E3泛素连接酶TRIM50促进口腔鳞状细胞癌增殖及迁移侵袭的分子机制研究

摘要

目的 检测E3泛素连接酶(tripartite motif containing 50,TRIM50)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中生物学功能,并探究TRIM50蛋白表达对OSCC细胞恶性表型调控的潜在机制.方法 采用蛋白质免疫印迹法检测OSCC细胞Cal27、HSC3、HOK、SCC9以及SCC25中TRIM50蛋白的表达.通过脂质体将搭载TRIM50-Flag表达序列的pcDNA3.1(+)质粒导入SCC9和SCC25细胞,设置空白载体作为过表达实验的空白对照组.同样的方法将TRIM50小干扰RNA(small inter-fering RNA,siRNA)转入Cal27和HOK细胞,设置无义干扰片段作为沉默实验的阴性对照组.然后,通过蛋白质免疫印迹法分别检测TRIM50过表达和沉默后OCSS细胞TRIM50表达水平的变化,再通过细胞计数法统计各组中OSCC细胞在相同的时间内细胞增殖的数目、克隆形成的集落数和迁移侵袭细胞数目的变化.之后,裂解提取OSCC细胞中的总蛋白,并通过TRIM50抗体进行免疫共沉淀鉴定在OSCC细胞中与TRIM50蛋白相互作用的蛋白.结果 OSCC细胞系中,SCC9和SCC25细胞低表达TRIM50,Cal27和HOK细胞高表达TRIM50.在SCC9和SCC25细胞过表达TRIM50后,相比于空白对照组,过表达TRIM50组SCC9和SCC25细胞的增殖数目增多、克隆形成集落数增多和迁移侵袭的细胞数增多(均P0.05).结论 TRIM50作为促癌基因增强了OSCC细胞的增殖、克隆形成和迁移侵袭能力.Rb是E3泛素化连接酶TRIM50所作用的底物蛋白.TRIM50通过促进Rb蛋白的泛素化降解下调其蛋白的表达量,调控OSCC细胞的恶性表型.