蛋白降解

摘要： 钙蛋白酶系统由多种Ca^(2+)激活的钙蛋白酶和钙蛋白酶抑制蛋白组成。钙蛋白酶系统介导的肌原纤维分解是骨骼肌蛋白降解的主要限速步骤,在维持肌肉生理稳态和肌肉完整性方面发挥了重要的作用。本文综述了钙蛋白酶系统的蛋白结构,激活和调控机制,以及日粮营养对钙蛋白酶系统的影响,以期为相关研究提供帮助。

摘要： ClpP(Casein lytic proteinase P)是一种广泛存在于真核细胞和原核生物中的丝氨酸蛋白酶,可与多种类型AAA+(ATPase associated with various cellular activity)超家族ATP酶组成多种ClpP蛋白酶复合物,其主要功能是清除或降解细菌胞内合成不当、受损伤、变性聚集或无用的蛋白,并维持正常代谢和压力刺激下胞内蛋白质的动态平衡。近年研究表明,细菌ClpP可协助病原菌在宿主体内生存、繁殖和播散,ClpP在细菌致病过程中发挥重要作用,其相关致病机制也受到广泛关注。近年,细菌对抗生素耐药性不断增强,已严重威胁人类健康,ClpP蛋白酶因其独特的蛋白水解作用而成为抗菌药物研究的新靶点。本文综述了ClpP在不同病原体中的结构、分子功能和不同作用以及相应药物开发方面的研究进展。

摘要： 以辣木叶粉为原料,研究自然发酵和7株不同菌株接种发酵过程中理化指标(pH、总酸、蛋白酶活力、蛋白含量、氨基酸态氮含量)的变化规律,并采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)筛选降解辣木叶蛋白的优良菌株。结果表明,发酵过程中pH值随发酵时间延长而降低,总酸含量逐渐上升,蛋白酶活力呈先上升后下降趋势。7株不同菌株中,纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)和棉籽糖乳球菌(Lactococcus raffinolactis)发酵的辣木叶粉在24 h时蛋白酶活力最高,分别为270.58 U/mL和248.34 U/mL,发酵结束时,蛋白含量分别下降20.24 mg/g、21.95 mg/g,氨基酸态氮含量明显高于其他组。SDS-PAGE结果显示,纳豆芽孢杆菌和棉籽糖乳球菌能够降解分子质量70 kDa和35 kDa的两种主要蛋白。因此该研究选出纳豆芽孢杆菌和棉籽糖乳球菌作为发酵降解辣木蛋白的优良菌株。

摘要： 优化凡纳滨对虾肌肉中组织蛋白酶L提取工艺,分离纯化组织蛋白酶L并验证其对肌原纤维蛋白的降解作用。以凡纳滨对虾肌肉为原料,采用单因素试验、Plackett-Burman试验和双因素等重复试验对肌肉中组织蛋白酶L的提取工艺进行了优化。采用Tris-HCl缓冲液浸提、硫酸铵沉淀、Q-Seharose F.F阴离子交换层析、Sephacryl S-100凝胶过滤层析和SDS-PAGA等方法对组织蛋白酶L粗酶液进行分离纯化,并验证提纯后的组织蛋白酶L对肌原纤维蛋白的降解作用。最终确定对虾肌肉中组织蛋白酶L最佳提取工艺为:缓冲液体系(Tris-HCl缓冲液浓度40 mmol/L,半胱氨酸浓度6 mmol/L,苯甲基磺酰氟浓度0.4 mmol/L),料液比1∶8(g∶mL),pH 6.0。优化后组织蛋白酶L总酶活力值升至378.36 U,酶活力得率达到150.1 U/g,纯化后的组织蛋白酶L的比活力从0.34 U/mg提高到了101.15 U/mg,纯化倍数达到298.28倍,得率为16.50%,分子质量为46.4 kDa,并进一步验证了提纯后的组织蛋白酶L对肌球蛋白重链和肌动蛋白有降解作用。发现对虾肌肉中组织蛋白酶L对肌原纤维蛋白降解有明显作用,为进一步研究对虾肌肉中组织蛋白酶L的相关性质及其对肌肉的降解机制提供理论依据。

