293T细胞

摘要： 采用L型大泡通气系统机械搅拌式生物反应器培养293T悬浮细胞和规模化生产慢病毒载体,通过4种方法驯化293T悬浮细胞,对其慢病毒包装能力进行验证,并建立种子扩增链,在5.5 L工作体积生物反应器中绘制悬浮细胞生长曲线和包装慢病毒.结果表明,采用体积分数50％的293 CD05 Medium无血清基础培养基和体积分数50％的SMM293-TⅡ培养基可以快速驯化293T细胞,成功得到野生型且具有慢病毒包装能力的悬浮细胞系.悬浮细胞在机械搅拌式生物反应器培养,2 d细胞密度可达1.5×106个·mL-1.添加质粒复合物和补料培养基,培养4 d可以收获6.5×107 TU·mL-1滴度的慢病毒粗产品,相比细胞工厂的滴度提高34倍.

摘要： 目的 构建法尼基二磷酸法尼基转移酶1(farnesyl diphosphate farnesyl transferase 1,FDFT1)基因重组质粒并在人胚肾上皮细胞(293T)验证质粒表达.方法 设计FDFT1基因引物并经两次PCR扩增获取FDFT1目的基因;用相应的限制性内切酶将pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP(pCDH-GFP)质粒线性化;FDFT1基因及线性化载体经纯化后以同源重组反应连接构建重组质粒;重组质粒通过菌落PCR、双酶切验证并测序做进一步验证;在293T细胞中利用三质粒共转染法包装FDFT1目的质粒并收集含病毒的上清液;以病毒液感染293T细胞验证FDFT1基因表达.结果 菌落PCR及双酶切说明目的基因成功插入载体质粒,测序结果 说明重组质粒中FDFT1基因与NCBI中登记的相应基因同源.构建成功的pCDH-GFP-FDFT1质粒包装为慢病毒后感染293T细胞,可检测到细胞中FDFT1基因表达与对照病毒感染相比升高15.13倍.结论 本研究成功构建高表达FDFT1基因的重组慢病毒表达载体,为进一步研究FD-FT1基因在肿瘤中的作用机制提供了实验基础.

摘要： 为了构建布鲁氏菌16M BtpA和BtpB真核表达载体,便于深入研究其在布鲁氏菌逃逸宿主免疫机制中发挥的作用.根据GenBank公布的布鲁氏菌16M BtpA和BtpB序列设计了特异性引物,并提取布鲁氏菌16M总RNA,将其逆转录成cDNA为模板,进行了PCR扩增,获得BtpA和BtpB目的片段,连接至pMD18-T进行克隆纯化,再与pcDNA3.1载体进行连接,经PCR、酶切和测序分析等方法鉴定后,利用LipofectamineTM2000脂质体转染至293T细胞,Western blot检测BtpA和BtpB蛋白的表达.结果显示,PCR扩增出了873 bp的BtpA基因片段和924 bp的BtpB基因片段,依次连至克隆载体pMD18-T和真核表达载体pcDNA3.1,经限制酶EcoRⅠ和XbaⅠ酶切验证正确,测序分析显示与GenBank公布的序列信息完全一致;Western blot检测结果显示,pcDNA3.1-BtpA-HA和pcDNA3.1-BtpB-HA分别在32 ku和35 ku处出现了条带,与预期结果完全相符,说明能在293T细胞中表达.成功构建了pcDNA3.1-BtpA-HA和pcDNA3.1-BtpB-HA真核表达载体,并证实了其能在293T细胞中表达,为后续研究其作用与机制提供了材料.

摘要： 目的:构建携带小鼠Toll样受体2(TLR2)编码基因的重组慢病毒,并在人胚肾上皮细胞系HEK293T(简称293T)细胞中验证重组慢病毒TLR2基因的表达.方法:根据小鼠TLR2编码基因序列,构建含有小鼠TLR2编码基因的重组表达质粒(pCDH-CMV-TLR2-EF1a-GFP-puro),并对阳性克隆进行酶切和测序鉴定.TLR2重组质粒经慢病毒包装、扩增、浓缩获得TLR2重组慢病毒.以慢病毒液感染293 T细胞以验证TLR2基因的表达.结果:获得携带小鼠TLR2基因的重组慢病毒,并成功在293 T细胞系表达.结论:成功构建表达小鼠TLR2基因的重组慢病毒,为后期研究TLR2分子在免疫细胞中的作用及信号传导提供了基础.

