实时聚合酶链反应

摘要： 目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术在肾结核病理诊断中的应用价值。方法回顾性收集我院泌尿外科通过后腹腔镜技术或开放技术行肾切除术后石蜡组织标本55例患者的临床资料,以术前尿结核分枝杆菌培养结果为金标准,并结合术后病理诊断结果,将研究对象分为结核肾病组25例(阳性组),非结核肾病组30例(阴性组)。采用Taqman探针法实时荧光定量PCR技术和抗酸染色技术检测每个石蜡组织标本,对比分析两种检测技术在肾结核病理诊断中的诊断效能,绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估两种方法在肾结核病理诊断中的价值。结果实时荧光定量PCR技术检测的敏感度与抗酸染色技术检测的敏感度分别为80.0%(20/25)和48.0(12/25),前者相比后者敏感度提高了32.0%,差异有统计学意义(χ^(2)=5.556,P=0.018)。荧光定量PCR检测的特异度、阳性预测值、阴性预测值均高于抗酸染色检测的结果,但两者比较差异均无统计学意义(P>0.05)。荧光定量PCR检测的准确度高于抗酸染色检测的准确度(89.1%vs.72.7%),两者比较差异有统计学意义(χ^(2)=4.767,P=0.029)。两种技术检测肾结核组织标本病原体结果与尿结核分枝杆菌培养结果的一致性Kappa值分别为0.777和0.429。ROC曲线分析显示,实时荧光定量PCR技术和抗酸染色技术的ROC曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.883和0.707,前者高于后者0.177,差异有统计学意义(Z=3.502,P<0.05)。结论实时荧光定量PCR技术检测方法简单易行,与抗酸染色检测技术相比可以提高肾结核组织病原体检测的敏感度和准确度,在肾结核的病理诊断中具有良好的应用价值。

摘要： 目的:探讨二肽基肽酶-4(DPP4)在瘢痕疙瘩中的表达情况。方法:分别获取切除术后的瘢痕疙瘩组织及正常皮肤组织,然后通过蛋白免疫印迹方法、定量聚合酶链反应,比较二者DPP4基因在蛋白和mRNA水平上表达的差异。结果:与正常皮肤组织相比,DPP4蛋白在瘢痕疙瘩组织中的表达高于正常皮肤,差异有统计学意义(P<0.05),DPP4基因在mRNA水平上的表达高于正常皮肤(P<0.05)。结论:DPP4在瘢痕疙瘩中的表达上升,DPP4可能在促进成纤维细胞活化、纤维化形成方面有一定作用。

摘要： 目的探讨含与E6-AP羧基末端同源结构域的E3泛素化蛋白连接酶1(HECT Domain E3 Ubiquitin Protein Ligase 1,HECTD1)在心肌细胞肥大过程中的功能与分子机制。方法选取心肌肥厚患者和对照心肌组织,荧光定量PCR分析心肌肥厚标志基因和HECTD1表达水平。在新生大鼠原代心肌细胞中用siRNA干扰HECTD1,用qRT-PCR和Western blot验证。利用血管紧张素Ⅱ在心肌细胞中诱导心肌肥厚,分析心肌细胞大小和肥厚标志基因表达。利用Western blot检测哺乳动物雷帕霉素受体(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路激活情况。结果在心肌肥厚患者心肌组织中肌凝蛋白重链7(myosin heavy chain 7,MYH7)、心房钠尿肽(natriuretic peptide A,ANP)和利尿钠肽(natriuretic peptide B,BNP)的表达增加,同时HECTD1表达水平增加。在血管内紧张素Ⅱ诱导的心肌肥厚大鼠心脏中,ANP、BNP、MYH7和HECTD1表达水平增加。siRNA敲低HECTD1表达可以抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大和心肌肥厚标志基因ANP、BNP和MYH7的表达水平。敲低Hectd1表达可以抑制血管紧张素Ⅱ诱导的mTOR信号通路活性。结论HECTD1通过激活mTOR信号通路促进血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大。

