实时荧光定量逆转录聚合酶链反应

摘要： 目的探究锌指蛋白139(zinc finger protein 139,ZNF139)在结直肠癌(colorectal cancer)组织中的表达及与临床病理参数及预后的关系。方法选取2012年5月~2014年6月就诊于恩施土家族苗族自治州中心医院行手术治疗的67例结直肠癌患者的临床病理资料及癌组织、癌旁组织和正常黏膜组织进行研究。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法染色检测ZNF139 mRNA及蛋白在结直肠癌组织中的表达情况,分析其与结直肠癌患者临床病理因素的关系;采用K-M生存曲线分析ZNF139表达对预后的影响;采用COX回归模型分析影响结直肠癌患者预后的风险因素。结果结直肠癌病灶组织中ZNF139 mRNA(0.651±0.130)表达水平明显高于癌旁组织(0.217±0.070)和正常组织(0.201±0.052),差异有统计学意义(t=24.060,24.947,均P=0.001)。结直肠癌组织中ZNF139蛋白阳性率(52.24%)明显高于癌旁组织(28.36%)和正常黏膜组织(19.40%),差异均有统计学意义(χ^(2)=7.941,15.711;P=0.005,0.000)。结直肠癌组织中ZNF139 mRNA及蛋白表达与肿瘤分化程度、浸润程度、TNM分期和有无淋巴结转移密切相关(t=4.447~10.964,χ^(2)=16.613~35.850,均P<0.01)。ZNF139阴性表达组患者5年总体生存率为75.0%,优于阳性组患者的51.4%(Log-rankχ^(2)=3.391,P=0.047)。ZNF139表达(HR:2.249,95%CI:1.359~3.712,P=0.003),临床TNM分期(HR:2.016,95%CI:1.230~3.327,P=0.006)和淋巴结转移(HR:2.125,95%CI:1.302~3.469,P=0.002)是影响结直肠癌患者总体预后的独立危险因素。结论ZNF139在结直肠癌组织中高(阳性)表达,与结直肠癌的分化、浸润、TNM分期和有无淋巴结转移密切相关,是影响结直肠癌患者预后的独立危险因素之一,可作为临床诊断及评估预后的参考指标。

摘要： 目的 探讨异位病毒整合位点-1(EVI-1)在胃癌中的表达及临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测胃癌组织和癌旁组织中EVI-1蛋白的表达情况;采用蛋白质印迹法(Western blot)和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应,分别检测人胃癌细胞株AGS、NCI-N87、MGC-803、HGC27和永生化正常胃黏膜细胞株GES-1中EVI-1的3个剪切变异体蛋白(MDS1/EVI-1、EVI-1、EVI-1△324)和EVI-1 mRNA(除MGC-803)的表达水平.结果 胃癌组织中EVI-1蛋白的阳性表达率为76.7％(46/60),明显高于癌旁正常胃组织的41.7％(25/60),差异有统计学意义(P﹤0.01).胃癌细胞中MDS1/EVI-1和EVI-1蛋白相对表达量均高于正常胃黏膜上皮细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.05);MGC-803、AGS胃癌细胞中EVI-1△324蛋白相对表达量也高于正常胃黏膜上皮细胞,但差异无统计学意义(P﹥0.05).HGC27、NCI-N87、AGS细胞株中EVI-1 mRNA相对表达量均高于GES-1细胞株,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论 胃癌中EVI-1蛋白(除EVI-1△324亚型)和EVI-1 mRNA的表达均较癌旁正常胃黏膜组织高.EVI-1基因可能是潜在的胃癌原癌基因,尚有待进一步深入研究.

摘要： [目的]探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用及ERCC1 mRNA的影响.[方法]采用实时荧光定量RT-PCR分别检测使用5-Aza-CdR处理胃癌SGC-7901细胞前后细胞内ER-CC1 mRNA表达水平.MTT法检测单独使用5-Aza-CdR或顺铂及两药联合使用对胃癌SGC-7901细胞的抑制作用.[结果]不同浓度的5-Aza-CdR对SGC-7901人胃癌细胞的生长均有抑制作用,抑制率与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05);5-Aza-CdR也显著抑制SGC-7901人胃癌细胞ERCC1 mRNA的表达,其抑制作用呈时间-剂量依赖;顺铂联合5-Aza-CdR可使SGC-7901人胃癌细胞对顺铂的IC50值下降.[结论]5-Aza-CdR联合顺铂能协同性地抑制胃癌细胞生长,这可能与5-Aza-CdR能影响ERCC-1 mRNA的表达有关.