摘要： 2022年7月,南开大学王宁宁教授团队在《Plant,Cell and Environment》上发表了题为“N7-SSPP fusion gene improves salt stress tolerance in transgenic Arabidopsis and soybean through ROS scavenging”的研究论文。研究发现,过表达SSPP能够显著提高转基因植物在盐胁迫条件下对活性氧的清除能力,进而增强植株对高盐胁迫的耐受性,但明显抑制营养生长速度,导致该基因无法被直接应用于转基因作物新品种的培育。该团队前期还发现,乙烯合成关键酶AtACS7蛋白N末端由14个氨基酸构成的短肽(命名为N7)具有转录后调控功能,通过26S泛素/蛋白酶体途径促进与之融合的多种蛋白降解,且N7介导的蛋白降解受盐胁迫和衰老信号负调控。

摘要： 以冷冻南极磷虾肉为研究对象,基于低场核磁共振(LF-NMR)及磁共振成像(MRI)技术,结合解冻汁液损失率、离心损失率,分析南极磷虾肉在反复冷冻-解冻循环过程中水分的迁移规律。借助电子、光学显微成像和SDS-PAGE观察反复冻融后南极磷虾肉肌原纤维结构及蛋白质的变化,并通过硫代巴比妥酸值(TBA)判断其脂质氧化情况。结果表明:随着反复冻融次数的增加,南极磷虾肉的解冻汁液损失率和离心损失率均显著增加(P0.05),不易流动水含量显著减少(P0.05)。结论:反复冻融使南极磷虾肉水分迁移、蛋白降解,而对脂质氧化影响不显著。

摘要： 目的:探索长期高强度间歇训练(HIIT)对中年大鼠比目鱼肌蛋白合成和蛋白降解的影响,为其在骨骼肌健康促进中的作用提供机制性的解释.方法:24只9月龄Wistar大鼠随机分为安静组(C)、中等强度持续训练组(M)和HIIT组(H),每组各8只.C组大鼠正常饮食生活,无运动训练;M组进行60％V·O2max强度的持续运动,共50 min;H组进行80％V·O2max和40％V·O2max的高低强度间歇运动,各3 min,重复6次,热身和恢复以60％V·O2max的强度进行,各7 min.运动组每周训练5次,共12周.运动干预结束后取比目鱼肌,称湿重,western blot检测比目鱼肌蛋白合成、泛素蛋白酶体关键组分和细胞自噬相关蛋白的表达,电镜观察自噬体结构.结果:相比C组:M和H组的比目鱼肌湿重均有所提高(P0.05);H组MAFbx蛋白含量有降低的趋势(P=0.052),自噬体生成增加,且LC3II和COXIV蛋白表达提高(P0.05).结论:HIIT可促进中年大鼠比目鱼肌质量的提高,可能是蛋白合成提高,MAFbx蛋白表达降低及基础自噬水平激活共同作用的结果.

摘要： 蛋白降解靶向嵌合体(PROTAC)将靶向蛋白募集到E3泛素连接酶进行泛素化标记,然后通过泛素-蛋白酶体途径将其降解,从而将过表达和突变的致病蛋白清除.本文基于已有的文献报道,总结PROTAC药物研发进展,针对其存在的相对分子质量较大、生物利用度低、稳定性和血管穿透能力差等问题提出应对策略,并从药理药效、代谢和安全性评价等方面对该类药物的非临床评价研究需要考虑的问题进行分析,为制定PROTAC药物非临床评价研究方案提供参考.

