NS1基因

摘要： 为了调查2015—2016年中国部分地区猪博卡病毒流行情况,在我国各地中抽取了89份猪样本,用PCR方法对这些样本进行检测,并对其中有扩增阳性的产物进行基因序列检测,将测序结果进行对比分析,找出其中可能存在的同源性或遗传性证据.在89份检测样本中,检测出PBoV的样本42分,占比47.19％,其中山东地区的样本阳性率最低,上海、江西地区阳性率最高.NS1基因序列分析结果显示,鉴定的5株PBoV均属于PBoV 3型,且这5株PBoV的核苷酸同源性达到了80.0％～85.6％,因此,可以预测其氨基酸的同源性在82.9％至87.9％之间.将这5株进行遗传进化分析,结果显示:检测的MH822023、MH822025、MH822024、MH82022、MH82026毒株与参考KC473563、KF025390、KF025379、KF025389、KF025380毒株具有较高同源性.

摘要： 从北京地区疑似细小病毒感染的犬粪拭子中成功分离鉴定出14株犬细小病毒(CPV)毒株,并对其完整的VP2和NSl基因进行了序列分析.结果表明,鉴定到的14株CPV毒株中,7株为New CPV-2a型,7株为CPV-2c型.此外,NS1的19、33、293、588、624和656位氨基酸以及VP2的13、574位氨基酸为新鉴定的氨基酸突变位点.基于VP2、NS1基因的系统进化分析表明,大部分的New CPV-2a型和CPV-2c型毒株与广西南宁和吉林长春地区的分离毒株亲缘关系密切,说明本次分离毒株与广西或吉林地区分离毒株具有相同的起源.本研究为更好地开展犬细小病毒流行病学调查提供了有益借鉴,也为深入研究犬细小病毒变异和传播的分子机制奠定了基础.

摘要： 为确诊四川某鸭场11日龄樱桃谷雏鸭死亡原因,本研究采集送检鸭只的肝、脾、脑组织,经研磨处理,利用BHK-21细胞及鸭胚成纤维细胞培养及RT-PCR鉴定,从送检的疑似鸭坦布苏病毒感染的病料中分离出一株鸭坦布苏病毒,将其命名为SCCD2020株.利用PCR方法对分离株E基因及NS1基因进行克隆,并对两基因序列进行分析,结果显示,E基因和NS1基因全长分别为1503 bp和1062 bp.将两基因序列分别与GenBank已发布的26株坦布苏病毒的相应序列进行比对分析,结果显示两者核苷酸序列未出现变异及缺失,SCCD2020分离株的E基因与鸭源DTMUV-H株同源性高达99.2％,与鹅源分离株同源性为96.4％,与鸡源分离株同源性为86.7％.E基因遗传进化分析结果显示,SCCD2020分离株位于中国和泰国流行的Ⅱ群毒株中,与Ⅱ群毒株同源性达96.2％,属于近年来国内DTMUV流行毒株之一.NS1基因序列比对及遗传进化分析结果和E基因类似.研究结果为进一步了解我国目前流行的鸭坦布苏病毒的基因组特征及流行病学研究提供数据支撑.

摘要： 目的:构建H7N9亚型禽流感病毒NS1基因真核表达载体,并在293T细胞中表达其编码的蛋白.方法:提取H7N9亚型禽流感病毒分离株总RNA,RT-PCR扩增获得NS1的全长基因,克隆至真核表达载体pRK中构建pRK-FLAG-NS1,经酶切及测序鉴定正确后将质粒转染到293T细胞中,Western blot技术鉴定NS1蛋白的表达.结果:成功克隆了NS1全长基因,构建了H7N9毒株的NS1蛋白真核表达载体pRK-FLAG-NS1并转染于293T细胞中.结论:Western blot分析表明,NS1蛋白得到成功表达,为开展流感病毒蛋白功能及与真核细胞中的蛋白相互作用奠定了基础.

