固定化脂肪酶

摘要： 基于固定化T.laibacchii脂肪酶催化2-甲基-1,4-苯醌与正丁胺的Michael加成反应建立了酶促制备丝裂霉素类似物2-甲基-3-正丁胺酰-1-氢-4-醌的反应动力学模型.该反应在柠檬酸缓冲溶液(pH值为7.0)中进行,最终产率可达98%.该文提出了修正的有序双双和随机双双机理,采用King-Altman方法得到相关微分方程组以表示即时反应速率.通过联合解微分方程和最优化方法确定动力学模型参数,使用ode45程序解微分方程组,并运用Fmincon软件计算动力学常数.研究结果表明:模型拟合值与实验值的平均相对偏差为11.25%,且偏差服从关于y=0的轴对称分布.当固定化酶粒径为0.5 mm、搅拌转速为200 rpm时可以忽略内外扩散限制.该文建立的动力学模型为固定化酶固有动力学模型.

摘要： 目的 研究固定化脂肪酶Lipozyme TL IM催化葫芦籽油合成脂肪酸乙酯工艺.方法 将葫芦籽油与乙醇(EtOH)作为原料,通过固定化脂肪酶Lipozyme TL IM的催化作用,完成脂肪酸乙酯(FAEE)的合成.采用单因素试验与RSM(响应面分析法),确定葫芦籽油脂肪酸乙酯的最佳合成工艺.结果 单因素试验表明醇油摩尔比、Lipozyme TL IM质量分数、反应温度与时间依次为4:1、30％、50°C与1 d时,脂肪酸乙酯转化率最高.响应面法优选工艺条件为:醇油摩尔比为4:1、Lipo-zyme TL IM质量分数为35％,以及反应时间与温度各为26 h、50°C时,通过3次试验检验最优条件下的合成工艺,脂肪酸乙酯转化率达到了(85.74％±0.43％),与预测值相差1.05％.葫芦籽油脂肪酸乙酯GC-MS分析结果表明,不饱和脂肪酸乙酯含量为73.55％,其中亚油酸乙酯的含量达58.483％.结论 本工艺操作简单可行,适用于葫芦籽油脂肪酸乙酯的合成,具有较好的应用前景.

摘要： 单硬脂酸甘油酯(glycerol monostearate,MG)是一种重要的多元醇型非离子表面活性剂.酶催化合成单硬脂酸甘油酯反应条件温和,可有效地降低能耗,减少副产物的产生,提高单甘酯的收率和质量.本文主要研究了以氢化油和甘油为原料,以固定化脂肪酶为催化剂在无溶剂体系中采用甘油解法,合成单硬脂酸甘油酯时主要影响因素:脂肪酶选择、物料摩尔比、脂肪酶添加量、反应温度及反应时间,对反应转化率的影响.通过研究,得出合成单硬脂酸甘油酯时,最佳合成条件及粗酯中单硬脂酸甘油酯的含量.

摘要： 采用固定化脂肪酶Novozym 435催化选择性合成6,6 '-O-海藻糖脂肪酸二酯.在叔丁醇-吡啶(11∶9,V/V)混合溶剂中,通过海藻糖和不同碳链长度(C6～C18)的脂肪酸乙烯酯发生酯交换反应实现,海藻糖和脂肪酸乙烯酯物质的量比为1∶4.通过核磁共振波谱及质谱分析对产物进行结构鉴定,分析产物的亲水亲油平衡(hydrophilic lipophilic balance,HLB)值、发泡性能和热稳定性,同时用噻唑蓝法分析该系列海藻糖脂肪酸二酯的细胞毒性.结果 表明:结构鉴定其为海藻糖脂肪酸二酯,产物得率为43％～75％;海藻糖癸酸二酯和海藻糖月桂酸二酯具有较好的发泡性能(起泡性分别为101.00％和142.67％,泡沫稳定性(80 min内)分别为40％～60％和50％～70％),海藻糖油酸二酯热稳定性最佳(温度达到350°C时剩余质量仍为60.58％);细胞毒性结果表明海藻糖油酸二酯安全、低毒.研究结果为开发食品领域高附加值的新型糖酯类非离子型表面活性剂提供了新方向.

