NDRG2

摘要： 目的探讨microRNA-181b(miR-181b)能否通过靶向调控NDRG2参与2型糖尿病胰岛素分泌的调节。方法选用小鼠胰岛β细胞进行体外传代培养,构建NDRG2野生型(NDRG2^(WT)-1uc)与突变型(NDRG2^(MUT)-1uc)荧光素酶报告基因质粒并进行转染,转染结束后进行双荧光素酶报告分析。构建NDRG2过表达和敲低质粒并转染小鼠胰岛β细胞,检测NDRG2 mRNA和蛋白表达、胰岛素分泌量。未转染的小鼠胰岛β细胞培养48 h后采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-181b和NDRG2 mRNA的表达。采用葡萄糖刺激的胰岛素释放试验检测5 mmol/L和20 mmol/L葡萄糖条件下的小鼠胰岛β细胞分泌的胰岛素。结果(1)荧光素酶报告基因实验检测发现,各组相对荧光强度比较,差异有统计学意义(P0.05);在20 mmol/L葡萄糖条件下,过表达对照组胰岛素分泌量高于过表达组(P0.05);在20 mmol/L葡萄糖条件下,敲低组胰岛素分泌量高于敲低对照组(P0.05);20 mmol/L葡萄糖组miR-181b相对表达量高于对照组和5 mmol/L葡萄糖组(P0.05)。在20 mmol/L葡萄糖条件下,miR-181b mimics组胰岛素分泌量高于Control组(P<0.05),miR-1b1 inhibitor组胰岛素分泌量低于Control组和miR-181b mimics组(P<0.05)。结论miR-181b可以通过靶向抑制NDRG2的表达来提高胰岛素的分泌。

摘要： 目的 探讨miR-181c-5p对人胶质母细胞瘤U87细胞生物学活性的影响及可能的调控机制.方法 qRT-PCR检测30例神经胶质瘤组织样本及邻近的正常组织样本中miR-181c-5p的表达;将miR-181c-5p mimics、miR-181c-5p inhib-itor及相对应的阴性对照分别转入U87细胞中,同时设置对照中并向其中加入等量的脂质体转染试剂;qRT-PCR检测U87细胞中miR-181c-5p的表达情况;CCK-8实验检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测细胞模拟物或抑制剂处理后的细胞凋亡情况;Western印迹检测NDRG2蛋白表达情况.结果 与正常组织相比,miR-181c-5p在神经胶质瘤组织表达上调;miR-181c-5p的表达可显著性促进U87细胞增殖、迁移和侵袭能力,而抑制U87细胞凋亡;通过生物信息学分析显示NDRG2是miR-181c-5p靶基因,并通过双荧光素酶报告实验证实miR-181c-5p可以直接靶向NDRG2;通过qRT-PCR和Western印迹证实miR-181c-5p可靶向抑制NDRG2表达.结论 miR-181c-5p通过靶向抑制NDRG2表达,进而促进细胞增殖、迁移和侵袭,但抑制细胞凋亡.

摘要： 选取30只健康成年的新西兰大白兔,随机均分为快速减压组、控制减压组、假手术组.术后24h评价各组动物行为学评分,检测脑组织含水量、N-myc下游调节基因2(NDRG2)、Caspase-3表达水平以及脑细胞凋亡情况.与假手术组相比,控制减压组和快速减压组中动物学评分、脑组织含水量、Caspase-3的表达水平增加以及脑细胞凋亡程度增加,但NDRG2的表达水平降低;与快速减压组相比,控制减压组中动物行为学评分、脑组织含水量、Caspase-3表达水平以及脑细胞凋亡程度降低,但NDRG2的表达水平增加.控制减压技术通过增加NDRG2的表达减轻了脑水肿程度,抑制了脑细胞凋亡程度,从而减轻了脑缺血再灌注的损伤程度,改善脑损伤预后.

