腺病毒载体

摘要： 针对目前全球新冠疫情蔓延,国民打疫苗的意识也空前高涨,疫苗的生产也呈喷井式膨胀,疫苗厂房的洁净要求规范设计对于疫苗生产的安全生产环境尤为重要,在此背景下,分析某疫苗厂房中暖通设计要求,总结疫苗洁净厂房设计中的几点注意事项。

摘要： 以"新冠肺炎"创设真实情境,用"开学第一课"中陈薇院士抗疫故事导入新冠疫苗;学生分析资料并理清新冠疫苗的研发思路,并在教师设置的任务驱动下完成腺病毒载体疫苗的模型构建,从而认识新冠疫苗研发的重要性以及我国在抗疫中做出的巨大贡献,激发民族自豪感.

摘要： 基因治疗最初用于治疗遗传性疾病,随着基因工程技术的发展,它在恶性肿瘤、神经退行性疾病、心血管疾病等获得性疾病的治疗中取得良好的临床效果,多种治疗方法获得监管部门的批准上市.基因治疗的优势在于特异性强、靶向性高、效果显著.基因治疗所涉及的基因工程技术包括病毒载体技术、基因编辑技术以及细胞改造的嵌合抗原受体修饰的T细胞技术.本篇综述将探讨基因工程技术在基因治疗中的应用以及基因治疗在国内外的研究进展.

摘要： 目的 检测生理状态和病理性肥大时大鼠乳鼠心肌细胞(NRVM)内Kruppel样因子14(KLF14)的表达水平.构建大鼠KLF14腺病毒载体,感染大鼠NRVM稳定高表达KLF14,探讨其对心肌细胞肥大的影响.方法 根据NCBI数据库KLF14的序列合成并构建pHBAd-MCMV-RFP-KLF14重组质粒,PCR和测序鉴定后通过大肠杆菌扩增,在HEK 293细胞中包装成KLF14腺病毒.用KLF14腺病毒或阴性对照红色荧光蛋白(RFP)腺病毒感染NRVM,使用异丙肾上腺素(ISO)刺激NRVM诱导心肌细胞肥大,RT-PCR检测BNP和KLF14的表达水平.结果 PCR和测序鉴定证实KLF14腺病毒质粒构建成功.RT-PCR检测感染KLF14腺病毒可以显著上调KLF14在NRVM中的表达,增加ISO上调的BNP的表达.结论 生理情况下,KLF14在心肌细胞中低丰度表达,病理性肥大时表达升高.KLF14过表达促进ISO诱导的心肌细胞肥大.

摘要： 近日,我国首个腺病毒载体新冠疫苗获批附条件上市。该疫苗是目前国家批准上市的新冠疫苗中唯一可采取单针接种程序的疫苗。“疫苗年产能将达到5亿剂,截至目前,接种的人群没有发现与疫苗相关的严重不良反应。”作为该疫苗的研发者,全国政协委员、中国工程院院士、军事科学院军事医学研究院研究员陈薇难掩激动。2020年3月16日,陈薇团队研制的新冠病毒疫苗成为国内第一个获批正式进入临床试验的疫苗;2020年4月12日,该疫苗开展二期临床试验……疫情就是命令,抗疫战场就是履职现场。