摘要： 目的探讨含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶7(ADAMTS7)基因rs3825807位点多态性与子痫前期(PE)遗传易感性的相关性。方法使用TaqMan探针实时荧光PCR技术,对山东地区706例PE病人(病例组)以及926例正常孕妇(对照组)的外周血DNA进行扩增,比较两组孕妇ADAMTS7基因rs3825807位点基因型及等位基因频率。结果病例组和对照组孕妇ADAMTS7基因rs3825807位点基因型及等位基因频率差异均无显著性(P>0.05);早发型、晚发型PE病人基因型及等位基因频率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论ADAMTS7基因rs3825807位点多态性与山东地区汉族人群PE的遗传易感性没有相关性。

摘要： 目的 探索慢性髓性白血病(CML)患者外周血样本的存储和运输对实时定量PCR(RQ-PCR)检测BCR-ABL(P210)转录本水平的影响.方法 采集84例CML患者外周血样本,根据储存时间(0、6、12、24、48和72 h)、温度[室温(18～24°C)和低温(2～8°C)]以及振荡条件(振荡时长3、6和12h)设置不同分组,RQ-PCR法检测不同条件下外周血样本BCR-ABL(P210)转录本水平.本研究将BCR-ABL拷贝数、ABL拷贝数和BCR-ABL(P210)转录本水平等原始数据进行对数转化(log10N).结果 ①琼脂糖凝胶电泳结果显示:室温条件下,储存48、72 h的样本RNA出现显著降解;②储存温度方面,总体样本中,室温储存48、72 h的样本BCR-ABL拷贝数检测水平显著低于低温储存的样本(P＜0.05);然而BCR-ABL(P210)转录本水平在低温储存与室温储存条件下检测结果差异无统计学意义(P＞0.05);③储存时间方面,与基线的3.35± 1.60相比,总体样本的BCR-ABL拷贝数检测结果仅在室温储存储存下48 h(2.93±1.59)和72 h(2.79±1.42)显著下降(P＜0.05);与基线的5.47±0.35相比,总体样本中ABL拷贝数检测结果在48 h(低温5.29±0.30,室温5.06±0.38)和72 h(低温5.11±0.54,室温4.64±0.79)均显著下降(P＜0.05).但是,与基线的-0.56± 1.51相比,无论低温或室温条件下,不同储存时间(6、12、24、48和72 h)的样本BCR-ABL(P210)转录本水平检测结果无显著改变(P＞0.05);④振荡方面,与基线的-0.60±1.37相比,振荡3、6、12h的样本BCR-ABL(P210)转录本水平检测结果无显著改变(JP＞0.05).结论 样本储存时间、储存温度及运输振荡因素可以影响BCR-ABL、ABL拷贝数的检测结果,但对BCR-ABL(P210)转录本水平定量检测结果无显著影响.

摘要： 目的 分析小鼠肾脏衰老过程中长链非编码RNA(lncRNA)的差异表达情况,探索肾脏衰老的机制.方法 随机选取3、12和24月龄C57BL/6雄性小鼠各5只(体重均为25g左右),采用PAS、Masson、半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色方法检测小鼠肾脏病理及细胞衰老情况.高通量测序得到3组小鼠组间差异表达的lncRNA及其表达丰度值,绘制热图.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证差异表达的lncRNA.构建竞争性内源性RNA(competitive endogenous RNA,ceRNA)网络(包含 lncRNA、miRNA 和 mRNA),GO、KEGG 富集分析预测差异表达lncRNA靶基因的生物学功能.结果 肾脏病理染色结果显示,随着小鼠月龄增加,肾小球系膜基质增多,基底膜增厚,肾小球硬化逐渐加重;肾脏纤维化逐渐加重;SA-β-gal染色阳性区域逐渐增加.测序结果显示,3组小鼠间差异表达的lncRNA共938个已知的lncRNA和542个未知的lncRNA.其中,与3月龄小鼠相比,12月龄小鼠有33个lncRNA表达上调,43个lncRNA表达下调;与3月龄小鼠相比,24月龄小鼠有130个lncRNA表达上调,91个lncRNA表达下调;与12月龄小鼠相比,24月龄小鼠有36个lncRNA表达上调,22个lncRNA表达下调.qRT-PCR验证的差异表达倍数较大、表达量较高的10个lncRNA与测序结果一致.GO富集分析结果显示,3组差异表达的lncRNA靶基因多定位于细胞核和细胞质,也可能通过与蛋白结合来发挥作用,还可能参与各种蛋白磷酸化、细胞周期、转录、转录调节等过程.KEGG富集分析结果显示,3组差异表达lncRNA的靶基因富集明显的通路是与肾脏衰老密切相关的Rap1信号通路、FOXO信号通路和MAPK信号通路.结论 不同月龄小鼠肾脏lncRNA表达存在显著差异,lncRNA的差异表达可能参与肾脏衰老的发生.