摘要： 刊出于《胃肠病学>2424年第25卷第9期《机械敏感离子通道Pezol/2蛋白在消化系统疾病中的研究进展》(第一作者刘才嫄,通信作者宋军)一文应为由国家自然科学基金(81674488,31375553-支持,特此更正!刊出于《胃肠病学>2451年第26卷第3期《肠道NDRG2参与PTSD状态下内脏高敏感作用及其机制研究》(第一作者王静和王彦钧,通信作者杨敏)一文的图4B和图4C应如下,特此更正!

摘要： [目的]研究泽兰提取物对低糖低氧所致神经细胞损伤的影响及潜在分子机制。[方法]用PC12细胞建立脑缺血模型,然后用0.1、1、10 mg/mL的泽兰提取物对模型细胞进行处理,噻唑蓝(MTT)法测定PC12细胞的光密度(OD)值,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测N-Myc下游调控基因2(NDRG2)、细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、p21、Bax和Bcl-2蛋白表达,流式细胞术测定细胞凋亡率。[结果]与对照组相比,1 mg/mL和10 mg/mL泽兰提取物均可使模型组PC12细胞OD值升高,CyclinD1和Bcl-2表达升高,NDRG2、p21和Bax表达降低,促细胞增殖并抑制细胞凋亡;抑制NDRG2表达可促进模型组PC12细胞增殖并抑制细胞凋亡;过表达NDRG2可逆转泽兰提取物对模型组PC12细胞增殖和凋亡的作用。[结论]泽兰提取物通过抑制NDRG2表达促进神经细胞脑缺血损伤模型细胞PC12增殖,抑制细胞凋亡。泽兰提取物可能对神经细胞脑缺血损伤具有潜在的治疗作用。