摘要： 目的 探讨腺病毒介导的ING4基因表达对NCI-H460肺癌细胞裸鼠移植瘤的抑癌增效作月j及分子机制.方法 用Ad-ING4重组腺病毒在裸鼠NCI-H460移植瘤的瘤体内注射治疗,观察肿瘤生长变化,治疗结束后3d处死裸鼠、摘取瘤体并称瘤体重量;免疫组织化学检测瘤体组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2 (bcl-2)、生存素(Survivin)等相关因子的表达.组间数据比较采用t检验.结果 动物实验结果表明,Ad-ING4组的平均体积明显低于磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline,PBS)对照组(720.20±23.51,t=30.64,P＜0.05)和Ad-GFP空病毒组(469.90±32.57,t=14.43,P＜0.05),差异有统计学意义;平均瘤体重量明显低于Ad-GFP组(0.732±0.068,=9.26,P＜0.01)和PBS组(0.757±0.049,t=15.32,P＜0.05),差异有统计学意义;Ad-ING4重组腺病毒能显著抑制裸鼠NCI-H460移植瘤的生长,瘤重的抑制率达32.69％,与空病毒载体Ad-GFP组和细胞对照PBS组比较差异有统计学意义(P＜0.05);免疫组织化学结果显示Ad-ING4重组腺病毒能明显上调bax和Caspase-3蛋白的表达水平,下调bcl-2和Survivin蛋白的表达水平.结论 腺病毒介导的IL-24基因可明显抑制人肺癌细胞NCI-H460移植瘤的生长,诱导其凋亡,其分子机制可能与上调bax、Caspase-3等促凋亡因子的表达,下调bcl-2、Survivin等凋亡抑制因子的表达有关.

摘要： 她说,这个平台好比火箭发射平台,有了它,就能不断“发射”针对各种病毒的疫苗2021年2月25日,中国工程院院士、军事医学研究院研究员陈薇带领团队研发的重组新冠病毒疫苗(腺病毒载体)获批上市。次日是陈薇55岁的生日,接受央视主持人白岩松采访时,吔微笑着说,这是自己收到的“特别大的一个礼物”。6月3日,陈薇出席2021浦江创新论坛全体大会并发言。

摘要： 目的 探讨携带人抑瘤素M(OSM)重组腺病毒表达载体对A549人肺癌细胞生长的影响和抗肿瘤机制.方法 用最佳感染复数的病毒感染A549细胞,用荧光显微镜、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)法检测OSM在人肺癌细胞中的转录和表达;荧光显微镜观察A549细胞的形态学改变;噻唑蓝(MTT)法和FCM检测Ad-OSM对A549细胞的生长抑制和细胞凋亡的影响;半定量RT-PCR法检测OSM基因的表达对A549细胞中的B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、p53基因表达的影响.多组间均数比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA),两两比较采用q检验.结果 Ad-OSM组与Ad组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组比较,Ad-OSM对A549人肺癌细胞有明显生长抑制作用(-0.250±0.021,t=12.012,P＜0.05;-0.220±0.016,t=13.470,P＜0.05),Ad 组和 PBS 对照组差异无统计学意义(2.333±2.097,t=1.113,P＞0.05).用流式细胞仪检测细胞凋亡,Ad-OSM能明显诱导A549细胞凋亡,其中凋亡率可达20.6％,与Ad(2.5％)组和PBS组比较差异有统计学意义(17.800±0.627,t=28.380,P＜0.05;17.530±0.667,t=26.335,P＜0.05).RT-PCR 和 Western blot 法检测到OSM基因在A549细胞成功转录和表达;OSM基因表达对A549细胞增殖有明显抑制作用,并可诱导人肺癌细胞凋亡,OSM基因可通过上调细胞中bax、p53和下调bcl-2基因表达诱导细胞凋亡.结论 OSM基因可明显抑制A549人肺癌细胞生长,诱导其凋亡,该现象可能是通过改变bax、bcl-2、p53基因表达水平来发挥抗肿瘤作用.

摘要： cqvip:新型冠状病毒自2019年底以来在全球范围内持续传播,对全世界人类的身体健康和生产生活造成了严重的影响[1]。虽然佩戴口罩、保持安全的社交距离等公共卫生干预措施对于控制疫情起到了非常重要的作用,但目前普遍认为彻底结束此次疫情需要通过实现群体免疫,而接种疫苗是最安全有效的方法[2-3]。目前新冠疫苗采取了不同的技术路线,如核酸类疫苗、病毒载体类疫苗、基因工程重组疫苗、病毒灭活疫苗等。其中基于腺病毒载体技术研发的疫苗Ad5-nCoV、AZD1222、Ad26.COV2.S和Sputnik V均取得了较快的研究进展,但AZD1222和Ad26.COV2.S在大规模的接种中均被报道有少量血栓形成的病例出现[4],部分国家目前暂停了相关疫苗的接种工作,同一技术研发的其它疫苗也因此受到质疑。为更好地了解基于腺病毒载体技术研制的新型冠状病毒疫苗,本文对其特点及研发进展进行综述。