摘要： 目的 回顾性检测和分析本实验室在新冠肺炎流行早期快速筛查检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸结果,总结检测失败经验供临床实验室参考.方法 首先对50例咽拭子样本,分别用本实验室所用试剂A和亳州市疾控中心提供的试剂B进行实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR)平行双盲检测,以评估本实验室用试剂A的可靠性.后续使用试剂A进行常规检测,发现37250例样本中有1354例检测结果异常,其中1286例为检测扩增失败样本,68例为检测信号曲线出现末尾起跳但是没有完整扩增的可疑样本.对检测结果异常的1354例样本用试剂A进行复查,并对两次检测结果进行统计和分析.结果 采用A和B两种试剂分别检测50例已知结果样本的结果符合率为96.0％(48/50),表明试剂A具有可靠性.用试剂A复检1286例扩增失败样本,发现1114例(86.63％)为阴性,25例(1.94％)单基因信号(15例ORF 1ab信号,10例N基因信号)曲线出现末尾起跳但是没有完整扩增,147例再次核酸制备/检测失败(11.43％).在68例检测信号曲线出现末尾起跳但是没有完整扩增的可疑样本中,用试剂A复检57例单基因曲线末尾起跳样本,结果符合率为94.7％(54/57),其检出病毒阳性率为10.53％(6/57);复检另外11例双基因信号曲线出现末尾起跳但是没有完整扩增样本(可疑),结果符合率为100％(11/11),其中检出病毒阳性率为81.82％(9/11).结论 荧光RT-PCR试剂盒A符合早期快速筛查病毒的实验室要求.检测时任何单基因或者双基因检测信号出现异常的末尾起跳时,必须进行重复检测才能保证结果的可靠和不漏检.同时,规范化的实验室操作和质量控制是保证操作精度和检测结果可重复的重要因素.

摘要： 目的 研究并评估适合临床实验室开展的食源性腹泻弯曲菌检测方法及抗菌药物敏感性试验.方法 分为预实验和大样本验证.(1)预实验:收集2017年9月至2018年1月就诊于北京地区某三甲医院食源性腹泻患者粪便标本400份.采用双孔滤膜培养法及改良头孢哌酮-木炭-脱氧胆酸盐(CCD)琼脂培养法在微需氧环境中培养48 h,挑选可疑菌落进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定,同时进行实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测空肠弯曲菌及结肠弯曲菌.(2)大样本验证:收集2018年4月至2019年3月就诊于北京不同地区不同级别3家医院肠道门诊食源性腹泻患者粪便标本2062份,进行qPCR检测及培养.阳性菌株按照美国临床与实验室标准化协会及美国国家肠道细菌耐药监测中心推荐的纸片扩散法及琼脂稀释法进行药物敏感性试验并进行结果判读.采用卡方检验比较3种检测方法的检测结果及2种抗菌药物敏感性试验的一致性.结果 预实验中qPCR、双孔滤膜培养法及改良CCD琼脂培养法检测弯曲菌(空肠弯曲菌/结肠弯曲菌)的检出率分别是9.0％(36/400)、5.0％(20/400)和3.5％(14/400),差异有统计学意义(x2=11.772,P＜0.01)且qPCR阴性,培养法均为阴性.大样本验证中,qPCR的检出率为8.1％(168/2 062),其中空肠弯曲菌7.0％(144/2 062),结肠弯曲菌1.2％(24/2 062).qPCR阳性标本进行双孔滤膜培养法培养,阳性率为61.9％(104/168),其中空肠弯曲菌为58.3％(84/144),结肠弯曲菌为83.3％(20/24),与预实验检出率差异无统计学意义(P＞0.1).空肠弯曲菌和结肠弯曲菌对环丙沙星耐药率分别为94.0％(94/100)和100.0％(24/24),对红霉素耐药率分别为6.0％(6/100)和33.3％(8/24),两种抗菌药物敏感性试验方法一致性较好(Kappa值＞0.75).结论 qPCR快速、灵敏、操作简单,适合临床实验室常规开展.双孔滤膜培养法检出率显著高于改良CCD琼脂培养法,弯曲菌对喹诺酮类药物显示出极高的耐药率,已不适用于北京地区弯曲菌食源性腹泻的治疗,应选择大环内酯类抗菌药物.