摘要： 以环氧氯丙烷-D5为起始原料,经水解反应得到3-氯-1,2-丙二醇-D5,然后和棕榈酰氯在固定化脂肪酶催化下得到稳定同位素标记的3-氯-1,2-丙二醇棕榈酸二酯-D5.以消耗的环氧氯丙烷-D5计算,3-氯-1,2-丙二醇棕榈酸二酯-D5的总产率为52.4％.产品结构、纯度和氘同位素丰度经核磁共振波谱(NMR)、高效液相色谱(HPLC)和质谱(MS)等仪器表征确定,3-氯-1,2-丙二醇棕榈酸二酯-D5的色谱纯度和氘同位素丰度均高于99.0％.该化合物可以作为稳定同位素内标试剂,用于油脂中3-氯-1,2-丙二醇棕榈酸二酯的含量检测.

摘要： 为实现功能性脂肪酸——金松酸(SCA)的高值化利用,本实验以香榧籽油为原料,富集SCA并用于酯交换反应生产1,3-甘油二酯.温度55°C,醇油比0.25∶1,碱催化木榧籽油醇解2h,乙脂转化率可达97.8％.得到的混合脂肪酸乙酯进一步采用尿素包合法富集SCA.结果 发现,随着脂脲比增加SCA回收率增加但纯度逐渐降低.当脂脲比为0.3,0.35时,SCA乙酯的纯度分别为73.0％,63.9％,回收率为43.0％,87.1％.不同脂肪酶无溶剂体系中催化SCA乙酯、甘油酯交换反应研究表明,Lipozyme RM IM的位置选择性较佳、1,3-DAG产率最高.当乙酯/甘油摩尔比2∶1、酶添加量5％、60 °C下反应24 h,1,3-DAG的产率为55.5％,其中SCA含量接近60％.化学-酶法两步催化制备富含金松酸的功能性1,3-DAG是可行的.

摘要： 采用固定化T.laibacchii脂肪酶催化一锅三步法制备聚ε-己内酯(PCL).所得最优聚ε-己内酯产率为96.5％,平均摩尔质量为2912 g/mol.首先,采用脂肪酶催化乙酸乙酯(EtOAc)与尿素过氧化氢(UHP)的反应,生成乙酸;然后,采用原位反应生成的过氧乙酸,将环己酮以非酶方式酯化为ε-己内酯(CL),同时,反应生成的乙酸与UHP反应生成过氧乙酸;最后,CL经酶催化开环聚合,原位生成聚ε-己内酯.采用响应面法(Response Surface Methodology,RSM)进行了实验设计和优化,建立了聚ε-己内酯产率模型,其相关系数R2为0.9997.反应中生成的乙酸与UHP反应生成过氧乙酸,有效减少了UHP用量,进而降低了UHP浓度,减弱了UHP对脂肪酶的抑制作用,加快了反应速度.经RSM优化得到的最佳条件为:脂肪酶用量23.55 mg,反应温度59.4°C,UHP/环己酮的摩尔比1.31.聚ε-己内酯高产率的原因有:采用交联固定化脂肪酶;在步骤3中添加脂肪酶;将UHP初始浓度由2.50 mol/L降至1.63 mol/L.

摘要： 将固定化脂肪酶MAS1应用于催化甘油与n-3PUFA的酯化反应和n-3PUFA乙酯的甘油解反应合成富含n-3PUFA的甘油三酯,并与相同条件下Novozym435的催化效果做对比.研究结果表明,在酯化反应中,固定化脂肪酶MAS1催化获得的酯化率和TAG含量分别达到99.31％和92.26％,其催化效果高于Novozym435(82.16％酯化率和47.26％TAG).在甘油解反应中,相对于Novozym435(54.8％乙酯转化率和29.6％TAG),固定化脂肪酶MAS1催化获得乙酯转化率和TAG含量更高,分别为82％和73.9％.这两种酶催化的两种反应合成的TAG中的脂肪酸组成均分别类似于相应的底物.这些结果说明固定化脂肪酶MAS1是一种潜在的可用于油脂改性的生物催化剂.

摘要： 米糠油是一类重要的植物油资源,但是油的品质常因高浓度的游离脂肪酸而受到影响.甾醇酯是一种功能脂质,具有降胆固醇的活性功能.本文将脂肪酶CRL固定在辛基修饰的有序介孔硅基载体C8-OMMs上,制备出新型固定化脂肪酶CRL@C8-OMMs.本文首次选用甾醇作为酯化试剂,以CRL@C8-OMMs为生物催化剂,一步实现了高酸价米糠油的酯化脱酸和功能脂质甾醇酯的制备.在最优条件下,四种高酸价米糠油的催化结果为:游离脂肪酸含量低于2.3％、甾醇酯含量高于84.7％.

