E3泛素连接酶

摘要： 目的研究葛根素抑制非小细胞肺癌细胞生长、侵袭和迁移的机制。方法培养A549细胞,采用不同浓度的葛根素处理细胞。CCK-8法检测细胞增殖抑制率(IR);qRT-PCR法检测细胞中miR-490和E3泛素连接酶(DTL)mRNA的表达情况;构建miR-490过表达对照组、miR-490过表达模拟物组、miR-490沉默阴性对照组、miR-490沉默组,采用双荧光素酶报告分析miR-490和DTL的靶向关系。将20μmol/L葛根素处理过的细胞分为对照组、葛根素组、葛根素+miR-490阴性对照组、葛根素+miR-490沉默模拟物组、葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组、葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL沉默质粒组。Transwell法检测细胞迁移和侵袭。Western blot检测上皮细胞-间充质转化进程标志因子E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达。结果随着葛根素浓度升高,细胞抑制率逐步升高,差异有统计学意义(F=105.375,P<0.001);且miR-490表达逐步升高(F=32.919,P<0.001),DTL表达逐步降低(F=116.120,P<0.001)。双荧光素酶报告分析显示,与miR-490过表达对照组相比,miR-490过表达模拟物组荧光素酶活性显著降低(t=7.762,P=0.016),miR-490 mRNA表达显著升高(t=13.319,P<0.001),DTL mRNA表达显著降低(t=7.415,P=0.002);与miR-490沉默阴性对照组相比,miR-490沉默组细胞中miR-490表达显著降低(t=9.523,P=0.001),DTL mRNA的表达显著升高(t=11.305,P<0.001)。Western blot检测结果显示,与miR-490过表达对照组相比,miR-490过表达模拟物组的DTL蛋白表达显著降低(t=7.953,P=0.001);与miR-490沉默阴性对照组相比,miR-490沉默组细胞中的DTL蛋白表达显著升高(t=10.552,P<0.001)。经葛根素处理后,与对照组相比,葛根素组细胞miR-490表达显著升高(t=10.255,P=0.001),DTL mRNA表达显著降低(t=6.682,P=0.003);与葛根素+miR-490阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物组细胞中miR-490表达显著降低(t=10.995,P<0.001),DTL mRNA表达显著升高(t=12.478,P<0.001);与葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL沉默质粒组细胞miR-490表达差异无统计学意义(t=1.081,P=0.341),DTL mRNA表达显著降低(t=14.321,P<0.001)。与葛根素+miR-490阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物组DTL蛋白表达显著升高(t=11.423,P<0.001);与葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL沉默质粒组细胞的DTL蛋白表达显著降低(t=12.080,P<0.001)。与对照组相比,葛根素组细胞增殖能力显著降低(F=129.27,P<0.001);与葛根素+miR-490阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物组细胞增殖能力显著升高(F=75.12,P<0.001);与葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL沉默质粒组细胞增殖能力显著降低(F=52.59,P<0.001)。与对照组相比,葛根素组细胞迁移能力显著降低(t=8.963,P=0.001);与葛根素+miR-490阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物组细胞迁移能力显著升高(t=12.117,P<0.001);与葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL沉默质粒组细胞迁移能力显著降低(t=12.934,P<0.001)。与对照组相比,葛根素组细胞侵袭能力显著降低(t=4.710,P=0.009);与葛根素+miR-490阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物组细胞侵袭能力显著升高(t=13.264,P<0.001);与葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL沉默质粒组细胞侵袭能力显著降低(t=13.476,P<0.001)。与对照组相比,葛根素组E-cadherin蛋白表达显著升高(t=7.137,P=0.002),N-cadherin(t=8.828,P=0.001)和Vimentin蛋白表达(t=6.594,P=0.003)显著降低;与葛根素+miR-490阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物组细胞中E-cadherin蛋白表达显著降低(t=12.376,P<0.001),N-cadherin(t=13.436,P<0.001)和Vimentin蛋白表达(t=11.467,P<0.001)显著升高;与葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL沉默质粒组E-cadherin蛋白表达显著升高(t=13.081,P<0.001),N-cadherin(t=10.835,P<0.001)和Vimentin蛋白表达(t=11.862,P<0.001)显著降低。结论葛根素可能是通过上调miR-490表达,降低其靶基因DTL的表达,抑制非小细胞肺癌的生长、侵袭和迁移。

