蛋白免疫印迹

摘要： 为对H9N2亚型禽流感病毒(AIVs)NS1基因进行原核表达,并对表达产物进行抗原性分析,根据NS1基因合成1对特异性引物,进行PCR扩增,将扩增片段连接至PMD18-T载体,通过序列测定和比对筛选出保真基因克隆;将保真基因克隆至pET32a表达载体,构建重组质粒pET32a-NS1后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,加入IPTG进行诱导表达;并对IPTG使用浓度和诱导时间进行优化,对表达的重组蛋白用His-tag镍柱进行纯化,利用Western Blot和免疫荧光技术对纯化的重组蛋白进行鉴定及免疫原性的测定。结果显示,本试验成功扩增出H9N2 AIVs的NS1基因,并筛选到保真克隆;带有NS1保真基因的重组载体pET32a-NS1可在大肠杆菌中进行IPTG诱导表达,其中,IPTG最佳使用浓度为2 mmol/L、最佳诱导时间为8 h时表达量最大,并且表达产物主要存在于包涵体中;纯化后的重组蛋白可被抗His标签识别,利用重组蛋白制备的抗体可识别H9N2 AIVs在细胞内表达的NS1蛋白,说明重组蛋白具有良好的免疫原性,该试验为H9N2 AIVs NS1蛋白的功能特性和免疫学研究奠定了基础。

摘要： 目的:探讨二肽基肽酶-4(DPP4)在瘢痕疙瘩中的表达情况。方法:分别获取切除术后的瘢痕疙瘩组织及正常皮肤组织,然后通过蛋白免疫印迹方法、定量聚合酶链反应,比较二者DPP4基因在蛋白和mRNA水平上表达的差异。结果:与正常皮肤组织相比,DPP4蛋白在瘢痕疙瘩组织中的表达高于正常皮肤,差异有统计学意义(P<0.05),DPP4基因在mRNA水平上的表达高于正常皮肤(P<0.05)。结论:DPP4在瘢痕疙瘩中的表达上升,DPP4可能在促进成纤维细胞活化、纤维化形成方面有一定作用。

摘要： 制备了刺参免疫相关因子AIF-1抗血清并检测AIF-1蛋白水平的表达。提取刺参呼吸树组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增AIF-1基因编码区,大小与预期相符。PCR产物测序结果与Genebank报道序列一致。基因序列经密码子优化,体外合成并构建重组表达载体pET-29b(+)-AIF-1-his,成功诱导了可溶性重组AIF-1蛋白的表达。镍离子金属螯和层析纯化重组AIF-1蛋白,纯化产物可见单一条带。以纯化的重组AIF-1蛋白注射小鼠进行免疫,制备鼠抗AIF-1多抗血清,间接ELISA法检测抗血清效价为1∶102400。荧光定量PCR和蛋白免疫印迹分析结果检测到刺参内源性AIF-1蛋白的表达。灿烂弧菌体腔注射AIF-1后,刺参呼吸树和AIF-1的转录和蛋白水平表达均显著增加。

摘要： 目的:比较传统的蛋白免疫印迹和全自动蛋白质定量分析检测特异性蛋白质相对含量的差异,并进行方法学优化,为蛋白质定量分析提供技术参考。方法:分别使用两种系统对不同分子量的目标蛋白进行检测,比较两种系统的灵敏度、重复性和适用范围。结果:相比传统WB系统,全自动系统灵敏性、重复性和稳定性更高,并且可进行多分子同时检测,尤其在检测微量蛋白、分子量较大或较小的蛋白以及高通量方面具有优势。结论:全自动蛋白检测是一种灵敏、高效的检测特异性蛋白丰度变化的系统,值得在科研和医学检验中推广。