摘要： 目的:构建并鉴定绿色荧光蛋白标记的人骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)2和血管内皮生长因子(vascular endotheliel growth factor,VEGF)165双基因共表达的重组腺病毒,为研究该双基因对骨髓J间充质干细胞成骨方向诱导和体内骨缺损修复作用奠定基础.方法:从cDNA文库中PCR扩增BMP2和VEGF165目的基因,并将其插入腺病毒穿梭质粒pAd-MCMV-GFP的多克隆位点,将构建的重组穿梭质粒pAd-MCMV-BMP2-VEGF165和腺病毒辅助质粒pBHGloxAE1,3Cre共转染细胞HEK293细胞内,经历腺病毒基因重组及出毒后收集细胞,多次冻融离心获取病毒溶液(Ad-BMP2-VEGF165).进一步纯化并测定病毒滴度,随后通过转染兔骨髓间充质干细胞并检测BMP2和VEGF165双目的基因表达和倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达.结果:基因测序、菌落PCR,Western blotting、Real-time PCR、绿色荧光蛋白表达均表明载体Ad-BMP2-VEGF165构建成功,可稳定转染骨髓间充质干细胞内并稳定表达,经测定腺病毒载体滴度达到1×1010GPFU/ml.结论:携带人BMP2和VEGF165双基因共表达重组腺病毒载体构建成功,并能获得高滴度的病毒感染液.

摘要： 目的：应用AdEasy复制缺陷型腺病毒载体系统构建携带组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)基因的重组腺病毒载体.方法：采用分子克隆技术,在PC3细胞中提取RNA,利用RT—PCR技术克隆出LSD1基因的cDNA编码序列,先酶切连接插入腺病毒载体系统的穿梭载体pShuttle-IRES-hrGFP-2,获得重组质粒后将其转入含有pAdEasy-1病毒骨架的大肠杆菌BJ5183进行同源重组,获得重组子.经酶切鉴定后将该重组子转染入人胚胎肾细胞(HEK293细胞),经包装后获得含有LSD1基因的重组腺病毒.反复感染HEK293细胞扩增病毒,用荧光显微镜观测绿色荧光蛋白的表达.结果：成功构建出含有LSD1基因的腺病毒载体,转染后的HEK293细胞在荧光显微镜下显示绿色荧光蛋白表达,证明腺病毒载体pAd-LSD1构建成功,通过反复转染HEK293细胞以扩增病毒.结论：成功构建LSD1基因的腺病毒载体,可以检测LSD1在诸多癌细胞中的表达.

摘要： 目的：成功构建携带SFRP2基因的腺病毒载体.rn 方法：从pGBKT-SFRP2质粒中扩增人SFRP2基因,将SFRP2基因亚克隆至质粒穿梭载体pAd-Track-CMV.用脂质体转染法将重组腺病毒pAd-Track-PPARγ2-CMV和pAdEasy-1共转染293细胞,成功构建的重组腺病毒Ad-SFRP2,确定转染效率.原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞,利用Ad-SFRP2感染该细胞.通过RT-PCR和Western Blot分别检测感染后人瘢痕成纤维细胞及对照组细胞中SFRP2基因mRNA和蛋白表达水平.rn 结果：RT-PCR检测结果显示腺病毒Ad-SFRP2的PCR产物约为904bp,SFRP2mRNA表达水平明显增高;用抗SFRP2多克隆抗体进行Western blot检测为阳性,感染的充足腺病毒载体在人瘢痕成纤维细胞中SFRP2蛋白有较高的稳定表达.rn 结论：成功构建含有人SFRP2基因的重组腺病毒Ad-SFRP2;它可有效提高人增生性瘢痕成纤维细胞中SFRP2基因的表达水平.