摘要： 【目的】无子瓯柑是其野生型的雄性不育突变体。基于转录组-代谢组关联分析,克隆无子瓯柑E3泛素连接酶基因CsRNF217,分析其序列特征、表达模式、亚细胞定位及基因功能。【方法】采用生物信息学方法分析无子瓯柑CsRNF217基因序列特征;利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)分析时空表达模式;根据转基因烟草表型特征分析基因功能,采用烟草瞬时表达分析其亚细胞定位。【结果】无子瓯柑CsRNF217基因cDNA全长768 bp,编码255个氨基酸,具有RING型E3家族典型结构域。qRT-PCR结果显示,无子瓯柑CsRNF217基因在雄蕊中表达量最高,在小孢子发育后期上调表达。过表达转基因烟草的种子数量和花粉活力显著下降。烟草叶片瞬时表达的荧光信号特异位于细胞核。【结论】无子瓯柑CsRNF217基因编码RING型E3,定位于细胞核,在雄蕊中表达量最高,在花粉发育晚期上调表达,推测对无子瓯柑和过表达转基因烟草的花粉发育过程可能起到负向调控作用。

摘要： 泛素化作为真核生物细胞内普遍存在且极为关键的蛋白质翻译后修饰,可以使被修饰的蛋白质发生降解,在植物生长发育、胁迫应答等方面发挥着重要作用。泛素化降解需要通过E3泛素连接酶特异性识别靶蛋白并对其进行修饰,因此E3连接酶在泛素化途径中起着决定性的作用。文章通过克隆番茄SlSL1基因编码序列、构建原核重组表达质粒,并利用诱导表达、亲和吸附纯化SlSL1重组蛋白,以此进行SlSL1的体外泛素化活性检测。SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色结果显示,由所构建番茄SlSL1基因重组质粒纯化获得SlSL1蛋白;体外泛素化检测显示,SlSL1蛋白形成多聚化泛素条带,具有E3泛素连接酶活性,表明SlSL1可能在番茄的泛素化调控途径中发挥功能。

摘要： 为探究泛素连接酶库伦-5(Cullin5,Cul5)对牛骨骼肌卫星细胞增殖和分化的影响,本实验采用牛肌卫星细胞进行体外实验模拟牛体内的成肌分化过程,根据基因的表达序列设计Cul5的小干扰RNA(si-RNA),通过实时定量PCR(qRT-PCR)蛋白质印迹(Western Blot)技术筛选出干扰效果最好的si-RNA转染细胞。成功干扰Cul5后,在转录、蛋白、细胞水平上分别采用qRT-PCR、Western Blot和EdU细胞增殖实验,检测细胞增殖及分化标志因子的表达水平。试验发现,干扰Cul5后,在蛋白水平上Pax7呈显著上调趋势,MyHC呈显著下调趋势,EdU染色阳性细胞率与对照组相比呈显著上调趋势。细胞光镜图下,实验组肌管的数量明显少于对照组。研究结果可见:敲低Cul5的表达能够促进牛肌卫星细胞的增殖,并抑制其分化进程。

摘要： 阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是老年期常见的、以进行性认知功能障碍为特征的中枢神经系统(CNS)退行性疾病。AD疾病进展缓慢,可逐渐从记忆减退发展至丧失身体机能,对家庭和社会造成极重的负担。AD患者脑内β-淀粉样蛋白异常聚集和沉积,神经元凋亡和突触功能障碍,神经炎症以及线粒体功能受损是AD典型的病理特征,而引起这些病理特征的原因之一可能是相关蛋白质生成和降解失衡。近几年,许多研究发现泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)在脑内蛋白质平衡方面起到重要作用。在UPS中,E3泛素连接酶又是其中数量、种类最多,调控机制最复杂的酶,能够参与调节多种AD相关蛋白,在AD等神经退行性疾病中起到非常重要的作用。本文围绕AD主要病理特征,就E3泛素连接酶在AD中的作用进行综述,以期为理解AD的发病机制提供新的研究思路。