摘要： 目的 探讨健脾活血方联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)抑制小鼠肝癌原位移植瘤的机制.方法 将40只BALB/c小鼠随机分为假手术组、模型组、5-Fu组、5-Fu联合健脾活血方低剂量组、5-Fu联合健脾活血方高剂量组,每组8只.除假手术组外,其余组采用肝膜下注入H22肝细胞液方法建立肝癌原位移植瘤模型.从造模手术结束后第3天开始,5-Fu组隔日腹腔注射1次20 mg/kg的5-Fu;5-Fu联合健脾活血方低剂量组、5-Fu联合健脾活血方高剂量组5-Fu给药方案同5-Fu组,同时每日灌胃36.9 g生药/kg、73.8 g生药/kg的健脾活血方1次;假手术组和模型组在相同时间点灌胃等量的蒸馏水.各组均持续干预14 d.第18天处死所有小鼠,收集其肝原位瘤及腹膜组织,比较各组肝原位瘤的瘤重、抑瘤率、腹膜转移率,采用HE染色法观察肿瘤组织及腹膜转移灶的病理形态,采用蛋白免疫印迹法检测肝原位瘤组织中α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)的表达情况,采用免疫组化法检测肝原位瘤组织中α-SMA与E-cadherin的阳性表达情况.结果 5-Fu组、5-Fu联合健脾活血方低剂量组、5-Fu联合健脾活血方高剂量组小鼠的肝原位瘤重均显著轻于模型组(P均<0.05),腹膜转移率均明显低于模型组(P均<0.05);5-Fu联合健脾活血方低剂量组、5-Fu联合健脾活血方高剂量组的肝原位瘤重均明显轻于5-Fu组(P均<0.05),抑瘤率均明显高于5-Fu组(P均<0.05),腹膜转移率均明显低于5-Fu组(P均<0.05).HE染色显示5-Fu联合健脾活血方低剂量组、5-Fu联合健脾活血方高剂量组的肝原位瘤组织的病理恶化状况均较5-Fu组有所改善.蛋白免疫印迹法检测显示5-Fu联合健脾活血方低剂量组、5-Fu联合健脾活血方高剂量组的MMP-2、MMP-9表达量均显著低于5-Fu组(P均<0.05),且蛋白免疫印迹法和免疫组化法检测显示5-Fu联合健脾活血方低剂量组、5-Fu联合健脾活血方高剂量组的α-SMA表达量和阳性表达率均显著低于5-Fu组(P均<0.05),E-cadherin表达量和阳性表达率均显著高于5-Fu组(P均<0.05).结论 健脾活血方联合5-Fu的给药方案可抑制小鼠肝癌原位移植瘤的生长,其作用机制可能与下调α-SMA、MMP-2、MMP-9的表达以及上调E-cadherin的表达相关.

摘要： 为实现甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)在原核系统中高效表达,在GenBank上查找AFP全基因序列(GenBank登录号:NM_001134.2),分析AFP基因序列及大肠杆菌密码子偏好性优化,化学合成AFP全基因。以pET28a(+)作为原核表达载体并转化至BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达。利用镍柱纯化AFP重组蛋白,并对纯化的AFP重组蛋白进行SDS-PAGE纯度分析、BCA蛋白浓度测定、Western-blot特异性鉴定。结果表明:AFP重组质粒经过Nde I、Xhol I双酶切鉴定,在1875 bp处出现特异性条带,与预期相符合;当诱导条件为30°C,0.1 mM的IPTG,诱导8 h,AFP重组蛋白可大量表达;BCA法测得AFP重组蛋白浓度达0.9239 mg/mL;纯化后的AFP重组蛋白与市售的AFP单抗进行Western blot鉴定,结果显示在75 kD处有明显的蛋白印迹,pET28a(+)/BL21(DE3)空白组无条带,表明AFP重组蛋白可在大肠杆菌中高效表达,且经Ni柱纯化后具有良好的特异性。研究实现了AFP重组蛋白在大肠杆菌中高效表达,为后续AFP的检测、以AFP为分子靶点的抗癌药物筛选奠定了基础。