摘要： 目的 通过鞘内注射 N-myc 下游调节基因2(NDRG2)干扰腺病毒(AD-Ndrg2-RNAi),研究脊髓背角内 NDRG2在脊神经结扎(SNL)神经病理性痛模型大鼠中的作用.方法 雄性 SD大鼠42只,体重180~230 g,随机分为假手术组(sham 组,n=6)和 SNL组(n=36),sham组仅暴露脊神经不结扎,SNL组行 L5脊神经结扎术.分别测定术前1 d、术后1、3、7、10、14和21 d大鼠术侧足底机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).SNL 组大鼠各相应时点行为学测试后分别处死,取术侧脊髓腰膨大,检测NDRG2蛋白含量和mRNA表达量.另取48只雄性SD大鼠行鞘内置管后随机分为四组(n=12):sham+生理盐水组(CS 组)、sham+AD-Ndrg2-RNAi 组(CA组)、SNL+生理盐水组(SS组)和 SNL+AD-Ndrg2-RNAi组(SA组);CS、SS两组大鼠术后3 d鞘内单次注射生理盐水10 μl,CA、SA两组大鼠相同时点鞘内单次注射10 μl,滴度为2×109PFU/ml的AD-Ndrg2-RNAi.于 SNL术前1 d、术后1、3、7和10 d分别测定大鼠足底 MWT和TWL.术后10 d行为学测试后处死大鼠,取术侧脊髓腰膨大,检测 NDRG2和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)蛋白含量,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测 NDRG2 mRNA 的表达量.结果 与 sham 组比较, SNL组术后1、3、7、10、14、21 d MWT明显降低(P<0.01),术后3、7、10、14、21 d TWL明显缩短(P<0.01).与术前1 d比较,SNL组脊髓背角内 NDRG2的蛋白含量和 mRNA表达量在术后1 d明显降低,术后7、10、14、21 d 明显升高(P<0.05).与 CS 组比较,SS 组和 SA 组术后1、3、7、10 d MWT明显降低,TWL 明显缩短(P<0.05);与 SS 组比较,SA 组术后7、10 d MWT 明显升高, TWL明显延长(P<0.05).与CS组比较,术后10 d CA组脊髓背角内NDRG2的蛋白含量和 mR-NA表达量均明显降低(P<0.05),SS组均明显升高(P<0.05);与 SS组比较,SA 组脊髓背角内NDRG2的蛋白含量和 mRNA表达量均明显降低(P<0.05).与 CS组比较,术后10 d CA、SS、SA组脊髓背角内 GFAP蛋白含量均明显升高(P<0.05).结论 NDRG2蛋白含量升高参与了神经病理性痛的形成,鞘内注射 AD-Ndrg2-RNAi明显抑制大鼠脊神经结扎造成的慢性病理性疼痛,提示星形胶质细胞中的 NDRG2参与慢性病理性疼痛的发生和发展.%Objective To investigate the effect of NDRG2 on neuropathic pain model rats with spinal cord ligation(SNL)in the dorsal horn of the spinal cordby using intrathecal NDRG2 adenovirus (AD-Ndrg2-RNAi).Methods Forty-two male SD rats weighing 180-230 g were randomly divided into sham operation group (n=6)and SNL group (n=3 6).SNL group underwent lumbar spinal dor-sal ligation.The sham operation group only exposed the spinal nerve without ligation.The mechanical withdraw threshold (MWT)and thermal withdrawlantency (TWL)were measured at 1 d before op-eration and at 1,3,7,10,14 and 21 d after operation.After the behavioral testing,the rats in SNL group were sacrificed and the lumber segment of the spinal cord was removed to test theprotein and mRNA level of NDRG2.Another forty-eight male SD rats were randomly divided into 4 groups after intrathecal catheterization (n=12):group sham operation with saline (group CS);group sham oper-ation with adenovirus (group CA);group SNL with saline (group SS);group SNL with adenovirus(group SA).The rats in groups CS and SS were treated with intrathecal injection of normal saline 10 μl on the third day after operation,while groups CA and SA received the single injection titer of 2× 109PFU/ml of AD-Ndrg2-RNAi on the same day.The rat plantar MWT and TWL were measured at 1 d before SNL and at 1,3,7 and 10 d after SNL.The rats were sacrificed after the lastbehavioral test.Lumbar enlargement of the spinal cord was removed to test the level of NDRG2 and GFAP pro-tein.The expression of NDRG2 mRNA was detected by real-time fluorescence quantitative PCR. Results Compared with sham group,the MWT and TWL was significantly decreased and reduced in SNL group 1,3,7,10,14,21 d and 3,7,10,14,21 d after surgery respectively(P<0.01).Com-pared with 1 d before surgery,protein content and mRNA expression of NDRG2 in the spinal dorsal horn of the SNL group were significantly decreased 1 d after surgery,and they were significantly in-creased on the 7,10,14,and 21 d after operation(P<0.01).Compared with group CS,the MWT and TWL were significantly decreased and reduced in group SS and group SA 1,3,7 and 10 d after surgery(P<0.05).MWT and TWL on 7 and 10 d were increased significantly in group SA (P<0.05)compared with group SS.Compared with group CS,protein content and mRNA expression of NDRG2 in the spinal dorsal horn of group CA were significantly decreased,and increased significantly in group SS 10 d after surgery(P<0.05).Compared with group SS,protein content and mRNA ex-pression of NDRG2 in the spinal dorsal horn of group SA were significantly decreased.Compared with group CS,the protein content of GFAP in spinal dorsal horn of group CA,group SS and group SA were increased significantly 10 d after surgery (P<0.05).Conclusion Intrathecal injection of AD-Ndrg2-RNAi significantly inhibits neuropathic pain caused by spinal cord ligation in rats,suggesting that NDRG2 in astrocytes is involved in the development and progression of neuropathic pain.