摘要： 近年来,蜱媒疾病的不断发生威胁着人类的健康和公共卫生安全。明确病原体与蜱媒唾液腺细胞相互作用的信号调控元件及通路、揭示蜱媒病原传播的分子基础,有助于阻断蜱媒疾病的传播、制定和优化蜱媒传染病的防控策略。本文通过对蜱类主要细胞免疫系统信号通路(如Toll、IMD、JAK/STAT等)及其泛素化(特别是E3泛素连接酶)机制在蜱类调控信号通路和免疫逃逸方面的作用进行回顾,以期探讨E3泛素连接酶对于蜱媒病原的感染、定植和传播的生物学意义,为科学阻断蜱媒病原传播、制定蜱媒传染病的防控策略提供技术支持。

摘要： 目的探讨膜相关锌指蛋白5(MARCH5)在卵巢癌细胞糖代谢中的调控作用。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为对照组(siCtrl)、MARCH5干涉组1(siMARCH5#1)与MARCH5干涉组2(siMARCH5#2),分别用葡萄糖摄取、乳酸生成、氧耗速率、ATP产生及代谢组学实验,分析下调MARCH5对卵巢癌细胞糖代谢的影响。结果与对照组SKOV3细胞相比,MARCH5干涉组1与干涉组2细胞的葡萄糖摄取[(1.00±0.06)vs(0.45±0.02)vs(0.44±0.02)]与乳酸产生[(1.00±0.05)vs(0.36±0.02)vs(0.35±0.03)]显著减少,而氧耗速率[(3.15±0.10)vs(5.73±0.14)vs(5.67±0.11)]与ATP含量[(1.00±0.04)vs(1.69±0.06)vs(1.74±0.07)]则显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);此外,与对照组SKOV3细胞相比,MARCH5干涉组1与干涉组2细胞内糖酵解代谢物显著减少,而线粒体三羧酸循环代谢物显著增多,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MARCH5促进了卵巢癌细胞糖代谢由氧化磷酸化向糖酵解的转变。

摘要： SCF (SKP1-Cullin 1-F-box protein) E3泛素连接酶作为E3泛素连接酶中最重要的家族,负责人类机体内多种蛋白的降解。其中,F-box蛋白作为SCF E3泛素连接酶的底物受体,其功能失调在包括原发性肝癌在内的多种人类癌症中发挥着重要的作用。本文将根据国内外文献报道FBXW7在原发性肝癌发生发展中发挥的重要角色,为未来针对FBXW7及其信号通路的分子靶向药物的开发在原发性肝癌中的运用提供方向。

摘要： 目的 检测E3泛素连接酶(tripartite motif containing 50,TRIM50)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中生物学功能,并探究TRIM50蛋白表达对OSCC细胞恶性表型调控的潜在机制.方法 采用蛋白质免疫印迹法检测OSCC细胞Cal27、HSC3、HOK、SCC9以及SCC25中TRIM50蛋白的表达.通过脂质体将搭载TRIM50-Flag表达序列的pcDNA3.1(+)质粒导入SCC9和SCC25细胞,设置空白载体作为过表达实验的空白对照组.同样的方法将TRIM50小干扰RNA(small inter-fering RNA,siRNA)转入Cal27和HOK细胞,设置无义干扰片段作为沉默实验的阴性对照组.然后,通过蛋白质免疫印迹法分别检测TRIM50过表达和沉默后OCSS细胞TRIM50表达水平的变化,再通过细胞计数法统计各组中OSCC细胞在相同的时间内细胞增殖的数目、克隆形成的集落数和迁移侵袭细胞数目的变化.之后,裂解提取OSCC细胞中的总蛋白,并通过TRIM50抗体进行免疫共沉淀鉴定在OSCC细胞中与TRIM50蛋白相互作用的蛋白.结果 OSCC细胞系中,SCC9和SCC25细胞低表达TRIM50,Cal27和HOK细胞高表达TRIM50.在SCC9和SCC25细胞过表达TRIM50后,相比于空白对照组,过表达TRIM50组SCC9和SCC25细胞的增殖数目增多、克隆形成集落数增多和迁移侵袭的细胞数增多(均P0.05).结论 TRIM50作为促癌基因增强了OSCC细胞的增殖、克隆形成和迁移侵袭能力.Rb是E3泛素化连接酶TRIM50所作用的底物蛋白.TRIM50通过促进Rb蛋白的泛素化降解下调其蛋白的表达量,调控OSCC细胞的恶性表型.

