荧光蛋白

摘要： 随着工业的快速发展,汞离子被大量排放到环境中,造成了严重的环境污染。虽然加大了环境治理的力度,但已造成显著的生物毒性,严重的汞污染已对人类健康造成巨大威胁。该研究通过蛋白质工程技术,改变荧光蛋白mCherry发色团周围的环境,成功设计了一种荧光猝灭型的Hg 2+荧光生物传感器(mCherry L199C)。该荧光生物传感器可以快速、可逆的响应微摩尔级别的Hg 2+,并且具有较好的金属离子选择性和较强的抗干扰能力。利用蛋白质固定化技术开发了蛋白琼脂糖凝胶试纸,初步实现了汞污染的现场可视化检测。

摘要： 为分析湛蓝色荧光蛋白(marine fluorescent protein,MFP)作为蛋白防晒剂的可行性,通过PCR定点突变、原核表达和亲和层析纯化获得MFP,并通过UVB紫外线照射大肠杆菌存活实验初步分析了MFP吸收紫外线的能力,采用噻唑蓝法(thiazolyl blue tetrazolium bromide assay,MTT法)分析了MFP对细胞的毒理性.结果表明:MFP将250～400 nm波长的紫外线吸收后释放的荧光波长大于400 nm,吸收峰波长为280 nm(εmax280为3.27×104 L·mol-1·cm-1)和365 nm(εmax365为1.54×104 L·mol-1·cm-1);在大肠杆菌内表达MFP可提高菌株抗紫外线的能力;cMFP<5μmol/L时,MFP对TL-Om1细胞株基本没有毒性.因此,MFP可作为广谱防晒剂应用于防晒霜和防晒喷雾等,该结果为蛋白类防晒剂的开发奠定了一定的理论基础.

摘要： 为实现对H7N9禽流感病毒(AIV)感染过程的动态可视化示踪,本研究构建了重组报告质粒pHH21-NS-Venus、pHH21-NS-Apple和包含H7N9 AIV CK/SD008株的8个基因节段的重组质粒pHH21-PB2-627E、pHH21-PB2-627K(来自CK/SD008-627K株)、pHH21-PB1、pHH21-PA、pHH21-HA、pHH21-NA、pHH21-NP、pHH21-M.上述质粒均经测序鉴定.利用12质粒反向遗传操作系统,构建2株荧光报告病毒SD008-627E-Venus、SD008-627E-Apple,及E627K对哺乳动物嗜性的2株荧光报告病毒SD008-627K-Venus、SD008-627K-Apple.将这4株报告病毒感染A549细胞后在荧光显微镜下均可见相应荧光且病毒主要定位在细胞核中;将其中两株报告病毒SD008-627E-Venus/Apple经鸡胚传2代,2株SD008-627K-Venus/Apple在小鼠体内传3代后均感染A549细胞,经倒置荧光显微镜观察均可见相应荧光.上述结果表明4株报告病毒正确构建,且其可以在鸡胚或者小鼠体内传代(即SD008-627K-Venus/Apple为小鼠适应性报告病毒).将4株报告病毒与亲本病毒分别感染C57BL/6小鼠,进行小鼠致病性试验.结果显示,报告病毒SD008-627E-Venus/Apple与其亲本病毒SD008-627E的MLD50均>5 log10EID50/mL,且均对小鼠不致死;报告病毒SD008-627K-Venus/Apple与其亲本病毒SD008-627K的MLD50分别为1.6 log10EID50/mL、2.3 log10EID50/mL和1.8 log10EID50/mL;报告病毒SD008-627E-Venus/Apple与其亲本病毒SD008-627E感染小鼠的鼻甲、肺、脑、脾和肾的病毒滴度均106 EID50/mL,脑、脾和肾的病毒滴度均<102 EID50/mL.上述结果表明,构建的4株报告病毒均未改变亲本病毒对小鼠的致病性.利用噬斑试验,将报告病毒SD008-627K-Venus感染MDCK细胞,结果可见其能够引起细胞病变和表达荧光蛋白且荧光斑数量与噬斑数量相近.分别将报告病毒SD008-627K-Venus感染小鼠,3 d后取其肺脏研磨后制备单细胞悬液,经流式细胞术检测肺脏细胞表面的CD45分子及CD11b分子.结果显示,SD008-627K-Venus主要感染实质细胞(CD45-),很少感染免疫细胞(CD45+);且小鼠肺部免疫细胞(CD45+)增多,其中趋化的免疫细胞中主要为单核巨噬细胞和中性粒细胞(CD11b+).表明,报告病毒SD008-627K-Venus能够用于追踪小鼠体内病毒感染的细胞,并能够对感染细胞粗略分类.本研究构建了4株H7N9报告病毒,可用于H7N9 AIV感染及致病机理相关的研究,为该类病毒的相关研究提供了有力工具.