摘要： 为深入研究乙型脑炎病毒(JEV)NS1和NS1-2A蛋白的表达和免疫效果差异,本试验构建并扩增C-端含Flag标签的NS 1和NS 1-2A基因,利用T4 DNA连接酶分别连接到质粒pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pcDNA3.1-NS1-Flag和pcDNA3.1-NS1-2A-Flag.将这两种真核表达质粒分别转染BHK-21细胞,利用RT-PCR、IFA和Western blotting检测NS1和NS1-2A蛋白在体外的表达情况,用pcDNA3.1-NS1-Flag、pcDNA3.1-NS1-2A-Flag和pcDNA3.1(+)免疫BALB/c小鼠,检测这两种蛋白在体内的表达差异.结果显示,试验成功构建了NS 1和NS 1-2A基因的真核表达载体pcDNA3.1-NS1-Flag和pcDNA3.1-NS1-2A-Flag,IFA和Western blotting鉴定NS1和NS1-2A蛋白成功表达,重组质粒pcDNA3.1-NS1-Flag和pcDNA3.1-NS1-2A-Flag免疫小鼠后可诱发机体产生特异性体液免疫,pcDNA3.1-NS1-2A-Flag联合免疫组小鼠血清抗体效价和INF-γ细胞因子分泌水平比pcDNA3.1-NS1-Flag免疫组高,且与pcDNA3.1(+)空载体免疫组差异极显著(P<0.01);pcDNA3.1-NS1-Flag和pcDNA3.1-NS1-2A-Flag免疫组小鼠体内的INF-γ 分泌量会增多,免疫第4周达到最高后逐渐降低.pcDNA3.1-NS1-Flag和pcDNA3.1-NS1-2A-Flag免疫小鼠能够刺激JEV特异性抗体的分泌和增强机体的细胞免疫功能,且NS 1-2A联合基因的免疫效果优于NS 1单一基因,为进一步研究JEV的非结构蛋白功能、研发NS 1和NS 1-2A基因疫苗奠定基础.

摘要： 为了了解广西地区竹鼠细小病毒的分子生物学特性与遗传变异情况,通过PCR、序列比对分析等方法,对采集到的某竹鼠场腹泻病料进行病原学检查.结果表明,用设计的引物A1/A2从竹鼠血清、内脏中检测到2株竹鼠细小病毒,将其分别命名为1-XQ、3-ZQ.用软件分析,1-XQ、3-ZQ核苷酸同源性为99.9％;与另外2株广西竹鼠细小病毒分离株的核苷酸同源性分别为96.8％～97.5％和96.9％～97.6％;与蝙蝠细小病毒的同源性较高,为98.9％～99.0％;与老鼠细小病毒的同源性为87.3％～87.6％;与牛、鹅、番鸭以及人类等其他种类细小病毒核苷酸同源性较低,为31.8％～41.6％.说明1-XQ、3-ZQ与广西竹鼠分离毒株、中国分离到的蝙蝠毒株亲缘关系最近,属于同一分支.

摘要： 2018年3月17日,贵州省某梅花鹿场的梅花鹿(Cervus nippon)出现关节肿大、下颌肿大、睾丸单侧肿胀,还伴有严重的跛行等症状.采集4份该发病梅花鹿的血样送检.检测结果表明,通过虎红平板凝集试验2份血样检测出了布氏杆菌感染,4份血样经RT-PCR均扩增出了JEV NS1部分基因的特异性条带,PCR产物测序结果分析显示,4份梅花鹿血样的JEV NS1基因(GZ-015、GZ-019、GZ-022、GZ-039)间的核苷酸同源性分别为99.9％、99.3％、99.4％,与强毒株SA-14、国内外的疫苗株及四川、吉林等地的JEV分离株之间核苷酸同源性为99％以上,GZ-015、GZ-019、GZ-022、GZ-039与强毒株SA-14、弱毒株、国内外的疫苗株及四川、吉林等地的JEV分离株处于同一个较大的遗传进化分支.