摘要： 最近流感病毒大流行风险使得流感疫苗的免疫效力和安全性是一件非常重要的事情，20多年来腺病毒载体作为一种非常具有潜力的、用于治疗和疫苗研制的基因转移平台，其至今仍被为是最安全和最有效的疫苗载体。在腺病毒载体流感疫苗研制方面也取得了重大进展。

摘要： 参照GenBank上的F1L基因序列设计引物，PcR扩增羊传染性脓疱病毒儿sY04株DNA，并克隆到pMD18-T载体中，测序获得长1 011 bp的F1L基因序列。序列分析表明，该毒株F1L基因与Jilin、Nz2、Ov-T耐n0等毒株的核苷酸序列同源性为97．2％~99．7％。系统发育进化树分析结果表明，不同地区分离毒株的F1L基因差异不大。将F1L基因克隆至pshuttle 2载体，筛选阳性克隆并与腺病毒载体进行同源重组，电转化至DHloB感受态细胞，PCR筛选阳性克隆，进行酶切、测序鉴定。结果表明，成功构建了携带羊传染性脓疱病毒FlL基因的重组腺病毒栽体cTE434-1。本研究结果为羊传染性脓疱基因工程疫苗研究奠定了基础。

摘要： NRIP1(nuclear receptor interacting protein 1)是一种转录辅抑制因子，其可以通过与核受体结合对脂肪组织、肌肉组织等多种代谢组织的靶基因进行调节。本研究拟通过克隆秦川牛NRIPI基因并构建重组腺病毒载体，期望发现其对相关代谢基因的调控规律，为秦川牛改良或新品种的培育提供基础科研资料。

摘要： 通过细菌双杂交筛选得到了6个单锌指库和两个3锌指库;从两个3锌指库中分别PCR扩增得到左右两侧锌指，构建至酵母表达载体，在酵母中验证得到两对有效的ZFN;利用T2A序列将左右两侧ZFN，分步构建至pAdTrack-CMV上得到了pAdTrack-ZFNL-T2A-ZFNR穿梭载体，用PmeI线性化pAdTrack-ZFNL-2A-ZFNR载体并纯化后，与pAdEasy-1进行重组得到pAdEasy-ZFNL-2A-ZFNR载体。经酶切及测序鉴定以上载体都正确。本文成功构建得到了旨在敲除绵羊MSTN基因的锌指核酸酶腺病毒载体。

摘要： 目的：制备酶促式断裂PEG修饰的腺病毒-阴离子脂质体复合物(PPC-AL-Ad5)并考察其理化性质、转染效率、免疫反应和诱导产生抗体的能力.方法：首先合成酶促式断裂PEG脂质材料,接着制备PPC-AL-Ad5复合物.然后考察了复合物的粒径和在血清中的稳定性,研究了该复合物在细胞中的转染效率.最后评价了该基因传递载体静脉注射后产生抗体及免疫反应的水平.结果：成功制备了PPC-AL-Ad5复合物，在肿瘤细胞上其转染效率比普通PEG修饰的载体高，且降低了免疫反应和抗体的产生水平.结论：PPC-AL-Ad5具有高效、安全地传递肿瘤治疗基因的潜力.

摘要： 本文通过腺病毒载体在体转染大鼠颈总动脉球囊损伤模型,研究过表达腺嘌呤核苷酸转位酶-1(ANT-1)对血管平滑肌细胞凋亡的影响。

摘要： 本研究通过改造GP5基因，去除产生ADE效应的A表位构建重组腺病毒，为以后研究ADE产生机理及PRRS新型疫苗奠定基础。

摘要： 本研究旨在应用腺病毒载体,构建并筛选出针对A-FABP基因的有效siRNA序列,并包装为高滴度的腺病毒,为研究A-FABP基因功能及动物品质改良做铺垫.