摘要： cqvip:细胞中的RNA种类繁多且功能复杂。荧光RNA是新兴的RNA标记颠覆性技术,其性能上的最新突破终于可以实现对活细胞中RNA的高分辨时空成像,不仅可以更加直观地了解RNA在细胞中的动态,同时也可为疾病诊断提供强有力的新工具。

摘要： 化学交联剂可用于研究蛋白质相互作用.分别以戊二醛和甲醛为交联剂,以Ni N T A Beads为固体介质,利用红色荧光蛋白(mCherry)和高可溶性绿色荧光蛋白(soluble GFP,sGFP)进行交联反应,通过激光共聚焦显微镜观察检测固体介质上双荧光强弱来判断交联效果并对交联效率进行评估,开发了一种快速、简便、高通量的体外初步筛选化学交联剂的荧光直观化检测新方法.结果表明:以戊二醛为交联剂时,最佳交联浓度为1.0％,交联效果显著,交联效率为95.6％;以甲醛为交联剂时,最佳交联浓度为1.5％,交联效果明显,交联效率为90.9％.通过激光共聚焦显微镜观察及交联效率评估,可以直观地检测到戊二醛、甲醛均使等比例mCherry和sGFP发生交联反应,与传统检测技术SDS-PAGE法的检测结果一致;并且对于戊二醛、甲醛作为交联剂的微量非等比例双分子荧光蛋白的交联反应,同样可以直观地检测到交联效果.该研究为体外检测荧光蛋白质交联反应中的化学交联剂的研究提供了一个简便、高效的直观化技术手段,同时也为体外初步大量快速筛选蛋白质交联反应化学交联剂提供了技术可能性.

摘要： 根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)能够将自身质粒上的部分DNA片段(简称T-DNA)以T-复合物的形式转运、整合至宿主基因组,而用作高效的植物转基因工具.vbp2是编码VBP蛋白的3个同源基因之一,VBP蛋白通过与T-复合物上的VirD2结合参与T-DNA的转运过程.根据生物信息学预测,vbp2基因的启动子区可能含有多个转录调控元件.通过同源重组的方法,将A.tumefaciens染色体上的vbp2基因替换成编码红色荧光蛋白的rfp基因,使vbp2的启动子控制rfp的表达,因此,可通过测定所表达的RFP的荧光强度来表征vbp2启动子的活性.结果表明:乙酰丁香酮(AS)和鼠李糖(Rha)均能诱导vbp2启动子表达RFP,AS和Rha的最佳诱导浓度分别为150μmol/L和100μmol/L.通过截短vbp2启动子DNA片段的方法,证明响应AS和Rha诱导的调控区域分别位于上游的165-260 bp和126-165 bp.

摘要： 将酿酒酵母的PSTL启动子用于启动细胞膜上STL蛋白,通过调控应答途径进而控制甘油/H+进入细胞,使得产甘油假丝酵母更高效的表达.构建了含有gfp报告基因的重组表达载体pET-PSTL1/PSTL2-gfp-zeocin-rDNA,转入大肠杆菌中复制后进行验证;电击转化将线性片段pET-PSTL1/PSTL2-gfp-zeocin-rDNA转入产甘油假丝酵母,以抗性基因zeocin为筛选标记,培养后进行荧光检测发现转入后的荧光强度明显加强.实验结果表明,酿酒酵母的PSTL启动子使得产甘油假丝酵母更高效的表达,从而产生更高的经济效益.