摘要： 为实现甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)在原核系统中高效表达,在GenBank上查找AFP全基因序列(GenBank登录号:NM_001134.2),分析AFP基因序列及大肠杆菌密码子偏好性优化,化学合成AFP全基因。以pET28a(+)作为原核表达载体并转化至BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达。利用镍柱纯化AFP重组蛋白,并对纯化的AFP重组蛋白进行SDS-PAGE纯度分析、BCA蛋白浓度测定、Western-blot特异性鉴定。结果表明:AFP重组质粒经过Nde I、Xhol I双酶切鉴定,在1875 bp处出现特异性条带,与预期相符合;当诱导条件为30°C,0.1 mM的IPTG,诱导8 h,AFP重组蛋白可大量表达;BCA法测得AFP重组蛋白浓度达0.9239 mg/mL;纯化后的AFP重组蛋白与市售的AFP单抗进行Western blot鉴定,结果显示在75 kD处有明显的蛋白印迹,pET28a(+)/BL21(DE3)空白组无条带,表明AFP重组蛋白可在大肠杆菌中高效表达,且经Ni柱纯化后具有良好的特异性。研究实现了AFP重组蛋白在大肠杆菌中高效表达,为后续AFP的检测、以AFP为分子靶点的抗癌药物筛选奠定了基础。

摘要： 【目的】类毒素过敏原蛋白(VAPs)是松材线虫侵染松树过程中分泌的一类蛋白。此类蛋白可通过抑制松树的防卫反应,从而利于松材线虫在松树内的定殖与扩散。本研究对4种类毒素过敏原蛋白进行原核表达、多抗制备和基因的表达模式分析,明确松材线虫Bx-VAPs蛋白的结构与功能,为阐明该类蛋白在松材线虫与寄主松树互作中的作用机理提供基础支撑。【方法】本研究利用聚合酶链式反应(PCR)扩增松材线虫4个Bx-VAPs基因,通过实时荧光定量(RT-qPCR)方法检测不同龄期松材线虫4个Bx-VAPs基因的表达量。同时,将扩增的4个基因全长产物分别转化至pET32b原核表达载体,构建重组质粒pET-32b-VAPs,经鉴定正确后的重组质粒转化至大肠杆菌BL21DE3进行诱导表达。利用纯化的Bx-VAPs蛋白分别免疫Balb/c鼠,4次免疫后获得多克隆抗体;采用间接酶联免疫吸附法ELISA测定抗体血清效价;利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹法(Western-blot)进行蛋白鉴定。最后,应用生物信息学方法分析这四个蛋白的理化性质、二级结构和表面特性,预测B细胞抗原表位。【结果】松材线虫4个Bx-VAPs基因在不同龄期的表达量存在显著差异,其中Bx-VAP1和Bx-VAP2基因在成虫期表达量较高,Bx-VAP3和Bx-VAP4基因在繁殖型L3时期表达量较高。构建获得的重组质粒pET-32b-VAPn诱导表达的蛋白分子量介于21~31 kDa之间,纯化后的多克隆抗体anti-VAP1、anti-VAP2和anti-VAP3均对松材线虫蛋白液具有较高的特异性,但anti-VAP4抗体未能与松材线虫蛋白液结合反应。4个Bx-VAP蛋白的二级结构均以α螺旋和无规则卷曲为主,存在信号肽,具有SCP结构域,无跨膜结构域,Bx-VAP1潜在的优势B细胞抗原表位较多。【结论】重组质粒pET-32b-VAPn诱导表达的蛋白大小与预测的蛋白大小一致,均为包涵体表达,制备的多克隆抗体anti-VAP1、anti-VAP2和anti-VAP3效价高,特异性良好,Bx-VAP1具有潜在的B细胞抗原表位优势,为进一步研究松材线虫VAPs蛋白的功能及其相关致病机制研究提供了实验材料和基础。