摘要： 本文探索以无水奶油为脂肪酸来源，在无溶剂体系中，固定化脂肪酶催化奶油与3-甲硫基丙醇反应制备新型含硫醋化合物，并探索反应过程中醇解率、酶催化选择性的变化规律，为无水奶油在食品风味方面深加工，及以大宗天然原料为风味前体来源，进行酶催化合成新型风味化合物提供思路。rn 结果显示:酶解前8h,脂肪酸对短链(C4～C14)脂肪酸选择性优势明显,随着反应的进行,对短链脂肪酸选择性逐渐变小;当反应温度为50°C,脂肪酶添加量为5wt％,3-甲硫基丙醇与无水奶油摩尔比3∶1,反应时间为8h时,产物中含硫酯的浓度分别为:丁酸(3-甲硫基)丙酯29.75mg/mL、己酸(3-甲硫基)丙酯15.32mg/mL、辛酸(3-甲硫基)丙酯7.22mg/mL、癸酸(3-甲硫基)丙酯21.32mg/mL、十二酸(3-甲硫基)丙酯26.64mg/mL、十四酸(3-甲硫基)丙酯77.62mg/mL,总转化率为71.16％.

摘要： 实验以戊二醛为交联剂，将脂肪酶固定在氨基硅烷偶联剂改性的乙酸纤维素(CA)载体中制备了固定化脂肪酶。详细考察了戊二醛浓度、活化反应时间、给酶量和交联反应时间对脂肪酶固定量和酶活性的影响，得到优化的固定化条件。实验结果表明，用5%的戊二醛交联8h，再与4ml浓度为1.64mg/ml的脂肪酶液在4°C培养箱中反应10h，酶的固定化效果最好。实验测定了游离酶和固定化脂肪酶的应用性能，结果表明，固定化脂肪酶的贮藏稳定性、温度适应性和pH值适应性都优于游离酶。固定化脂肪酶可以重复使用，克服了游离酶的缺陷，为进一步的应用奠定了基础。

摘要： 本研究以普鲁兰多糖为原材料对其进行改性制备固定化载体，固定化载体的直径随着PH值的降低而逐渐增大，实现了普鲁兰多糖的PH敏感性修饰。利用普鲁兰多糖改性材料固定化洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶拆分1-苯乙醇，反应时间大为缩短。单因素优化拆分反应的最优条件为:加酶量为2:1(游离酶:载体);PH值为6.5;温度为50°C拆分反应2小时趋于平衡，拆分反应转化率可达50.0%。该固定化酶在重复利用10次以后酶活回收率仍在85%以上，表明其具有良好的重复利用性。结果表明，普鲁兰多糖改性修饰的固定化酶在对映选择效率上有明显的优势，在生产应用上具有极大的应用潜力。

摘要： 本文研究了利用固定化脂肪酶435进行酯化反应降低稻米油酸价的方法和工艺.考察了反应时间,酶添加量,甘油分散粒径,滴加有机溶剂,充加氮气,水分含量以及加水方式这7个因素对酯化反应效率的影响.结果表明,在反应时间为大于2h,加酶量为大于0.5％,甘油添加粒径为小于1mm,含水量为0.5％-6％时,可显著提升酯化效率;同时,滴加有机溶剂、充加氮气、三种加水方式也可以有效地提高反应效率.

摘要： 本研究采用固定化脂肪酶Candida.99-125(实验室自制)催化合成植物甾醇油酸酯.考察了底物用量、酶量、温度、溶剂种类、底物浓度、硅胶量,反应时间对反应的影响以及固定化酶的使用寿命.研究结果表明,最适条件为:醇:酸(摩尔比)=1:1,酶量:底物量=4:1(质量比),异辛烷量:底物量=58:1(mL:g),最适温度为45°C,硅胶量:底物量=3.3:1,反应24h 达到平衡.以0.1g 植物甾醇、0.071g 油酸、0.684g 固定化脂肪酶、0.565g 硅胶和10ml 异辛烷组成的反应系统在45°C条件下反应24h,酯化率可达92.3%,固定化酶连续反应11批后酯化率仍能达到88.6%以上.