摘要： 细胞周期(cell cycle)是细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,细胞周期分为间期和分裂期。具体来说,分为DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)、DNA合成后期(G2期)与分裂期(M期)。肿瘤细胞能进行无限的增殖与分裂,主要与细胞周期失控有关,使其不受正常的生长调控。因而,关注肿瘤细胞周期的监测,对肿瘤的防治非常重要。根据药物与细胞周期的关系,可分为细胞周期依赖性药物(如博来霉素、依托泊苷、紫杉醇等)和细胞周期非依赖性药物(如环磷酰胺、顺铂、氮芥等)。将细胞阻滞在G2期的药物博来霉素,可以达到肿瘤的放疗增敏作用。荧光泛素化细胞周期指示系统(fluorescent ubiquitination-based cell cycle indicator,FUCCI)是将细胞周期特异性蛋白与荧光蛋白融合,通过荧光颜色标记细胞周期,可以实时观察活体细胞周期,在肿瘤细胞生物学中得到广泛的应用。

摘要： 神经递质是神经系统中至关重要的组成部分,神经递质释放的时间和空间变化是神经网络中信息处理的核心,可视化监测神经递质的生物传感器是探究各类生理和病理活动的重要工具.文中综述了近年来具有较高时间和空间分辨率的监测神经递质时空分布变化技术的研究进展,介绍了对谷氨酸、多巴胺、γ-氨基丁酸和乙酰胆碱这4类重要的神经递质的检测方法,并归纳总结了各类检测方法的基本原理和优缺点,为设计具有高时空分辨率的神经递质传感器提供一个较为系统的参考.

摘要： 荧光蛋白自发现以来,因其具有基因编码、可以自主发出稳健荧光的特点,在生命科学领域中发挥着重要作用.随着对荧光蛋白的结构和功能有了更清晰的认识,在蛋白质工程技术和有机合成迅速发展的基础上,科研工作者可以对荧光蛋白的结构进行设计改造和模拟,赋予其新的性质和功能,扩宽其在生物传感、生物成像等生命领域的应用.本文以绿色荧光蛋白的结构改造为主线,从局部结构改变、桶状结构重构和表面重构等不同层面阐述了荧光蛋白结构改造的方法以及荧光蛋白模拟物的研究进展,并介绍了这些荧光蛋白及其模拟物在生物领域的代表性应用.

摘要： 实验测得的荧光蛋白的单、双光子吸收光谱在低频和高频区域都表现出明显不同的特征.为了揭示这些不同点的起源和研究荧光蛋白的构-效关系,详细研究了三种荧光蛋白发色团(一种增强型蓝绿色荧光蛋白的中性发色团和两种红色荧光蛋白的阴离子发色团)的单、双光子吸收特性,分别计算了纯的和振动分辨的电子谱.计算结果表明:光谱线形与计算采用的交换相关密度泛函及谱截面计算所采用的近似关系密切;如果在计算光谱截面时,利用长程修正的交换相关泛函CAM-B3LYP来计算几何和电子结构参数,然后把Franck-Condon(FC)效应和包含Herzberg-Teller(HT)效果的电-声耦合效应都考虑进去,理论计算的光谱与实验测定的光谱可以很好地符合;对于两种离子态的发色团,HT电-声耦合效应使得对应于基态到第一激发态跃迁的双光子吸收最强峰相对于单光子吸收的最强峰发生了蓝移,但HT电-声耦合效应对高频的双光子吸收谱没有太大的影响;分子内电荷转移是导致高频区的双光子吸收明显强于单光子吸收的主要原因.

摘要： 目的：构建带有黄色/青色荧光蛋白标签的人Apelin受体(putative receptor protein related to the angiotensin receptor ATJ,APJ)真核表达载体,用于研究Apelin受体介导的下游信号通路及活化机制等. 方法：依据人Apelin受体基因序列设计引物,以pcDNA3.1-APJ为模板,利用重叠延伸PCR技术扩增目的片段,经酶切、连接、转化后,获取重组质粒.经酶切初步鉴定后,送上海生工测序.利用倒置荧光显微镜、激光共聚焦显微镜生物发光能量共振转移技术进一步验证重组质粒在HEK293T细胞中的表达. 结果：测序结果表明,PCR扩增片段与GenBank相同.倒置荧光显微镜显示重组质粒APJ-CFP与APJ-Venus均在细胞膜上表达.BRET结果表明,APJ-Venus与Venus-N1的荧光值无显著性差异. 结论：重组质粒APJ-CFP与APJ-Venus构建成功,且荧光蛋白的引入没有影响受体的表达.