摘要： 目的:通过检测血清沉默信息调节因子1(SIRT1)mRNA和Nephrin mRNA在糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)血液中的表达,探讨其与糖尿病肾病患者蛋白尿发生的相关性。方法:按照2型糖尿病患者不同尿白蛋白排泄率(UAER)的水平分为单纯糖尿病组、尿白蛋白微量组和临床糖尿病肾病组。分析2型糖尿病患者SIRT1和Nephrin与糖尿病肾损害的相关性。结果:2型糖尿病肾病患者的血清SIRT1水平明显低于健康组,糖尿病肾病患者的nephrin水平明显低于健康组,糖尿病肾病患者体内SIRT1水平与Nephrin水平呈正相关。结论:2型糖尿病患者尿白蛋白排泄率越高,SIRT1和Nephrin的表达越少,因此推断两种因子的减少可能是导致蛋白尿的重要因素。

摘要： Objective To investigate the epidemiological and genetic characteristics of human astorvirus (HAstV) infections in Futian district,Shenzhen.Methods A total of 1 625 stool samples were collected from patients with suspected diarrhea in Futian district,Shenzhen from January 2013 to December 2015.The HAstV RNA was detected by reverse transcription quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR),and the ORF2 of HAstV in positive samples was amplified and sequenced by RT-PCR with primer set of Mon269/Mon270,followed by phylogenetic analysis.Results From January 2013 to December 2015,the overall detection rate of HAstV was 2.03％ (33/1 625),while the annual detection rates were 1.84％ (12/653),1.31％ (7/535) and 3.20％ (14/437),respectively.The detection rate of HAstV was 2.27％ (21/925) among males and 1.71％ (12/700) among females.There was no significant difference in the detection rate between male and female (x2=0.62,P=-0.431).HAstV was detected in all age groups,while the detection rate was significantly lower in age group ＜ 1 year old (1.69％,11/650).The detection rate was the highest in January (5.59％,8/143),and was the lowest in July (no case was detected).Thirty-three positive samples were sequenced and analyzed,HAstV-1,HAstV-4,HAstV-5 and HAstV-2 were detected in 15,7,4,1 sample(s),respectively,of which HAstV-1 was the predominant strain.Conclusions HAstV was a pathogen causing viral diarrhea in Futian district.HAstV-1 was the predominant strain,while other genotypes also existed.%目的 研究深圳市福田区腹泻患者人星状病毒(human astrovirus,HAstV)感染的流行病学及分子特征.方法 收集2013年1月至2015年12月深圳市福田区1 625例疑似腹泻患者粪便标本,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测粪便中的HAstV核酸,RT-qPCR阳性样品使用Mon269/Mon270引物对,用荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HAstV的开放阅读框ORF2区域,将RT-PCR扩增产物纯化、测序后进行序列分析,并分析病例的流行病学资料.结果 2013-2015年福田区HAstV的检出率为2.03％(33/1 625),其中2013年的检出率为1.84％(12/653),2014年的检出率为1.31％(7/535),2015年的检出率为3.20％(14/437);男性检出率为2.27％(21/925),女性检出率为1.71％(12/700),男女患者检出率的差异无统计学意义(x2=0.62,P=0.431).HAstV在各年龄组人群均有检出,但在1岁以下年龄组患者的检出率最低,为1.69％(11/650).HAstV在1月份的检出率最高(5.59％,8/143),7月份的检出率最低(未检出).将33份RT-qPCR检测为HAstV阳性的样品用开放阅读框ORF2区进行分型,结果有27份可进一步分型,其中HAstV-1检出15株,是福田区HAstV的主要流行株,此外分别检出7株HAstV-4、4株HAstV-5和1株HAstV-2.结论 HAstV是导致福田区病毒性腹泻的病原体,HAstV-1是福田区HAstV的主要流行株,同时也存在其他型别的感染.