摘要： 泛素-蛋白酶体系统是真核细胞蛋白质降解的重要途径之一,在细胞的增殖、分化、凋亡以及DNA的修复等生理活动的调节中起着重要作用.E3泛素连接酶是泛素-蛋白酶体系统的重要组成部分,决定底物识别的特异性.E3泛素连接酶的失调会引起癌症、阿尔茨海默症和帕金森病等多种疾病.本文对靶向E3泛素连接酶的药物在癌症、阿尔茨海默病、帕金森病、糖尿病并发症、动脉粥样硬化以及炎症性肠炎等领域的研究进展进行了总结.目前能够开发成为药物的靶向E3泛素连接酶的小分子抑制剂或激动剂数量不多,我国在天然产物的研究与开发方面具有突出的优势,很多天然产物都具有靶向E3泛素连接酶的活性,值得进一步开发应用.

摘要： 探讨E3泛素(Ub)连接酶Parkin在糖尿病鼠肠缺血再灌注(ⅡR)所致肠损伤易损性增加中的作用.将42只健康雄性C57BL/6L小鼠随机分为4组：假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、糖尿病+假手术组(DS组)、糖尿病+缺血再灌注组(DIR组).通过链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病小鼠模型,采用无创动脉夹夹闭肠系膜上动脉根部45min恢复灌注2h的方法制备小鼠肠缺血再灌注损伤模型,2h后处死小鼠,留取小肠组织,观察组织病理改变行Chiu＇s病理学损伤评分,HE染色观察小肠组织病理变化,检查小肠组织Parkin蛋白的表达情况.

摘要： 探讨E3泛素(Ub)连接酶Parkin在糖尿病鼠肠缺血再灌注(ⅡR)所致肠损伤易损性增加中的作用.将42只健康雄性C57BL/6L小鼠随机分为4组：假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、糖尿病+假手术组(DS组)、糖尿病+缺血再灌注组(DIR组).通过链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病小鼠模型,采用无创动脉夹夹闭肠系膜上动脉根部45min恢复灌注2h的方法制备小鼠肠缺血再灌注损伤模型,2h后处死小鼠,留取小肠组织,观察组织病理改变行Chiu＇s病理学损伤评分,HE染色观察小肠组织病理变化,检查小肠组织Parkin蛋白的表达情况.

摘要： 探讨E3泛素(Ub)连接酶Parkin在糖尿病鼠肠缺血再灌注(ⅡR)所致肠损伤易损性增加中的作用.将42只健康雄性C57BL/6L小鼠随机分为4组：假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、糖尿病+假手术组(DS组)、糖尿病+缺血再灌注组(DIR组).通过链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病小鼠模型,采用无创动脉夹夹闭肠系膜上动脉根部45min恢复灌注2h的方法制备小鼠肠缺血再灌注损伤模型,2h后处死小鼠,留取小肠组织,观察组织病理改变行Chiu＇s病理学损伤评分,HE染色观察小肠组织病理变化,检查小肠组织Parkin蛋白的表达情况.

摘要： 探讨E3泛素(Ub)连接酶Parkin在糖尿病鼠肠缺血再灌注(ⅡR)所致肠损伤易损性增加中的作用.将42只健康雄性C57BL/6L小鼠随机分为4组：假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、糖尿病+假手术组(DS组)、糖尿病+缺血再灌注组(DIR组).通过链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病小鼠模型,采用无创动脉夹夹闭肠系膜上动脉根部45min恢复灌注2h的方法制备小鼠肠缺血再灌注损伤模型,2h后处死小鼠,留取小肠组织,观察组织病理改变行Chiu＇s病理学损伤评分,HE染色观察小肠组织病理变化,检查小肠组织Parkin蛋白的表达情况.