摘要： 目的：回顾性调查长沙市无偿献血者中男男同性HIV感染情况及WB带型分析,为无偿献血宣传、招募、体检征询等方面采取有效措施提供参考依据。方法：收集长沙市2010年1月～2012年6月无偿献血者314551份血液标本及其人口流行病学资料,采用ELISA初筛检测,反应性标本用蛋白免疫印迹(WB)进行确认。结果：2010年1月～2012年6月共检出抗-HIV阳性献血者80例,其中30例为男男同性性行为感染,占所确诊感染HIV的37.5％,近2年来通过男男性行为途径感染HIV的阳性率呈明显上升趋势。WB检测结果中gp160、gp120、gp41、P66、p24的阳性率均为100％,P39、P55条带存在较大个体差异。结论：近年长沙市无偿献血者中MSM人群HIV感染率呈上升趋势,大多以18～30岁未婚者,文化程度以大专或以上为主,且以首次献血者居多,隐蔽性强。通过MSM途径与异性性接触或其他途径感染HIV的WB带型并无明显差异。

摘要： 目的：考察中药复方柴胡疏肝散的抗抑郁作用，阐述抑郁症形成机理及复方柴胡疏肝散起效机制。rn 方法：运用经典的慢性应激模型研究中药复方柴胡疏肝散的抗抑郁效应。首次引入代谢组学研究方法，应用超高效液相色谱与四极杆飞行时间质谱联用技术（UPLC-Q-TOF MS）对海马组织样品进行分析，运用多元统计分析方法对内源性产物的代谢轮廓进行描述，考察柴胡疏肝散对慢性应激所致抑郁大鼠海马组织中内源性代谢产物轮廓的变化：并寻找潜在的生物标志物。采用蛋白免疫印迹分析（Western-blot），考察柴胡疏肝散对慢性应激模型大鼠大脑海马组织大脑神经营养因子（BDNF）的表达及相关的MEK-ERK-CREB 信号转导通路调控[cAMP 反应结合蛋白（CREB）、胞外信号调节激酶（ERK）以及磷酸化胞外信号调节激酶（p-ERK）的表达]的影响，进一步探讨柴胡疏肝散的抗抑郁作用机制。rn 结果:中药复方柴胡疏肝散对慢性不可预见性应激所致抑郁大鼠行为学指标有改善趋势。通过模式识别，病理模型组与正常组海马组织中内源性产物代谢轮廓显著不同，而柴胡疏肝散复方给药组海马组织中内源性产物代谢轮廓与病理模型组显著区分，而与正常组很接近。对代谢轮廓进行加载处理后，初步鉴定了16 个代谢产物，它们分别是肌酸、烟酰氨、次黄嘌呤、苯丙氨酸、吲哚丙烯酸、9Z-十六烯酰丙三醇、二十二烯酰丙三醇、肉豆蔻酸、3-羟基十六烷酸、1-十六酰基甘油-3-磷酸胆碱、葡萄糖醛酸-6,3-内酯、N-乙酰基天冬氨酸、肌苷、1-十五酰基-甘油-3 磷酸胆碱、1-十六酰基-甘油-3 磷酸胆碱、二十二碳六烯酸和辛酸。它们对各组代谢轮廓的区分起重要作用，这些潜在的生物标志物分别与能量代谢、神经递质的合成、色氨酸代谢、脂肪酸代谢等代谢途径相关。应激模型组大鼠海马组织BDNF、ERK1/2、pERK1/2 表达水平与对照组相比均明显降低，CSGS 给药后与模型组相比能显著上调应激模型组大鼠海马组织BDNF、ERK1/2、pERK1（44kD）表达水平。rn 结论：复方柴胡疏肝散对慢性应激所致大鼠抑郁具有干预作用，且该作用与调节能量代谢、神经递质的合成、色氨酸代谢、脂肪酸代谢等等代谢途径的异常相关。CSGS 临床的抗抑郁效应可能与其神经营养作用相关，同时，调节MEK-ERK-CREB 信号转导通路的失调有可能是CSGS 抗抑郁效应神经生物学机制的重要组成部分之一。研究表明将代谢组学方法应用于中药复方的研究具有科学性与可行性。