摘要： 目的 构建特殊富含AT序列结合蛋白2(Satb2)基因慢病毒表达载体并通过感染293T细胞检测目的基因的表达.方法 采用PCR技术扩增目的基因Satb2,并在目的基因的上下游分别添加酶切位点PacⅠ和AscⅠ,将其PCR产物和目的载体用PacⅠ和AscⅠ分别进行双酶切,通过T4 DNA ligase连接酶切后的PCR产物及目的载体,构建pLenti6.3-Satb2-IRES-EGFP慢病毒表达载体,通过菌液PCR、酶切及测序鉴定其结果;将阳性克隆质粒与包装质粒Mix共转染293T细胞,收集、浓缩病毒液并测定其浓度;将重组病毒液感染293T细胞,观察其荧光表达情况,通过qPCR检测目的基因表达.结果 菌液PCR结果得到一条约2202 bp的亮带,与目的基因大小相符;重组载体经过双酶切得到一条9.1 kb大片段及一条2202 bp小片段;通过测序验证重组载体中Satb2基因序列与GenBank报道的序列完全一致,表明慢病毒表达载体构建成功.经过包装,重组慢病毒滴度达到7.9×107 ifu/mL,该病毒液感染293T细胞后可观察到大量荧光,感染率约为70％,通过qPCR检测结果显示实验组Satb2 mRNA的表达量增加了约106倍(P<0.05).结论 本实验成功构建pLenti6.3-Satb2-IRES-EGFP慢病毒表达载体并包装出具有感染能力的慢病毒,为进一步研究该基因在牙周支持组织再生中的作用奠定基础.

摘要： 目的 以胶原水凝胶为三维细胞培养支架,结合病毒学实验技术,构建能长时间体外三维培养腺病毒的模型,为病毒分离鉴定、致病机制研究、药物筛选等提供新的研究方法.方法 扫描电镜(SEM)表征胶原水凝胶的结构特征,以胶原水凝胶为三维支架材料进行293T细胞培养,并感染腺病毒.用倒置显微镜观察3D培养293T细胞的形态特征;MTS法检测腺病毒感染前后细胞的增殖活性;透射电镜(TEM)观察三维培养293T细胞中的腺病毒颗粒,并用qPCR检测在胶原水凝胶三维培养293T细胞中腺病毒的增殖情况以及复制子的感染性.结果 293T细胞在胶原水凝胶三维培养系统中能长时间良好生长.腺病毒感染持续时间长,有多个增殖峰.在此3D系统中增殖的腺病毒颗粒仍具有感染性.结论 以胶原水凝胶为支架构建的腺病毒三维培养系统能长时间维持腺病毒的持续增殖,更接近体内感染情况,胶原水凝胶可作为腺病毒分离、培养和研究的三维培养支架材料.

摘要： 目的以胶原水凝胶为三维细胞培养支架,结合病毒学实验技术,构建能长时间体外三维培养腺病毒的模型,为病毒分离鉴定、致病机制研究、药物筛选等提供新的研究方法。方法扫描电镜(SEM)表征胶原水凝胶的结构特征,以胶原水凝胶为三维支架材料进行293T细胞培养,并感染腺病毒。用倒置显微镜观察3D培养293T细胞的形态特征;MTS法检测腺病毒感染前后细胞的增殖活性;透射电镜(TEM)观察三维培养293T细胞中的腺病毒颗粒,并用qPCR检测在胶原水凝胶三维培养293T细胞中腺病毒的增殖情况以及复制子的感染性。结果293T细胞在胶原水凝胶三维培养系统中能长时间良好生长。腺病毒感染持续时间长,有多个增殖峰。在此3D系统中增殖的腺病毒颗粒仍具有感染性。结论以胶原水凝胶为支架构建的腺病毒三维培养系统能长时间维持腺病毒的持续增殖,更接近体内感染情况,胶原水凝胶可作为腺病毒分离、培养和研究的三维培养支架材料。