摘要： 泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-proteasome system,UPS)是介导细胞内蛋白降解的主要途径,影响细胞增殖、分化、凋亡和应激应答等广泛生物学行为.UPS功能失调可促进肿瘤发生、发展和转移,因此UPS已成为抗肿瘤药物开发的主要靶点之一.同时,UPS系统中,底物降解的特异性由E3泛素连接酶所决定,开发针对特定E3泛素连接酶的靶向抑制剂,阻断其介导的特定蛋白底物的降解,将增加药物选择性并降低药物潜在毒副作用,目前这已经成为UPS靶向药物开发的主要研究方向.多亚基SCF(skp1-cullin-F-box protein)E3泛素连接酶是针对泛素-蛋白酶体降解系统的新型抗肿瘤靶点.SCF(skp1-cullin-F-boxprotein)E3泛素连接酶是细胞内最大的多亚基泛素连接酶.其功能发挥除了需要相关组成亚基有效组合外,其活化还需要在其核心组成亚基Cullin上发生类泛素化(neddylation)修饰,阻断neddylation修饰可以灭活CRL/SCF泛素连接酶功能,这代表了一种新的靶向CRL/SCF抗肿瘤策略.最近,小分子化合物MLN4924作为SCF靶向新药被成功筛选.MLN4924可抑制SCF核心组成亚基Cullin蛋白的neddylation修饰,从而灭活SCF功能,导致其底物因降解受阻而发生积聚,最终抑制肿瘤细胞生长.MLN4924不仅具有显著的抗肿瘤效果,而且具有高度的安全性,目前已进入到I期临床试验,显示出了良好的开发前景.但是,类泛素化系统在肿瘤中的活化状况以及MLN4924灭活SCF泛素连接酶介导抗肿瘤应答的分子机制尚未阐明,这严重阻碍了MLN4924作为新型靶向药物的进一步开发.首先鉴定了neddylation系统在食管癌、肺癌等肿瘤中高度活化,并且与患者的5年生存期呈显著负相关,提示neddylation可以作为新型的针对食管癌和肺癌的抗肿瘤靶标,进而研究了阻断neddylation修饰通路在食管癌和肺癌中的抗肿瘤效果及分子机制.同时,由于MLN4924在发挥其抗肿瘤效应的过程中可以引起保护性自噬应答,研究发现使用临床经典的自噬抑制剂CQ可以显著增强MLN4924的抗肿瘤效应.这些研究工作将促进MLN4924作为靶点明确、机制清晰的抗肿瘤新药的开发进程,同时也为开发和评价其他针对SCF靶向新药提供借鉴意义.

摘要： 泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-proteasome system,UPS)是介导细胞内蛋白降解的主要途径,影响细胞增殖、分化、凋亡和应激应答等广泛生物学行为.UPS功能失调可促进肿瘤发生、发展和转移,因此UPS已成为抗肿瘤药物开发的主要靶点之一.同时,UPS系统中,底物降解的特异性由E3泛素连接酶所决定,开发针对特定E3泛素连接酶的靶向抑制剂,阻断其介导的特定蛋白底物的降解,将增加药物选择性并降低药物潜在毒副作用,目前这已经成为UPS靶向药物开发的主要研究方向.多亚基SCF(skp1-cullin-F-box protein)E3泛素连接酶是针对泛素-蛋白酶体降解系统的新型抗肿瘤靶点.SCF(skp1-cullin-F-boxprotein)E3泛素连接酶是细胞内最大的多亚基泛素连接酶.其功能发挥除了需要相关组成亚基有效组合外,其活化还需要在其核心组成亚基Cullin上发生类泛素化(neddylation)修饰,阻断neddylation修饰可以灭活CRL/SCF泛素连接酶功能,这代表了一种新的靶向CRL/SCF抗肿瘤策略.最近,小分子化合物MLN4924作为SCF靶向新药被成功筛选.MLN4924可抑制SCF核心组成亚基Cullin蛋白的neddylation修饰,从而灭活SCF功能,导致其底物因降解受阻而发生积聚,最终抑制肿瘤细胞生长.MLN4924不仅具有显著的抗肿瘤效果,而且具有高度的安全性,目前已进入到I期临床试验,显示出了良好的开发前景.但是,类泛素化系统在肿瘤中的活化状况以及MLN4924灭活SCF泛素连接酶介导抗肿瘤应答的分子机制尚未阐明,这严重阻碍了MLN4924作为新型靶向药物的进一步开发.首先鉴定了neddylation系统在食管癌、肺癌等肿瘤中高度活化,并且与患者的5年生存期呈显著负相关,提示neddylation可以作为新型的针对食管癌和肺癌的抗肿瘤靶标,进而研究了阻断neddylation修饰通路在食管癌和肺癌中的抗肿瘤效果及分子机制.同时,由于MLN4924在发挥其抗肿瘤效应的过程中可以引起保护性自噬应答,研究发现使用临床经典的自噬抑制剂CQ可以显著增强MLN4924的抗肿瘤效应.这些研究工作将促进MLN4924作为靶点明确、机制清晰的抗肿瘤新药的开发进程,同时也为开发和评价其他针对SCF靶向新药提供借鉴意义.

