肝癌细胞增殖和诱导肝癌细胞凋亡药物中的应用。本发明紫檀芪在制备抑制肝癌细胞增殖和诱导肝癌细胞凋亡药物中的应用的有效浓度为20～140μmol/L。本发明对肝癌细胞系HepG2进行常规培养，利用MTT法，倒置显微镜和流式细胞术，实时定量PCR和Western？blot等方法，分别检测不同浓度紫檀芪对HepG2细胞活力的影响、紫檀芪处理后HepG2细胞的凋亡情况、紫檀芪处理后Bax、Bcl-2、Fas、Cycs(细胞色素C)和Caspase3基因mRNA和蛋白表达情况。实验结果充分证明了紫檀芪在制备抑制肝癌细胞增殖和诱导肝癌细胞凋亡药物中的应用。同时作为天然物质提取物，紫檀芪将会在抗肿瘤的药物治疗领域具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明提供一种包含安卓幸醇(Antrocinol；(3aS,4R,6aS,10aR)‑4‑(羟甲基)‑7,7‑二甲基十氢‑1H‑萘酚[1,8a‑c]呋喃‑1‑酮)的组合物用于制备抑制肝癌细胞或肝癌干细胞生长的药物的用途，其中该组合物包含有效剂量的安卓幸醇。

摘要： 本发明提供了H基因或其表达产物在制备抑制肝癌细胞和肝癌干细胞耐药能力的药物中的应用。本发明的研究证明H基因或其表达产物是肝癌干细胞的标志物，H表达阳性的肝癌细胞具有侵袭能力强、自我更新能力强、耐药性强的干细胞特性。H基因敲降、使用抑制H基因表达的小分子抑制剂以及抑制H基因功能的功能性抗体可抑制H表达阳性的肝癌细胞的侵袭能力、自我更新能力以及耐药能力。根据以上研究成果，本发明提供了H表达阳性的肝癌干细胞的广泛应用。

摘要： 本发明公开了一种诱导肝癌细胞向肝癌干细胞转化的方法，包括以下步骤：将获得单细胞状态的人肝癌细胞，加入培养基中，制成细胞悬液；将细胞悬液滴加到多孔纤维素支架上，待细胞悬液渗入到多孔纤维素支架内部，置于细胞培养箱中培养贴附，然后再加入培养基置于细胞培养箱中培养数日，得到三维培养细胞；通过使用Western Blot、定量PCR、流式细胞术和IHC检测三维培养细胞中的肝癌干细胞标志分子EpCAM、OCT4、CD44和CD133表达情况的变化和（或）显微镜观察，检测转化的肝癌干细胞。本发明还公开了肝癌干细胞及其应用。本发明获得的肝癌干细胞具有耐药性。

摘要： 本发明提供了一种诱导成体肝干细胞转化为高转移肝癌细胞的方法及以此方法筛选出的稳定肝癌细胞，方法包括如下步骤：S1：对大鼠成体肝干细胞进行扩增、培养并保存；S2：采用基因转染技术将含有Notch1基因的慢病毒载体转入大鼠成体肝干细胞，获得稳定过表达Notch1的大鼠成体肝干细胞；S3：利用稳定过表达Notch1的大鼠成体肝干细胞，采用选择性条件培养法进行培养，使其在体外进一步分化，筛选出致瘤能力强及稳定的肝癌细胞；S4：采用筛选出的肝癌细胞，通过同种属的原位肝脏移植瘤模型，可在肝脏形成肝癌，并伴自发形成双肺转移瘤，从而获得高转移肝癌细胞。采用本发明的方法筛选出的稳定肝癌细胞成瘤时间短、致瘤性好、具有肺转移能力。