摘要： 绵羊肺腺瘤病毒(exogenous Jaagsiekte sheep retrovirus exJSRV)是引起绵羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenomatosis,OPA)的病原.JSRV具有相互重叠的gag、pro、pol、env的反转录病毒典型的基因结构,其中env基因编码病毒的囊膜蛋白(ENV),ENV主要负责病毒粒子与病毒的靶细胞的特异性结合,同时发生膜融合使病毒粒子侵入靶细胞内.为了进一步探索exJSRV囊膜蛋白的结构与功能,从而揭示绵羊肺腺瘤病的发病机理.本研究以绵羊腺瘤病的病肺组织为原料，提取总RNA并反转录为cDNA，以此cDNA为模板，F-env，R-env1，R-env2为引物，利用半巢式PCR扩增目的基因，胶回收纯化PCR产物并与真核表达载体pcDNA3.1(+)均用kpnl和XbaⅠ限制性内切酶进行双酶切。结果表明质粒单、双酶切和测序结果证明本试验构建的pcDNA3.1(+)/exjSRV-env重组质粒的DNA序列完全正确，将其瞬时转染293T细胞后，裂解细胞并提取总RNA，利用RT-PCR技术，琼脂糖凝胶电泳检测到目的基因env片段约2000bp，与预期大小一致。而阴性对照与空白对照组均无条带。说明pcDNA3.1(+)/exjSRV-env真核表达质粒构建成功，并能在293T细胞内表达。

摘要： 绵羊肺腺瘤病毒(exogenous Jaagsiekte sheep retrovirus exJSRV)是引起绵羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenomatosis,OPA)的病原.JSRV具有相互重叠的gag、pro、pol、env的反转录病毒典型的基因结构,其中env基因编码病毒的囊膜蛋白(ENV),ENV主要负责病毒粒子与病毒的靶细胞的特异性结合,同时发生膜融合使病毒粒子侵入靶细胞内.为了进一步探索exJSRV囊膜蛋白的结构与功能,从而揭示绵羊肺腺瘤病的发病机理.本研究以绵羊腺瘤病的病肺组织为原料，提取总RNA并反转录为cDNA，以此cDNA为模板，F-env，R-env1，R-env2为引物，利用半巢式PCR扩增目的基因，胶回收纯化PCR产物并与真核表达载体pcDNA3.1(+)均用kpnl和XbaⅠ限制性内切酶进行双酶切。结果表明质粒单、双酶切和测序结果证明本试验构建的pcDNA3.1(+)/exjSRV-env重组质粒的DNA序列完全正确，将其瞬时转染293T细胞后，裂解细胞并提取总RNA，利用RT-PCR技术，琼脂糖凝胶电泳检测到目的基因env片段约2000bp，与预期大小一致。而阴性对照与空白对照组均无条带。说明pcDNA3.1(+)/exjSRV-env真核表达质粒构建成功，并能在293T细胞内表达。

摘要： 绵羊肺腺瘤病毒(exogenous Jaagsiekte sheep retrovirus exJSRV)是引起绵羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenomatosis,OPA)的病原.JSRV具有相互重叠的gag、pro、pol、env的反转录病毒典型的基因结构,其中env基因编码病毒的囊膜蛋白(ENV),ENV主要负责病毒粒子与病毒的靶细胞的特异性结合,同时发生膜融合使病毒粒子侵入靶细胞内.为了进一步探索exJSRV囊膜蛋白的结构与功能,从而揭示绵羊肺腺瘤病的发病机理.本研究以绵羊腺瘤病的病肺组织为原料，提取总RNA并反转录为cDNA，以此cDNA为模板，F-env，R-env1，R-env2为引物，利用半巢式PCR扩增目的基因，胶回收纯化PCR产物并与真核表达载体pcDNA3.1(+)均用kpnl和XbaⅠ限制性内切酶进行双酶切。结果表明质粒单、双酶切和测序结果证明本试验构建的pcDNA3.1(+)/exjSRV-env重组质粒的DNA序列完全正确，将其瞬时转染293T细胞后，裂解细胞并提取总RNA，利用RT-PCR技术，琼脂糖凝胶电泳检测到目的基因env片段约2000bp，与预期大小一致。而阴性对照与空白对照组均无条带。说明pcDNA3.1(+)/exjSRV-env真核表达质粒构建成功，并能在293T细胞内表达。