摘要： 泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-proteasome system,UPS)是介导细胞内蛋白降解的主要途径,影响细胞增殖、分化、凋亡和应激应答等广泛生物学行为.UPS功能失调可促进肿瘤发生、发展和转移,因此UPS已成为抗肿瘤药物开发的主要靶点之一.同时,UPS系统中,底物降解的特异性由E3泛素连接酶所决定,开发针对特定E3泛素连接酶的靶向抑制剂,阻断其介导的特定蛋白底物的降解,将增加药物选择性并降低药物潜在毒副作用,目前这已经成为UPS靶向药物开发的主要研究方向.多亚基SCF(skp1-cullin-F-box protein)E3泛素连接酶是针对泛素-蛋白酶体降解系统的新型抗肿瘤靶点.SCF(skp1-cullin-F-boxprotein)E3泛素连接酶是细胞内最大的多亚基泛素连接酶.其功能发挥除了需要相关组成亚基有效组合外,其活化还需要在其核心组成亚基Cullin上发生类泛素化(neddylation)修饰,阻断neddylation修饰可以灭活CRL/SCF泛素连接酶功能,这代表了一种新的靶向CRL/SCF抗肿瘤策略.最近,小分子化合物MLN4924作为SCF靶向新药被成功筛选.MLN4924可抑制SCF核心组成亚基Cullin蛋白的neddylation修饰,从而灭活SCF功能,导致其底物因降解受阻而发生积聚,最终抑制肿瘤细胞生长.MLN4924不仅具有显著的抗肿瘤效果,而且具有高度的安全性,目前已进入到I期临床试验,显示出了良好的开发前景.但是,类泛素化系统在肿瘤中的活化状况以及MLN4924灭活SCF泛素连接酶介导抗肿瘤应答的分子机制尚未阐明,这严重阻碍了MLN4924作为新型靶向药物的进一步开发.首先鉴定了neddylation系统在食管癌、肺癌等肿瘤中高度活化,并且与患者的5年生存期呈显著负相关,提示neddylation可以作为新型的针对食管癌和肺癌的抗肿瘤靶标,进而研究了阻断neddylation修饰通路在食管癌和肺癌中的抗肿瘤效果及分子机制.同时,由于MLN4924在发挥其抗肿瘤效应的过程中可以引起保护性自噬应答,研究发现使用临床经典的自噬抑制剂CQ可以显著增强MLN4924的抗肿瘤效应.这些研究工作将促进MLN4924作为靶点明确、机制清晰的抗肿瘤新药的开发进程,同时也为开发和评价其他针对SCF靶向新药提供借鉴意义.