摘要： 单核细胞增生李斯特茵的prfA基因编码一个温度控制启动蛋白,具有在37°C条件下启动下游基因表达的功能.为构建新型原核温控诱导表达载体,本研究利用PCR方法扩增prfA基因,并将其与EGFP或DsRed基因分别插入到pET28a和pUC19载体中,构建pET-prfA-EGFP和pUC-prfA-DsRed重组质粒.将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,在37°C条件下培养,利用激光共聚焦显微镜观测细菌中荧光蛋白的表达情况.结果表明,构建的两种重组质粒的荧光蛋白基因于37°C条件下,在受体茵中均获得有效表达,而30°C时则仅有微弱的本底荧光蛋白表达.本研究成功构建了以最适生理温度为单一诱导条件的温控表达的新型表达载体,为蛋白的表达与功能研究提供了新的平台.

摘要： 构建携带人环核苷酸门控离子通道基因(HCN4)、发育调控相关转录因子基因(Tbx3)及增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的慢病毒载体,获得可供转染的滴度,为进一步研究Tbx3对HCN4异位表达及细胞起搏功能的影响提供高效的慢病毒转基因平台。

摘要： 目的：应用AdEasy复制缺陷型腺病毒载体系统构建携带组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)基因的重组腺病毒载体.方法：采用分子克隆技术,在PC3细胞中提取RNA,利用RT—PCR技术克隆出LSD1基因的cDNA编码序列,先酶切连接插入腺病毒载体系统的穿梭载体pShuttle-IRES-hrGFP-2,获得重组质粒后将其转入含有pAdEasy-1病毒骨架的大肠杆菌BJ5183进行同源重组,获得重组子.经酶切鉴定后将该重组子转染入人胚胎肾细胞(HEK293细胞),经包装后获得含有LSD1基因的重组腺病毒.反复感染HEK293细胞扩增病毒,用荧光显微镜观测绿色荧光蛋白的表达.结果：成功构建出含有LSD1基因的腺病毒载体,转染后的HEK293细胞在荧光显微镜下显示绿色荧光蛋白表达,证明腺病毒载体pAd-LSD1构建成功,通过反复转染HEK293细胞以扩增病毒.结论：成功构建LSD1基因的腺病毒载体,可以检测LSD1在诸多癌细胞中的表达.

摘要： 目的：探讨慢病毒(Lentiviral)在不同转染复数、不同时间点转染人脐带华通胶间充质干细胞(UW-MSCs)的效率及其对细胞生长的影响。方法：用含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的Lentiviral(Lenti-EGFP),以感染复数(MOI)分别为5、10、50转染体外培养人脐带华通胶间充质干细胞,2d、7d、10 d时在荧光显微镜下观察EGFP的表达,检测子代细胞的活力、增殖倍数、分化情况,以评估慢病毒对UW-MSCs存活、增殖、分化能力的影响。结论：Lenti-EGFP能有效的转染UW -MSCs，随感染复数的增加和短期内随转染时间的延长，转染率和荧光指数明显增加，在转染过程中Lenti-EGFP对细胞的活力、生长无影响，对于改造UW-MSCs， Lentiviral是一种安全、有效的基因转移载体。

摘要： 目的:验证SFRP5对P-gp的调节作用及对白血病多药耐药性的影响.方法：采用转基因方法构建过表达SFRP5的KG1 a/SFRP5细胞及表达绿色荧光蛋白的KG1 a/eGFP细胞作为对照.采用real-time PCR检测KG1a、KG1 a/eGFP及KG1 a/SFRP5细胞mdr1 mRNA表达.采用Western blot检测KG1a、KG1 a/eGFP及KG1 a/SFRP5细胞P-gp表达.应用免疫荧光显微镜观察KG1a、KG1 a/eGFP及KG1 a/SFRP5细胞膜表面P-gp表达.

摘要： 本文阐述了绿色荧光蛋白的晶体结构和发光特性,以及荧光蛋白在异源细胞内能自发产生荧光,用于活细胞适时定位观察,研究外界信号刺激下蛋白的变化过程,获得自然真实状态.荧光蛋白成像技术使错综复杂的细胞结构和功能研究达到跟踪、定位、监测和动态观察.查明化学反应在细胞、组织间的传递过程.介绍了全光纤活体生物组织3D非线性光学内窥观察的主要优越性及其在生命科学、医学研究和药物开发中的应用.光量子光纤器件是指光动力治疗时光敏物质在光照下由基态激发所吸收的能量量子化,有利于促进细胞再生,提高疗效.将全光纤非线性光学内窥观察和光量子治疗光纤器件形成一体化集成系统.将实现重大疾病的早期检测、病灶的精确定位、靶向量子治疗与实时在线跟踪一体化.