摘要： 本文采用实验室自制的以织物为载体的固定化假丝酵母脂肪酶(Candida sp.99-125),来催化蓖麻油酸与多羟基醇的聚合反应,成功合成出了网状聚酯.自制的固定化酶的价格远远比市售商品酶便宜,催化效率高,易于分离,具有很高的实际应用价值.实验中采用红外光谱和凝胶色谱法(GPC)对聚酯进行了表征;并且优化了聚合时间、温度、摩尔比等对聚合反应的影响.在最适的反应条件下,成功获得了可以用于润滑油基础油的聚酯产品,其分子量为2000 Da～5000 Da.

摘要： 研究了Novozym435和Lipozyme TLIM混合脂肪酶催化香叶树籽油制备生物柴油,2种酶按1：3质量比混合使用时,既可提高反应转化率，又可降低酶的使用成本。应用响应面优化法确定了固定化酶催化香叶树籽生物柴油的最优工艺参数，采用叔丁醇作为反应体系的溶剂，最优反应条件为反应温度38.5°C、甲醇与油摩尔比4：1、叔丁醇与油体积比1：1.5、酶用量为油质量的4%，此时反应转化率达90.09%。分析表明香叶树籽油的甘油三酯主要由短链脂肪酸甘油酯组成，生物柴油中原油的甘油三酯已完全转变成脂肪酸甲酯。

摘要： 采用亚临界R134a作为固定化脂肪酶Nonozym435催化富含n-3多不饱和脂肪酸甘油酯合成的反应介质,并利用响应面法对影响甘油酯合成的工艺条件进行了优化.结果表明,反应时间、酶用量、底物摩尔比、初始水分是影响酯化率的显著因素.通过对转化率的拟合模型响应面分析,得到了优化工艺条件:在亚临界R134a体系中,体系压力4MPa,温度40°C反应时间3.59小时,酶量:底物量的3．44%,底物摩尔比:4.55:1(甘油/游离脂肪酸,W/W),初始水分0.81ml;在此优化工艺条件下,酯化率的预测值为78.89%,试验值为84.06%.试验值与预测值的相符性很好,RSM模型的有效性得到验证.

摘要： 本发明公开的脂肪酶固定化载体是以皮胶原为基材，与交联剂依次在酸性条件和中偏碱性条件下进行交联后，用中性缓冲溶液冲洗除去未反应的交联剂即可，所得载体的游离醛基含量为0.5～5.0mmol/g，干热变性温度为80～100°C，比表面积为2.0～20m

摘要： 本发明公开的脂肪酶固定化载体是以皮胶原为基材，与交联剂依次在酸性条件和中偏碱性条件下进行交联后，用中性缓冲溶液冲洗除去未反应的交联剂即可，所得载体的游离醛基含量为0.5～5.0mmol/g，干热变性温度为80～100°C，比表面积为2.0～20m

摘要： 本发明涉及脂肪酶固定化载体、固定化脂肪酶及其制备方法和应用。具体而言，本发明提供一种固定化脂肪酶用载体或使用该固定化酶用载体作为载体的固定化脂肪酶，所述固定化脂肪酶用载体含有种子残渣和粉末吸附剂，或由种子残渣和粉末吸附剂组成。本发明还涉及种子残渣和粉末吸附剂的混合物在制备固定化脂肪酶中的应用。本发明能够降低固定化脂肪酶的成本，所制备的固定化脂肪酶具有很高的活力。

摘要： 本发明涉及固定化脂肪酶以及固定化脂肪酶的制备方法。固定化脂肪酶包含阴离子交换树脂载体、酶蛋白、水分和保护剂，所述保护剂是低分子量的多羟基化合物。固定化脂肪酶的制备方法，包括：（1）提供脂肪酶酶液；（2）将阴离子交换树脂载体加入（1）所提供的酶液中并进行混合；（3）从步骤（2）所得的混合物中分离得到固定化酶，在步骤（1）和/或步骤（2）中添加保护剂，所述保护剂是低分子量的多羟基化合物，所述固定化酶不进行干燥处理。本发明的固定化脂肪酶不需要干燥也不需要任何物质处理，可直接用于酯化反应，反应速度快，酯化效果突出。本发明的制备方法中，载体不需要任何处理可直接用来吸附酶。