摘要： 泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-proteasome system,UPS)是介导细胞内蛋白降解的主要途径,影响细胞增殖、分化、凋亡和应激应答等广泛生物学行为.UPS功能失调可促进肿瘤发生、发展和转移,因此UPS已成为抗肿瘤药物开发的主要靶点之一.同时,UPS系统中,底物降解的特异性由E3泛素连接酶所决定,开发针对特定E3泛素连接酶的靶向抑制剂,阻断其介导的特定蛋白底物的降解,将增加药物选择性并降低药物潜在毒副作用,目前这已经成为UPS靶向药物开发的主要研究方向.多亚基SCF(skp1-cullin-F-box protein)E3泛素连接酶是针对泛素-蛋白酶体降解系统的新型抗肿瘤靶点.SCF(skp1-cullin-F-boxprotein)E3泛素连接酶是细胞内最大的多亚基泛素连接酶.其功能发挥除了需要相关组成亚基有效组合外,其活化还需要在其核心组成亚基Cullin上发生类泛素化(neddylation)修饰,阻断neddylation修饰可以灭活CRL/SCF泛素连接酶功能,这代表了一种新的靶向CRL/SCF抗肿瘤策略.最近,小分子化合物MLN4924作为SCF靶向新药被成功筛选.MLN4924可抑制SCF核心组成亚基Cullin蛋白的neddylation修饰,从而灭活SCF功能,导致其底物因降解受阻而发生积聚,最终抑制肿瘤细胞生长.MLN4924不仅具有显著的抗肿瘤效果,而且具有高度的安全性,目前已进入到I期临床试验,显示出了良好的开发前景.但是,类泛素化系统在肿瘤中的活化状况以及MLN4924灭活SCF泛素连接酶介导抗肿瘤应答的分子机制尚未阐明,这严重阻碍了MLN4924作为新型靶向药物的进一步开发.首先鉴定了neddylation系统在食管癌、肺癌等肿瘤中高度活化,并且与患者的5年生存期呈显著负相关,提示neddylation可以作为新型的针对食管癌和肺癌的抗肿瘤靶标,进而研究了阻断neddylation修饰通路在食管癌和肺癌中的抗肿瘤效果及分子机制.同时,由于MLN4924在发挥其抗肿瘤效应的过程中可以引起保护性自噬应答,研究发现使用临床经典的自噬抑制剂CQ可以显著增强MLN4924的抗肿瘤效应.这些研究工作将促进MLN4924作为靶点明确、机制清晰的抗肿瘤新药的开发进程,同时也为开发和评价其他针对SCF靶向新药提供借鉴意义.

摘要： 本文拟对E3泛素连接酶介导SnoN蛋白泛素化的研究进展,综述了E3泛素连接酶的结构、种类及其效应，分析了SnoN蛋白表达的泛素化调控。

摘要： 本文拟对E3泛素连接酶介导SnoN蛋白泛素化的研究进展,综述了E3泛素连接酶的结构、种类及其效应，分析了SnoN蛋白表达的泛素化调控。

摘要： 本发明公开了一种中国明对虾泛素连接酶基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，并提供了其重组表达与纯化方法。本发明还提供了中国明对虾泛素连接酶基因编码的泛素连接酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，并提供了该基因序列的用途、泛素连接酶的用途：可以利用中国明对虾泛素连接酶基因制备原核表达载体，转化大肠杆菌，表达具有抗病毒活性的重组蛋白。利用本发明获得的重组的泛素连接酶蛋白可用于抗病毒的饲料添加剂、动植物基因转化和药物开发。

摘要： 本发明涉及生物医药领域，具体是E3泛素连接酶ASB3作为抗肿瘤新靶点在制备肝癌治疗药物中的应用。本发明通过小干扰RNA特异性下调ASB3，提供了一种新的肝癌治疗方式。干扰ASB3能够抑制肝癌细胞的增殖活力，诱导肝癌细胞凋亡；对裸鼠皮下肝癌种植瘤具有治疗作用；解决了中晚期肝癌现有治疗方式疗效差、预后不佳等技术问题。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，涉及一种番茄泛素化E3连接酶基因SlCHIP1及应用和基因SlCHIP2。本发明克隆了番茄泛素化E3连接酶基因SlCHIP1和SlCHIP2核苷酸序列，并研究和讨论了这两个基因的同源性及与其它物种同源基因的进化关系，及在番茄抗高温中的作用和机制，为番茄及其他物种的抗高温育种及选种提供了一种新基因资源和可能的分子标记。

摘要： 本发明公开了大豆E3泛素连接酶GmNLA1的应用。大豆GmNLA1蛋白编码基因GmNLA1，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.1。将构建的植物过量表达载体pMDC83‑GmNLA1和GmNLA1‑RNAi转化到大豆毛状根中，用1/2 Hoagland处理15d后发现，在GmNLA1‑OE转基因毛状根中，GmNLA1‑OE转基因毛状根中的P浓度显著降低。在GmNLA1‑RNAi转基因毛状根中的P浓度显著增加。总的来说，GmNLA1可能通过负调节大豆转基因毛状根中的P浓度来负调控大豆磷效率。