摘要： 目的：运用新近建立成功的高度自动化的实时荧光PCR技术结合融解曲线分析进行α-地中海贫血基因诊断，携带者检查。rn 方法：运用SYBR Greenl进行4个实时荧光PCR(SYBR-PCR)，同时进行融解曲线分析(D.C)，对来自福建省的一对夫妇及其胎儿进行基因诊断。同时运用多重PCR(mPCR)结合凝胶电泳技术进行基因检测加以对照确认。rn 结果：运用SYBR-PCR及D.C技术查出该胎儿系东南亚型缺失纯合子(--SEA/--SEA)，即Bart’s水肿胎儿综合征;该夫妇双方均为--SEA携带者(--SEA/αα)。用mPCR凝胶电泳技术得出的基因诊断结果与上述结果一致。引产后死婴病理检查显示：其双肾、双肺、脾等多脏器淤血;胸、腹腔积液;胸、腹壁真皮及皮下组织水肿伴不成熟淋巴细胞浸润;房间隔缺损等。脐血全血细胞分析显示MCV 65.7 fl，MCH20.9 pg，均低于正常值，血红蛋白分析结果Hb/Ban’s占84.9％。rn 结论：实时荧光PCR结合融解曲线分析技术可以独立应用于Bart’s水肿胎等α-地中海贫血的基因诊断，携带者检出及产前诊断。

摘要： 目的：运用新近建立成功的高度自动化的实时荧光PCR技术结合融解曲线分析进行α-地中海贫血基因诊断，携带者检查。rn 方法：运用SYBR Greenl进行4个实时荧光PCR(SYBR-PCR)，同时进行融解曲线分析(D.C)，对来自福建省的一对夫妇及其胎儿进行基因诊断。同时运用多重PCR(mPCR)结合凝胶电泳技术进行基因检测加以对照确认。rn 结果：运用SYBR-PCR及D.C技术查出该胎儿系东南亚型缺失纯合子(--SEA/--SEA)，即Bart’s水肿胎儿综合征;该夫妇双方均为--SEA携带者(--SEA/αα)。用mPCR凝胶电泳技术得出的基因诊断结果与上述结果一致。引产后死婴病理检查显示：其双肾、双肺、脾等多脏器淤血;胸、腹腔积液;胸、腹壁真皮及皮下组织水肿伴不成熟淋巴细胞浸润;房间隔缺损等。脐血全血细胞分析显示MCV 65.7 fl，MCH20.9 pg，均低于正常值，血红蛋白分析结果Hb/Ban’s占84.9％。rn 结论：实时荧光PCR结合融解曲线分析技术可以独立应用于Bart’s水肿胎等α-地中海贫血的基因诊断，携带者检出及产前诊断。

摘要： 目的：运用新近建立成功的高度自动化的实时荧光PCR技术结合融解曲线分析进行α-地中海贫血基因诊断，携带者检查。rn 方法：运用SYBR Greenl进行4个实时荧光PCR(SYBR-PCR)，同时进行融解曲线分析(D.C)，对来自福建省的一对夫妇及其胎儿进行基因诊断。同时运用多重PCR(mPCR)结合凝胶电泳技术进行基因检测加以对照确认。rn 结果：运用SYBR-PCR及D.C技术查出该胎儿系东南亚型缺失纯合子(--SEA/--SEA)，即Bart’s水肿胎儿综合征;该夫妇双方均为--SEA携带者(--SEA/αα)。用mPCR凝胶电泳技术得出的基因诊断结果与上述结果一致。引产后死婴病理检查显示：其双肾、双肺、脾等多脏器淤血;胸、腹腔积液;胸、腹壁真皮及皮下组织水肿伴不成熟淋巴细胞浸润;房间隔缺损等。脐血全血细胞分析显示MCV 65.7 fl，MCH20.9 pg，均低于正常值，血红蛋白分析结果Hb/Ban’s占84.9％。rn 结论：实时荧光PCR结合融解曲线分析技术可以独立应用于Bart’s水肿胎等α-地中海贫血的基因诊断，携带者检出及产前诊断。