摘要： 目的:研究分化相关基因NDRG2在胃癌细胞中的表达及与细胞分化的关系.方法:采用RT-PCR及West-ern blot检测胃永生化粘膜上皮细胞GES1及6株胃癌细胞株中NDRG2的mRNA及蛋白的表达情况,进一步采用分化诱导剂TPA处理胃癌细胞株,分析NDRG2的表达水平及恶性表型是否可逆转.结果:与胃永生化粘膜上皮细胞GES1相比,NDRG2在6株胃癌细胞中有不同程度的表达下调,未分化胃癌细胞株HGC27中表达最低(P＜0.05).不同浓度的分化诱导剂TPA(0、10、50、100nmol/L)处理胃癌细胞株HGC27后,随TPA浓度升高,NDRG2表达上调,100nmol/L组表达最高(P＜0.05),Transwell实验显示TPA干预组胃癌细胞的侵袭力明显减弱.结论:分化诱导剂干预可上调胃癌细胞NDRG2表达水平,逆转细胞恶性表型,且与细胞分化成正相关,故NDRG2可能是胃癌中一种候选的肿瘤抑制基因.

摘要： 目的:探讨NDRG2在上皮性卵巢癌中的表达及其与预后的关系.方法:收集新鲜的上皮性卵巢癌和正常卵巢组织各15例,采用real-time PCR检测和比较其NDRG2 mRNA的表达.收集上皮性卵巢癌病理切片96例进行免疫组化检测其NDRG2蛋白的表达,并收集患者的临床病理资料,随访患者的生存情况,分析NDRG2蛋白的表达与上皮性卵巢癌患者临床病理特征和预后的关系.结果:上皮性卵巢癌组织中NDRG2 mRNA和蛋白的表达均显著低于正常卵巢组织(P＜0.05).NDRG2在上皮性卵巢癌组织中的表达随着上皮性卵巢癌病理分期的升高而降低,而且其表达降低和患者不良预后显著相关(P=0.002),但其表达和不同上皮性卵巢癌的病理类型、分化程度以及年龄均无明显相关性.去除手术病理分期的影响,NDRG2表达下调和肿瘤细胞减灭术的满意程度以及术后规范化疗是三个影响上皮性卵巢癌预后的重要因素.结论:NDRG2在上皮性卵巢癌中的表达下降,并与患者的不良预后呈显著正相关.%Objective:To study the expression of NDRG2 in epithelial ovarian cancer(EOC) and its correlation with the prognosis of EOC patients.Methods:15 cases of fresh epithelial ovarian cancer and 15 cases of normal ovarian tissue were collected.The mRNA expression of NDRG2 were detected and compared by real-time PCR.96 cases of epithelial ovarian cancer pathological sections were collected and the expression of NDRG2 protein was detected by immunohistochemistry,the clinicopathological characteristics and survival of patients were statistically analyzed.Results:The mRNA and protein expression of NDRG2 in the EOC tissue were significantly lower than those of the normal ovarian tissue (P＜0.05).The protein expression of NDRG2 decreased with the increase of pathological staging of EOC and was significantly correlated with the poor prognosis of EOC patients (P=0.002).However,no obvious correlation was found of the protein expression of NDRG2 with pathological type,differentiated degree and age (P＞0.05).Excluding the effect of surgical-pathological staging,decrease of NDRG2 expression,satisfaction of cytoreductive surgery and postoperative standard chemotherapy were influencing factors for the prognosis of EOC patients.Conclusion:The expression of NDRG2 was decreased in the EOC tissue and was positively correlated with theprognosis of EOC patients.