摘要： 目的:探讨长期抗阻运动调控细胞自噬状态抑制衰老骨骼肌萎缩的分子机制.方法:3月龄IC R雄性小鼠18只,随机分为青年对照组(YC)组、老年对照组(OC)、长期抗阻运动组(LR),每组6只.采用负重爬梯方式进行为期14个月的抗阻运动.选取腓肠肌湿质量比(SI值)间接评估骨骼肌萎缩程度,HE染色观察肌纤维横截面积(CSA),Western blotting检测骨骼肌Beclin1、Bcl-2、Atrogin-1和GAPDH蛋白表达水平.结果:①与青年对照组相比,老年对照组小鼠腓肠肌纤维排列紊乱,SI值与肌纤维横截面积均显著降低(p<0.001;p<0.01);然而,长期抗阻运动组小鼠腓肠肌纤维结构清晰,SI值与肌纤维横截面积均显著增加(p<0.01).②与青年对照组相比,老年对照组小鼠腓肠肌Beclin1、Bcl-2表达均显著降低(p<0.05,p<0.01),Atrogin-1表达显著增加(p<0.01);相反,与老年对照组相比,长期抗阻运动组小鼠腓肠肌Beclin1、Bcl-2蛋白表达均显著增加(p<0.001),Atrogin-1表达显著降低(p<0.001).结论:长期抗阻运动可通过激活细胞自噬活性增加细胞抗凋亡能力,减少蛋白降解,从而抑制衰老和骨骼肌萎缩.

摘要： 目的·探索异土木香内酯(isoalantolactone,Iso)对伊马替尼敏感和耐药的慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞的效应,以及下调BCR-ABL融合蛋白的分子机制.方法·采用不同浓度的Iso分别处理K562和K562R细胞0、24、36、48h后,用CCK-8法测定Iso对CML细胞的抑制效应.用流式细胞术检测Iso诱导K562和K562R细胞24 h的凋亡效应.蛋白质印迹法(Western blotting)检测不同浓度、不同作用时间下Iso对CML细胞中BCR-ABL融合蛋白水平的影响.采用反转录及实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测Iso对CML细胞中BCR-ABL mRNA水平的影响.分别用蛋白酶体抑制剂MG132、自嗤抑制剂3-甲基腺嘌呤和溶酶体抑制剂氯喹联合Iso处理K562细胞,用半胱天冬酶抑制剂Z-VAD-FMK联合Iso处理K562与K562R细胞,并采用Western blotting检测BCR-ABL融合蛋白水平的改变.在K562R细胞中敲减半胱天冬酶3(caspase3,CASP3)、半胱天冬酶7(caspase7,CASP7),检测其对由Iso诱导BCR-ABL融合蛋白下调的影响.结果·Iso抑制CML细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性.流式细胞术结果显示Iso可增加K562与K562R细胞凋亡的发生(均P＜0.05).Western blotting结果显示Iso能诱导BCR-ABL融合蛋白水平降低,而qPCR结果显示BCR-ABLmRNA水平无显著变化.MG132、3-甲基腺嘌呤以及氯喹不能逆转由Iso诱导的BCR-ABL融合蛋白的下调,而Z-VAD-FMK可部分逆转该下调.敲减CASP3后能部分逆转由Iso诱导的BCR-ABL蛋白的降解,而CASP7敲减后则无影响.结论·Iso可靶向降解BCR-ABL融合蛋白.该结果为克服CML细胞的耐药提供了实验基础.

摘要： 本试验旨在研究不同品种(金皇后、中苜1号)和刈割期(现蕾期、初花期、盛花期)对紫花苜蓿青贮饲料的蛋白降解的影响.结果表明:虽然两个品种间总氮和非蛋白氮含量无显著差异,但金皇后品种的肽氮含量较高,游离氨基酸含量较低,蛋白降解程度降低.现蕾期的非蛋白氮含量高于初花期和盛花期,但盛花期的游离氨基酸态氮和氨态氮含量都高于初花期,肽氮也低于早期刈割.随着刈割期的延迟,真蛋白降解比例减少,但降解程度加剧.