摘要： 目的：运用新近建立成功的高度自动化的实时荧光PCR技术结合融解曲线分析进行α-地中海贫血基因诊断，携带者检查。rn 方法：运用SYBR Greenl进行4个实时荧光PCR(SYBR-PCR)，同时进行融解曲线分析(D.C)，对来自福建省的一对夫妇及其胎儿进行基因诊断。同时运用多重PCR(mPCR)结合凝胶电泳技术进行基因检测加以对照确认。rn 结果：运用SYBR-PCR及D.C技术查出该胎儿系东南亚型缺失纯合子(--SEA/--SEA)，即Bart’s水肿胎儿综合征;该夫妇双方均为--SEA携带者(--SEA/αα)。用mPCR凝胶电泳技术得出的基因诊断结果与上述结果一致。引产后死婴病理检查显示：其双肾、双肺、脾等多脏器淤血;胸、腹腔积液;胸、腹壁真皮及皮下组织水肿伴不成熟淋巴细胞浸润;房间隔缺损等。脐血全血细胞分析显示MCV 65.7 fl，MCH20.9 pg，均低于正常值，血红蛋白分析结果Hb/Ban’s占84.9％。rn 结论：实时荧光PCR结合融解曲线分析技术可以独立应用于Bart’s水肿胎等α-地中海贫血的基因诊断，携带者检出及产前诊断。

摘要： 目的：运用新近建立成功的高度自动化的实时荧光PCR技术结合融解曲线分析进行α-地中海贫血基因诊断，携带者检查。rn 方法：运用SYBR Greenl进行4个实时荧光PCR(SYBR-PCR)，同时进行融解曲线分析(D.C)，对来自福建省的一对夫妇及其胎儿进行基因诊断。同时运用多重PCR(mPCR)结合凝胶电泳技术进行基因检测加以对照确认。rn 结果：运用SYBR-PCR及D.C技术查出该胎儿系东南亚型缺失纯合子(--SEA/--SEA)，即Bart’s水肿胎儿综合征;该夫妇双方均为--SEA携带者(--SEA/αα)。用mPCR凝胶电泳技术得出的基因诊断结果与上述结果一致。引产后死婴病理检查显示：其双肾、双肺、脾等多脏器淤血;胸、腹腔积液;胸、腹壁真皮及皮下组织水肿伴不成熟淋巴细胞浸润;房间隔缺损等。脐血全血细胞分析显示MCV 65.7 fl，MCH20.9 pg，均低于正常值，血红蛋白分析结果Hb/Ban’s占84.9％。rn 结论：实时荧光PCR结合融解曲线分析技术可以独立应用于Bart’s水肿胎等α-地中海贫血的基因诊断，携带者检出及产前诊断。

摘要： 本发明为一种一步法实时荧光定量RT‑PCR检测人细胞角蛋白7 试剂盒，该试剂盒以mRNA为模板，使反转录和实时荧光定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需打开管盖，避免了交叉污染，并可以精确定量检测标本中人细胞角蛋白7(CK7) 的mRNA表达量。该试剂盒可以用于临床及科研中检测患者外周血、淋巴结等标本中CK7的表达，用以辅助诊断、指导治疗结直肠癌及提示预后。

摘要： 本发明为一种实时荧光定量RT‑PCR检测人基质金属蛋白酶1的试剂盒，该试剂盒以mRNA为模板，使反转录和实时荧光定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需打开管盖，避免了交叉污染，并可以精确定量检测标本中人基质金属蛋白酶1 (MMP1) 的mRNA表达量。该试剂盒可以用于临床及科研中检测患者结直肠癌手术切除标本中MMP1的表达，用以结直肠癌患者辅助诊断、指导治疗是否存在肝转移的指标。