摘要： 本发明公开一种脂肪酶固定化载体、固定化脂肪酶及其制备方法、生物柴油的制备方法，涉及酶工程技术领域。所述脂肪酶固定化载体包括有机/无机杂化树脂。使用有机/无机杂化树脂作为脂肪酶固定化载体，针对脂肪酶亲极性和亲非极性的特点，所选树脂通过杂化，兼具有机材料与无机材料的优点，耐热性与附着性优异。通过因固化而生成的无机物如二氧化硅来“保护”树脂中耐热性弱的部分，因此可以获得较高的固定化率。本发明提出的脂肪酶固定化载体，能够有效维持脂肪酶分子的三维结构，减轻有机介质对脂肪酶分子结构的破坏，提高脂肪酶分子的稳定性；用于固定化脂肪酶具有环境耐受力强、催化效率高的优点。

摘要： 本发明公开了一种使用氨基树脂固定化脂肪酶的方法及由该方法制得的固定化脂肪酶。利用氨基载体共价结合法固定化脂肪酶，使用交联剂来活化氨基载体，得到末端带有环氧基团的氨基载体，将脂肪酶表面氨基与氨基载体的尾部环氧基团反应，形成稳定的共价键，从而达到固定化的目的。经酶学性质测定发现，与游离脂肪酶比较，本发明制得的固定化脂肪酶LX‑1000HA‑CRL和LX‑1000EA‑CRL具有更佳的热稳定性、操作稳定性、保存稳定性。该方法制备的固定化酶具有极大的实际应用前景，同时为固定化脂肪酶开拓了新方向，具有及其重要的研究和实用价值。

摘要： 本发明公开了一种使用羧基树脂固定化脂肪酶的方法及由该方法制得的固定化脂肪酶。该方法使用EDC·HCl作为交联剂，将羧基载体和游离酶通过酰胺键连接，达到固定化的目的。经酶学性质测定发现，与游离脂肪酶比较，本发明制得的固定化脂肪酶IDA‑LIPASE在热耐受性、可重复利用性、保存稳定性方面具有极佳的优势，此外，在该方法下，进行模拟10倍扩大化，当载体量扩大为实验条件的10倍时，固定化酶酶活获得提高，因此具备实际扩大化生产的潜力，利用本发明制备的固定化酶可以在实际应用中发挥较好的催化能力，并且可以为生产降低成本，具有方便、实用、经济的特点，具有重要的研究价值和实用价值。

摘要： 本发明涉及脂肪酶固定化载体、固定化脂肪酶及其制备方法和应用。具体而言，本发明提供一种固定化脂肪酶用载体或使用该固定化酶用载体作为载体的固定化脂肪酶，所述固定化脂肪酶用载体含有种子残渣和粉末吸附剂，或由种子残渣和粉末吸附剂组成。本发明还涉及种子残渣和粉末吸附剂的混合物在制备固定化脂肪酶中的应用。本发明能够降低固定化脂肪酶的成本，所制备的固定化脂肪酶具有很高的活力。

摘要： 本发明涉及固定化脂肪酶以及固定化脂肪酶的制备方法。固定化脂肪酶包含阴离子交换树脂载体、酶蛋白、水分和保护剂，所述保护剂是低分子量的多羟基化合物。固定化脂肪酶的制备方法，包括：（1）提供脂肪酶酶液；（2）将阴离子交换树脂载体加入（1）所提供的酶液中并进行混合；（3）从步骤（2）所得的混合物中分离得到固定化酶，在步骤（1）和/或步骤（2）中添加保护剂，所述保护剂是低分子量的多羟基化合物，所述固定化酶不进行干燥处理。本发明的固定化脂肪酶不需要干燥也不需要任何物质处理，可直接用于酯化反应，反应速度快，酯化效果突出。本发明的制备方法中，载体不需要任何处理可直接用来吸附酶。

摘要： 固定脂肪酶的磁性氧化石墨复合物载体的制备方法及其固定脂肪酶的方法，本发明涉及到固定化脂肪酶的载体及其固定脂肪酶的方法。本发明是要解决现有的固定脂肪酶的方法的酶固定量低、容易导致酶变性的技术问题。载体制法：一、制备Fe3O4纳米粒子；二、在Fe3O4纳米粒子外包裹介孔硅，得到磁性介孔硅；三、制备氧化石墨；四、将磁性介孔硅分散到无水乙醇中，再加入氧化石墨分散液，搅拌均匀后，滴加3-氯丙基三乙氧基硅烷，升温搅拌回流，洗净、冷冻干燥，得到固定脂肪酶的磁性氧化石墨复合物载体。固酶方法：将载体与酶分别分散至磷酸盐缓冲液中恒温振荡后、冷冻干燥，固定化脂肪酶。本法固定化效率高达98％。可用于酶催化反应中。