猪流感病毒

摘要： 【目的】流感病毒的致病性是由多个基因共同决定的,笔者之前的研究结果发现当两株具有相似基因特征的H1N1亚型猪流感病毒进行HA基因替换以后,病毒对小鼠的致病性发生了改变。通过确定影响病毒致病性的关键氨基酸位点,为进一步揭示流感病毒致病力差异奠定了基础。【方法】对ZD71和SY130的HA蛋白氨基酸序列进行比对,确认氨基酸差异位点并设计定点突变引物,构建单点突变的重组病毒并测定其鸡胚半数感染量(EID50)。将拯救的亲本病毒、HA单基因替换重组病毒及单点突变重组病毒以感染复数(MOI)为0.001和0.1的病毒量分别接种于MDCK和A549细胞,测定病毒的体外复制能力;将上述各株病毒以50μL含106EID50的剂量经滴鼻途径接种BALB/c小鼠,分别采集小鼠的脑、鼻甲、肺、脾、肾等脏器,匀浆处理后接种鸡胚分析病毒在小鼠体内各脏器的复制情况;将病毒分别以50μL含101-106 EID50的剂量经鼻腔感染BALB/c小鼠,感染后每天称量小鼠体重,当小鼠体重下降比率超过25%时判定为死亡,统计死亡情况,测定病毒的小鼠半数致死量(MLD_(50)),评估各突变病毒对小鼠的致病性,与亲本病毒进行分析比较后,获知决定病毒致病性的关键氨基酸位点。【结果】ZD71和SY130病毒HA蛋白共存在4个氨基酸差异位点,分别为4、138、144和225位(H3 Numbering)。经过定点突变、病毒拯救及序列测定确认,分别获得含有单个位点突变的重组病毒。通过测定病毒在MDCK和A549细胞上的复制情况,结果发现与亲本病毒rZD71相比较,突变病毒rZD71-HA/G225E在感染MDCK细胞的各检测时间点、及感染A549细胞24—48 h后,复制滴度均显著提高;与rSY130相比较,突变病毒rSY130-HA/E225G在感染MDCK细胞12—36 h后、及感染A549细胞36—72 h后,复制滴度均显著降低。而4、138、144位点的突变对病毒的复制影响较小。进一步的小鼠感染试验发现HA 225位氨基酸的改变显著影响了病毒对小鼠的致病性,与亲本病毒rZD71相比,225位氨基酸由G突变为E后,病毒rZD71-HA/G225E的MLD_(50)由4.32 log_(10)EID_(50)降低至3.0 log_(10)EID_(50);病毒不仅在小鼠鼻甲和肺脏内检测到,而且在脾脏和肾脏中也均有一定水平的复制。【结论】HA蛋白225位氨基酸对两株H1N1 SIV对小鼠的致病性具有重要决定作用,提示在后续开展的病原学监测中要密切关注该位点氨基酸的变异情况,为更好地防控动物流感乃至人流感的大流行提供科学依据。

摘要： 1猪流感的概况猪流感是由猪流感病毒引起的一种急性、热性、高度传染性和群发性呼吸道疾病.该病一年四季均可发生,其中秋冬季节和春季发病率较高,每个年龄段的猪均可感染该病,且该病传染力非常强,可在较短时间内迅速波及整个猪场.按照核蛋白和基质蛋白的不同,流感病毒可分为三个血清型,即甲型、乙型和丙型,其中猪流感病毒属于甲型.目前,世界范围内甲型流感病毒的HA主要有16个亚型,NA有9个亚型,不同亚型之间组成了不同的血清型,现在已发现的猪流感病毒至少有9个血清型,世界范围内主要流行的猪流感病毒血清型为H1N1、H3N2和H1N2,我国主要流行的血清型为H1N1、H3N2.猪流感病毒毒株感染范围非常广,除了可以感染水禽外,还可以感染猪、人、马、狗等.