摘要： 含水生菜种子是种子低温保存的模式生物.本研究利用程序降温仪(Kryo seriesⅢ)对含水(含水量50％)生菜(Lactuca sativa)种子进行快速和慢速降温处理,至-20°C做全转录组测序分析比较,发现RNA降解通路和介导蛋白降解的泛素化连接酶的功能得到了富集,暗示了快速和慢速降温过程中RNA和蛋白降解的调控发生了变化.检测了快速和慢速降温至冰冻温度(分别降温至-5°C,-10°C,-15°C,-20°C)过程中RNA降解通路和蛋白泛素化连接酶E3—SCF复合体因子的的mRNA水平变化,以便为研究程序降温过程中的RNA和蛋白降解调控机制提供初步的研究基础.结果表明5′脱帽因子EDC4、3′脱腺苷酸尾巴因子CNOT1以及5′→3′外切核酸酶因子XRN2在慢速降温过程受到诱导,直到后期自身也被降解.程序降温对3′→5′核酸外切酶Rrp44的诱导不明显.快速降温造成5′脱帽因子EDC4和3′脱腺苷酸尾巴因子CNOT1短时的抑制,可能是种子胚的应激反应,以暂时降低低温造成的RNA降解,保护种子胚活力.介导蛋白降解的泛素化连接酶E3-SCF复合体因子在快速降温早期(-10°C)和慢速降温的后期(-20°C)受到诱导,其在慢速降温后期、RNA降解功能增强条件下的mRNA水平提高证明泛素化蛋白降解在慢速降温后期功能增强.总之,以上结果暗示快速降温早期RNA降解因子的短时抑制是一种应激保护,而慢速降温中RNA降解因子的诱导是种子细胞受伤害的反应,同时泛素化介导的蛋白降解可能是一种防御调控机制.

摘要： 鲭鱼(Scomber australasicus)、鳕鱼(Merluccius productus)、大西洋产鳕鱼或比目鱼等鱼浆在冷冻贮藏过程中极易因Cathepsins B、H、I等之残存而造成品质下降,而且于制造鱼浆加工品时,常会在加热过程发生鱼浆解胶(thermal degradation)之品质劣变问题.由过去之研究结果显示,Cathepsin B、L等硫氢蛋白酶均会影响鱼浆蛋白的冷冻安定性及热凝胶特性.由于从农、畜、水产原料中分离与制备蛋白酶抑制剂极不经济,且产量也受限,因此,本研究室将鸡肺的cystatin cDNA序列利用pET-23a(+)表现载体表现,并转送到大肠杆菌AD494(DE3)pLysS细胞内,经由isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside(IPTG)诱导,可在大肠杆菌细胞质内表现出高量具有正确蛋白分子内双硫键及活性之recombinant cystatin.基于安全及工业上量产之考量,本研究室亦将此cystatin的cDNA序列,接到PGAPZαC表现载体上并将此载体转送入酵母菌Pichia pastoris X-33细胞中,令cystatin cDNA整合到此酵母核内之染色体DNA上,经由此载体上之GAP promoter的调控及α-factor prepro-sequence之引导可以于培养液中大量的表现出具有正确蛋白结构及活性之胞外分泌型recombinant cystatin.以上酶抑制活性及热安定性,且对冷冻鱼浆在加工过程均具有显著抑制肌肉蛋白降解之能力.

摘要： 本研究的目的是探究在牛肉宰后成熟过程中一氧化氮(NO)对钙蛋白酶活性和蛋白降解的影响.从刚屠宰的牛胴体取半膜肌,4°C条件下在生理盐水或0.05M,0.10M和0.15M的L-NAME(一氧化氮合成酶(NOS)抑制剂)溶液中孵育24小时.真空包装,在4°C成熟1,4和7天.结果显示,成熟第一天,NOS抑制剂加速了钙蛋白酶自溶(P＜0.05);NOS抑制剂减少了肌浆蛋白中某些蛋白的含量(P＜0.05).这些数据显示在牛肉宰后成熟过程中,NO参与了调控钙蛋白酶的活性.

