APJ-CFP/Venus重组质粒的构建及其在HEK293T细胞中的表达

摘要

目的：构建带有黄色/青色荧光蛋白标签的人Apelin受体(putative receptor protein related to the angiotensin receptor ATJ,APJ)真核表达载体,用于研究Apelin受体介导的下游信号通路及活化机制等. 方法：依据人Apelin受体基因序列设计引物,以pcDNA3.1-APJ为模板,利用重叠延伸PCR技术扩增目的片段,经酶切、连接、转化后,获取重组质粒.经酶切初步鉴定后,送上海生工测序.利用倒置荧光显微镜、激光共聚焦显微镜生物发光能量共振转移技术进一步验证重组质粒在HEK293T细胞中的表达. 结果：测序结果表明,PCR扩增片段与GenBank相同.倒置荧光显微镜显示重组质粒APJ-CFP与APJ-Venus均在细胞膜上表达.BRET结果表明,APJ-Venus与Venus-N1的荧光值无显著性差异. 结论：重组质粒APJ-CFP与APJ-Venus构建成功,且荧光蛋白的引入没有影响受体的表达.