摘要： 2018年3月17日,贵州省某梅花鹿场的梅花鹿(Cervus nippon)出现关节肿大、下颌肿大、睾丸单侧肿胀,还伴有严重的跛行等症状。采集4份该发病梅花鹿的血样送检。检测结果表明,通过虎红平板凝集试验2份血样检测出了布氏杆菌感染,4份血样经RT-PCR均扩增出了JEVNS1部分基因的特异性条带,PCR产物测序结果分析显示,4份梅花鹿血样的JEVNS1基因(GZ-015、GZ-019、GZ-022、GZ-039)间的核苷酸同源性分别为99.9%、99.3%、99.4%,与强毒株SA-14、国内外的疫苗株及四川、吉林等地的JEV分离株之间核苷酸同源性为99%以上,GZ-015、GZ-019、GZ-022、GZ-039与强毒株SA-14、弱毒株、国内外的疫苗株及四川、吉林等地的JEV分离株处于同一个较大的遗传进化分支。

摘要： 目的 了解2015-2016年深圳市分离的登革Ⅲ、Ⅳ型病毒E/NS1基因序列特征及登革Ⅲ、Ⅳ型病毒流行规律,探究其可能的传播来源.方法 收集2015-2016年深圳市登革热患者病例资料及急性期血清,用C6/36细胞培养分离登革病毒,用FQ-PCR对其进行血清分型,分离成功的病毒株用反转录-聚合酶链反应(PCR)方法扩增E基因和NS1基因,进行序列分析,绘制系统进化树,氨基酸比对分析4个不同血清型NS1蛋白.结果 从5份Ⅲ型的登革病毒标本中成功分离4份病毒株,3份Ⅳ型登革病毒标本中成功分离2份登革病毒;BLAST分析保守E基因结果表明,与DENV-3分离株同源性最高(99％)的毒株主要是印度尼西亚2010和2015年分离株、菲律宾2015年分离株.与DENV-4分离株同源性最高(99％)的毒株主要是菲律宾2013年分离株、印度尼西亚2010分离株、意大利2009年分离株.NS1基因序列分析显示所选4株不同血清型的病毒株氨基酸相似性为77.69％,4个不同血清型的登革热NS1抗原存在5-7个氨基酸保守区域.结论 2015-2016年深圳市输入的登革Ⅲ、Ⅳ型病毒可能来自印度尼西亚和菲律宾,应加强出入境人员的监测工作,避免输入引起本地感染的风险.

摘要： 为了表达流行性乙型脑炎(epidemic encephalitis type B)非结构蛋白NS1,本研究通过PCR扩增了日本乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)P3株NS1基因,并分别构建了其融合表达His和GST标签的原核表达载体,经PCR、酶切和测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,用IPTG诱导表达了NS1融合蛋白,通过SDS-PAGE电泳和Western blotting进行鉴定,并用尿素变性复性和镍亲合层析法纯化目的蛋白.结果显示,试验成功构建了NS1的两个原核表达载体pET-42b-NS1和pGEX-KG-NS1,P3株N S1基因全长1056 bp,以包涵体的形式表达约40 ku的蛋白,尿素变性复性效果较好,镍亲合层析纯化得到纯度和浓度均较高的NS1蛋白.JEVNS1基因可以通过原核表达系统高效表达蛋白并纯化得到高纯度产物,为后期生物学功能研究奠定基础.

摘要： 根据已知H5N1亚型禽流感病毒NS1基因序列,设计并合成一对特异性引物P1/P2,利用PCR方法从质粒pUC-NS1扩增出H5N1亚型禽流感NS1基因.将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a上,通过酶切分析及序列测定,鉴定出了NS1基因片段的阳性重组子.转化BL21大肠杆菌感受态细胞后,经IPTG诱导和SDS聚丙烯胺凝胶电泳鉴定,成功表达出大小约27.0kD的NS1重组蛋白.

摘要： 根据已知H5N1亚型禽流感病毒NS1基因序列,设计并合成一对特异性引物P1/P2,利用PCR方法从质粒pUC-NS1扩增出H5N1亚型禽流感NS1基因.将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a上,通过酶切分析及序列测定,鉴定出了NS1基因片段的阳性重组子.转化BL21大肠杆菌感受态细胞后,经IPTG诱导和SDS聚丙烯胺凝胶电泳鉴定,成功表达出大小约27.0kD的NS1重组蛋白.