摘要： 为探究猪流感病毒(SIV)的流行情况,本实验室2020年11月从广州市某养殖场采集病猪鼻拭子30份,将鼻拭子接种9日龄SPF鸡胚,增殖后分离到1株具有凝血特性的病毒,经特异性PCR鉴定为流感病毒,通过进一步测序发现该病毒为H1N1亚型,命名为A/swine/Neimeng/03/2020(H1N1)。通过NCBI进行各基因片段的同源性比对,发现该病毒的基因与2000年左右的人H1N1亚型病毒同源性较高。通过构建系统遗传进化树发现,确认病毒株是由人流感病毒A/Dunedin/2/2000(H1N1)演化而来。通过HA基因推导发现该病毒HA1蛋白与2009年墨西哥流感的流行毒株以及经典的H1N1毒株具有较大的抗原性差异,该病毒呈现较低的致病性,与其HA裂解位点基序(PSIQSRGLF)表现一致,呈低致病性特征。

摘要： 为建立一种快速检测欧亚类禽H1N1猪流感病毒(EA H1N1 SIV)抗体的检测方法,本研究以EA H1N1 SIV代表株A/Swine/Liaoning/445/2018(LN445)灭活的全病毒免疫BALB/c小鼠,通过HI试验筛选得到7株HA蛋白单克隆抗体(MAb),分别命名为1B3、2B12、2E1、3B4、3F6、3G5、3H12。抗体亚类鉴定结果显示,HA蛋白MAb除3B4重链为IgG1之外,其余均为IgG2a,7株MAb轻链均为κ链。间接免疫荧光试验结果显示,7株HA蛋白MAb均可以与EA H1N1 SIV发生特异性反应。采用纯化的EA H1N1 SIV(LN445)灭活全病毒作为包被抗原,以EA H1N1 SIV SPF猪阳性血清作为待检血清,选取HA蛋白MAb 2B12作为竞争抗体,经条件优化后初步建立了检测EA H1N1 SIV抗体的竞争ELISA方法。特异性试验结果显示EA H1N1 SIV的阳性血清对2B12 MAb具有良好的阻断作用,而甲型H1N1 SIV、H3N2 SIV、猪圆环病毒2型(PCV2)、轮状病毒(RV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)和肠致病性大肠杆菌(EPEC)阳性血清对其均无阻断作用,表明该方法的特异性较强;敏感性试验结果显示,该方法对HI效价为1:10的EA H1N1 SIV阳性血清检测仍为阳性结果,敏感性较高;重复性试验结果显示,该方法批内、批间变异系数均小于10%,重复性较好。利用本研究建立的竞争ELISA方法与GB/T 27535-2011猪流感HI抗体检测方法同时对100份临床猪血清样品进行检测,结果显示该方法与国标HI检测方法总体符合率为81%,表明该方法的准确性较高。本研究为EA H1N1 SIV抗体检测和流行病学调查提供了有效的检测手段。

摘要： 猪流感是猪的一种常见易患疾病,是由甲型流感病毒入侵猪呼吸道诱发的疾病。该病的传染性强,会对养猪业造成不利影响,若不能及时做好防控,会在养殖区域内大范围传播,造成巨大的经济损失。本文介绍了猪流感的诊断和预防措施,供参考。

摘要： 猪流感现已成为全球性的地方性流行病。猪流感病毒感染猪群后会导致受感染猪体重下降、增重慢,抵抗力低下者,易与其他病原体混合感染,从而导致猪群料肉比降低、繁殖性能下降、死亡率增高、经济效益降低。本文就猪流感的病原特性、临床症状、病理变化、临床诊断方法及常见的防控措施进行了论述,以期为广大养殖户科学防控猪流感提供借鉴。

摘要： 1冬春季节猪流行性感冒的发病特点1.1有一定的季节性一般猪流行性感冒主要由A型猪流感病毒引起,对这种病毒的研究已经较为成熟。根据其病毒结构合成了多种亚型流感病毒,相匹配地具备多种治疗血清。常见的猪流感病毒有猪H1N1、猪H3N2、猪H9N2等,第一种病毒中包含猪流感、禽流感和人流感病毒基因,不仅感染猪和禽类,还会对人体造成感染[1]。

摘要： 本研究分离得到两株猪源H1N1流感病毒,通过进化树分析发现分别是欧亚类禽H1N1猪流感病毒和类鸭源H1N1猪流感病毒,为了研究两株毒株的NS1蛋白对Ⅰ型IFN产生的抑制能力,分别构建了2个毒株的NS1基因的真核表达载体,将NS1真核表达质粒、Ⅰ型IFN报告质粒与干扰素刺激质粒RIG-I共转染293T细胞,利用双荧光素酶报告基因检测Ⅰ型IFN激活水平.结果显示:欧亚类禽H1N1猪流感病毒NS1蛋白对人源细胞干扰素的拮抗作用明显强于类鸭源H1N1猪流感病毒;2种NS1蛋白对RIG-I与TBK-1激活的IFN-I抑制能力存在显著的差别,但是对IRF-3激活的IFN-I抑制能力没有显著差别.本研究结果初步揭示了欧亚类禽与类鸭源H1N1猪流感病毒抑制IFN-I能力的差异,及H1N1禽流感适应猪群的潜在分子机制.