摘要： 利用胚胎干细胞细胞特异性启动子构建荧光蛋白报告基因载体转染体细胞与干细胞，通过干细胞特异性启动子激活报告基因，观察报告基因的表达可以动态追踪干细胞分化过程中相关基因的表达情况。不仅有助于筛选能诱导干细胞体外特异分化的小子化合物以及具有发育毒性的药物，纯化特定的组织细胞，而且可以通过制作转基因动物模型和转基因猪来鉴定干细胞和追踪干细胞的分化。

摘要： 脂肪酸结合蛋白(FABPs)是一组多元性的低分子量细胞内蛋白质，分子量约为12～16kD。该蛋白家族是1971年美国加利福尼亚大学的Ocker等在研究大鼠的小肠脂肪酸吸收的调节时，在肠黏膜发现的。在动物水平上，H-FABP基因可作为影响禽畜肌间脂肪含量和肉质形状的候选基因。而肌间脂肪是形成肌肉风味的主要前体物质，与肉质及口感呈正相关，因为它影响肉质的嫩度、风味和多汁性，特别是肉的多汁性。而且该性状具有较高的遗传力，因此可以通过分子水平上的改造进而对动物肉质及风味口感进行改良，在动物改良育种上具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明提供了一种基于绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白的双荧光共定位系统。该组用于检测待测蛋白是否相互作用的融合蛋白，为如下1)和2)：1)由荧光蛋白A、待测蛋白A和核输出信号组成；2)由荧光蛋白B、待测蛋白B和核定位信号组成；所述荧光蛋白A与所述荧光蛋白B为发不同颜色荧光的荧光蛋白；所述1)所示融合蛋白片段与2)所示融合蛋白片段分别独立包装；所述待测蛋白A和待测蛋白B是待检测是否相互作用的两个蛋白。本发明方法检测结果可靠，操作简单，一目了然地看到共定位现象，易于判别，方便快捷。

摘要： 本发明公开了一种远红光荧光蛋白，所述远红光荧光蛋白包括BDFP近红外光荧光蛋白，并且包括在第113位氨基酸处的突变，且在第120位氨基酸处不发生突变，其中，所述BDFP近红外光荧光蛋白的氨基酸序列如SED ID NO：2所示。本发明进一步公开了一种包括该远红光荧光蛋白的融合荧光蛋白。本发明还公开了一种编码该远红光荧光蛋白或融合荧光蛋白的核酸，及包括该核酸的载体。

摘要： 本发明公开了一种β2微球蛋白与绿色荧光蛋白的融合蛋白，其氨基酸序列包括与SEQ ID No.1所示序列具有至少85％相同性的第一区和与SEQ ID No.2所示序列具有至少85％相同性的第二区；还公开了编码该融合蛋白的基因，含有该基因的重组表达载体，利用该重组表达载体制备该融合蛋白的方法，以及应用该融合蛋白检测抗原肽与MHC-I类分子的亲和力的方法；该检测方法操作简便快速，结果准确可靠，鉴定效率高，成本低，适用于大通量的CTL表位鉴定，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明提供了一种基于绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白的双荧光共定位系统。该组用于检测待测蛋白是否相互作用的融合蛋白，为如下1)和2)：1)由荧光蛋白A、待测蛋白A和核输出信号组成；2)由荧光蛋白B、待测蛋白B和核定位信号组成；所述荧光蛋白A与所述荧光蛋白B为发不同颜色荧光的荧光蛋白；所述1)所示融合蛋白片段与2)所示融合蛋白片段分别独立包装；所述待测蛋白A和待测蛋白B是待检测是否相互作用的两个蛋白。本发明方法检测结果可靠，操作简单，一目了然地看到共定位现象，易于判别，方便快捷。