摘要： 本发明实施例涉及一种基于黑猩猩腺病毒载体的重组载体、腺病毒、2019新型冠状病毒疫苗及其制备方法，所述重组载体经过线性化包装成重组腺病毒，该重组腺病毒在人群中预存免疫较低，只能在特定的细胞系中可以复制，因此重组腺病毒在感染动物和人后可以表达外源基因，但是在动物和人体内的正常细胞内也没有复制能力，作为疫苗使用十分安全。另外，该重组腺病毒具有表达抗原能力强、可以诱导很强的抗原特异性免疫反应和易于培养生产大规模应用等特点。更重要的是，包含腺病毒的2019新型冠状病毒疫苗对小鼠抵抗新冠病毒感染引起的肺炎起到了较好的保护作用。

摘要： 本发明公开了重组溶瘤腺病毒、用于制备该重组溶瘤腺病毒的重组溶瘤腺病毒载体及其构建方法和应用，所述重组溶瘤腺病毒载体的构建方法包括以下步骤：在腺病毒质粒中引入编码RGD肽的基因，构成靶向性骨架质粒；将shRNA抗肿瘤干细胞标志分子ALDH1A1的基因序列以及促凋亡基因PUMA的基因序列连接至第一穿梭质粒，构成第二穿梭质粒；将人端粒逆转录酶启动子连接至第二穿梭质粒，构成第三穿梭质粒；将第三穿梭质粒与靶向性骨架质粒在大肠杆菌中重组为重组溶瘤腺病毒载体；该方法构建出的重组溶瘤腺病毒载体线性化后转染至病毒包装细胞中进行包装、扩增、纯化后获得重组溶瘤腺病毒，从而能够有效的识别并杀死多种恶性肿瘤的肿瘤干细胞和普通肿瘤细胞。

摘要： 本发明提供一种构建重组腺病毒载体的方法，用C亚型人腺病毒基因组的E4基因序列改造AdC6的E4基因序列以提高重组腺病毒产量。以本发明的方法可构建得到非复制型腺病毒载体，可用作疫苗载体，实验证明可在其E1/E3/E4/Fiber/Hexon等区域插入外源基因，用于疫苗开发或基因治疗。以本发明的方法还可构建得到条件复制型腺病毒载体，即溶瘤病毒载体，并可在其△E3或E1或E4等区域插入了各种促进溶瘤的外源基因以增强溶瘤作用：实验证明所得重组溶瘤病毒可在多种肿瘤细胞中复制，并裂解肿瘤细胞；动物实验中重组溶瘤病毒都可有效抑制肿瘤进展，甚至清除肿瘤，表明其具有治疗肿瘤的潜力，可进一步向临床推进。

摘要： 本发明实施例涉及一种基于黑猩猩腺病毒载体的重组载体、腺病毒、2019新型冠状病毒疫苗及其制备方法，所述重组载体经过线性化包装成重组腺病毒，该重组腺病毒在人群中预存免疫较低，只能在特定的细胞系中可以复制，因此重组腺病毒在感染动物和人后可以表达外源基因，但是在动物和人体内的正常细胞内也没有复制能力，作为疫苗使用十分安全。另外，该重组腺病毒具有表达抗原能力强、可以诱导很强的抗原特异性免疫反应和易于培养生产大规模应用等特点。更重要的是，包含腺病毒的2019新型冠状病毒疫苗对小鼠抵抗新冠病毒感染引起的肺炎起到了较好的保护作用。

摘要： 本发明公开了重组溶瘤腺病毒、用于制备该重组溶瘤腺病毒的重组溶瘤腺病毒载体及其构建方法和应用，所述重组溶瘤腺病毒载体的构建方法包括以下步骤：在腺病毒质粒中引入编码RGD肽的基因，构成靶向性骨架质粒；将shRNA抗肿瘤干细胞标志分子ALDH1A1的基因序列以及促凋亡基因PUMA的基因序列连接至第一穿梭质粒，构成第二穿梭质粒；将人端粒逆转录酶启动子连接至第二穿梭质粒，构成第三穿梭质粒；将第三穿梭质粒与靶向性骨架质粒在大肠杆菌中重组为重组溶瘤腺病毒载体；该方法构建出的重组溶瘤腺病毒载体线性化后转染至病毒包装细胞中进行包装、扩增、纯化后获得重组溶瘤腺病毒，从而能够有效的识别并杀死多种恶性肿瘤的肿瘤干细胞和普通肿瘤细胞。