摘要： 本发明公开了一种中国明对虾泛素连接酶基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，并提供了其重组表达与纯化方法。本发明还提供了中国明对虾泛素连接酶基因编码的泛素连接酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，并提供了该基因序列的用途、泛素连接酶的用途：可以利用中国明对虾泛素连接酶基因制备原核表达载体，转化大肠杆菌，表达具有抗病毒活性的重组蛋白。利用本发明获得的重组的泛素连接酶蛋白可用于抗病毒的饲料添加剂、动植物基因转化和药物开发。

摘要： 本发明描述了双官能化合物，其可用作B细胞淋巴瘤6蛋白(BCL6；靶蛋白)的调节剂。具体地讲，本公开的双官能化合物在一端上含有与相应E3泛素连接酶结合的希佩尔‑林道、小脑蛋白、凋亡抑制蛋白或小鼠双微体同源物2配体，并且在另一端上含有结合所述靶蛋白的部分，使得所述靶蛋白被置于所述泛素连接酶附近，以实现靶蛋白的降解(和抑制)。本公开的双官能化合物表现出与靶蛋白的降解/抑制相关的广泛范围的药理学活性。使用本公开的化合物和组合物治疗或预防由靶蛋白的聚集或积累导致的疾病或病症。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及E3泛素连接酶HRD1在调控初级纤毛发生中的应用。更具体地，本发明提供了HRD1在促进纤毛发生、制备纤毛相关疾病的药物中的应用；以及，HRD1抑制剂在抑制纤毛发生、构建胚胎发育缺陷的动物模型中的应用。

摘要： 本发明公开了一种E3泛素连接酶RBCK1在制备治疗肝癌的药物中的应用，本发明研究发现，RBCK1的高表达与较差的肿瘤生存和远处侵袭显著相关。功能实验证明RBCK1通过增强GLUT1介导的有氧糖酵解促进迁移和侵袭，RBCK1激活WNT/β‑catenin/GLUT1通路诱导HCC细胞迁移和有氧糖酵解依赖于PPARγ/PGC1α复合物的破坏。RBCK1促进PPARγ泛素化降解，RBCK1过表达增强WNT/β‑catenin转录活性，从而上调GLUT1介导的HCC细胞有氧糖酵解。不论在体内还是体外，RBCK1在肝癌细胞的发生和进展过程中都发挥着重要的作用，并且依据RBCK1在肝癌组织中的高表达结果，为今后肝癌患者的潜在靶向治疗提供强有力的手段。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种失活泛素连接酶提高酵母虾青素产量的方法及重组菌株。该重组菌株由出发菌株红发夫酵母经遗传改造，敲除其中至少一个E3泛素连接酶获得，所得重组菌株提高红发夫酵母虾青素的产量。本发明通过敲除红发夫酵母E3泛素连接酶编码基因，消除E3泛素连接酶对虾青素合成的负调控作用，以提高虾青素产量。与对照菌株相比，E3泛素连接酶基因敲除菌株的虾青素细胞含量可以显著提高8.3倍。该方法可应用于构建虾青素高产菌株和提高虾青素产量。

摘要： 本发明提供了棉花SINA E3泛素连接酶基因在提高植物抗旱性中的应用，涉及植物分子生物学技术领域。所述棉花基因为GhSINA12基因，本发明实验研究发现当陆地棉受到干旱胁迫时，GhSINA12基因显著上调表达。同时，表明棉花GhSINA12转基因株系在干旱胁迫响应中具有正调控作用。利用病毒诱导的基因沉默技术沉默表达棉花GhSINA12基因，表明GhSINA12沉默株系在干旱胁迫中的耐旱性明显降低。本发明表明棉花GhSINA12基因可以响应干旱胁迫，在一定程度上提高了植株的抗旱性，并且可能通过依赖ABA通路来调控植物的抗旱性。本发明为调控目的植物应答干旱胁迫以及培育和筛选抗旱植物提供了新的方法。