摘要： 为制备H3N2亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体(MAb)并对其抗原表位进行鉴定,本研究采用RT-PCR方法扩增H3N2亚型SIV的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGs中,获得重组质粒pCAGGs-HA,以重组质粒pCAGGs-HA免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用血凝抑制(HI)试验和ELISA方法筛选出1株稳定分泌抗SIV HA1蛋白MAb的杂交瘤细胞株(3F8),经ELISA检测结果显示其诱导小鼠产生的腹水效价为1∶106;HI试验检测结果显示其效价为12 log2.利用噬菌体随机7肽库对纯化的抗H3N2亚型SIV HA1蛋白的MAb 3F8进行了 4轮筛选,经DNA测序得到3个7肽序列,分别是"HPRRRRV"(E1)、"WPFHHHR"(E2),"IERGRTS"(E3),3个7肽序列经比对显示与 H3N2 SIV HA1 蛋白有部分同源区,为HA蛋白的模拟表位,分别位于HA1蛋白序列的157、158位(E1)、196、199、200位(E2)、276、279、282位(E3),即位于流感病毒HA蛋白5个抗原位点中的B位点与C位点,且均位于HA1段上,与制备的抗HA1段蛋白的MAb鉴定结果一致.本研究制备了 SIVH3N2亚型的HA蛋白MAb,并利用噬菌体短肽库技术获得该SIV HA模拟表位,为进一步设计具有广谱保护性的SIV表位疫苗提供了数据支持.

摘要： 目的:从猪流感疑似病例中分离鉴定猪流感病毒,并对病毒进行全基因组测序及其序列的分析. 方法:采用鼻棉拭子法从猪流感疑似病猪的鼻中收集病样,制成病毒悬液,经SPF鸡胚增殖培养和纯化.采用红细胞凝集、血凝抑制和神经氨酸酶抑制试验进行病毒亚型的判定,并作电镜观察.运用RT-PCR法扩增病毒的8个基因片段,分别克隆到pMD18-T载体,进行全基因组测序及序列分析. 结果与结论:获得一株猪流感病毒,经血凝和血凝抑制试验,判定为H3N2亚型,命名为A/Swine/Chongqing/CQ/3/2011(H3N2),简称SIV CQ3.基因组序列比较分析显示,SIV CQ38个节段与不同时间的猪流感广东分离株(H3N2亚型)相应基因的核苷酸相似性最高,可能来源于H3N2亚型SIV.然而,NP、HA和NA基因编码氨基酸序列与参考毒株A/New York/392/2004(H3N2)的相似性比较低,分别达95％、89％和90％;而血凝素(HA)裂解位点处的氨基酸序列为P-E-K-Q-T-R↓G,与参考毒株的一致,不具有高致病分子特征.此外,HA和NA的糖基化位点、受体结合位点处氨基酸存在一定程度的差异.最后,系统进化树分析显示,NP、HA基因位于SIV群,与A/swine/Guangdong/2006/(H3N2)处于同一分支;而NA基因与禽流感(A/Duck/Ontario/2000/AJ697881)和猪流感位于同一个进化单元,表明这株H3N2亚型流感病毒在不断的发生演变.

摘要： 猪流感病毒(SIV)和猪链球菌是危害全球养猪生产的两种重要病原,二者均能感染猪并引起严重呼吸道疾病.临床上,猪流感病毒和猪链球菌混合感染时有发生,引起猪呼吸道疾病综合征,导致严重的肺炎,大大提高感染的致病力,造成巨大经济损失.然而,这两种病原混合感染的协同致病机制并不清楚.本研究以H1Nl亚型猪流感病毒和猪链球菌2型(SS2)为对象，建立SIV-SS2混合感染模型。研究发现，SIV-SS2混合感染较SIV和SS2单独感染引起更为严重的临床症状，肺脏病变和显著的肺脏细胞凋亡。基因芯片分析发现，混合感染组中参与免疫、炎性、和凋亡反应的差异基国较单独感染组显著增多。

摘要： 2012年辽宁省某屠宰场猪鼻咽拭子样品中分离到一株流感病毒,经HA-HI试验和RT-PCR鉴定为H1N1亚型猪流感病毒株,通过对病毒的八个基因片段克隆并测序,并利用分子生物学软件进行遗传演化分析.结果表明,分离株HA基因裂解位点附近的氨基酸序列为IPSIQSR↓G,符合低致病力流感病毒的分子特征;全基因组进化树结果表明,分离株的8个基因片段与该株核苷酸同源性最高,分离株处在类禽型H1N1亚型遗传进化分支上.此实验为辽宁首次分离到该型猪流感病毒.