摘要： Objective:To explore the effect and mechanism of NDRG2 on the histone acetylation in U87-MG cells and provide new ideas for the treatment of glioma.Methods:NDRG2 overexpression was mediated by lentivirus,and the level ofhistone acetylation was measured by Western blot using acetylation antibodies in U87-MG cells.ELISA was used to evaluated the effect on acetyl-CoA metabolism ofNDRG2 overexpression.The AKT-ACLY pathway was detected to illustrated this mechanism.Results:The phosphorylation of AKT and ACLY in U87MG cell were significantly down-regulated with the overexpression of NDRG2,resulting in change of acetyl-CoA/CoA ratio.The histone acetylation level was down-regulated,which had an effect on the proliferation of glioma cells.Conclusions:NDRG2 might participate in the metabolism of acetyl-CoA and regulate the histone acetylation,which could further suppress the proliferation ofU87-MG glioma cell.%目的:探讨NDRG2对胶质瘤U87-MG细胞组蛋白乙酰化的影响,从代谢组学角度明确其抑癌机制,为胶质瘤治疗提供新思路.方法:利用慢病毒介导的外源性NDRG2基因在胶质瘤U87-MG细胞株中过表达,并采用MTT检测其对胶质瘤U87-MG细胞增殖的影响,采用Western blot技术研究其对胶质瘤U87-MG细胞组蛋白乙酰化及AKT-ACLY通路磷酸化状态的影响,并使用酶联反应检测胞内乙酰辅酶A的水平.结果:NDRG2在胶质瘤U87-MG细胞中外源过表达可降低AKT及下游分子ACLY的磷酸化水平,减少胞内乙酰辅酶A的合成,抑制组蛋白乙酰化.结论:NDRG2可能通过抑制AKT通路,减少组蛋白乙酰化,进而抑制胶质瘤U87-MG细胞增殖.

摘要： 本发明使用基因工程方法，大量表达N-myc下游调节基因亚型ndrg2和ndrg4所编码的NDRG2和NDRG4蛋白，研究了NDRG2和NDRG4蛋白的理化性质和它们对肿瘤细胞的生物学功能。流式细胞术结果表明NDRG2蛋白对胃癌7901细胞的影响表现在G1期延长、G2和S期缩短，对肝癌HHCC细胞的影响表现在G1和G2期缩短、S期延长；而NDRG4蛋白对胃癌7901和肝癌HHCC细胞的影响均表现在G1期延长、G2和S期缩短。裸鼠致瘤抑制等动物试验证实了NDRG2和NDRG4蛋白对肿瘤细胞的生长以及对裸鼠的肿瘤形成都具有显著的抑制作用，其中高剂量组肿瘤抑制作用明显，低剂量组作用相对较弱。

摘要： 本发明提出了确定结直肠肿瘤细胞的方法和系统。所述方法包括：分别获得待测样本的KRAS基因和NDRG4基因，并将所述NDRG4基因进行甲基化处理；分别对所述KRAS基因和经甲基化处理的NDRG4基因进行测序，获得KRAS基因测序结果和NDRG4基因测序结果；将所述KRAS基因测序结果中第一目标靶点位置的基因序列与第一参考序列进行第一比对，计算出KRAS基因突变率；将所述NDRG4基因测序结果中第二目标靶点位置的基因序列与第二参考序列进行第二比对，计算出NDRG4基因甲基化连锁比率；基于所述KRAS基因突变率和NDRG4基因甲基化连锁比率，确定所述待测样本是否存在结直肠肿瘤细胞。利用本发明的方法及系统能够快速、简单且特异性检测出是否为结直肠肿瘤细胞，且灵敏度高。

摘要： 本发明公开了一种用于改善脑卒中兴奋性毒性损伤的特异性降解NDRG2靶向肽及其应用，构建特异性快速可逆降解NDRG2的靶向肽，其中包含三个结构域的设计与合成：①利用已知的膜穿透肽段TAT合成穿膜结构域(CMPD)②特异性结合NDRG2结构域(PBD)③串联降解结构域(CTM/degron)。其中，与NDRG2蛋白结合的功能区域的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示，溶酶体加蛋白酶体诱导降解肽段的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2所示，穿膜肽TAT的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.3所示。

摘要： 本发明提出了检测SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列的第12密码子和第13密码子突变的试剂、检测SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列的第6和第10个CpG位置的基因甲基化连锁水平的试剂和检测血红蛋白的试剂在制备确定结直肠肿瘤细胞的试剂中的用途和系统，所述制备确定结直肠肿瘤细胞的试剂的使用方法包括：基于所述KRAS基因突变率、NDRG4基因甲基化连锁比率以及血红蛋白检测结果，确定所述待测样本是否存在结直肠肿瘤细胞。利用本发明的试剂及系统能够快速、简单且特异性检测出是否为结直肠肿瘤细胞，且灵敏度高。