摘要： 构建流感病毒多表位的的核酸疫苗,并研究表位基因在BHK细胞内表达产物的生物学活性。筛选流感病毒主要抗原(HA NA NP M)优势抗原表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构合成流感通用多表位基因(Epi),然后定向克隆至真核表达载体pVAX1的CMV启动子下游,构建多表位核酸疫苗pVAX1-Epi.最后将该重组质粒转染BHK细胞,提取细胞全RNA,以RT-PCR方法目的基因；以间接免疫荧光试验(IFA)和蛋白免疫印迹分析(Westblotting)检测其表达产物抗原性。RT-PCR检测到目的基因；IFA检测到特异性荧光存在；Westblotting检测到目的蛋白条带.本试验所构建的重组质粒pVAX1-Epi,在真核细胞内均获了有效地转录和表达；而且其表达产物均能与相应的抗体特异性结合,证明了其具有一定的生物学活性和抗原性,有望能针对H3、H9亚型流感病毒提供保护。

摘要： 为了研究锯缘青蟹(Scylla serrata)特异性过敏原，首先从锯缘青蟹肌肉中提取可溶性蛋白质，利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离。以过敏患者阳性血清和正常人阴性血清作对照，通过Western blot鉴定出分子量为14.3kDa的蛋白为锯缘青蟹的特异性过敏原。然后用SephadexG75凝胶过滤层析和DEAE-52离子交换层析纯化出该过敏原，再经MALDI-TOF／TOF-MS检测，利用Blastz在线分析确定该蛋白为血蓝蛋白的亚基，经Clustal W分析该蛋白的多肽片段序列和可口美青蟹(Callinectes sapidus)、邓杰内斯蟹(Cancer magister)、加州龙虾(Panulirus interruptus)、艾氏真蟹(Carcinus aestuarii)的血蓝蛋白亚基序列有很高的同源性，经Prosite数据库检索后发现肽段1和肽段2有酪蛋白激酶磷酸化位点和蛋白激酶Ｃ磷酸化位点，是过敏原参与机体反应的重要活性位点。

摘要： 为了研究锯缘青蟹(Scylla serrata)特异性过敏原，首先从锯缘青蟹肌肉中提取可溶性蛋白质，利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离。以过敏患者阳性血清和正常人阴性血清作对照，通过Western blot鉴定出分子量为14.3kDa的蛋白为锯缘青蟹的特异性过敏原。然后用SephadexG75凝胶过滤层析和DEAE-52离子交换层析纯化出该过敏原，再经MALDI-TOF／TOF-MS检测，利用Blastz在线分析确定该蛋白为血蓝蛋白的亚基，经Clustal W分析该蛋白的多肽片段序列和可口美青蟹(Callinectes sapidus)、邓杰内斯蟹(Cancer magister)、加州龙虾(Panulirus interruptus)、艾氏真蟹(Carcinus aestuarii)的血蓝蛋白亚基序列有很高的同源性，经Prosite数据库检索后发现肽段1和肽段2有酪蛋白激酶磷酸化位点和蛋白激酶Ｃ磷酸化位点，是过敏原参与机体反应的重要活性位点。

摘要： 为了研究锯缘青蟹(Scylla serrata)特异性过敏原，首先从锯缘青蟹肌肉中提取可溶性蛋白质，利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离。以过敏患者阳性血清和正常人阴性血清作对照，通过Western blot鉴定出分子量为14.3kDa的蛋白为锯缘青蟹的特异性过敏原。然后用SephadexG75凝胶过滤层析和DEAE-52离子交换层析纯化出该过敏原，再经MALDI-TOF／TOF-MS检测，利用Blastz在线分析确定该蛋白为血蓝蛋白的亚基，经Clustal W分析该蛋白的多肽片段序列和可口美青蟹(Callinectes sapidus)、邓杰内斯蟹(Cancer magister)、加州龙虾(Panulirus interruptus)、艾氏真蟹(Carcinus aestuarii)的血蓝蛋白亚基序列有很高的同源性，经Prosite数据库检索后发现肽段1和肽段2有酪蛋白激酶磷酸化位点和蛋白激酶Ｃ磷酸化位点，是过敏原参与机体反应的重要活性位点。