摘要： 目的探讨异常胆液质载体溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中炎症相关因子白介素(interleukin,IL)-1a、IL-1b、IL-10在异常胆液质载体溃疡性结肠炎病证发生、发展中的作用.方法根据维吾尔医学体液理论建立异常胆液质载体证候模型的基础上,采用2,4,6-三硝基苯磺酸(trinitro-benzene-sulfonic acid,TNBS)/乙醇法构建异常胆液质载体溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)病证大鼠模型,并进行鉴定,应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction,qRT-PCR)方法 ,检测正常组与异常胆液质载体UC病证模型组(模型组)大鼠结肠组织中I L-1a、I L-1b、IL-10 mRNA表达水平,并分析其表达差异.结果模型鉴定与HE染色结果显示,模型组大鼠体征、症状、结肠黏膜损伤等均符合异常胆液质载体UC病证模型的判定标准;qRT-PCR结果显示,与正常组比较,模型组大鼠结肠组织中IL-1a、IL-1b、IL-10的mRNA表达水平均上调,差异有统计学意义(P<0.05).结论异常胆液质载体UC病证模型组大鼠结肠组织中存在炎症相关因子平衡紊乱.

摘要： Objective To explore the clinical significance of real‐time quantitative polymerase chain reaction (RQ‐PCR) in detec‐ting BCR‐ABLp210 fusion gene in chronic myelogenous leukemia (CML ) cells .Methods The transcript level of BCR‐ABLp210 was measured by RQ‐PCR from the bone marrow cells of 60 CML patients .Results All of 60 CML patients were BCR‐ABL posi‐tive .Among the 60 patients ,33 patients were in chronic phase ,13 patients were in accelerated phase and 14 patients were in blast phase .In contrast ,the transcript level of BCR‐ABLp210 in blast phase was significantly higher than that in the other phases .Six months after the treatment with allogenic hematopoietic stem cell transplantation (allo‐HSCT ) or imatinib ,the transcript level of BCR‐ABLp210 was decreased .In addition ,there was no significant difference between allo‐HSCT and imatinib treatment after 12 months(P > 0 .05) .Meanwhile ,the application of the other tyrosine kinase inhibitors had the similar results for CML after 12‐month treatment .Conclusion The detection of BCR‐ABLp210 transcript level by RQ‐PCR contributes to the diagnosis ,the evalua‐tion of curative effect and the minimal residue detection .%目的：探讨采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RQ‐PCR）技术检测慢性粒细胞白血病（CML）细胞的BCR‐ABLp210融合基因的临床价值。方法应用 RQ‐PCR 技术对60例 CML 患者骨髓细胞 BCR‐ABLp210融合基因进行定量检测分析。结果60例 BCR‐ABLp210融合基因阳性的 CML 患者中，慢性期33例，加速期13例，急变期14例，且 CML 急变期患者BCR‐ABLp210转录本水平明显高于慢性期和加速期患者。经异基因造血干细胞移植治疗或经伊马替尼治疗6个月后，BCR‐ABLp210转录本水平均较6个月前明显降低。但这两种方法治疗 CML 患者12个月后的效果比较差异无统计学意义（P ＞0．05），而采用其他酪氨酸激酶抑制剂治疗 CML 12个月后也可达到相似的治疗效果。结论 RQ‐PCR 技术监测 CML 患者细胞BCR‐ABLp210融合基因表达有助于 CML 的诊断、治疗效果评价及微小残留的监测。

摘要： 本发明为一种实时荧光定量RT-PCR检测原发性肝癌表达的人甲胎蛋白试剂盒。该试剂盒通过逆转录(RT)mRNA样品得到cDNA，再结合实时荧光定量PCR检测技术，可以精确定量检测标本中AFP的mRNA表达量。该试剂盒可以用于临床及科研中检测患者的外周血及肿瘤组织、胸腹水、穿刺液、骨髓等标本中AFP的表达，用以辅助诊断、指导治疗及提示预后。