摘要： 本发明公开了用于检测与胃癌相关的NDRG4基因甲基化程度的试剂盒及其应用，特点是一对NDRG4基因甲基化特异性扩增引物对及甲基化特异性测序引物，具体核苷酸序列如下：上游引物：5'‑AGGGTTGGGGGTTTTAGA‑3'；下游引物：5'‑Biotin‑CACCCTCTACCAAAAACTCAAAACTCAATT‑3'；测序引物：5'‑GGGGTTTTAGAGTGTAT‑3'，优点是检测简单方便、针对性强、检测准确率和效率高，用于制备胃癌早期诊断的试剂或试剂盒。

摘要： 本发明公开了一种用于胃癌早期诊断及预后评估的NDRG4基因甲基化检测的试剂盒，特点是包括一对NDRG4基因启动子区甲基化特异性扩增引物及荧光定量探针，具体核苷酸序列如下：上游引物：5'‑TGGGATGGGGATGTTTTTGT‑3'；下游引物：5'‑CCTCCAAACCCCCTATAACC‑3'；荧光定量探针：5'‑6‑FAM‑AAAACGACGCTACCGTAATCTTTA‑BHQ1‑3'，优点是操作简便，周期短，灵敏度高，特异性好以及检测准确率高。

摘要： 本发明公开了一种基于ARMS‑PCR法检测BMP3和NDRG4基因甲基化的荧光PCR方法、试剂盒及体系。方法包括：(a)对含有BMP3和NDRG4基因的DNA材料中的CpG位点进行转换处理，使得未甲基化的CpG位点转换为UpG；(b)以转换处理后的DNA材料作为模板进行荧光PCR反应，荧光PCR体系中包括：用于检测BMP3基因甲基化的特异性引物及其探针序列，用于检测NDRG4基因甲基化的特异性引物及其探针序列，Taq酶、UNG酶、dNTPs、dUTP、Mg

摘要： 本发明使用基因工程方法，大量表达N－myc下游调节基因亚型ndrg2和ndrg4所编码的NDRG2和NDRG4蛋白，研究了NDRG2和NDRG4蛋白的理化性质和它们对肿瘤细胞的生物学功能。流式细胞术结果表明NDRG2蛋白对胃癌7901细胞的影响表现在G1期延长、G2和S期缩短，对肝癌HHCC细胞的影响表现在G1和G2期缩短、S期延长；而NDRG4蛋白对胃癌7901和肝癌HHCC细胞的影响均表现在G1期延长、G2和S期缩短。裸鼠致瘤抑制等动物试验证实了NDRG2和NDRG4蛋白对肿瘤细胞的生长以及对裸鼠的肿瘤形成都具有显著的抑制作用，其中高剂量组肿瘤抑制作用明显，低剂量组作用相对较弱。

摘要： 本发明涉及了一种人BMP3和NDRG4基因甲基化检测试剂盒，该试剂盒包括酶切反应液，所述酶切反应液包含酶切缓冲液、甲基化依赖型限制性内切酶，还包括针对BMP3基因和/或NDRG4基因的CpG岛分别设计的引物和部分双链线性DNA探针的荧光PCR反应液。本发明所述检测试剂盒能够实现在一管中依次进行酶切反应和荧光PCR反应以检测BMP3和NDRG4基因甲基化状态，具有操作简单快速、灵敏度高、特异性好、易于自动化的特点。

摘要： 本发明公开了一种用于改善脑卒中兴奋性毒性损伤的特异性降解NDRG2靶向肽及其应用，构建特异性快速可逆降解NDRG2的靶向肽，其中包含三个结构域的设计与合成：①利用已知的膜穿透肽段TAT合成穿膜结构域(CMPD)②特异性结合NDRG2结构域(PBD)③串联降解结构域(CTM/degron)。其中，与NDRG2蛋白结合的功能区域的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示，溶酶体加蛋白酶体诱导降解肽段的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2所示，穿膜肽TAT的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.3所示。