摘要： 为了研究锯缘青蟹(Scylla serrata)特异性过敏原，首先从锯缘青蟹肌肉中提取可溶性蛋白质，利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离。以过敏患者阳性血清和正常人阴性血清作对照，通过Western blot鉴定出分子量为14.3kDa的蛋白为锯缘青蟹的特异性过敏原。然后用SephadexG75凝胶过滤层析和DEAE-52离子交换层析纯化出该过敏原，再经MALDI-TOF／TOF-MS检测，利用Blastz在线分析确定该蛋白为血蓝蛋白的亚基，经Clustal W分析该蛋白的多肽片段序列和可口美青蟹(Callinectes sapidus)、邓杰内斯蟹(Cancer magister)、加州龙虾(Panulirus interruptus)、艾氏真蟹(Carcinus aestuarii)的血蓝蛋白亚基序列有很高的同源性，经Prosite数据库检索后发现肽段1和肽段2有酪蛋白激酶磷酸化位点和蛋白激酶Ｃ磷酸化位点，是过敏原参与机体反应的重要活性位点。

摘要： 为了研究锯缘青蟹(Scylla serrata)特异性过敏原，首先从锯缘青蟹肌肉中提取可溶性蛋白质，利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离。以过敏患者阳性血清和正常人阴性血清作对照，通过Western blot鉴定出分子量为14.3kDa的蛋白为锯缘青蟹的特异性过敏原。然后用SephadexG75凝胶过滤层析和DEAE-52离子交换层析纯化出该过敏原，再经MALDI-TOF／TOF-MS检测，利用Blastz在线分析确定该蛋白为血蓝蛋白的亚基，经Clustal W分析该蛋白的多肽片段序列和可口美青蟹(Callinectes sapidus)、邓杰内斯蟹(Cancer magister)、加州龙虾(Panulirus interruptus)、艾氏真蟹(Carcinus aestuarii)的血蓝蛋白亚基序列有很高的同源性，经Prosite数据库检索后发现肽段1和肽段2有酪蛋白激酶磷酸化位点和蛋白激酶Ｃ磷酸化位点，是过敏原参与机体反应的重要活性位点。

摘要： 为了研究锯缘青蟹(Scylla serrata)特异性过敏原，首先从锯缘青蟹肌肉中提取可溶性蛋白质，利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离。以过敏患者阳性血清和正常人阴性血清作对照，通过Western blot鉴定出分子量为14.3kDa的蛋白为锯缘青蟹的特异性过敏原。然后用SephadexG75凝胶过滤层析和DEAE-52离子交换层析纯化出该过敏原，再经MALDI-TOF／TOF-MS检测，利用Blastz在线分析确定该蛋白为血蓝蛋白的亚基，经Clustal W分析该蛋白的多肽片段序列和可口美青蟹(Callinectes sapidus)、邓杰内斯蟹(Cancer magister)、加州龙虾(Panulirus interruptus)、艾氏真蟹(Carcinus aestuarii)的血蓝蛋白亚基序列有很高的同源性，经Prosite数据库检索后发现肽段1和肽段2有酪蛋白激酶磷酸化位点和蛋白激酶Ｃ磷酸化位点，是过敏原参与机体反应的重要活性位点。