摘要： 绵羊肺腺瘤病毒(exogenous Jaagsiekte sheep retrovirus exJSRV)是引起绵羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenomatosis,OPA)的病原.JSRV具有相互重叠的gag、pro、pol、env的反转录病毒典型的基因结构,其中env基因编码病毒的囊膜蛋白(ENV),ENV主要负责病毒粒子与病毒的靶细胞的特异性结合,同时发生膜融合使病毒粒子侵入靶细胞内.为了进一步探索exJSRV囊膜蛋白的结构与功能,从而揭示绵羊肺腺瘤病的发病机理.本研究以绵羊腺瘤病的病肺组织为原料，提取总RNA并反转录为cDNA，以此cDNA为模板，F-env，R-env1，R-env2为引物，利用半巢式PCR扩增目的基因，胶回收纯化PCR产物并与真核表达载体pcDNA3.1(+)均用kpnl和XbaⅠ限制性内切酶进行双酶切。结果表明质粒单、双酶切和测序结果证明本试验构建的pcDNA3.1(+)/exjSRV-env重组质粒的DNA序列完全正确，将其瞬时转染293T细胞后，裂解细胞并提取总RNA，利用RT-PCR技术，琼脂糖凝胶电泳检测到目的基因env片段约2000bp，与预期大小一致。而阴性对照与空白对照组均无条带。说明pcDNA3.1(+)/exjSRV-env真核表达质粒构建成功，并能在293T细胞内表达。

摘要： 绵羊肺腺瘤病毒(exogenous Jaagsiekte sheep retrovirus exJSRV)是引起绵羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenomatosis,OPA)的病原.JSRV具有相互重叠的gag、pro、pol、env的反转录病毒典型的基因结构,其中env基因编码病毒的囊膜蛋白(ENV),ENV主要负责病毒粒子与病毒的靶细胞的特异性结合,同时发生膜融合使病毒粒子侵入靶细胞内.为了进一步探索exJSRV囊膜蛋白的结构与功能,从而揭示绵羊肺腺瘤病的发病机理.本研究以绵羊腺瘤病的病肺组织为原料，提取总RNA并反转录为cDNA，以此cDNA为模板，F-env，R-env1，R-env2为引物，利用半巢式PCR扩增目的基因，胶回收纯化PCR产物并与真核表达载体pcDNA3.1(+)均用kpnl和XbaⅠ限制性内切酶进行双酶切。结果表明质粒单、双酶切和测序结果证明本试验构建的pcDNA3.1(+)/exjSRV-env重组质粒的DNA序列完全正确，将其瞬时转染293T细胞后，裂解细胞并提取总RNA，利用RT-PCR技术，琼脂糖凝胶电泳检测到目的基因env片段约2000bp，与预期大小一致。而阴性对照与空白对照组均无条带。说明pcDNA3.1(+)/exjSRV-env真核表达质粒构建成功，并能在293T细胞内表达。

摘要： 本发明的目的在于，提供能够使T细胞或NK细胞高效地增殖并且维持该细胞的状态(例如未分化性)的T细胞或NK细胞的制造方法、T细胞或NK细胞的培养用培养基、T细胞或NK细胞的培养方法、维持未分化T细胞的未分化状态的方法和T细胞或NK细胞的增殖促进剂。本发明涉及T细胞或NK细胞的制造方法等，其包括如下步骤：在含有式(X‑1)或式(X‑2)所示的双苄基异喹啉生物碱或者其中的1个醚键断裂后的化合物或其药学上可接受的盐的培养基中培养T细胞或NK细胞。