摘要： 本发明提供了一种联合使用痘病毒载体HIV疫苗与腺病毒载体HIV疫苗的方法，具体为联合使用痘病毒载体HIV疫苗与腺病毒载体HIV疫苗免疫机体。该方法可以先使用痘病毒载体HIV疫苗免疫机体，再使用腺病毒载体HIV疫苗免疫机体；也可以先使用腺病毒载体HIV疫苗免疫机体，再使用痘病毒载体HIV疫苗免疫机体。本发明还提供了上述联合使用痘病毒载体与腺病毒载体的方法应用在预防性和治疗性HIV疫苗领域，以预防和治疗艾滋病以及预防和控制乙肝、埃博拉病毒和肿瘤中。本发明的方法能诱发更强烈、更广谱和多功能性的T淋巴细胞反应，可以普遍用于预防和治疗艾滋病，以及预防和控制其它传染性疾病和肿瘤。

摘要： 本发明公开了一种表达非洲猪瘟病毒p72、B602L蛋白的重组腺病毒载体、重组腺病毒及构建方法，该重组腺病毒感染细胞后可以同步表达非洲猪瘟p72、B602L蛋白，B602L通过自裂解2A信号肽与p72串联表达。本发明构建了能同时表达p72、B602L蛋白的重组腺病毒载体，使用该载体与腺病毒骨架系统共转染细胞后获得可表达非洲猪瘟病毒p72、B602L蛋白的重组腺病毒，使用该重组腺病毒免疫试验动物后可以刺激试验动物产生特异性的抗体，为非洲猪瘟疫苗的开发提供了新的试验数据。

摘要： 本发明公开了一种表达非洲猪瘟病毒p34基因的重组腺病毒载体、重组腺病毒、方法及应用，其中，所述表达非洲猪瘟病毒p34基因的重组腺病毒载体包括腺病毒骨架载体和插入腺病毒骨架载体多克隆位点的非洲猪瘟病毒p34基因，所述p34基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述腺病毒骨架载体为pAd5；其中，所述重组腺病毒由本发明所公开的重组腺病毒载体转染哺乳动物细胞所获得。本发明首次利用重组腺病毒表达系统表达非洲猪瘟病毒的p34蛋白，实现了p34蛋白的高水平表达，为非洲猪瘟病毒核酸疫苗的研制提供了病毒模型，为进一步开发基因工程疫苗奠定了基础。

摘要： 本发明提供了一种表达非洲猪瘟病毒EP402R基因重组腺病毒载体、构建方法及重组腺病毒制备方法，属于基因工程技术领域。本发明提供一种表达EP402R基因重组腺病毒质粒pAD‑EP402R，以pAD‑EF1α‑GFP腺病毒表达载体为基础，在多克隆位点处引入EP402R基因。本发明还提供了表达EP402R基因的重组腺病毒的制备方法，利用构建得到的pAD‑EP402R质粒与腺病毒包装体系PEI混合，实现腺病毒包装过程，得到能够直接感染真核细胞的重组腺病毒，从而实现了EP402R基因在真核细胞中正常表达的目的，为研究表达EP402R基因重组腺病毒载体候选疫苗奠定基础。

摘要： 本发明提供了一种表达非洲猪瘟病毒EP153R基因重组腺病毒载体、构建方法及重组腺病毒制备方法，属于基因工程技术领域。该方法利用腺病毒穿梭载体 pKO‑FH、pAD‑EF1a‑GFP，经一系列中间过程，得到重组腺病毒表达质粒pAD‑EP153R。将最后得到的线性化重组腺病毒载体质粒转染 HEK293 细胞；根据腺病毒感染形成的细胞病变筛选重组病毒，最终实现腺病毒包装过程，并通过扩增、浓缩和鉴定得到能够直接感染真核细胞的重组腺病毒，从而实现了EP153R基因在真核细胞中正常表达的目的，为研究基于表达EP153R的腺病毒载体疫苗奠定基础。