摘要： 本文拟对E3泛素连接酶介导SnoN蛋白泛素化的研究进展,综述了E3泛素连接酶的结构、种类及其效应，分析了SnoN蛋白表达的泛素化调控。

摘要： 本文阐述了影响肉品嫩度的生理生化基础，促使肉品嫩化的蛋白降解理论和钙蛋白酶理论，以及加速宰后嫩化的电刺激、CaCl2注射和超声波处理方法及其研究应用进展情况。

摘要： 本研究采用相分离法获得了粒径在0.3–1.2μm之间的玉米醇溶蛋白(zein)微球,将该微球与伊维菌素(IVM)按照10:1混合,制备微球片剂,每个片剂为0.22g,以不含药物的片剂作为对照,研究了该片剂分别在10％胃蛋白酶存在和PBS体系中的药物释放和蛋白降解的动力学.结果表明:在pH2.2的柠檬酸-NaH2PO4缓冲体系中,含药物的片剂降解速度明显高于不含药物的片剂,该体系中IVM在第11天全部释放.在pH7.4的PBS体系中,IVM在第11天有22％释放,说明药物的释放与蛋白降解存在协同效应.研究表明,该片剂可以用于缓释药物体系.

摘要： 弄清烧伤、脓毒症时骨骼肌蛋白分解的发生机制,给予相应的干预或调控,在临床具有十分重要的意义.文章对比进行了研究及论述.

摘要： 研究从五步蛇毒中提取的类凝血酶的稳定性.将酶置于不同的pH值溶液中，恒温保存一定时间，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳，观察蛋白的降解状况;同时，将在不同温度下进行冷冻保存的酶溶液，在相同温度下进行相同次数的冻融，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳，观察蛋白的降解状况;结果显示，在pH值为5-6时，该类凝血酶最为稳定，经过8次冻融之后，在-70°C下保存的样品电泳条带最为完整.

摘要： 研究从五步蛇毒中提取的类凝血酶的稳定性.将酶置于不同的pH值溶液中，恒温保存一定时间，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳，观察蛋白的降解状况;同时，将在不同温度下进行冷冻保存的酶溶液，在相同温度下进行相同次数的冻融，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳，观察蛋白的降解状况;结果显示，在pH值为5-6时，该类凝血酶最为稳定，经过8次冻融之后，在-70°C下保存的样品电泳条带最为完整.

摘要： 本文描述了用于治疗性应用的药用降解剂和降解决定子。

摘要： 本发明提供了具有可连接至针对经选择进行体内降解的蛋白质的靶向配体的E3泛素连接酶靶向部分(降解决定子)的降解决定子体，及其使用方法和组合物以及它们的制备方法。本发明还提供了可用于治疗由cereblon或Ikaros家族蛋白介导的病症的降解决定子，及其使用方法和组合物以及它们的制备方法。

摘要： 本发明涉及一种靶向降解Gli1蛋白的降解剂及其制备方法和应用，该靶向降解Gli1蛋白的降解剂包括Gli1降解剂化合物或其药学上可接受的盐、异构体、外消旋体、水合物或前体药物；Gli1降解剂化合物由式(I)所示结构与降解招募子通过共价连接得到，降解招募子为可招募泛素化的分子。本发明制备的靶向降解Gli1蛋白的降解剂不但能够一定程度上解决已有的Hh通路中SMO拮抗剂耐药性问题，还能够开发出新型Hh/Gli1调节剂，研究Gli1蛋白被化学敲低所带来的生理学效应，为治疗Hh/Gli1介导的癌症提供新的方法。