摘要： 提供能保存细胞的组合物。本发明的组合物包含微小气泡。

摘要： 本发明涉及一种红细胞除去装置(100)，具备：血液容器(10)，其容纳血液；以及红细胞除去器(11)，其从血液容器(10)接受血液，并从血液至少部分地除去红细胞。

摘要： 提供一种细胞的培养方法，在细胞培养器内向细胞导入因子，并在与上述细胞培养器相同的细胞培养器内培养导入了上述因子的细胞。另外，提供一种单核细胞的回收方法，其包括：对血液进行处理，制作至少部分地除去了红细胞而得到的处理血液；对处理血液进行稀释；使稀释后的处理血液中所含的单核细胞沉降；除去稀释后的处理血液的上清液；以及回收单核细胞。

摘要： 本申请提供了一种制备NKT细胞刺激性树突细胞的方法，该方法包括：将单个核细胞置于培养容器内并通过保持该培养容器静置而使得所述单个核细胞中的一些沉降于所述容器的底表面上的步骤；将除已沉降于所述培养容器的底表面上的细胞以外的悬浮细胞去除的步骤；通过向所述培养容器内添加预定的因子而使已沉降于所述底表面上的细胞中的单核细胞分化为未成熟树突细胞的步骤；通过向所述培养容器内添加预定的因子而使所述未成熟树突细胞成熟；和通过向所述培养容器内添加α‑半乳糖神经酰胺而将成熟树突细胞诱导为NKT细胞刺激性树突细胞的步骤。

摘要： 含有细胞细胞外基质的制造方法包括：在具有前端开口部的移液管的内部准备含有(i)细胞外基质前体以及(ii)细胞或者细胞团的细胞外基质溶液；排出上述细胞外基质溶液，在上述移液管的前端开口部形成上述细胞外基质溶液的液滴；使上述移液管的前端开口部接近细胞培养容器的培养面，按照使上述移液管的前端开口部不与上述培养面接触的方式将上述液滴载置于上述培养面上；使上述移液管的前端开口部从上述培养面远离，将上述液滴与上述移液管的前端开口部分离；以及使上述细胞外基质溶液凝胶化，形成含有细胞细胞外基质。

摘要： 本发明提供具备适宜的亲水性和强度，细胞接种后的固定性较高，可高效进行细胞增殖的细胞培养用支架材料。本发明的细胞培养用支架材料为含有合成树脂的细胞培养用支架材料，其中，所述合成树脂的氮含量为0.1质量％以上10质量％以下。

摘要： 本发明公开一种以前所未有的效率及功能性从人类iPSC诱导神经祖细胞、寡树突细胞祖细胞、寡树突细胞的新颖方法。本发明的核心是循着多能细胞到外胚层、神经外胚层到NPC到OPC到寡树突细胞路径的多个关键分化决定点处以早先未知的方式使用经实验发现的转录因子。

摘要： 本发明涉及通过引入逆分化因子Bmi1及dNP63a来诱导尿液细胞逆分化为角质形成细胞干细胞的方法以及包含所诱导的逆分化角质形成细胞干细胞条件培养基作为有效成分的用于促进皮肤再生的组合物。

摘要： 本发明涉及包含作为从鸟类的蛋(egg)分离的细胞的胚盘多能干细胞(pluripotent stem cells，PSCs)或神经干细胞(neural stem cell s，NSCs)、胚胎成纤维细胞(embryonic fibroblasts，FBs)条件培养基(conditioned medium)作为有效成分的用于细胞增殖、皮肤再生及皱纹改善的培养基组合物，具体地，蛋(egg)细胞条件培养基可从根本上防止使用动物血清所导致的污染，而且，不存在由于使用支撑细胞而由不同物质之间的感染物质所导致的传染可能性，从而产生包括人干细胞、皮肤细胞在内的多种细胞增殖效果，并且，产生显著的皮肤再生或皱纹改善效果，因此，可将蛋细胞条件培养基有效用作用于细胞增殖的培养基组合物以及用于皮肤再生或皱纹改善的化妆品组合物。