摘要： 根据已知H5N1亚型禽流感病毒NS1基因序列,设计并合成一对特异性引物P1/P2,利用PCR方法从质粒pUC-NS1扩增出H5N1亚型禽流感NS1基因.将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a上,通过酶切分析及序列测定,鉴定出了NS1基因片段的阳性重组子.转化BL21大肠杆菌感受态细胞后,经IPTG诱导和SDS聚丙烯胺凝胶电泳鉴定,成功表达出大小约27.0kD的NS1重组蛋白.

摘要： 根据已知H5N1亚型禽流感病毒NS1基因序列,设计并合成一对特异性引物P1/P2,利用PCR方法从质粒pUC-NS1扩增出H5N1亚型禽流感NS1基因.将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a上,通过酶切分析及序列测定,鉴定出了NS1基因片段的阳性重组子.转化BL21大肠杆菌感受态细胞后,经IPTG诱导和SDS聚丙烯胺凝胶电泳鉴定,成功表达出大小约27.0kD的NS1重组蛋白.

摘要： 人鸟甘酸结合蛋白1(hGBPl)是一种干扰素诱导蛋白,参与宿主抗病毒免疫反应.A型流感病毒感染后,hGBPl的转录水平和蛋白水平显著上调.体外过表达试验显示hGBP1抑制A型流感病毒复制作用具有剂量依赖性,hGBP1第51位赖氨酸(K51)是其抑制流感病毒复制所必需的,51位赖氨酸突变会导致其丧失抑制流感病毒复制的功能.研究发现NS1可以和hGBP1相结合,NS1的123～144位氨基酸与hGBP1第51位赖氨基酸是两者结合所必需的关键位点.NS1结合hGBP1后,引起hGBP1的GTPase活性和抗流感病毒活性的显著降低.这些结果表明hGBPl在机体的抗流感病毒过程中具有重要作用,流感病毒NS1通过结合hGBP1拮抗hGBP1介导的抗病毒作用。

摘要： 人鸟甘酸结合蛋白1(hGBPl)是一种干扰素诱导蛋白,参与宿主抗病毒免疫反应.A型流感病毒感染后,hGBPl的转录水平和蛋白水平显著上调.体外过表达试验显示hGBP1抑制A型流感病毒复制作用具有剂量依赖性,hGBP1第51位赖氨酸(K51)是其抑制流感病毒复制所必需的,51位赖氨酸突变会导致其丧失抑制流感病毒复制的功能.研究发现NS1可以和hGBP1相结合,NS1的123～144位氨基酸与hGBP1第51位赖氨基酸是两者结合所必需的关键位点.NS1结合hGBP1后,引起hGBP1的GTPase活性和抗流感病毒活性的显著降低.这些结果表明hGBPl在机体的抗流感病毒过程中具有重要作用,流感病毒NS1通过结合hGBP1拮抗hGBP1介导的抗病毒作用。

摘要： 人鸟甘酸结合蛋白1(hGBPl)是一种干扰素诱导蛋白,参与宿主抗病毒免疫反应.A型流感病毒感染后,hGBPl的转录水平和蛋白水平显著上调.体外过表达试验显示hGBP1抑制A型流感病毒复制作用具有剂量依赖性,hGBP1第51位赖氨酸(K51)是其抑制流感病毒复制所必需的,51位赖氨酸突变会导致其丧失抑制流感病毒复制的功能.研究发现NS1可以和hGBP1相结合,NS1的123～144位氨基酸与hGBP1第51位赖氨基酸是两者结合所必需的关键位点.NS1结合hGBP1后,引起hGBP1的GTPase活性和抗流感病毒活性的显著降低.这些结果表明hGBPl在机体的抗流感病毒过程中具有重要作用,流感病毒NS1通过结合hGBP1拮抗hGBP1介导的抗病毒作用。