摘要： 本发明涉及在宿主细胞内产生控制系统，以限制或消除发酵期间某些时间的关键指定产物的降解，并使细胞的代谢通量重转向相同关键指定产物的更高产量。

摘要： 本发明涉及一种新的基于VHL配体诱导的双功能分子化合物，以及在合成这些化合物和其药物组合物中的应用。本发明所涉及化合物如式I所示，该化合物能够选择性诱导AR蛋白降解，可用于治疗前列腺癌、乳腺癌等癌症。

摘要： 本发明公开一种靶向蛋白降解c‑Met降解剂及其制备方法与应用。本发明提供一种基于靶向蛋白降解PROTAC策略的c‑Met降解剂及其制备方法，以及该类c‑Met降解剂在治疗非小细胞肺癌和胃癌等癌症中的应用。本发明的化合物具有显著的c‑Met降解作用与细胞增殖抑制作用，具有作为抗肿瘤药物治疗肿瘤的潜力，并且本发明化合物在慢病毒转染构建的EBC‑1耐药细胞株中表现出显著的增殖抑制活性，且明显优于小分子抑制剂LXM‑262，并且显著提高了细胞选择性，说明本发明实例化合物在克服肿瘤c‑Met获得性耐药性上具有显著的优势，尤其是化合物S27只对c‑Met依赖的EBC‑1肺癌细胞表现出较好的活性，说明化合物S27具有较好的细胞选择性，而原本的小分子抑制剂是多靶点的，对c‑Met非依赖的细胞系也有抑制效果。

摘要： 本发明涉及一种光控蛋白降解系统，所述系统包括p‑vhhGFP4‑Fc、GAVPO和TRIM21质粒表达载体；其中，所述GAVPO为光控启动子组成部分；所述TRIM21为一种E3泛素连接酶，其能够招募蛋白酶体，参与泛素化降解途径；所述p‑vhhGFP4‑Fc为一种融合蛋白，其在光照条件下能够表达vhhGFP4‑Fc融合蛋白，诱导GFP发生降解。本系统可以通过调整光照时间，光照频率，光照强度对细胞内特定蛋白进行降解，简单高效。

摘要： 本发明公开一种可降解PDGFR‑β的蛋白降解靶向嵌合体及其制备方法和应用，抗肿瘤药索拉菲尼经水解得到带有活性反应基团羧基的化合物，然后经由不同类型的链接体与不同类型的E3泛素连接酶配体经酰胺缩合反应连接在一起，得到蛋白降解靶向嵌合分子。本发明的蛋白降解靶向嵌合体制备方法简单，易于实现，并且收率较高，能够用于制备用于治疗或预防癌症的药物中，尤其用于制备以PDGFR‑β靶点的抗肿瘤药物中。

摘要： 本发明公开一种靶向蛋白降解c‑Met降解剂及其制备方法与应用。本发明提供一种基于靶向蛋白降解PROTAC策略的c‑Met降解剂及其制备方法，以及该类c‑Met降解剂在治疗非小细胞肺癌和胃癌等癌症中的应用。本发明的化合物具有显著的c‑Met降解作用与细胞增殖抑制作用，具有作为抗肿瘤药物治疗肿瘤的潜力，并且本发明化合物在慢病毒转染构建的EBC‑1耐药细胞株中表现出显著的增殖抑制活性，且明显优于小分子抑制剂LXM‑262，并且显著提高了细胞选择性，说明本发明实例化合物在克服肿瘤c‑Met获得性耐药性上具有显著的优势，尤其是化合物S27只对c‑Met依赖的EBC‑1肺癌细胞表现出较好的活性，说明化合物S27具有较好的细胞选择性，而原本的小分子抑制剂是多靶点的，对c‑Met非依赖的细胞系也有抑制效果。

摘要： 本发明涉及一种新的基于VHL配体诱导的双功能分子化合物，以及在合成这些化合物和其药物组合物中的应用。本发明所涉及化合物如式I所示，该化合物能够选择性诱导AR蛋白降解，可用于治疗前列腺癌、乳腺癌等癌症。