摘要： 为了比较4种常用消毒剂对猪流感病毒的杀灭效果,通过采用鸡胚感染试验和Klein-Defors悬浮灭活试验,研究了戊二醛、氢氧化钠、聚维酮碘、复合消毒剂等4种常用消毒剂在不同浓度下,与H3N2猪流感病毒作用5 min和10 min的杀灭率.结果:戊二醛1∶20000的稀释液、氢氧化钠1∶1000的稀释液、聚维酮碘1∶50的稀释液、复合消毒剂1∶20000的稀释液能将病毒100％杀灭.因此,复合消毒剂和戊二醛的杀灭效果较为显著,其他依次是氢氧化钠、聚维酮碘.

摘要： 中国报道过的20株H1N2猪流感病毒目前仍没有详细的基因型和重组特征分析，为此本研究根据流感病毒库中的序列对比，将H1N2猪流感病毒进行具体分型，并且利用2009年本实验室在湖北从猪体内分离到的两株H1N2猪流感病毒进行小鼠致病性研究，为H1N2猪流感的防控奠定基础。

摘要： 目的:获得具有抑制猪流感病毒复制能力的表达多基因转基因猪.rn 方法:在成功培育F0代表达shRNA-Mx-RNAi三基因转基因猪的基础上,经PCR、Southern blot、RT-PCR、Western blot 方法鉴定,筛选出阳性转基因猪,与野生型同品种猪(WT)进行杂交繁育F1代转基因猪.通过上述分子生物学方法分析阳性转基因猪.分离与培养1日龄F1代转基因猪体细胞,100TCID50A /Swine/Guangdong/2004(H1N1)毒株感染体细胞,通过间接免疫荧光(IFA)、实时荧光定量PCR(Real-time PCR)、病毒滴度测定分析了转基因猪体细胞抗流感病毒活性.rn 结果:3头F0代转基因猪均为阳性转基因猪,选择其中1头阳性转基因猪与野生型同种猪繁育获得5头F1代转基因猪,1头为阳性转基因猪.与非转基因猪和WT猪相比,阳性转基因猪体细胞具有抑制流感病毒复制活性,细胞感染流感病毒16h,细胞中H1N1 PB2基因复制效率比WT降低2倍,细胞上清中病毒TCID50达1×10-2.8.rn 结论:该表达shRNA-Mx-RNAi三基因转基因猪体细胞在体外具有抑制流感病毒复制活性,为进一步在体内评价转基因猪抑制猪流感病毒病毒活性奠定了基础.

摘要： 猪流感H1N1和猪链球菌2型(SS2)共感染引起的猪呼吸道疾病综合征在临床上普遍存在,给养猪业造成了重大经济损失.但是其致病机制尚不完全清楚.本研究首次以仔猪为实验动物,构建了H1N1和SS2的共感染模型,利用基因芯片对共感染仔猪肺脏进行基因表达谱分析.结果发现,共感染能引起更为剧烈的炎症反应和促凋亡反应,这可能是造成共感染致病力比单独感染更强的两个原因.该研究为理解共感染致病机制提供了一定基础.

摘要： 为建立可同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)与猪流感病毒(SIV)三重RT-PCR方法,本研究根据Gen-Bank登录的相关病毒基因序列,选择保守区域设计引物,经过反应条件的优化,建立了可同时检测以上3种病毒的RT-PCR诊断方法,扩增的目的片段长度分别为364 bp (PRRSV)、530 bp (CSFV)和981 bp (SIV).通过试验证明该方法具有良好的特异性和较高的敏感性,对PRRSV、CSFV和SIV的核酸检测最低浓度分别为3.2×10-2、8.3×10-2和3.7×10-2 ng.该方法的成功建立为快速高效地检测以上3种病毒提供了有力手段.