摘要： 人鸟甘酸结合蛋白1(hGBPl)是一种干扰素诱导蛋白,参与宿主抗病毒免疫反应.A型流感病毒感染后,hGBPl的转录水平和蛋白水平显著上调.体外过表达试验显示hGBP1抑制A型流感病毒复制作用具有剂量依赖性,hGBP1第51位赖氨酸(K51)是其抑制流感病毒复制所必需的,51位赖氨酸突变会导致其丧失抑制流感病毒复制的功能.研究发现NS1可以和hGBP1相结合,NS1的123～144位氨基酸与hGBP1第51位赖氨基酸是两者结合所必需的关键位点.NS1结合hGBP1后,引起hGBP1的GTPase活性和抗流感病毒活性的显著降低.这些结果表明hGBPl在机体的抗流感病毒过程中具有重要作用,流感病毒NS1通过结合hGBP1拮抗hGBP1介导的抗病毒作用。

摘要： 人鸟甘酸结合蛋白1(hGBPl)是一种干扰素诱导蛋白,参与宿主抗病毒免疫反应.A型流感病毒感染后,hGBPl的转录水平和蛋白水平显著上调.体外过表达试验显示hGBP1抑制A型流感病毒复制作用具有剂量依赖性,hGBP1第51位赖氨酸(K51)是其抑制流感病毒复制所必需的,51位赖氨酸突变会导致其丧失抑制流感病毒复制的功能.研究发现NS1可以和hGBP1相结合,NS1的123～144位氨基酸与hGBP1第51位赖氨基酸是两者结合所必需的关键位点.NS1结合hGBP1后,引起hGBP1的GTPase活性和抗流感病毒活性的显著降低.这些结果表明hGBPl在机体的抗流感病毒过程中具有重要作用,流感病毒NS1通过结合hGBP1拮抗hGBP1介导的抗病毒作用。

摘要： 将猪细小病毒基因组分4个重叠片段进行PCR扩增，并将产物克隆到pGEM-T载体中，测定基因组近全长序列。其中编码猪细小病毒非结构蛋白基因(NSl基因)全长为2189 bp，编码662个氨基酸;编码结构蛋白基因(VP2基因)全长为1740 bp，编码579个氨基酸。序列分析结果表明，猪细小病毒YL株与与国内外主要毒株NSl基因核苷酸同源性为：97.8％-99.4％，氨基酸同源性为96.7％-99.5％，与国内外主要毒株VP2基因核苷酸98.7％-99.7％，氨基酸同源性为：97.4％-99.8％;PPVYL株的进化分析表明，PPVYL株与EU79064 1毒株处在同一小分支上，遗传距离最近。

摘要： 本发明涉及一种肽组合物，其含有丙型肝炎病毒的多蛋白NS3/NS4和丙型肝炎病毒的多肽NS5b。本发明还涉及插入了编码多蛋白NS3/NS4和多肽NS5b的核酸序列的表达载体如腺病毒和痘病毒。本发明的组合物可用于治疗用途。

摘要： 本发明公开了一种II型草鱼呼肠孤病毒VP4‑NS38融合蛋白基因、表达载体、菌株及其应用。本发明通过融合PCR的方式将能够引起草鱼产生不同方式免疫应答反应的VP4和NS38蛋白以柔性linker连接，构建能够在枯草芽孢杆菌芽孢体中融合表达GCRVVP4‑NS38蛋白的重组芽孢杆菌。以该重组芽孢杆菌口服免疫草鱼能够刺激鱼体产生具有中和活性的黏膜抗体和血清抗体，而且能够引起草鱼产生体液免疫反应，也能够引起草鱼产生细胞免疫反应；同时还能够减少草鱼在病毒感染过程中的炎症反应。具有很好的安全性，对草鱼的生长不产生显著影响，也不会对草鱼的组织器官造成病理损害，可以应用在草鱼出血病口服疫苗的研究中。

摘要： 本发明涉及生物技术辅助育种领域，特别涉及黄瓜果实多刺基因ns紧密连锁的SNP标记及其应用。用于检测黄瓜果实多刺基因ns紧密连锁的SNP标记的引物，核苷酸序列为TCACCCTTACTCTAAAAAAGTA/GCTTTCAACGTGAAAAATGTG；所述引物扩增的与黄瓜果实多刺基因ns连锁的特征条带的核苷酸序列如Seq ID No.1所示，序列的23位碱基为T；所述引物扩增的与黄瓜果实少刺基因Ns连锁的特征条带的核苷酸序列如Seq ID No.2所示，序列的23位碱基为C。该标记可用在黄瓜候选材料的任何阶段判断其果实为多刺还是少刺，具有效率高、限制少、准确度高的优点。