摘要： 本发明属于免疫印迹检测技术领域，具体涉及一种总蛋白刚果红染色作为内参标准的免疫印迹定量检测方法，包括以下步骤：（1）制备变性待测蛋白质样本；（2）通过凝胶电泳对待测蛋白质样本分离；（3）将步骤（2）电泳分离的蛋白从凝胶转移至固相膜上；（4）用刚果红对步骤（3）转印后的固相膜进行染色、脱色；（5）将步骤（4）染色后的固相膜进行免疫检测;(6)运用分子模拟技术揭示被刚果红染色的总蛋白作为内参可能涉及到的机理。本发明评价了刚果红染色后的免疫反应，发现总蛋白刚果红染色作为内参标准，相比总蛋白丽春红S染色及多种常用管家蛋白，其稳定性、线性动力学范围具有更为明显的优势。

摘要： 本发明涉及抗体检测技术领域，特别涉及一种风疹病毒IgM抗体检测免疫印迹膜条及免疫印迹试剂盒。该膜条的制备方法包括如下步骤：将风疹病毒用抗原稀释液进行稀释，在95～105°C条件下处理4～6min；抗原稀释液的组成为：Tris‑HCl 8vt％～12vt％，SDS 3w/v％～5w/v％，甘油15vt％～25vt％，溴酚蓝0.01w/v％～0.02w/v％，水补足；抗原稀释液不包括还原剂；对抗原进行电泳分离，将风疹病毒蛋白转印至硝酸纤维膜，封闭。本发明将纯化后的风疹病毒经凝胶电泳对目的蛋白进行再次纯化，减少因目的蛋白中杂蛋白引起的非特异性反应，提升检测的灵敏度和特异性。

摘要： 本发明是一种用于蛋白质免疫印迹中封闭转印膜的鱼明胶蛋白粉的制备方法，该方法用PBS缓冲液溶解海鱼鱼皮明胶制成鱼皮明胶溶液，用牛胰蛋白酶和凝血酶冻干粉混合酶溶液酶解，超滤，富集，干燥得到鱼明胶蛋白。本发明还公开了蛋白质免疫印迹封闭方法。本发明有效解决了在蛋白质免疫印迹实验中转印膜的封闭效果不佳、曝光的背景高、非特异性条带检出等常见的问题。采用本发明中用于蛋白质免疫印迹实验的封闭剂，抗体孵育后经ECL底物检测可以得到特异性蛋白检出带且背景干净无杂带，同时也缩短孵育时间至15min，为获得准确、高效的实验结果提供技术基础。

摘要： 本实用新型提供一种免疫印迹膜的载持结构及免疫印迹仪。免疫印迹膜的载持结构包括附板和防水胶带，所述附板竖直设置，免疫印迹膜背面靠于所述附板表面，所述防水胶带粘接于免疫印迹膜和所述附板之间。采用本实用新型技术方案，附板给免疫印迹膜提供附着平面，确保在移载过程中，免疫印迹膜的位置保持稳定；直接通过防水胶带来固定免疫印迹膜顶部，方便快捷，提高了实验效率；防水胶带对免疫印迹膜在试剂或清洗液中浮动的规制作用较小，有助于印迹膜与试剂或清洗液充分反应，提高实验结果准确度。

摘要： 本实用新型提供蛋白质免疫印迹实验废弃蛋白胶处理装置，涉及蛋白胶处理技术领域，包括机体，所述机体的顶面设置有入料口，所述入料口的表面设置有清理装置，所述机体的表面固定安装有除尘装置，所述清理装置包括支撑架和圆槽，所述支撑架的底面固定安装有刷子，所述支撑架的底面开设有滑槽，所述滑槽的内壁滑动安装有滑块，所述滑块的底端固定安装有连接块，所述连接块靠近入料口的一侧固定安装有滑杆，所述连接块与支撑架之间固定安装有弹簧。通过设置清理装置，以上整个实现了简单方便的清洁入料口内壁残留蛋白胶的功能，使用方便且简单，提高了清洁时的工作效率，且结构简单维护方便。