摘要： 应对由猪流感病毒引起的人流感大流行是世界公共卫生机构所关心的重要问题之一。对猪流感病毒的受体亲和性鉴定对于评估病毒跨越种间屏障的潜能非常重要。本研究利用固相酶联方法对分离自吉林省猪群中的3株H3N2亚型流感病毒进行了受体亲和性鉴定。结果显示,这3株病毒与SAα2,3和SAα2,6受体都能结合,并且偏嗜SAα2,6受体,暗示它们具有感染人的潜能。因此应该加强猪流感的流行病学调查,及时发现那些具有引发人流感流行潜能的病毒,为防控人间流感提前做好准备。

摘要： 为研究复方在小鼠体内的抗流感效果及其作用机制,本实验通过使BALB/C小鼠感染H1N1和H3N2两种亚型流感病毒,然后研究中药复方对感染SIV小鼠的保护作用及其机制.实验表明:复方一组、复方一组、复方三组对SIV感染小鼠的保护率、平均存活时间和延长寿命率均高于模型对照组,肺指数低于模型对照组,与模型对照组相比IL-2、INF-γ上升,TNF-α下降.结果提示:复方一、复方一、复方三抗SIV效果显著,且能提高机体免疫力.

摘要： 本发明提供一种混合病毒样颗粒包含流感病毒的基质蛋白M1，流感病毒的表面抗原红细胞凝集素HA，一个融合膜蛋白，其包含猪口蹄疫病毒的含有主要抗原表位的衣壳蛋白，流感病毒的红细胞凝集素HA的跨膜区和膜内区；所述猪口蹄疫病毒的含有主要抗原表位的衣壳蛋白替换流感病毒的红细胞凝集素HA的5’端的大致相同长度的膜外域；在所述混合病毒样颗粒的表面上同时表达流感病毒的表面抗原红细胞凝集素HA和猪口蹄疫病毒的含有主要抗原表位的衣壳蛋白。本发明还提供猪流感和猪口蹄疫二价疫苗，包含所述的混合病毒样颗粒和佐剂。本发明还提供制备混合病毒样颗粒的方法。

摘要： 本发明公开了一种流感病毒rRT-PCR(real-time RT-PCR)检测引物和探针及检测流感病毒的方法及H7N9亚型流感病毒标准品，包括H7N9亚型流感病毒特异性引物和探针3种共9条寡核苷酸引物和探针序列，同时包括待检样本的处理、rRT-PCR反应体系及反应条件、结果分析。能快速有效的甄别人和动物中的H7N9亚型流感病毒。操作简单、应用方便，为临床诊断、检验检疫等领域的流感疫情早期预警机制提供了可行的技术支持。

摘要： 本发明提供一种混合病毒样颗粒包含流感病毒的基质蛋白M1，流感病毒的表面抗原红细胞凝集素HA，一个融合膜蛋白，其包含猪口蹄疫病毒的含有主要抗原表位的衣壳蛋白，流感病毒的红细胞凝集素HA的跨膜区和膜内区；所述猪口蹄疫病毒的含有主要抗原表位的衣壳蛋白替换流感病毒的红细胞凝集素HA的5’端的大致相同长度的膜外域；在所述混合病毒样颗粒的表面上同时表达流感病毒的表面抗原红细胞凝集素HA和猪口蹄疫病毒的含有主要抗原表位的衣壳蛋白。本发明还提供猪流感和猪口蹄疫二价疫苗，包含所述的混合病毒样颗粒和佐剂。本发明还提供制备混合病毒样颗粒的方法。

摘要： 本发明提供混合病毒样颗粒包含猪流感病毒的基质蛋白M1，猪流感病毒的表面抗原红细胞凝集素HA，一个融合膜蛋白，其包含猪蓝耳病病毒GP5蛋白的主要抗原表位的膜外域，流感病毒的红细胞凝集素HA的跨膜区和膜内区；所述含猪蓝耳病病毒GP5蛋白的主要抗原表位的膜外域替换流感病毒的红细胞凝集素HA的5’端的大致相同长度的膜外域；在所述混合病毒样颗粒的表面上同时表达流感病毒的表面抗原红细胞凝集素HA和猪蓝耳病病毒GP5蛋白。本发明还提供猪流感和蓝耳病二价疫苗，包含所述的混合病毒样颗粒和佐剂。本发明还提供制备混合病毒样颗粒的方法。

摘要： 本发明属于生物技术领域，公开了猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒及其制备方法。根据猪流感病毒(A/swine/Guangxi/1/2004(H3N2))毒株HA1的基因序列设计、合成HA1基因，并把该基因克隆入猪痘病毒载体pUSZ11中，得到转移载体pUSZ11/H3。所述的重组病毒是将猪痘病毒和转移载体pUSZ11/H3感染、转染PK15细胞，进行同源重组获得的阳性克隆。该重组猪痘病毒能稳定表达HA1蛋白，接毒后细胞病变出现规律，种毒的毒价稳定在107TCID50/mL，并能有效地刺激机体的免疫保护反应，能够在制备预防和/或治疗猪流感病毒H3N2亚型感染的药物中应用。