摘要： 本发明提供了一种互换HA和NS1缺失基因包装信号的H9N2亚型禽流感病毒及其构建方法和应用，属于疫苗技术领域。一种互换HA和NS1缺失基因包装信号的H9N2亚型禽流感病毒，包括重组NS‑HAmut‑NS和HA‑NS1‑128mut‑HA基因。所述重组NS‑HAmut‑NS和HA‑NS1‑128mut‑HA基因的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。利用本发明所述基因构建得到的重组H9N2亚型禽流感病毒能有效避免HA和NS片段与野生毒株发生重配，且具有减毒特性和良好的攻毒保护效力。

摘要： 本文报道了具有减毒表型的新型重组呼吸道合胞病毒(RSV)，其中RSV基因组中NS1和/或NS2基因的天然位置被迁移到更高的位置，即位于更远离启动子的位置。基因位置的变化可以与其他基因座的突变组合存在，以达到所需的减毒和免疫原性水平。本文描述的重组RSV株适合用作减毒活RSV疫苗。还提供了能够编码所述病毒的多核苷酸序列，以及产生和使用该病毒的方法。

摘要： 提供了通过施用NS5A抑制剂、NS5B抑制剂、NS3抑制剂或其组合而治疗乙型肝炎病毒感染的方法。

摘要： 本发明公开了一种包含滨麦3Ns，6Ns和7Ns染色体的小麦-滨麦多重异代换系的培育方法，包括下述步骤：1)四倍体硬粒小麦与八倍体小滨麦杂交，在F1，F2，F3和F4世代均进行鉴定，筛选出染色体数目为2n=42，且含有滨麦Ns基因组染色体的单株；2)筛选出的单株均套袋自交，在F5世代，选育出含有6条滨麦Ns基因组染色体(3Ns，6Ns和7Ns)的小麦-滨麦多重异代换系。本发明公开了上述小麦-滨麦多重异代换系的鉴定方法。本发明公开的小麦-滨麦多重异代换系在株高、穗长、分蘖数等农艺性状方面得到了明显的改善。

摘要： 一种包含滨麦1Ns、5Ns和6Ns染色体的小麦-滨麦多重异代换系的创制：通过利用八倍体小滨麦M842-12(2n＝8x＝56，AABBDDNsNs)与硬粒小麦(2n＝4x＝28，AABB)品种Trs-372杂交，在F1，F2，F3和F4世代均进行细胞学染色体镜检和基因组原位杂交(GISH)鉴定，筛选染色体数目为2n＝42，且含有滨麦Ns基因组染色体的单株，对筛选出的单株均套袋自交，在F5世代，选育出1个含有滨麦1Ns、5Ns和6Ns染色体的小麦-滨麦多重异代换系05DM6。

摘要： 本发明涉及一种肽组合物，其含有丙型肝炎病毒的多蛋白NS3/NS4和丙型肝炎病毒的多肽NS5b。本发明还涉及插入了编码多蛋白NS3/NS4和多肽NS5b的核酸序列的表达载体如腺病毒和痘病毒。本发明的组合物可用于治疗用途。

摘要： 本发明涉及一种登革病毒NS1基因片段裸眼检测平台及制备方法，所述裸眼检测平台包括杂交液与AuNRs溶液；所述杂交液是通过采用DNA探针H1和H2对DENV‑NS1序列进行杂交链式反应得到杂交反应液；向杂交反应液加入捕获探针、信号放大探针以及底物显色液；对杂交反应液进行反应终止操作得到的；所述AuNRs溶液是通过向种子生长液中加入种子溶液搅拌均匀、孵育并纯化得到的；所述裸眼检测平台在使用时采用AuNRs溶液对杂交液进行AuNRs蚀刻并观察结果。本发明解决了检测过程中存在依赖大型仪器、高成本、需专业人员检测等问题，其检测成本低，无需复杂昂贵的大型仪器及专业人员即可实现裸眼对DENV‑NS1核酸检测，可用于DENV感染筛查。