摘要： 本实用新型提出的用于蛋白质免疫印迹蛋白/PCR核酸提取的冷却装置，包括盒体，所述盒体为一封闭盒体，在盒体的顶部端面开设若干用于器皿插入的通孔，通孔的内孔孔径大于器皿的外壁直径，在盒体内部设置容纳蓄冷剂的腔室，顶部设有蓄冷剂注入装置，在盒体的侧壁底部设置排出端口，本方案中通过设计了一个既能容纳蓄冷剂、又能稳定放置器皿的冷却装置，满足了试验需求，而且，还设计了进一步稳定试管的可拆卸过渡座，使装有蛋白质/核酸或细胞的器皿能够充分接触冷却剂，从而达到冷却的目的。

摘要： 本实用新型公开了一种横向免疫印迹蛋白质芯片以及设有该蛋白质芯片的反应装置，横向免疫印迹蛋白质芯片包括固相支持物，在固相支持物的上表面按顺序依次连接设有样品垫、标记物膜、蛋白质芯片和吸水材料；反应装置包括盒体和上盖，上盖设于盒体上部，所述盒体底部设有横向槽，所述横向槽内设有横向免疫印迹蛋白质芯片。本实用新型的横向免疫印迹蛋白质芯片在使用时直接将样品加至样品垫处，样品逐渐扩散至标记物膜溶解，样品与标记物充分反应后，继续扩散至蛋白质芯片，在蛋白质芯片上与包被物反应并显示结果，该免疫印迹蛋白质芯片只需一次加样，不需要多次加样、多次洗涤等多步反应步骤，反应时间短，在5-20分钟内即可得出实验结果。

摘要： 本实用新型公开了一种用于免疫印迹试验的走胶蛋白调齐架，属于实验器材领域，一种用于免疫印迹试验的走胶蛋白调齐架，包括架体，架体顶部的左侧开设有进液槽，架体顶部的右侧开设有集液槽，进液槽和集液槽之间通过流道连通，流道位于架体的内部，且流道从左至右向下倾斜设置，架体的内部从左至右开设有多个调齐槽，多个调齐槽的顶部均与流道连通，每个调齐槽的体积均一致，每个调齐槽的上方对应开设有一个取液孔，每个取液孔均与流道连通。本实用新型的用于免疫印迹试验的走胶蛋白调齐架，一次调齐，省时方便。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，且公开了一种快速蛋白免疫印迹系统方法，包括以下步骤：S1、获取蛋白质样品；S2、制备梯度预制凝胶，并将蛋白质样品放入到梯度预制凝胶中进行电泳；S3、电泳结束后，将胶条切割成合适的大小，并用蛋白转膜液进行平衡；S4、将预先裁剪好与胶条大小相同的滤纸和NC膜进入到蛋白转膜液中；本发明利用梯度预制凝胶替代传统实验中的聚丙烯酰胺凝胶，在进行电泳的过程中，不需要进行低压浓缩，只需要外加一个恒压电场进行蛋白的分离即可，并且梯度预制凝胶适应使5‑500kDa蛋白，不需要根据不同蛋白配置不同的凝胶，同时在转膜的过程中，在蛋白转膜液中增加了SDS表面活性剂，可以加快蛋白从凝胶中的剥离速度。

摘要： 本实用新型提供一种蛋白免疫印迹孵育盒及蛋白免疫印迹孵育装置，属于实验器材技术领域，包括盒体，所述盒体具有容纳空间，所述容纳空间被挡板分隔为多个小格；与所述盒体配合的盒盖；以及，至少一块隔板，每块所述隔板沿大致平行于所述盒体底壁的方向可拆卸安装于一个所述小格内，并将所述小格分隔为靠近所述盒体底壁的第一容纳空间以及远离所述盒体底壁的第二容纳空间；所述隔板上设置有连通所述第一容纳空间与第二容纳空间的孔。本实用新型通过在盒体小格内设置隔板，将两张膜隔开，避免了振摇时膜的重叠。成功的用一个格子的液体封闭两张膜，从而大大节省了抗体的使用量且对实验结果没有影响。