摘要： 本发明属于生物技术领域，公开了猪流感病毒H1N1亚型HA1蛋白重组猪痘病毒及其制备方法。根据猪流感病毒A/swine/Shanghai/1/2005(H1N1)毒株HA1的基因序列设计、合成HA1基因，并把该基因克隆入猪痘病毒载体pUSZ11中，得到转移载体pUSZ11/H1。所述的重组病毒是将猪痘病毒和转移载体pUSZ11/H1感染、转染PK15细胞，进行同源重组获得的阳性克隆。该重组猪痘病毒能稳定表达HA1蛋白，接毒后细胞病变出现规律，种毒的毒价稳定在107TCID50/mL，并能有效地刺激机体的免疫保护反应，能够在制备预防和/或治疗猪流感病毒H1N1亚型感染的药物中应用。

摘要： 本发明属于生物技术领域，公开了猪流感病毒H3N2和H1N1亚型HA1蛋白重组猪痘病毒及其制备方法。根据猪流感病毒H3N2毒株和H1N1毒株的HA1基因序列、口蹄疫病毒的2A基因序列，设计、合成H3-2A-H1基因，并把该基因克隆入猪痘病毒载体pUSZ11中，得到转移载体pUSZ11/H3-2A-H1。将猪痘病毒和转移载体pUSZ11/H3-2A-H1感染、转染PK15细胞，进行同源重组获得重组猪痘病毒。该重组猪痘病毒能稳定表达猪流感病毒H3N2和H1N1的HA1蛋白，能有效地刺激机体的免疫保护反应，可在制备预防和/或治疗猪流感病毒H3N2和H1N1亚型感染的药物中应用。

摘要： 本发明属于兽用疫苗领域，具体涉及一种猪圆环病毒2型杆状病毒、猪肺炎支原体、猪流感病毒、副猪嗜血杆菌四联灭活疫苗，并进一步公开其制备方法和应用。本发明所述四联灭活疫苗，含有灭活的猪圆环病毒2型杆状病毒表达的Cap蛋白、灭活的猪肺炎支原体、灭活的猪流感病毒H1N1亚型病毒、灭活的副猪嗜血杆菌4型、5型、13型和疫苗的佐剂；四种抗原之间无干扰，可实现一针免疫四种保护，一次免疫即可预防四种疫病；同时，从攻毒保护和血清抗体水平看，其免疫效果达到或超过各商品单苗的水平，免疫持续期长，效力持久，具备了安全性好、制备方法简单、免疫方便、降低免疫成本等优点。

摘要： 本发明提供混合病毒样颗粒包含猪流感病毒的基质蛋白M1，猪流感病毒的表面抗原红细胞凝集素HA，一个融合膜蛋白，其包含猪蓝耳病病毒GP5蛋白的主要抗原表位的膜外域，流感病毒的红细胞凝集素HA的跨膜区和膜内区；所述含猪蓝耳病病毒GP5蛋白的主要抗原表位的膜外域替换流感病毒的红细胞凝集素HA的5’端的大致相同长度的膜外域；在所述混合病毒样颗粒的表面上同时表达流感病毒的表面抗原红细胞凝集素HA和猪蓝耳病病毒GP5蛋白。本发明还提供猪流感和蓝耳病二价疫苗，包含所述的混合病毒样颗粒和佐剂。本发明还提供制备混合病毒样颗粒的方法。

摘要： 本发明提供了一种猪丹毒、猪细小病毒、猪流感病毒三联灭活疫苗制备方法，所得到的疫苗免疫母猪，能起到一针多防的作用，填补了市场上目前缺少猪丹毒、猪细小病毒、猪流感病毒三联灭活疫苗的空白。该方法采用了特定的免疫佐剂，疫苗免疫后免疫部位不会引起红肿发热的副反应，不会影响免疫后猪的精神及采食情况，有效提升了免疫猪只的免疫效果以及生产性能。与现有技术中各单抗原疫苗相比免疫效力相当，保护率均在80％以上。同时，本发明方法有效提升了猪丹毒、猪细小病毒、猪流感病毒三联灭活疫苗质量的稳定性，克服了转瓶培养过程中操作繁杂、工作强度大、易污染等缺点。