摘要： 本发明为一种实时荧光定量RT‑PCR检测人基质金属蛋白酶11的试剂盒，该试剂盒以mRNA为模板，使反转录和实时荧光定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需打开管盖，避免了交叉污染，并可以精确定量检测标本中人基质金属蛋白酶11(MMP11)的mRNA表达量。该试剂盒可以用于临床及科研中检测患者结直肠癌手术切除标本中MMP11的表达，用以结直肠癌患者的辅助诊断、指导治疗及提示预后。

摘要： 本发明为一种实时荧光定量RT‑PCR检测人miR‑1290试剂盒，该试剂盒以总mRNA为模板，使反转录和实时荧光定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需打开管盖，避免了交叉污染，并可以精确定量检测标本中人miR‑1290的表达量。该试剂盒可以用于临床及科研中检测患者外周血标本中miR‑1290的表达，用以结直肠癌辅助诊断、指导治疗、复发及提示预后。

摘要： 本发明为一种实时荧光定量RT‑PCR检测人上皮细胞粘附分子试剂盒，该试剂盒以mRNA为模板，使反转录和实时荧光定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需打开管盖，避免了交叉污染，并可以精确定量检测标本中人上皮细胞粘附分子(Ep‑CAM) 的mRNA表达量。该试剂盒可以用于临床及科研中检测患者外周血标本中EP‑CAM的表达，用以结直肠癌辅助诊断、指导治疗及提示预后。

摘要： 本实用新型公开了一种实时荧光定量聚合酶链反应仪，涉及荧光检测技术领域，能够提高内部器件之间的固定稳定性，进而提高仪器的检测准确性和使用寿命。包括一侧铰接的底座和盖板，在底座上设置有待测标本固定架，以及围绕待测标本固定架设置的弹性部件、温控部件和通风部件，盖板上设置有光学模组，光学模组的光学扫描通道朝向待测标本固定架。实时荧光定量聚合酶链反应仪还包括开关组件，开关组件包括相互配合卡合的第一开关部件和第二开关部件，第一开关部件设置在底座的一侧，第二开关部件设置在盖板的一侧。

摘要： 本发明涉及在PCR产物的末端上互补结合探针的情况下，利用抑制DNA聚合酶的5'‑皮瓣内切核酸酶(FEN)活性的特性来检测单核苷酸多态性(SNP)的方法。更具体地涉及将实时聚合酶链反应(real‑time PCR)中使用的探针与PCR产物末端进行互补结合的情况下，确认抑制针对探针的耐热性DNA聚合酶的5'‑皮瓣内切核酸酶活性的特性，并利用其特性来使待检测的单核苷酸多态性(SNP)部位位于探针的5'‑末端部位时，根据等位基因(allele)来诱导5'‑皮瓣的形成，从而可有效地检测单核苷酸多态性(SNP)的方法。

摘要： 本发明涉及一种利用单管巢式实时聚合酶链反应（PCR）的改良结核菌诊断方法，尤其是一种利用两组结核菌特殊引物（Primer）的单管巢式PCR方法，本发明的方法诊断迅速，有利于特异且具有高敏感性的结核菌诊断。

摘要： 本申请提供实时聚合酶链反应的集成分析系统和DNA芯片以及使用其的集成分析方法，更具体地涉及实时聚合酶链反应的集成分析仪器和DNA芯片以及使用其的集成分析方法。根据本发明的生物材料的集成分析方法，可在单反应器中进行基因扩增并随后进行杂交，从而防止在转移样品以进行反应时由于外部因素导致的样品污染，并可自动化进行一系列程序，如样品的加注、生物材料的反应及结果的检测和分析。

摘要： 本发明涉及在PCR产物的末端上互补结合探针的情况下，利用抑制DNA聚合酶的5'‑瓣状内切核酸酶(FEN)活性的特性来检测单核苷酸多态性(SNP)的方法。更具体地涉及将实时聚合酶链反应(real‑time PCR)中使用的探针与PCR产物末端进行互补结合的情况下，确认抑制针对探针的耐热性DNA聚合酶的5'‑瓣状内切核酸酶活性的特性，并利用其特性来使待检测的单核苷酸多态性(SNP)部位位于探针的5'‑末端部位时，根据等位基因(allele)来诱导5'‑瓣状的形成，从而可有效地检测单核苷酸多态性(SNP)的方法。