摘要： 一种测量活细胞内青色荧光蛋白和黄色荧光蛋白浓度比的方法，该方法是利用三通道荧光共振能量转移显微镜测量活细胞内青色荧光蛋白和黄色荧光蛋白浓度比的方法，包括下列步骤：①测量三通道荧光共振能量转移显微镜漏过系数；②利用三通道荧光共振能量转移显微镜测量活细胞内CFP蛋白与YFP蛋白浓度之比。本发明方法的测量结果表明：校正了CFP和YFP荧光的串扰，校正了由于FRET的发生而引起的CFP荧光的减少和YFP荧光的增加，测量的结果稳定，标准误差比较小。

摘要： 本发明公开了一种远红光荧光蛋白，所述远红光荧光蛋白包括BDFP近红外光荧光蛋白，并且包括在第113位氨基酸处的突变，且在第120位氨基酸处不发生突变，其中，所述BDFP近红外光荧光蛋白的氨基酸序列如SED ID NO：2所示。本发明进一步公开了一种包括该远红光荧光蛋白的融合荧光蛋白。本发明还公开了一种编码该远红光荧光蛋白或融合荧光蛋白的核酸，及包括该核酸的载体。

摘要： 本发明涉及藻蓝蛋白类荧光蛋白质领域，具体为一种生产具有荧光活性和链霉亲和素标记的藻蓝蛋白类荧光蛋白质的方法及应用，通过将链霉亲和素合成基因、藻蓝蛋白亚基合成基因、催化酶合成基因、色基合成基因、标签合成基因等重组于同一表达质粒中，实现多基因的组合表达，通过对诱导、纯化条件的优化，制备具备稳定荧光活性的融合蛋白。采用单一质粒完成荧光活性融合藻胆蛋白的组合表达，避免多质粒在工程菌株中的稳定性及各基因表达的不同步问题，减少发酵过程中的抗生素的使用，有效提高了荧光蛋白质的稳定性，大幅降低藻蓝蛋白类荧光标记制剂的制作成本。在生物医学领域，尤其在荧光探针的生产方面具有良好的实用价值和应用前景。

摘要： 本发明公开了一种疏水蛋白‑荧光蛋白融合蛋白及其构建与应用，其构建为：(1)化学合成改良过的疏水蛋白mHGFI、荧光蛋白smURFP及HO‑1的核苷酸序列；(2)将荧光蛋白基因smURFP的核苷酸序列与HO‑1的核苷酸序列连接；再将疏水蛋白基因mHGFI的核苷酸序列和荧光蛋白基因smURFP与HO‑1基因的核苷酸序列连接得到融合序列；(3)将融合序列连接到大肠杆菌表达载体上，得到重组表达载体；(4)将重组表达载体转入宿主大肠杆菌中，得到重组大肠杆菌；(5)破菌后，通过Ni亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层蛋白纯化方法得到疏水蛋白‑荧光蛋白融合蛋白。本发明对从大肠杆菌中纯化出的融合蛋白进行凝血酶检测，与其他检测方法相比具有生产成本低、生产效率高、操作简便、反应迅速、检测特异性与灵敏度高的优势。

摘要： 本发明涉及生物工程领域，公开了一种融合蛋白表达载体。将谷氨酰胺转运蛋白2(SNAT2)C端与加强型绿色荧光蛋白(EGFP)的N端相连，构建在真核生物表达载体pBK-CMV(Δ[1098-1300])上，得到谷氨酰胺转运蛋白2-加强型绿色荧光蛋白融合蛋白表达载体。通过这种载体，可用激光共聚焦电子显微镜和利用GFP抗体通过蛋白免疫印记技术(Western blot)检测SNAT2在哺乳动物细胞(如HEK293T细胞)膜上的表达、定位及定量的方法。

摘要： 本发明公开了一种β2微球蛋白与绿色荧光蛋白的融合蛋白，其氨基酸序列包括与SEQ ID No.1所示序列具有至少85％相同性的第一区和与SEQ ID No.2所示序列具有至少85％相同性的第二区；还公开了编码该融合蛋白的基因，含有该基因的重组表达载体，利用该重组表达载体制备该融合蛋白的方法，以及应用该融合蛋白检测抗原肽与MHC－I类分子的亲和力的方法；该检测方法操作简便快速，结果准确可靠，鉴定效率高，成本低，适用于大通量的CTL表位鉴定，具有良好的应用前景。