摘要： 本发明为一种实时荧光定量RT-PCR检测人细胞角蛋白20试剂盒，该试剂盒通过逆转录(RT)mRNA样品得到cDNA，再结合实时荧光定量PCR检测技术，可以精确定量检测标本中人细胞角蛋白20(CK20)的mRNA表达量。该试剂盒可以用于临床及科研中检测患者外周血、淋巴结、骨髓等标本中CK20的表达，用以辅助诊断、指导治疗及提示预后。

摘要： 本发明为一种实时荧光定量RT-PCR检测人细胞角蛋白19试剂盒，该试剂盒通过逆转录(RT)mRNA样品得到cDNA，再结合实时荧光定量PCR检测技术，可以精确定量检测标本中CK19的mRNA表达量。该试剂盒可以用于临床及科研中检测患者的外周血及淋巴结、骨髓等标本中CK19的表达，用以辅助诊断、指导治疗及提示预后。

摘要： 本发明公开了通过复合竞争性逆转录酶-聚合酶链反应定量测定基因表达的方法及仪器。该方法和仪器特别适用于细胞和组织的小样品分析。

摘要： 本发明为一种一步法实时荧光定量RT‑PCR检测人细胞角蛋白7 试剂盒，该试剂盒以mRNA为模板，使反转录和实时荧光定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需打开管盖，避免了交叉污染，并可以精确定量检测标本中人细胞角蛋白7(CK7) 的mRNA表达量。该试剂盒可以用于临床及科研中检测患者外周血、淋巴结等标本中CK7的表达，用以辅助诊断、指导治疗结直肠癌及提示预后。

摘要： 本发明为一种实时荧光定量RT‑PCR检测人基质金属蛋白酶1的试剂盒，该试剂盒以mRNA为模板，使反转录和实时荧光定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需打开管盖，避免了交叉污染，并可以精确定量检测标本中人基质金属蛋白酶1 (MMP1) 的mRNA表达量。该试剂盒可以用于临床及科研中检测患者结直肠癌手术切除标本中MMP1的表达，用以结直肠癌患者辅助诊断、指导治疗是否存在肝转移的指标。

摘要： 本发明为一种实时荧光定量RT‑PCR检测人基质金属蛋白酶11的试剂盒，该试剂盒以mRNA为模板，使反转录和实时荧光定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需打开管盖，避免了交叉污染，并可以精确定量检测标本中人基质金属蛋白酶11(MMP11)的mRNA表达量。该试剂盒可以用于临床及科研中检测患者结直肠癌手术切除标本中MMP11的表达，用以结直肠癌患者的辅助诊断、指导治疗及提示预后。

摘要： 本发明为一种实时荧光定量RT‑PCR检测人miR‑1290试剂盒，该试剂盒以总mRNA为模板，使反转录和实时荧光定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需打开管盖，避免了交叉污染，并可以精确定量检测标本中人miR‑1290的表达量。该试剂盒可以用于临床及科研中检测患者外周血标本中miR‑1290的表达，用以结直肠癌辅助诊断、指导治疗、复发及提示预后。

摘要： 本发明为一种实时荧光定量RT‑PCR检测人上皮细胞粘附分子试剂盒，该试剂盒以mRNA为模板，使反转录和实时荧光定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需打开管盖，避免了交叉污染，并可以精确定量检测标本中人上皮细胞粘附分子(Ep‑CAM) 的mRNA表达量。该试剂盒可以用于临床及科研中检测患者外周血标本中EP‑CAM的表达，用以结直肠癌辅助诊断、指导治疗及提示预后。

摘要： 本发明属生物技术领域，涉及定量RT-PCR检测试剂盒，具体是一种实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测的鸡高迁移率族蛋白B1的试剂盒。该试剂盒含有逆转录反应液、莫洛尼氏鼠白血病病毒逆转录酶、RNA酶抑制剂、聚合酶链反应液、耐热DNA聚合酶、标准品、对照品。本发明试剂盒通过逆转录(RT)mRNA样品得到cDNA，再结合实时荧光定量PCR检测技术，可以精确定量检测标本中鸡高迁移率族蛋白B1的mRNA表达量。该试剂盒可以用于鸡体内各组织脏器中HMGB1的表达分析，也可以用于检测不同状态下细胞中鸡HMGB1表达水平的变化。该发明为研究鸡HMGB1表达水平提供了一种快速、准确、可重复的检测方法。