miR-519d-3p通过靶向MECP2抑制口腔鳞状细胞癌增殖、迁移与侵袭的研究

摘要

目的 探究miR-519d-3p与甲基化CpG结合蛋白2(MECP2)的作用关系及其对口腔鳞状细胞癌(OSCC)的影响.方法 逆转录PCR(RT-PCR)筛选最适细胞进行后续实验.分组转染miR-519d-3p或MECP2重组表达载体,双荧光素酶报告基因实验检测靶向作用关系,CCK8检测细胞增殖倍数,流式细胞术检测细胞周期阻滞及细胞凋亡,划痕愈合法检测细胞迁移,Transwell法检测细胞侵袭,Western blot检测MECP2、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、周期蛋白D1(Cyclin D1)、活化型半胱天冬酶3(cl-CASP3)和分泌性卷曲相关蛋白4(SFRP4)蛋白水平,MSP法检测SFRP4甲基化水平.结果 与癌旁组织比较,在OSCC组织标本中miR-519d-3p表达水平降低,MECP2基因表达水平升高,miR-519d-3p和MECP2存在靶向作用关系(P<0.05).与mimics NC组比较,miR-519d-3p mimics组OSCC细胞增殖倍数降低,细胞周期阻滞,细胞凋亡率升高,细胞迁移和侵袭能力降低,MECP2、MMP-2、Cyclin D1蛋白水平降低,E-cadherin、cl-CASP3、SFRP4蛋白水平升高,SFRP4基因去甲基化;MECP2蛋白水平提高可扭转miR-519-3p mimics引起的上述各指标的变化.结论 miR-519d-3p可靶向作用于MECP2,抑制OSCC细胞的增殖、迁移与侵袭.